全 文 ：·论 著· 中国医药导报 2016 年 8 月第 13 卷第 24 期
CHINA MEDICAL HERALD Vol. 13 No. 24 August 2016
重楼（Paridis Rhizoma）是百合科重楼属植物，始
载于《神农本草经》，称“蚤休”，列为下品[1]。味苦，性微
寒，有小毒，归肝经，具有清热解毒、消肿止痛、凉肝定
惊的功效[2]。现代药理研究证明重楼具有抗肿瘤、止血
止痛[3-4]、抗炎抑菌、心血管系统作用 [5]等药理活性，其
活性成分有重楼总皂苷和黄酮类化合物 [6]。 重楼主要
分布于亚欧大陆的温带、亚热带地区 [7]，约有 10 个品
种，我国分布有 7 种 8变种[8]，主要分布于云南、贵州、
四川、湖北等地。 武当山区分布有 2 种 6 变种[9]，主要
有七叶一枝花（华重楼）、滇重楼、球药隔重楼、长药隔
重楼、狭叶重楼、宽叶重楼等。 重楼是多年生草本，对
生长环境要求较高，不同的海拔高度、气温、气候、土
壤等因素都可能影响重楼质量及产量 [10]。 另外，山体
武当山区不同采收期宽叶重楼地上部分
总黄酮的累积规律
杨金霞 1，2 张 慧 3 叶 方 1，2▲ 黄良永 1，2 孙良学 4 雷 攀 1，2
1.湖北省十堰市太和医院 湖北医药学院附属医院药学部，湖北十堰 442000；2.湖北医药学院湖北省药用植物综
合利用工程技术研究中心，湖北十堰 442000；3.湖北中医药大学药学院，湖北武汉 430064；4.湖北济世药业有
限责任公司，湖北十堰 442000
[摘要] 目的 以武当山区野生转家种宽叶重楼为样本，测定宽叶重楼不同采收期地上部分总黄酮含量，研究总黄
酮累积规律。 方法 根据黄酮与 Al3+络合形成稳定络合荧光物质的特点，以芦丁为标准品，采用荧光光度法测定
宽叶重楼地上部分的黄酮含量。 结果 宽叶重楼地上部分总黄酮含量在 4 月上旬最高，随后呈降低趋势，到
6 月下旬种子开始发育时含量升高，然后再下降，到 7 月下旬最低。4月上旬、下旬，5、6、7、9 月总黄酮含量分别为
1.11%、0.76%、0.47%、0.70%、0.19%、0.53%。 结论 以总黄酮含量为考察指标， 考虑到植株生长发育的实际因素，
宽叶重楼地上部分可在 6月中下旬采收。
[关键词] 宽叶重楼；荧光光度法；地上部分；总黄酮；累积规律
[中图分类号] R927.1 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2016）08（c）-0016-05
Dynamic change of total flavonoids in aerial parts of Paris polyphylla var.
latifolia in various harvest times from Wudang Mountain area
YANG Jinxia1，2 ZHANG Hui 3 YE Fang1，2▲ HUANG Liangyong1，2 SUN Liangxue4 LEI Pan1，2
1.Department of Pharmacy, Shiyan Taihe Hospital, the Affiliated Hospital of Hubei University of Medicine, Hubei
Province, Shiyan 442000, China; 2.Engineering Research Center for Herbal Utilization of Hubei Province, Hubei
Province, Shiyan 442000, China; 3.College of Pharmacy, Hubei University of Chinese Medicine, Hubei Province,
Wuhan 430064, China; 4.Hubei Jishi Pharmaceutical Co. Ltd., Hubei Province, Shiyan 442000, China
[Abstract] Objective To study the dynamic change of total flavonoids in aerial parts of Paris polyphylla var. latifolia in
Wudang Mountain area, and to explore the optimal harvest period of Paris polyphylla var. latifolia. Methods According
to the characteristic that flavonoids could react with Al3+ to form stable flurescent complex, taking rutin as the standard
sample, and fluorescence spectrophotometric method to determine the content of total flavonoids was used in the aerial
parts of Paris polyphylla var. latifolia in different harvest periods. Results The content of total flavonoids reached high-
est level in early April, after that it had a trend to decrease, but it increased and then decreased in the last June, and
reached the lowest in late July. The content of early April, late April, May, June, July, September was 1.11%, 0.76%,
0.47%, 0.70%, 0.19%, 0.53% respectively. Conclusion The optimal harvest period of Paris polyphylla var. latifolia in
Wudang Mountain area is confirmed in mid to late June, for the content of total flavonoids as reference indexes with
considering the actual factors.
