全 文 ：虎眼万年青镇痛抗炎作用的实验研究
张晓丹1 ,闫静 1＊ ,许庆轩 2 ,路杰 1
(1.黑龙江中医药大学药学院 ,黑龙江　哈尔滨　150040;
2.黑龙江大学 ,黑龙江　哈尔滨　150001)
摘　要:目的:研究虎眼万年青乙醇提取物镇痛 、抗炎作用 。方法:采用小鼠热板法和扭体法镇痛实验 ,
观察虎眼万年青提取物的镇痛作用;采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀法和醋酸致小鼠毛细血管通透性增高
法观察其抗炎作用。结果:虎眼万年青提取物能物能明显延长小鼠的疼痛阈值 ,降低毛细血管通透性 ,
抑制由二甲苯所致的炎症反应 ,可显著减轻小鼠耳廓肿胀 。结论:虎眼万年青乙醇提取物有明显的镇
痛 、抗炎作用 。
关键词:虎眼万年青;镇痛;抗炎
中图分类号:R285.5　　　文献标识码:A　　　文章编号:1002-2406(2009)01-0042-02
作者简介:张晓丹(1980-),女 ,现为黑龙江中医药大学 2006级药物分
析专业硕士研究生。
通讯作者:＊闫静(1962-),女 ,现为黑龙江中医药大学教授 ,硕士生导
师 ,主要从事药物合成及药物质谱学研究工作。
收稿日期:2008-12-08
修回日期:2009-01-06
　　虎眼万年青(OrnithogalumcaudatumAit)又名珍珠草 、胡连万年青 、海葱 、葫芦兰 ,为百合科虎眼万年青
属多年生草本植物 [ 1] 。主要分布于东半球温带地区 ,原产于非洲南部 ,我国北方有栽培 。虎眼万年青有极
高的药用价值 ,民间用其全草或球茎入药 ,主要用于抗炎消毒 ,治疗肝病 、肝癌 、胆囊炎症等 。目前 ,对虎眼万
年青的研究主要在其多糖对机体免疫调节方向和化学
成分方向[ 2, 3] ,对于虎眼万年青民间用于镇痛抗炎的
作用尚未见文献报道 。本实验主要对这一作用进行研
究 ,为进一步开发应用虎眼万年青提供依据。
1　实验材料
1.1　实验动物昆明种小鼠 ,体重 18 ～ 22g,雌雄兼用 ,由黑龙江
中医药大学动物实验中心提供 。根据实验性质和性别分笼喂养 ,自由采食饮水。
1.2　实验用药阿斯匹林泡腾片 ,阿斯利康制药有限公司;伊文思
蓝 ,上海化学试剂公司进口分装 ,批号 F-9800。虎眼万年青提取物的制备:取虎眼万年青干燥粉
末 300g, 置 5000mL圆底烧瓶中 , 加入 70% 乙醇
3000mL回流提取 2h,残渣再加 70%乙醇 2 000mL回流提取 2次 ,每次 2h,合并滤液 ,抽滤 ,回收乙醇至无
醇味 ,浓缩并混悬于水中得虎眼万年青乙醇提取物 ,使其每毫升中含 1g生药 ,备用 。
1.3　实验仪器R— 202旋转蒸发器(上海申胜生物技术有限公
司);JY系列药物电子天平(上海民桥精密科学仪器有限公司);ZXC-3R型恒温自控热板仪(石家庄市永丰
电子通讯设备厂);LDZ4-0.8自动平衡微型离心机(北京医用离心机厂);UV-265型紫外分光光度计
(日本岛津)。
2　方法
2.1　虎眼万年青提取物的镇痛实验 [ 4]
2.1.1　对热刺激所致小鼠疼痛的方法(热板法)
取昆明雌性小鼠 ,体重 18 ～ 22g,放入(55±0.5)℃热板测痛仪中 ,小鼠自放上至出现舔后足所需时间(s)作为该鼠的痛阈值 。将筛选合格(舔足时间小于
5s或者大于 30s或者跳跃者弃之不用)的雌性小鼠 50
只 ,随机分为 5组 ,每组 10只 ,即空白对照组 ,虎眼万
年青高 、中 、低剂量组和阳性对照组 ,每组给药前重复测定痛阈值 ,取两次痛阈平均值作为正常痛阈值。连
续给药 4d,每天 1次 ,实验前小鼠禁食不禁水 12 h,空白对照组给予 0.9%生理盐水(20ml/kg),其余组分别
灌服高 、中 、低剂量的虎眼万年青提取液 (20g/kg,
20ml/kg;10g/kg, 20ml/kg;5 g/kg, 20ml/kg),阳性对照
