全 文 ：·实验研究· 2012 年 11月第 9卷第 33期
中国医药导报 CHINA MEDICAL HERALD
莪术为姜科姜黄属植物蓬莪术 Curcuma phaeocaulis
Val.、 广西莪术 Curcuma kwangsiensis S. G. Lee et C. F. Liang
或温郁金 Curcuma wenyujin Y. H. Chen et C. Ling 的干燥根
茎，其性味辛、苦、温，归肝、脾经，具行气破血、消积止痛的功
效，用于症瘕痞块，瘀血经闭，胸痹心痛，食积胀痛 [1]。 其中的
广西莪术主要分布于我国的广西壮族自治区， 又称毛莪术、
桂莪术，主要含有挥发油、姜黄素、二苯庚烷类、多种萜类及
多糖类等成分 [2-3]。 现代药理研究表明，莪术具有抗肿瘤、抗
菌、抗血栓等广泛的药理活性，但是目前大多数研究对象都
是局限于莪术的醇、水提取液或者挥发油 [4-6]，对莪术多糖的
药理研究较少，目前尚无莪术多糖纤溶方面的研究报道。 莪
术茎叶一般被认为不具有药用价值，目前尚无药效方面的研
究报道。 笔者在前期研究工作中发现桂郁金（来源为姜科姜
黄属植物广西莪术 Curcuma kwangsiensis S. G. Lee et C. F.
Liang 干燥的块根）多糖具有明显的体外纤溶作用，广西莪术
及其茎叶和桂郁金来源于相同植物的不同部位，故推测广西
莪术及其茎叶也可能具有纤溶活性的多糖。本文采用纤维蛋
白琼脂平板法，对广西莪术及其茎叶的多糖进行体外纤溶活
性研究，现将研究报道如下：
1 仪器与试药
1.1 药材
广西莪术（生品阴干）及其茎叶（干燥地上部位），均产自
广西灵山，两者经广西中医药大学梁子宁副教授鉴定为姜科
姜黄属植物广西莪术 Curcuma kwangsiensis S. G. Lee et C. F.
Liang 的根茎及其茎叶。
1.2 试剂
琼脂（上海国药集团），尿激酶（纯度：85%，批号：39784，
Aladdin Chemistry Co. Ltd），纤维蛋白原 （纯度 ：75%，批号 ：
029K7636V，Sigma， 北京拜尔迪生物技术有限公司分装），凝
血酶（纯度：75%，批号：070M7351V，Sigma，北京拜尔迪生物
技术有限公司分装），磷酸盐缓冲液（PBS，pH 7.2~7.4，博海
生物科技有限公司），乙醇为分析纯，水为高纯水，其余试剂
均为分析纯。
1.3 仪器
移液枪（Dragon-med），90 mm 玻璃培养皿（上海申玻仪
器公司），游标卡尺（上海恒胜工具有限公司），B3500S-MT 超
声清洗仪 （上海必能信超声有限公司），LRH-100 生物培养
箱（广东泰宏医疗器械有限公司），80-2 医用离心机（金坛市
广西莪术及其茎叶多糖的体外纤溶活性研究
曾金强 1 潘小姣 2 陈秋燕 2 唐 璐 2
1．广西边防总队医院，广西南宁 530022；2.广西中医药大学，广西南宁 530001
[摘要] 目的 考察广西莪术及其茎叶多糖的体外纤溶活性。 方法 用分步沉淀法，分离广西莪术及其茎叶的多糖，然后
用纤维蛋白琼脂平板法考察不同醇沉多糖的纤溶活性。 结果 广西莪术只有 10%醇浓度沉淀多糖的体外纤溶效果稳
定。 广西莪术茎叶 10%~30%的醇浓度沉淀多糖体外纤溶作用稳定，40%~60%的醇浓度沉淀多糖在高、中浓度时作用
稳定，在低浓度时作用不稳定；在有纤溶活性的分步沉淀多糖中，除了 10%和 30%的醇浓度沉淀多糖具有浓度依赖
性之外（P < 0.05），其余纤溶活性多糖均无浓度依赖性。 结论 广西莪术及其茎叶的多糖成分具有体外纤溶活性。
[关键词] 广西莪术；纤溶活性；多糖
[中图分类号] R972.5 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2012）11（c）-0022-03
Vitro fibrinolytic activities of polysaccharides from Rhizome and stem and
its leaf of Curcuma kwangsiensis
ZENG Jinqiang1 PAN Xiaojiao2 CHEN Qiuyan2 TANG Lu2
1.Guangxi Frontier Corps Hospital, Guangxi Zhuang Autonomous Region, Nanning 530022, China; 2.University of Guangxi
Traditional Chinese Medical, Guangxi Zhuang Autonomous Region, Nanning 530001, China
[Abstract] Objective To observe the vitro fibrinolytic activities of polysaccharides from Rhizome and its stem and leaf of
Curcuma kwangsiensis. Methods Fractional precipitation was used to separate the different polysaccharides and fibrin plate
method was used to detect their vitro fibrinolytic activities. Results Only the 10% alcohol precipitated polysaccharides from
Rhizome of Curcuma kwangsiensis had stable vitro fibrinolytic activities. The polysaccharides having stable vitro fibrinolyt -
ic activities from stem and leaf of Curcuma kwangsiensis were the 10% to 30% alcohol precipitated polysaccharides and
the high and medium concetration of 40% to 60% alcohol precipitated polysaccharides. 10% and 30% alcohol precipitated
polysaccharides had vitro fibrinolytic activities in concentration-dependent manner (P < 0.05). Other fibrinolytic activities
polysaccharides had no concentra-tion-dependent. Conclusion Polysaccharides from rhizome, stem and leaf of Curcuma
kwangsiensis has vitro fibrinolytic activities.
