全 文 ：Hainan Med J, Oct. 2016, Vol. 27, No. 20
荧光光度法测定竹叶柴胡地上部分不同部位总黄酮含量
樊秦娥，胡杨根，叶方
(十堰市太和医院湖北医药学院附属医院产科，湖北 十堰 442000)
【摘要】 目的 分析竹叶柴胡不同部位总黄酮含量，研究黄酮在柴胡不同部位的分布，为中药资源合理开发利用
提供参考。方法 以芦丁为对照品，以5%硝酸铝与样品中黄酮成分产生络合反应，选择激发波长λex=445 nm，发射波
长λem=484 nm，应用荧光光度法测样品的荧光光度值，计算总黄酮含量。结果 以芦丁在0.198~3.168 μg/mL范围
内与荧光强度线性关系良好，y=0.972 8x-0.001，r2=0.999 3。竹叶柴胡花、叶、茎中总黄酮含量最分别为 3.08%、
1.85%、0.41%。结论 竹叶柴胡花、叶中总黄酮含量较高，应在开花期采收竹叶柴胡地上部分。
【关键词】 竹叶柴胡；总黄酮；荧光光度法
【中图分类号】 R93 【文献标识码】 A 【文章编号】 1003—6350（2016）20—3319—03
Determination of total flavonoids in different aerial parts of Bupleurum marginatum by fluorescence
spectrophotometry. FAN Qin-e, HU Yang-gen, YE Fang. Department of Obstetrics, the Affiliated Hospital of Hubei
Medical College (Taihe Hospital of Shiyan), Shiyan 442000, Hubei, CHINA
【Abstract】 Objective To establish a method to determine the total flavonoid levels in flower, leaves and stalk
of Bupleurum marginatum by Spectrofluorimetry, and to provided a reference for reasonable development and utilization
of traditional Chinese medicine resources. Methods Based on fluorescent property that flavonoids could make a stable
complexation with Al3+, and the excitation and emission wavelengths were selected at 445 nm and 484 nm respectively
with rutin as the standard sample. The total flavonoids levels were determined in the sample by fluorescence spectropho-
tometry. Results The fluorescence intensity had a good linear relationship with rutin concentration in the range of
0.198~3.168 μg/mL. The regression equation was found to be y=0.972 8x-0.001, r2=0.999 3. The content of flavonoids
in flower, leaves and stalk were 3.08%, 1.85%, 0.41%, respectively. Conclusion The flower, leaves of Bupleurum mar-
ginatum contain relatively higher levels of total flavonoids, which provides a reference for harvesting the aerial parts of
Bupleurum marginatum in flowering period.
【Key words】 Bupleurum marginatum; Total flavonoids; Fluorescence spectrofluorimetry
