全 文 ：大理百合多糖对小鼠免疫功能的影响＊
栾玉泉1 　董莎莎2 　方淑环2 　万顺康2 　左绍远2
(1.大理学院公共卫生学院 ,2.大理学院基础医学院 ,云南省大理市 ,671000)
　　摘　要　目的:观察大理百合多糖(Lilium polysaccharide , LP)对小鼠免疫功能的影响。方法:昆明种小白鼠每天分别腹腔注
射给药(ip)LP 100 mg · kg -1 .BW , 150 mg · kg-1 .BW , 300 mg · kg-1 .BW ,对照组则给等量生理盐水(NS),连续 14 天后 ,观察 LP
对小鼠免疫功能的影响。结果:LP 能显著增加小鼠免疫器官重量 , 促进小鼠单核巨噬细胞的吞噬功能 , 提高小鼠血清溶血素的生
成 ,能明显促进 ConA 诱导的淋巴细胞增殖转化 , 能显著提高小鼠 NK 细胞活性。结论:LP 对小鼠免疫功能能有显著促进作用。
关键词:百合多糖(LP);免疫功能
＊基金项目:大理州科技局科研基金资助项目(DL2003-014)
作者简介:栾玉泉(1962-),男 ,山东潍坊市人 ,副教授 ,主要从事公共卫
生与预防医学研究。 Email:luanyu qu an@sina.com
　　百合(Lilium brow nii F.E.Brown va r.Colchesteri Wils)为
百合科百合属多年生草本植物 ,全球约有 80 余种 ,我国分布 40
余种。大理百合(Lilium bake riamum Collet t et Hemsl.Var
delavayi(F ranch)Wilson)为百合科百合属植物 , 性味甘寒 ,具
有养阴清肺 、清心安神之功效。
多糖是一类结构复杂的生物大分子物质 , 广泛分布于植
物 、动物 、微生物等有机体中。多糖不仅是细胞的基本组成成
分 ,还广泛参与细胞识别 、细胞生长 、分化 、免疫应答等多种复
杂而广泛的生理活动。研究表明[1] , 不同来源的多糖具有增强
机体免疫力 、调节血糖 、降血脂及抗肿瘤 、抗病毒 、抗氧化等多
种生物学活性 , 已成为现代药学和功能性食品研究的热点之
一。目前有关大理百合多糖的研究尚未见报道[ 2] , 为进一步观
察大理其生理活性和药理学作用 , 我们对其免疫学活性进行了
初步实验研究 , 现将实验结果报道如下。
1　材料与方法
1.1　主要仪器与试剂
岛津 UV-2600 型紫外可见分光光度计 , BioTeck 全自动
酶标仪 、LD大容量冷冻离心机。 Sephadex G-150 , RPM I 1640
培养液 ,刀豆蛋白 A(ConA)、M TT 等均为 sigma公司产品。其
余试剂为国产分析纯。
1.2 动物
昆明种小白鼠 ,体重 20±2g , 由昆明医学院实验动物中心
提供 ,动物合格证号:滇实动证第 2003056 号。
1.3　药物
大理百合多糖(L ilium polysaccha ride , LP)), 由大理学院
基础医学院生物化学实验室提供 ,为白色粉末。将 LP用灭菌
生理盐水制成 5 mg ·mL -1 , 过滤除菌 , 置 4℃备用。
2 实验方法
2.1 LP 对小鼠脏器/体重比值(胸腺指数和脾指数)的影响
取小鼠 40 只 ,随机分成 4 组 , 每组 10 只。 LP 低 、中 、高剂
量组每天分别腹腔注射给药(见表 1),对照组则给等量生理盐
水(NS), 连续 14 天。于末次给药后 24h , 称小鼠重 , 颈椎脱臼
法处死小鼠 ,取出脾脏及胸腺 ,用滤纸吸干血迹后称重。计算
胸腺指数和脾指数:脏器(mg)/体重(10g)。
2.2 LP对小鼠血液碳粒廓清速率的影响
取小鼠 40 只 ,分组给药同前 , 连续 14天。于末次给药 24h
后 , 称重 ,各鼠尾静脉注入印度墨汁 , 每 10g 体重 0.1 m L , 于注
入墨汁后第 2 、10min , 分别眼内眦静脉丛取血 20μL , 测定小鼠
血液碳粒廓清速率 , 用半自动生化仪以 600 nm 波长测光密度
值(OD)。小鼠处死 , 取肝 、脾脏 , 称重。 计算吞噬指数 a。 a=
K 1/3 ×体重/(肝重+脾重);K=(lgOD1 -lgOD2)/(t2-t1)
2.3 LP对小鼠血清溶血素的影响(血凝法)
取小鼠 40 只 ,分组给药同前 , 连续 14 天。于给药的第 10
天各鼠腹腔注射 0.2mL 的 2%(v/v)绵羊红细胞悬液致敏(当