[Key words] Paris polyphylla var. latifolia; Fluorescence spectrophotometry; Aerial parts; Total flavonoids; Accumula-
tive rules
[基金项目] 湖北省 2011 计划（2011JH-2014CXTT13）；湖北
省药用植物综合利用工程技术研究中心项目（GC2015204）。
▲通讯作者
16
中国医药导报 2016 年 8月第 13卷第 24期
CHINA MEDICAL HERALD Vol. 13 No. 24 August 2016
·论 著·
走向也会影响其生长，同样是高海拔地区，重楼喜背
阴坡，而朝阳坡基本不生长，且需要腐殖质丰富的土
壤。 武当山区以其独特的地理气候环境，适于重楼等
药用植物的生长[9]。重楼的主要药用部位是根茎，主要
药用成分是甾体皂苷类，一般需要种植 5 年以上才能
药用。 而重楼每年生长的地上部分没有得到利用，造
成资源浪费[11]。
黄酮类化合物是重楼的化学成分之一[12]。 黄酮类
化合物具有抗心律失常、抗血脂、镇静、抗抑郁、抗菌
抗病毒、免疫调节等作用，目前含有黄酮类化合物的
药物有很多，如舒血宁片、心脉舒通等[13]。 通过研究重
楼中黄酮类化合物的分布情况有可能开发新的药用
资源，使重楼地上部分得到合理应用。 本次试验采用
荧光光度法，测定重楼地上部分黄酮含量，研究总黄
酮的累积规律，根据各地重楼的黄酮累积规律合理确
定采收时间，以合理利用资源。
1 仪器与试药
1.1 仪器
荧光光谱仪（日立 F-7000），电子分析天平（FA-
2004，上海精密仪器），数字式酸度计（PHSJ-A，上海
雷磁仪器 ），电热恒温水浴箱 （HW1A，北京医疗设
备厂）。
1.2 试药
芦丁标准品（中国食品药品检定研究院，100080-
201408，供含量测定用，92.8%）。
重楼药材采自武当山区龙王寨重楼种植基地，由
湖北医药学院药学院叶方副教授鉴定，样本保存在湖
北医药学院附属十堰市太和医院药学部标本室。其样
品基源地及产地信息见表 1。 药材洗净，50℃烘干，粉
碎过 3 号筛备用。 硝酸铝、醋酸钠、冰乙酸均为分析
纯，水为自制去离子水。
1
2
3
4
5
6
茅箭区马家河龙王寨
茅箭区马家河龙王寨
茅箭区马家河龙王寨
茅箭区马家河龙王寨
茅箭区马家河龙王寨
茅箭区马家河龙王寨
宽叶重楼
宽叶重楼
宽叶重楼
宽叶重楼
宽叶重楼
宽叶重楼
Paris polyphylla var. latifolia
P. polyphylla var. latifolia
P. polyphylla var. latifolia
P. polyphylla var. latifolia
P. polyphylla var. latifolia
P. polyphylla var. latifolia
20150411
20150424
20150516
20150621
20150725
20150925
1.11
0.76
0.47
0.70
0.19
0.53
编号 产地 品种鉴定 拉丁名 采集日期 总黄酮含量（%）
表 1 样品基源及产地信息和含量测定结果
2 方法与结果
2.1 对照品的制备
精密称取芦丁对照品 10.3 mg 于 50 mL 容量瓶
中，用 60%的乙醇溶解，定容至刻度，摇匀，得浓度为
0.2060 mg/mL 的对照品溶液。
2.2 供试品的制备
精密称取重楼地上部分干燥粉末 1 g，置于 100 mL
锥形瓶中， 加入 25 mL 石油醚，60℃水浴回流 2 h，弃
去石油醚液， 药渣挥干后加入 60%乙醇 30 mL，80℃
水浴回流 2 h。 滤过，滤渣用 60%乙醇洗涤 3 次，滤
液定容至 50 mL 容量瓶中， 摇匀， 得到样品提取液
A1~A6[14]。
2.3 测定方法及检测波长的确定
精密量取“2.1”项下对照品溶液 0.5 mL 于 10 mL
容量瓶中，加入 10%硝酸铝溶液 1 mL，pH=4 的 HAc-
NaAc缓冲溶液 3 mL，用 60%乙醇定容至刻度。精密量
取 A1溶液 0.5 mL于 10 mL容量瓶中，同法操作[14-15]。 固
定激发波长 （λex），在 200~700 nm 范围内进行对照
品和样品溶液荧光扫描，确定发射波长（λem），结果
最佳 λem 为 484 nm，见图 1~2；固定 λem 为 484 nm，
扫描 λex 在 200~700 nm 范围内对照品及样品溶
液荧光强度 ，结果最佳 λex 为 445 nm，见图 3~4。