·论 著·doi:10.3969/j.issn.1003-6350.2016.20.017
通讯作者：胡杨根。E-mail：wuerfan@sina.com
柴胡为伞形科柴胡属多年生草本植物，最早收载
于《神农本草经》，原名茈胡，具有疏散退热、疏肝解
郁、升举阳气的功效，《中国药典》收载(北)柴胡 Bu-
pleurum chinense DC.和南柴胡(狭叶柴胡) B. scorzoneri
folium Willd.作为正品柴胡 [1]，但除大叶柴胡外，很多
其他柴胡品种在药材市场上也作为柴胡广泛应用[2]。
鄂西北地区主要分布竹叶柴胡(Bupleurum marginatum
Wall ex DC)，习惯以北柴胡之名远销国内外，品质较
好 [3]。柴胡中主要含有皂苷类和黄酮类活性成分，皂
苷类成分具有解热、抗炎、镇静、镇痛、保肝、抗肿瘤等
􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲􀤲
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(收稿日期：2016-03-18)
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海南医学2016年10月第27卷第20期
海南医学2016年10月第27卷第20期 Hainan Med J, Oct. 2016, Vol. 27, No. 20
药理作用，黄酮类成分具有杀菌、抗病毒等作用[4-6]，黄
酮类化合物主要分布在植株的地上部分[7]，竹叶柴胡
植物地上部分占植株的比例较大，生产中通常都被丢
弃，造成了资源浪费。为了更好地利用中药资源，进
一步考察不同部位黄酮成分分布情况，我们对地上部
分花、茎、叶中总黄酮含量进行分析比较，为开发利用
地上部分提供参考。
1 仪器与材料
F-7000荧光光谱仪(日立)；GZX-9240MBE电热
鼓风干燥箱(上海博弈实业有限公司医疗设备厂)，
MBE-20A 1000克密封型摇摆式粉碎机(温岭市迈邦
机械设备有限公司)，SQP分析天平(赛多利斯科学仪
器北京有限公司)，KQ-250D型数控超声波清洗器(昆
山市超声仪器有限公司)，SHZ-DⅢ循环水式多用真空
水泵(河南宇科自动化仪器仪表设备有限公司)，旋转
蒸发器RE-52A (上海亚荣生化仪器厂)。
柴胡药材采自湖北医药学院百草园，由湖北医药
学院药学院叶方副教授鉴定，见表 1。去杂质，枯枝，
洗净，45℃烘干，粉碎，过 3号筛备用。芦丁对照品
(GR-133-140106)购自南京广润生物制品有限公司；
甲醇、乙腈为色谱纯，水为自制超纯水，其他试剂均为
分析纯。
2 方法与结果
2.1 对照品溶液的制备 精密称取芦丁对照品
10 mg于 50 mL容量瓶中，用 60%的乙醇溶解并稀释
至刻度，冷藏储存备用。
2.2 样品溶液的制备 精密称取柴胡样品粉末
1 g，置于50 mL圆底烧瓶中，加石油醚25 mL，70℃水
浴回流 2 h，弃石油醚液，药渣挥干石油醚后加 60%乙
醇 30 mL，70℃回流提取 2 h，滤过，60%乙醇洗涤药
渣和容器，合并滤液转移至 50 mL容量瓶中，加 60%
乙醇稀释至刻度 [8]得溶液A1~A5。从A1~A5中精密
量取 5 mL置 50 mL容量瓶中，以 60%乙醇稀释至刻
度，得到供试品溶液B1~B5。
2.3 测定方法及测定波长的选择 精密量取
0.5 mL对照品溶液于 10 mL容量瓶中，加入 5%硝酸
铝溶液 1 mL，pH=5的HAc-NaAc缓冲溶液 3 mL，用
60%乙醇稀释至刻度 [9]。精密量取B1溶液 0.5 mL于
10 mL容量瓶中，同法操作。根据芦丁等黄酮类成分
在酸性条件下与硝酸铝反应产生荧光物质的特点，
取两种溶液进行激发光谱和发射光谱扫描：固定激
发波长(λex)，扫描发射波长(λem)在 200~700 nm范围内
芦丁对照品及样品溶液荧光强度，结果最佳λ em为
484 nm，见图 1；固定λem484 nm，扫描λex在 200~700 nm
范围内芦丁对照品及样品溶液荧光强度，结果最佳
λex为445 nm，见图2~图4。因此，确定测定波长：激发
波长为445 nm，发射波长484 nm，狭缝宽度为5 nm。
表1 柴胡样品及来源、含量测定结果(n=3)
样品号
1
2
3
4
5
药材品种
竹叶柴胡
竹叶柴胡
竹叶柴胡