日给药改为皮下注射)。免疫 5 天后 , 小鼠眼球取血 , 分离 、收
集血清。用生理盐水将血清倍比稀释 , 置于微量血凝板内 , 每
孔 100μL ,加入 100μL0.5%(v/ v)的绵羊红细胞悬液 , 37℃温
箱孵育 3h ,观察血球凝集程度。计算抗体积数:抗体积数=(S1
+2 S2+ S3 ……nSn);式中 1、2 、3……n 为对倍稀释的指数 , S
为凝集程度的级别。
2.4 LP 对体外 ConA 诱导的小鼠淋巴细胞转化的影响
(MT T 法)
取小鼠 40 只 ,分组给药同前 , 连续 14天。于末次给药 24h
后 , 处死小鼠 , 无菌取脾 , 制细胞悬液 , 计数活细胞数 , 用 RP-
MI1640培养液调整细胞浓度为 3×106个/ mL。将细胞悬液分
两孔加入 24 孔培养板中 , 每孔 1mL ,其中一孔加 75μL ConA 液
(相当于 7.5μg/m L),另一孔作对照 , 置 5%CO 2 , 37℃孵箱中培
养 72h , 然后用 M TT 法测定细胞活性 , 以 570nm 波长测定光密
度值。淋巴细胞的增殖能力用加 ConA 孔的光密度值减去不
加 ConA 孔的光密度值表示。
2.5　LP对小鼠 NK 细胞活性的影响(LDH 测定法)
小鼠 40 只 , 分组给药同前 , 连续 14 天。 于末次给药 24h
后 , 处死小鼠 ,无菌取脾 , 制成脾细胞悬液 ,裂解红细胞后 , 用含
10%小牛血清的 RPMI1640 完全培养液重悬 , 台酚兰染色计数
活细胞数 , 最后用 RPMI1640 完全培养液调整细胞浓度为 2×
107个/m L , 此为效应细胞。取传代后 24h 生长良好的 YAC-1
细胞 , 用 RPMI1640 完全培养液调整细胞浓度为 4 ×105个/
m L ,此为靶细胞。取靶细胞和效应细胞各 100μL(效靶比 50:
1), 加入 96 孔培养板处理;用 LDH 法测定 NK 细胞活性。
3　统计处理
用 SPSS 统计软件进行方差分析 ,结果用 x±s ±s 表示。 P
<0.05为差异显著。
67四川生理科学杂志 2009;31(2)
4　实验结果
4.1　对小鼠免疫器官脏器/体重比值的影响
结果见表 1。由表 1 可见 , 与对照组比较 ,脾脏指数有显著
性差异(P<0.05), LP 高剂量组的胸腺指数与对照组相比 , 有
显著性差异(P<0.05), 但 LP 中 、低剂量对小鼠胸腺指数无某
些影响(P>0.05)。
表 1 增强免疫力功能试验小鼠的免疫器官脏器/体重比值(x±s , n=10)
组别 剂量(mg ·kg-1) 脾脏指数　　 胸腺指数　　
LP 高剂量 300 128.67±46.78＊＊ 43.68±10.86＊
LP 中剂量 150 123.54±52.15＊ 40.12±9.23
LP 低剂量 100 106.45±45.67＊ 38.03±6.34
对照组 - 48.95±.8.56 35.62±6.68
注:与对照组比较＊＊P<0.01;＊P<0.05。
4.2 LP 对小鼠血液碳粒廓清速率 、脾淋巴细胞转化能力和血
清溶血素的影响
结果如表 2 所示。从表 2 可见 , LP 高 、中剂量组的吞噬指
数和脾淋巴细胞转化能力均高于对照组 , P<0.05。 LP 高 、中
剂量组的抗体积数均高于对照组 , 表明具有提高小鼠的血清溶
血素水平的作用。 LP 低剂量组与对照组相比 , 无显著性差异
(P>0.05)。
表2 　LP对小鼠碳廓清功能的影响(x±s , n=10)
组别 剂量(mg ·kg-1) 吞噬指数　　
淋巴细胞增殖　　
能力(OD 值)　　 抗体积数　　
LP高剂量 300 8.43±2.06＊＊ 0.175±0.143＊＊ 175.10±18.73＊＊
LP中剂量 150 7.28±1.65＊ 0.148±0.058＊ 165.80±13.88＊
LP低剂量 100 5.28±1.25 0.132±0.087＊ 155.40±14.83
对照组 - 4.71±0.80 0.044±0.046 152.90±14.02
注:与对照组比较＊＊P<0.01;＊P<0.05。
4.3　LP对小鼠 NK 细胞活性的影响
结果如表 3 所示 , LP 各剂量组的 NK 细胞活性均高于对
照组 ,差异均具有显著性(P<0.05)。