确定检测波长：λex为445 nm，λem为 484 nm， 狭缝宽
度为 2.5 nm。
图 1 芦丁标准品：固定激发波长扫描发射波长
波长（nm）
500
0
200 300 400 500 600 700
荧
光
强
度
17
·论 著· 中国医药导报 2016 年 8 月第 13 卷第 24 期
CHINA MEDICAL HERALD Vol. 13 No. 24 August 2016
2.4 方法学考察
2.4.1 标准曲线的考察 分别精密移取芦丁对照品溶
液 0.0、0.1、0.2、0.4、0.8、1.6 mL， 置于 10 mL 容量瓶
中 ， 加入 10%的硝酸铝溶液 1 mL，pH=4 的 HAc-
NaAc 缓冲溶液 3 mL，用 60%乙醇定容，摇匀，静置
25 min，即配成标准工作溶液。 以 60%乙醇溶液为空
白对照， 在固定激发波长为 445 nm， 发射波长为
484 nm，狭缝宽度为 2.5 nm的条件下，测定荧光强度。
以荧光光度值为 Y 轴，芦丁浓度（μg/mL）为 X 轴绘制
标准曲线，求回归方程。 结果芦丁的线性方程为：Y=
0.019 05X+0.0385（r2 =0.9968），说明在 2.06~32.96 μg/mL
范围内芦丁浓度与荧光强度呈良好的线性关系。
2.4.2 精密度试验 取标准品溶液 1.0 mL 于容量瓶
中，按“2.4.1”项下操作，静置 25 min后，在 λex=445 nm，
λem=484 nm处连续测定光度值 5次，计算 RSD值。 结
果 RSD=1.50%。 表明仪器精密度良好。
2.4.3 重复性试验 取 1 号样品 6 份，精密量取同样的
体积，按“2.4.1”项下操作，测定它们的光度值，计算总
黄酮含量，6 份样品的平均总黄酮含量为 1.11%，RSD
值为 1.39%。 表明重复性良好。
2.4.4 稳定性试验 取同一样品在 0、0.5、1.0、2.0、4.0 h
内测定光度值，结果 RSD=1.25%。 表明样品溶液在
4 h内稳定性良好。
2.4.5 加样回收率测定 精密称取同批次 6 号药材粉
末 0.5 g，共计 6 份，按“2.2”项下提取样品溶液，石油
醚挥干后加入浓度为 2.6500 mg/mL 的芦丁对照品溶
液 1 mL，同法操作，用 60%乙醇定容后按“2.3”项下
络合显色 。 测得其平均回收率为 96.87% ，RSD 为
1.48%，说明芦丁的加样回收率符合规定。 见表 2。
图 2 样品溶液：固定激发波长扫描发射波长
图 3 芦丁标准品：固定发射波长扫描激发波长
波长（nm）
荧
光
强
度
波长（nm）
荧
光
强
度
图 4 样品溶液：固定发射波长扫描激发波长
波长（nm）
荧
光
强
度
18
中国医药导报 2016 年 8月第 13卷第 24期
CHINA MEDICAL HERALD Vol. 13 No. 24 August 2016
·论 著·
1
2
3
4
5
6
0.5005
0.5018
0.4989
0.4975
0.5012
0.4982
2.6627
2.6696
2.6541
2.6467
2.6664
2.6504
2.6500
2.6500
2.6500
2.6500
2.6500
2.6500
5.2703
5.2319
5.2345
5.2522
5.1900
5.1727
98.40
96.69
97.37
98.32
95.23
95.18
96.87 1.48
编号 原药材粉末质量（g） 样品中含量（mg） 加入量（mg） 测得量（mg） 回收率（%） 平均回收率（%） RSD（%）
表 2 加样回收率试验结果
2.5 样品含量测定
在狭缝宽度为 2.5 nm、激发波长为 λex =445 nm、
发射波长 λem=484 nm 的条件下按“2.3”项下操作方法
测定样品中总黄酮的荧光强度，再用回归方程计算含
量，结果见表 1。
2.6 重楼地上部分总黄酮含量动态积累规律结果分析
根据含量测定结果，结合采收时间绘制重楼地上
部分总黄酮含量变化曲线图见图 5。 由图 5 可知，含
量最高的为 4 月上旬，达到 1.11%，然后开始降低，
6 月下旬花发育成熟出现一个高峰，然后再降低，至
7 月下旬降到最低，为 0.19%，然后又开始上升。
3 讨论
通过对宽叶重楼不同采收期总黄酮含量的测定
可以看出，不同采收期总黄酮含量有较大差异。 由于
重楼是多年生药用植物， 根茎繁殖需 4~5 年采收，种
子繁殖需要 8~9 年采收，周期较长。 在人工种植重楼
过程中， 为了让养分集中供应根茎部位以利生长，一