组给予阿司匹林药液(0.2g/kg, 20ml/kg)。第 4天给药后在第 30min、60 min、90 min、120 min测量小鼠的
痛阈值 ,在测定中 ,如 60s内无痛反应 ,应立即取出 ,并以 60s计算 。记录结果求每组均数与标准差 ,比较组
间差异 。
2.1.2　对醋酸所致小鼠疼痛的方法(扭体法)取体重 18 ～ 22g健康小鼠 50只 ,雌雄各半 ,随机
分为 5组 ,分组及给药方法同 “ 2.1.1”。末次给药后
40min后 ,腹腔注射 0.6%冰醋酸 10 ml· kg-1 ,观察 20min内出现的扭体次数。并计算抑制率:抑制率(%)=(空白对照组平均扭体次数 -给药组平均扭体次数)/空
白对照组平均扭体次数 ×100%。各给药组与空白对照组比较 ,统计方法用 t检验法。
2.2　虎眼万年青提取物的抗炎实验
2.2.1　对二甲苯所致耳廓肿胀的方法(小鼠耳肿胀
法)
选雄性昆明种小鼠 5O只 ,体重 18 ～ 22g。随机分为 5组 ,每组 10只 ,即空白对照组(0.9%生理盐水 ,
20ml/kg),虎眼万年青高剂量组 (20g/kg, 20ml/kg)、中剂量组(10g/kg, 20ml/kg)、低剂量组(5g/kg, 20ml/kg)和阳性对照组(阿司匹林药液 0.2g/kg, 20ml/kg),连续灌胃给药 7d,每天 1次 , 实验前小鼠禁食不禁水
12 h。于末次给药后 40min用二甲苯(0.04ml/只)均
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2009年第 26卷第 2期
Vol.26, No.2, 2009 　
匀涂在每只小鼠左耳正反两面致炎 ,右耳不涂作对照 ,
致炎后 2h脱颈椎处死小鼠 ,沿耳廓基线剪下双耳 ,用直径 9mm的打孔器在相同位置取左右两耳片。于分
析天平上称重 ,计算左耳片和右耳片重量的差值(肿胀度)及抑制率。肿胀度 (mg)=左耳片重—右耳片
重 。抑制率(%)=(对照组平均肿胀度—给药组平均肿胀度)/对照组平均肿胀度 ×100%。各给药组与对
照组比较 ,统计方法 t检验法。
2.2.2　对小鼠腹腔毛细血管通透性的方法 [ 5]
选取雄性昆明种小鼠 50只 ,体重 18 ～ 22g。随机分为 5组 ,每组 10只 ,分组及给药方法同 “2.2.1”。
末次灌胃给药 40min后 ,各小鼠尾静脉注射 0.5%伊
文思蓝溶液 10ml·kg-1 ,然后立即腹腔注射 0.6%醋
酸 10ml· kg-1 , 20min后脱颈椎处死动物 ,暴露腹腔 ,
用 10ml生理盐水冲洗腹腔数次 ,收集冲洗液装入试
管 ,以 3 000 r· min-1离心 15 min后 , 取上清液于
590nm处用比色法测定吸光度 ,计算均数与标准差 ,比较组间差异 。
2.3　统计学处理应用 SPSS统计分析软件进行处理 ,实验数据以( x±s)表示 ,实验结果进行多变量方差分析及 t检验 。
3　结果
3.1　镇痛实验结果
3.1.1　对热刺激所致小鼠疼痛的影响　结果见表 1。
表 1　虎眼万年青对小鼠热板法痛阈的影响(n=10, x±s)
组别 剂量C/g· kg-1
给药前痛阈
t· s-1
给药后痛阈值 t·s-1
30min 60min 90min 120min
空白对照组 — 20.32±2.63 21.01±6.20 23.19±6.89 20.81±8.82 22.92±3.67
低剂量组 5 21.28±3.36 26.28±6.20 25.89±9.77 27.06±9.97 29.60±10.89
中剂量组 10 19.39±3.78 30.36±8.82＊ 34.83±9.97＊＊ 32.83±8.23＊＊ 35.95±9.62＊＊
高剂量组 20 20.93±5.43 33.02±9.88＊＊ 34.82±7.42＊＊ 36.55±9.37＊＊ 37.90±7.92＊＊