表3 LP对小鼠NK细胞活性影响(x±s)
组别 剂量(mg ·kg -1)
NK 细胞活性　　
(%)　　
NK细胞活性　　
转换数据　　
LP 高剂量 300 50.88±11.87＊＊ 0.896±0.122＊＊
LP 中剂量 150 39.45±9.93＊ 0.782±0.103＊
LP 低剂量 100 41.40±7.55＊ 0.698±0.077＊
对照组 - 34.97±7.09 0.412±0.076
注:与对照组比较＊＊P<0.01;＊P<0.05 。
5　讨论
植物来源的多糖作为一种潜在的新药资源 ,其最大的特点
是具有独特的生理活性和低毒副效应 , 因而在临床实际应用有
较广阔的应用前景 , 已引起医药学界的高度重视。目前已有百
余种植物多糖被分离提取出来。其中部分已应用临床 ,如香菇
多糖 、云芝多糖 、灰树花多糖 、裂隙葡多糖 、牛膝多糖等。但由
于多糖本身的原因 , 如多糖的结构太复杂 , 其质量标准不易控
制 , 有些多糖在天然产物中含量很低而不易分离 , 同时多糖的
药理活性和多种因素有关等 ,给多糖的研究和临床应用带来了
一定的限制。因此 , 在规范多糖的提取方法 , 搞清多糖的构效
关系 , 探讨多糖的药理作用机制方面进行深入研究。
我国百合资源较丰富 , 但对百合多糖的研究起步较晚 , 且
主要集中在分离纯化方法及生物学活性研究方面 , 对其化学结
构的研究报道较少。特别是其高级结构与药理作用关系 、其作
用机制等方面的研究尚未见报道[ 2] ,有待开展更深入的研究工
作。随着对百合多糖研究的不断深入 , 百合多糖将会有较好的
临床实际应用前景。
参考文献
1　朱欣婷.植物多糖的生物活性研究进展[ J] .安徽农业科学 , 2008 ,
36(28):12076-12077.
2　任利君.刘俊田.弥曼 ,等 ,百合多糖的研究进展[ J] .西北药学杂志 ,
2005 , 20(6):284-285.
(收稿日期:2009-4-13)
Effect of Lilium polysaccharide on immune function in mice
Luan Yu-quan , Dong Sha-sha , Fang Shu-huan , Wan Shun-kang , Zuo Shao-yuan
(DaLi Colleg e , Dali , Yunnan 671000)
Abstract Objective:To study the effect of Lilium polysaccharide (LP) on immune function in mice.Methods:LP was isolated
from Lilium bake riamum na tive in DaLi , Yunnan , and its immune activ ity w as obse rved.With the dosage of 100 , 150 and 300 mg
kg -1 by ip administra tion to mice fo r 14 days.Results:LP could increase the w eight of spleen and thymus , promo te mononucleic-
macrophage function , as well as inhance the production of hemo ly sin in serum.In addition , LP could remarkably stimula te the pro lif-
er ation and transfo rmation of spinocyte induced by ConA.Fur thmo re , w ith the same do sage , LP could significantly incr ease the ac-
tivity of NK cell in mice.Conclusion:LP had w ide-range regula tive actions upon immuo lo gic function in mice.
Key Words:Lilium po ly saccharide(LP);Immuo log ic function
68 四川生理科学杂志 2009;31(2)