[Key words] Curcuma kwangsiensis; Fibrinolytic activities; Polysaccharides
[基金项目] 国家自然科学基金项目（项目编号：200810LX100）；2011 年度
广西高等学校科研资助项目（项目编号：200103YB081）。
[作者简介] 曾金强（1972-），男，副主任医师，主要从事活血化瘀中药治疗
疼痛症及心血管疾病的研究。
[通讯作者] 潘小姣（1975-），女，硕士研究生，副教授，主要从事中药活性
成分筛选及其质量标准研究。
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2012 年 11月第 9卷第 33期 ·实验研究·
CHINA MEDICAL HERALD 中国医药导报
莪术超声水提液
莪术 10％醇沉多糖
莪术 20％醇沉多糖
莪术 30％醇沉多糖
莪术 40％醇沉多糖
莪术 50％醇沉多糖
莪术 60％醇沉多糖
莪术 70％醇沉多糖
莪术 80％醇沉多糖
莪术 90％醇沉多糖
90％乙醇上清液
尿激酶★
1 333.2*
96.0
45.2
29.5
22.8
25.3
57.3
43.7
8.8
8.6
51.5
26.66*
24.70
11.63
7.59
5.87
6.51
14.74
11.24
2.26
2.21
13.25
24.00
12.00
6.00
24.00
12.00
6.00
24.00
12.00
6.00
24.00
12.00
6.00
24.00
12.00
6.00
24.00
12.00
6.00
24.00
12.00
6.00
24.00
12.00
6.00
24.00
12.00
6.00
24.00
12.00
6.00
24.00
12.00
6.00
100.00 U/mL
50.00 U/mL
25.00 U/mL
50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
20.63±3.68
20.91±1.97
19.86±0.11
13.07±0.42
13.78±1.56
10.84±1.62
10.27±0.63
－
－
－
－
－
±
－
－
－
－
－
±
－
－
－
－
－
－
±
－
－
－
－
－
－
±
14.45±0.27
12.67±0.23
11.22±0.46
样品
重量
（mg）
得率
（％）
浓度
（mg/mL）
加样量
（μL）
透明圈直径
（x±s，mm）
表 1 广西莪术分步沉淀多糖的体外纤溶活性结果（n = 3）
注：“±”表示纤溶作用不稳定，时有时无；“－”表示没有纤溶作用；“★”
表示该组样品不同浓度之间的纤溶活性差异显著，P < 0.05；“*” 表示由
于 2 mL 提取液的浸膏重 0.222 2 g， 故推算出 12 mL 提取液的浸膏重
1.333 2 g，进而推算出 5 g 莪术的浸膏提取率约为 26.66%
医疗仪器厂）。
2 方法与结果
2.1 分步醇沉法提取分离广西莪术及其茎叶的多糖
取广西莪术和其茎叶粉末各 5 g，分别加 50 mL 和 80 mL
纯水，超声提取 1 h，过滤，将滤液分别水浴浓缩至 12 mL，取
2 mL 浓缩液继续水浴蒸干得到水提液浸膏， 剩下 10 mL 浓
缩液分别加入适量无水乙醇调节含醇量为 10%， 置冰箱 5℃
冷藏至少 5 h 以上，离心 5 min（10 000 r/min），分取多糖沉淀
和上清液， 多糖沉淀于 45℃低温干燥之后置冰箱冷冻保存，
剩下的上清液再加入适量无水乙醇调节含醇量为 20%，同法
制备 20%的醇沉多糖， 然后依次同法制备得到 30%~90%的
醇沉多糖。 将 90%醇沉多糖的乙醇上清液水浴蒸干，得到上
清夜浸膏。 将水提液浸膏、各段醇沉多糖和乙醇上清液分别
加水制成浓度为 24、12 和 6 mg/mL 三个浓度的样品，备用。
2.2 储备溶液的配置