阳性对照组 0.2 20.37±5.17 33.21±8.83＊＊ 34.06±8.67＊＊ 34.99±10.55＊＊ 38.95±9.72＊＊
注:与空白对照组比较 , ＊P<0.05, ＊＊P<0.01。　　结果显示 ,与空白对照组比较 ,虎眼万年青高 、中剂量组在药后 60min, 90min能显著提高小鼠痛阈值 ,
差异有显著性意义。虎眼万年青高 、中剂量组对热板刺激所致小鼠疼痛均有一定的抑制作用。
3.1.2　对醋酸所致小鼠疼痛的影响　结果见表 2。表 2　虎眼万年青对醋酸致小鼠扭体反应的影响(n=10, x±s)
组别 剂量 扭体次数 抑制率(%)
空白对照组 — 45.90±9.94 —
低剂量组 5 37.10±8.71＊ 19.17
中剂量组 10 28.40±6.70＊＊ 38.13
高剂量组 20 21.60±6.47＊＊ 52.94
阳性对照组 0.2 14.20±5.35＊＊ 69.06
注:与空白对照组比较 , ＊P<0.05, ＊＊P<0.01。
结果显示 ,虎眼万年青高 、中 、低剂量组均能对抗
醋酸刺激所致的疼痛反应 ,使小鼠扭体次数明显减少。虎眼万年青高 、中剂量组与空白对照组比较均有统计
学差异 ,且以虎眼万年青高剂量组作用更明显 (P<
0.01)。
3.2　抗炎实验结果
3.2.1　对二甲苯所致耳廓肿胀的影响　结果见表 3。
表 3　虎眼万年青对二甲苯所致耳廓肿胀的影响(n=10, x±s)
组别 剂量 肿胀度 抑制率(%)
空白对照组 — 16.30±3.39 —
低剂量组 5 6.68±1.02＊＊ 59.01
中剂量组 10 3.92±0.91＊＊ 75.94
高剂量组 20 2.53±0.73＊＊ 84.46
阳性对照组 0.2 2.09±0.82＊＊ 87.20
注:与空白对照组比较 , ＊P<0.05, ＊＊P<0.01。
结果显示 ,各给药组对二甲苯引起的小鼠耳廓肿
胀均有一定的抑制作用 ,与空白对照组比较有统计学
差异。虎眼万年青高 、中 、低剂量组均能使小鼠耳廓肿胀度明显降低 ,其中虎眼万年青高剂量组作用更明显(P<0.01)。
3.2.2　对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响　结果见
表 4。
表 4　虎眼万年青对小鼠腹腔毛细血管通透性的
影响(n=10, x±s)
组别 剂量 吸光度
空白对照组 — 0.451±0.099
低剂量组 5 0.326±0.094＊＊
中剂量组 10 0.231±0.097＊＊
高剂量组 20 0.192±0.076＊＊
阳性对照组 0.2 0.232±0.081＊＊
注:与空白对照组比较 , ＊P<0.05, ＊＊P<0.01。
结果显示 ,各给药组均能降低伊文思蓝的吸光度。与空白对照组相比 ,虎眼万年青高 、中剂量组能显著抑
制醋酸所致的小鼠毛细血管通透性增高(P<0.01),使腹腔内渗出的染料明显减少 。
4　讨论本实验运用热板法和扭体法对虎眼万年青的镇痛
作用进行研究 ,结果显示 ,虎眼万年青具有一定的镇痛作用或有这种作用的趋势 ,能减少醋酸所致的小鼠扭
体反应次数 。对二甲苯所致小鼠耳肿胀模型和腹腔毛
细血管通透性亢进模型的实验结果表明 ,虎眼万年青能显著抑制二甲苯所致小鼠耳廓肿胀 ,抑制醋酸诱导
的小鼠腹腔毛细血管通透性增加 ,说明该药能抑制毛细血管扩张 、通透性增加 、渗出性水肿为主的炎症早期
反应。其抗炎作用呈现一定的量效关系 ,以高剂量的作用最显著(P<0.01)。上述实验结果显示 ,虎眼万
年青具有一定的镇痛抗炎作用 ,与民间所说疗效一致 ,其镇痛抗炎作用机制及其有效部位有待进一步研究 。
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Vol.26, No.2, 2009 　　　　　　　　
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