般在 5~6 月花萼片展开后， 及时剪去全部花花萼，以
提高产量[16-17]。这样地上部分均被浪费，在野生资源日
趋紧张的大环境下，有必要开展药材新资源的研究[18]。
如能用宽叶重楼地上部分为原料提取黄酮，对扩大其
临床用药的药源具有积极的经济意义。所以如按重楼
中黄酮成分考察， 可以在 6 月中下旬采收重楼地上
部分。
重楼在许多中药制剂中都有应用， 是云南白药、
季德胜蛇药片、宫血宁胶囊、楼莲胶囊、热毒清胶囊等
重要中成药的主要成分。但在《中国药典》中药用重楼
仅为云南重楼和七叶一枝花，各地野生重楼资源下降
严重，有的甚至濒临灭绝，所以可以考虑其他民间应
用的品种，如多叶重楼、宽叶重楼等替代云南重楼和
七叶一枝花。 重楼的地上部分生长较快 [19]，也可以通
过考察地上部分有效成分的含量，挖掘其隐含着药用
及经济价值，避免资源浪费。
根据黄酮类化合物能与铝离子反应形成荧光螯
合物的原理 [20]，可以采用荧光分光光度法测定黄酮类
化合物的含量。 重楼地上部分含有大量的叶绿素，在
样品处理过程中用石油醚除去叶绿素，但可能还是会
对黄酮成分的分析存在干扰，本研究采用硝酸铝在酸
性条件下与芦丁等黄酮类化合物产生荧光物质的原
理，用荧光分光光度法测定总黄酮含量，专属性较高。
[参考文献]
[1] 清·黄奭辑.神农本草经[M].北京：中医古籍出版社,1982：
298.
[2] 国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京：中国医药科技
百
分
含
量
图 5 重楼不同采收期黄酮含量
月份
19
·论 著· 中国医药导报 2016 年 8 月第 13 卷第 24 期
CHINA MEDICAL HERALD Vol. 13 No. 24 August 2016
[15] Tay Y，Zhang J，Thomson AM，et al. MicroRNAs to
Nanog，Oct4 and Sox2 coding regions modulate embryon-
ic stem cell differentiation [J]. Nature，2008，455（7216）：
1124-1128.
[16] 覫rom UA，Nielsen FC，Lund AH. MicroRNA-10a binds
the 5UTR of ribosomal protein mRNAs and enhances
their translation [J]. Mol Cell，2008，30（4）：460-471.
[17] Cesana M，Cacchiarelli D，Legnini I，et al. A long non-
coding RNA controls muscle differentiation by function-
ing as a competing endogenous RNA [J]. Cell，2011，147
（2）：358-369.
[18] Poliseno L，Salmena L，Zhang J，et al. A coding-indepen-
dent function of gene and pseudogene mRNAs regulates
tumour biology [J]. Nature，2010，465（7301）：1033-1038.
[19] Eiring A M，Harb JG，Neviani P，et al. miR-328 func-
tions as an RNA decoy to modulate hnRNP E2 regula-
tion of mRNA translation in leukemic blasts [J]. Cell，
2010，140（5）：652-665.
[20] Cordes KR，Sheehy NT，White MP，et al. miR-145 and
miR-143 regulate smooth muscle cell fate and plasticity [J].
Nature，2009，460（7256）：705-710.
[21] Cheng Y，Liu X，Yang J，et al. MicroRNA-145，a novel
smooth muscle cell phenotypic marker and modulator，
controls vascular neointimal lesion formation [J]. Circ Res，
2009，105（2）：158-166.