用 PBS 缓冲溶液分别配制 10 mg/mL 的纤维蛋白原溶
液、1 U/mL 的凝血酶和 100 U/mL 的尿激酶， 小剂量分装后
于-20℃保存，临用前取出适量解冻后使用。
2.3 每个纤维蛋白琼脂平板的制备
取 0.2 g 琼脂加适量 PBS 缓冲液加热溶解， 最后用 PBS
缓冲液定容成 20 mL。待温度降到 55~60℃时，取 18 mL 放入
玻璃杯中，先加入解冻至 30℃的纤维蛋白原溶液（10 mg/mL）
茎叶超声水提液★
茎叶 10％醇沉多糖★
茎叶 20％醇沉多糖
茎叶 30％醇沉多糖★
茎叶 40％醇沉多糖
茎叶 50％醇沉多糖
茎叶 60％醇沉多糖
茎叶 70％醇沉多糖
茎叶 80％醇沉多糖
茎叶 90％醇沉多糖
90％乙醇上清液
尿激酶★
1 627.2
16.7
8.7
8.8
21.1
34.4
31.6
26.7
34.9
14.8
92.0
32.54
5.76
3.00
3.04
7.28
11.87
10.91
9.22
12.05
5.11
31.76
24.00
12.00
6.00
24.00
12.00
6.00
24.00
12.00
6.00
24.00
12.00
6.00
24.00
12.00
6.00
24.00
12.00
6.00
24.00
12.00
6.00
24.00
12.00
6.00
24.00
12.00
6.00
24.00
12.00
6.00
24.00
12.00
6.00
100.00 U/mL
50.00 U/mL
25.00 U/mL
50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
23.05±1.93
20.87±1.80
18.25±2.33
21.08±2.68
19.27±2.02
17.07±2.54
20.66±4.37
16.71±2.18
16.65±5.18
20.30±6.15
19.22±4.67
15.79±3.20
19.72±5.59
19.57±4.63
±
18.15±3.76
18.30±4.59
±
16.66±3.75
17.65±3.89
±
±
±
±
－
－
－
－
－
－
－
－
－
14.85±0.97
13.71±0.77
12.57±0.86
样品
重量
（mg）
得率
（％）
浓度
（mg/mL）
加样量
（μL）
透明圈直径
（x±s，mm）
表 2 广西莪术茎叶分段沉淀多糖的体外纤溶活性结果（x±s，n = 3）
注：“±”表示纤溶作用不稳定，时有时无；“－”表示没有纤溶作用；“★”表
示该组样品不同浓度之间的纤溶活性差异显著，P < 0.05；“*” 表示由于
2 mL 提取液的浸膏重 0.271 2 g，故推算出 12 mL 提取液的浸膏重 1.627
2 g，进而推算出 5 g 莪术的浸膏提取率约为 32.54%
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·实验研究· 2012 年 11月第 9卷第 33期
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有可行性 、稳定性 、可重复性 。 须附中英文结构式摘要 ：目的 （Objective）、方法 （Methods）、结果 （Results）、结论
（Conclusion）。 英文表达要规范准确，符合医药英文学术论文表达习惯。 标引关键词 4~8 个。 参考文献的引用数目
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1 mL，摇匀之后再加入解冻至 30℃的凝血酶溶液（1 U/mL）
1 mL，摇匀，立即倒入水平放置的 90 mm 玻璃培养皿中，待
冷凝之后打孔。
2.4 样品的加入和结果的测量
用直径约为 7.00 mm 的中空打孔器，在已经凝固的琼脂
上打出适量的孔，每个孔洞加入样品溶液 50 μL，然后将琼