竹叶柴胡
竹叶柴胡
拉丁名
B. marginatum
B. marginatum
B. marginatum
B. marginatum
B. marginatum
生长部位
叶
叶
花
茎
茎
生长
年限
2
1
1
1
2
图2 固定发射波长，扫描对照品激发波长
图3 固定激发波长，扫描样品发射波长
图1 固定激发波长，扫描对照品发射波长
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Hainan Med J, Oct. 2016, Vol. 27, No. 20
图4 固定发射波长，扫描样品激发波长
2.4 线性关系考察 准确吸取此溶液 0 mL、
0.1 mL、0.2 mL、0.4 mL、0.8 mL、1.6 mL，分别置于10 mL
容量瓶中，加入 5%的硝酸铝溶液 1 mL，pH=5的醋
酸-醋酸钠缓冲液 3 mL。用 60%乙醇稀释至刻度，摇
匀，即配成标准工作溶液。以 60%乙醇溶液作空白
对照，按“2.3”项下操作，测定荧光强度。以荧光强度
对相应的浓度作图，绘制标准曲线。结果芦丁的线
性回归方程为：y=0.972 8x-0.001，r2=0.999 3，说明在
0.198~3.168 μg/mL范围内芦丁浓度与其荧光强度呈良
好的线性关系。
2.5 精密度试验 精密量取芦丁对照品溶液
0.5 mL，按照“2.3”项下操作，连续测定荧光强度 5次，
记录荧光强度值。结果RSD为 0.24%，说明仪器精密
度良好。
2.6 重现性试验 取同一样品6份，按样品测定
方法操作，测定荧光强度。结果RSD为0.92%，表明方
法重现性良好。
2.7 稳定性试验 取同一样品溶液在0 h、0.5 h、
1 h、2 h、4 h内测定荧光强度，结果RSD为 0. 89%，表
明样品供试品溶液在 4 h内检测对结果无影响，稳定
性良好。
2.8 加样回收试验 精密称取芦丁对照品
21.04 mg，稀释至 50 mL量瓶中，得到 0.42 mg/mL的
对照品溶液。精密称取4号样品0.5 g于50 mL圆底烧
瓶中，加入5 mL 0.42 mg/mL的对照品溶液，依次按照
“2.2”及“2.3”方法处理进行加样回收试验，计算加样
回收率(n=6)，结果平均回收率为 97.91%，相对标准偏
差为1.33%，见表2。
2.9 样品测定结果 精密吸取供试品溶液
B1~B5各0.5 mL于10 mL容量瓶中，按“2.3”方法测定
荧光光度值，以 60%乙醇溶液作为空白对照，计算样
品中总黄酮的含量，样品1（生长部位：叶，2年）总黄酮
含量 0.35%；样品 2（生长部位：叶，1年）1.85%；样品 3
（生长部位：花，1年）3.08%；样品 4（生长部位：茎，1
年）0.41%；样品5（生长部位：茎，2年）0.95%。
3 讨 论
竹叶柴胡茎、叶、花中总黄酮含量测定结果显示，
1年生柴胡花中总黄酮含量最高，为 3.08%，叶中总黄
酮含量为1.85%，茎中总黄酮含量最低，只有0.41%。2
年生柴胡花中总黄酮没有检测，但 2年生柴胡叶中总
黄酮含量低于 1年生，而茎中含量高于 1年生柴胡，1
年生柴胡茎叶中黄酮总量高于 2年生柴胡，说明柴胡
不同部位黄酮类成分的累积规律与生长周期的变化
不呈相关性。如果以柴胡总黄酮作为主要疗效成分
时，应在一年生柴胡开花期采收，同时由于茎中总黄
酮含量较低，所以在种植中可以通过给柴胡打顶收集
柴胡叶和花作为原料，即能保证柴胡主要药用部位根
茎的生长，还能综合利用资源。
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(收稿日期：2016-04-22)
表2 芦丁加样回收率
药材量
(g)
0.536 5
0.534 8
0.527 3
0.513 7
0.542 6
0.509 2
黄酮含量
(mg)
2.199 7
2.192 7
2.161 9
2.106 2
2.224 7
2.087 7
加样量
(mg)
2.10
2.10
2.10
2.10
2.10
2.10
测得量
(mg)
4.263 2
4.209 3
4.252 6
4.183 7
4.278 1
4.122 8
回收率
(%)
98.26
96.03
99.56
98.93
97.78
96.91
平均回收率
(%)
97.91
RSD
(%)
1.33
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