[22] Sun SG，Zheng B，Han M，et al. miR-146a and Krüppel-
like factor 4 form a feedback loop to participate in vas-
cular smooth muscle cell proliferation [J]. EMBO Rep，2011，
12（1）：56-62.
[23] Chen J，Yin H，Jiang Y，et al. Induction of microRNA-1
by myocardin in smooth muscle cells inhibits cell prolif-
eration [J]. Arterioscler Thromb Vasc Biol，2011，31（2）：
368-375.
[24] Torella D，Iaconetti C，Catalucci D，et al. MicroRNA-133
controls vascular smooth muscle cell phenotypic switch
in vitro and vascular remodeling in vivo [J]. Circ Res，
2011，109（8）：880-893.
[25] Li P，Zhu N，Yi B，et al. MicroRNA-663 regulates human
vascular smooth muscle cell phenotypic switch and vas-
cular neointimal formation [J]. Circ Res，2013，113（10）：
1117-1127.
（收稿日期：2016-05-23 本文编辑：程 铭）
出版社，2015：260.
[3] Zheng JY，Wang H，Chen XX，et al. Microsatellite markers
for assessing genetic diversity of the medicinal plant Paris
polyphylla var.chinensis（Trilliaceae） [J]. Genet Mol Res，
2012，11（3）：1975-1980.
[4] Song Y，Li MF，Xu J，et al. Polymorphic microsatellite
markers in the traditional Chinese medicinal plant Paris
polyphylla var.yunnanensis [J]. Genet Mol Res，2015， 14（3）：
9939-9942.
[5] Li P，Fu JH，Wang JK，et al. Extract of Paris polyphylla
Simth Protects Cardiomyocytes from Anoxia-Reoxia Injury
through Inhibition of CalciumOverload [J]. Chin J Integr Med，
2011，17（4）：283-289.
[6] 钟月姣，刘莹，于新海，等.重楼活性成分及药理作用研
究进展[J].黑龙江畜牧兽医，2016，2：69-71.
[7] Birendra M，Dhurva P，Gauchan，et al. An ethnobotanical
study of medicinal plants used by ethnic people in Parbat
district of western Nepal [J]. Journal of Ethnopharmacolo-
gy，2015，165：103-117.
[8] 中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志[M].15卷.
北京：科学出版社，1978：86-96.
[9] 叶方，胡培，杨光义，等.湖北武当山地区重楼资源调查[J].
中药材，2015，38（8）：1616-1618.
[10] 马云淑，桂镜生，朱燕，等．滇产重楼资源及市场情况调
查[J].云南中医学院学报，1997，20（2）：24-25.
[11] 年四辉，刘丽敏 .重楼地上部分初步开发实验研究 [J].
云南中医中药杂志，2007，28（4）：35-36.
[12] 张亚茹，彭献娜，王彩虹，等.重楼活性化学成分与药理
作用研究进展[J].亚太传统医药，2015，11（2）：39-40.
[13] 张丹萍，丁丁 .黄酮类化合物药理作用的研究 [J].北方
药学，2015，12（8）：150.
[14] 张敏，邱朝晖，曹庸，等.荧光光度法测定银杏叶总黄酮
含量的研究[J].时珍国医国药，2005，16（3）：238-239.
[15] 刘君，李振泉，全先高，等.荧光法测定不同采收期银杏
叶中的总黄酮[J].数理医药学杂志，2012，25（1）：94-95.
[16] 杨斌，李绍平，王馨，等 .滇重楼的栽培与合理利用 [J].
中国野生植物资源，2008，27（6）：70-73.
[17] 梅中青，梅益丽.七叶一枝花野生变人工栽培的技术研
究[J].中国中药杂志，2004，29（12）：1213-1214.
[18] 冯玲枫，翁美娅，田富饶，等 .11 种铁线莲属药用植物
地上部分总黄酮含量比较研究[J].中国现代中药，2011，
13（7）：14-18.
[19] 杨光义，胡培，叶方，等.重楼资源分布与可持续利用研
究进展[J].中国药师，2016，19（1）：159-162.
[20] 邵菊芳，温宗壮，朱红威.基于荧光光谱法对银杏黄酮
糖苷的检测研究[J].光谱学与光谱分析 .2013，33（11）：
3055-3060.
（收稿日期：2016-04-20 本文编辑：赵鲁枫）
（上接第 15 页）
20