脂平板放入培养箱 37℃温育 24 h，取出，用游标卡尺测定纤
维蛋白溶解透明圈两垂直直径，以两者算术平均值为纤溶活
性的结果。 以纯水作为空白对照，以尿激酶溶液作为阳性对
照。 用以下公式计算各分步沉淀多糖的得率：某种沉淀多糖
的得率（%）= 该段沉淀多糖的重量（mg）
所有多糖的重量（mg）+上清夜残渣的重量（mg）
×100%
2.5 统计学方法
采用统计软件 SPSS 17.0 对实验数据进行分析， 计量资
料数据以均数±标准差（x±s）表示，采用方差分析，两两比较
采用 LSD-t检验。 以 P < 0.05 为差异有统计学意义。
2.6 结果
实验结果表明广西莪术只有 10%醇浓度沉淀多糖的体
外纤溶效果稳定。 广西莪术茎叶 10%~30%的醇浓度沉淀多
糖体外纤溶作用稳定，40%~60%的醇浓度沉淀多糖在高、中
浓度时作用稳定，在低浓度时作用不稳定；在有纤溶活性的
分步沉淀多糖中，除了 10%和 30%的醇浓度沉淀多糖具有浓
度依赖性之外（P < 0.05），其余纤溶活性多糖的均无浓度依
赖性。 见表 1、2。
3 讨论
纤维蛋白平板法是目前最常用的溶栓活性体外检测方
法，其实验原理为：纤维蛋白原在凝血酶的作用下，转化成纤
维蛋白（形成血栓的主要结构），而当药物将纤维蛋白溶解，
就会产生纤溶圈，通过产生纤溶圈的大小可以推断药物具有
纤溶活性能力的大小[7]。纤维蛋白原、凝血酶和尿激酶的化学
性质很不稳定， 配成溶液之后最好小剂量分装冷冻保存，每
次根据实验所需取出适量解冻，如果反复地冻溶将使其失去
活性。
用分步醇沉的方法分离多糖时，不同浓度醇沉多糖的相
对分子质量（Mr）分布不同[8]。 10%~30%醇浓度沉淀出的应是
一些高 Mr 的多糖，40%~60%醇浓度沉淀出的应是一些中等
Mr 的多糖，70%~90%醇浓度沉淀出的应是一些低 Mr 的多
糖。 广西莪术只有 10％醇沉多糖具有稳定的体外纤溶活性，
故推测其具有活性的应该是一些高 Mr 的多糖， 但是通过碘
液检测实验发现在该活性多糖中含有大量淀粉，所以虽然该
段多糖的得率较高（24.70%），但是因为其含有不具药效的高
Mr 多糖（淀粉），所以其真正的纤溶活性多糖的含量应该不
高。 广西莪术茎叶 10％~60％的醇沉多糖都有较明显的体外
纤溶活性，该部分醇沉多糖的得率较高，合计约为 40%，且通
过用碘液检测发现其所有的活性多糖均不含淀粉。 由此可
见， 广西莪术茎叶中含有较多的高至中等 Mr 的体外纤溶活
性多糖，而且不含淀粉，可以在用醇沉的方法分离多糖的过
程中避免淀粉的干扰，因此广西莪术茎叶在抗血栓方面更具
有开发的潜在价值。
[参考文献]
[1] 国家药典委员会 .中国药典 [S].一部 .北京 ：中国医药科技出版社 ，
2010：257-258.
[2] 李军，刘越，李建强，等.广西莪术的化学成分研究[J].中国天然药物，
2011，9（5）：329-333.
[3] 朱凯，李军，罗桓，等.广西莪术化学成分的分离与鉴定[J].沈阳药科大
学学报，2009，26（1）：27-29.
[4] 李林，陆兔林，卞慧敏，等.莪术活血化瘀有效物质研究[J].上海中医药
大学学报，2004，18（3）：40-44.
[5] 李萍，谢金鲜，江海燕，等.广西莪术 5 种不同炮制品抗肿瘤作用研究
[J].中国实验方剂学杂志，2010，16（9）：155-161.
[6] 张丹媚，李群，马丹炜，等.广西莪术油抑制植物病原真菌活性的研究
[J].安徽大学学报：自然科学版，2008，32（1）：81-84.
[7] 赵明 ，潘映红 ，王一丁 .溶栓活性体外检测方法概况 [J].中国药事 ，
2006，20（2）：117-120.
[8] 吴海玥.红枣多糖沉淀特性及脱蛋白质工艺研究[J].食品与药品，2008，10
（3）：21-23.
（收稿日期：2012-07-20 本文编辑：卫 轲）
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