全 文 ：大理百合中多糖的提取与总糖含量的测定 短篇论著
周静华　李芬　汪祖芳(大理学院　云南　大理　671000)
【摘要】　目的　提取大理百合中的多糖并对其总糖含量进行测定。方法　水提醇沉法提取多糖 , Sevag法(用氯仿和正
丁醇按 5∶1的比例进行萃取 ,以除去蛋白质)除蛋白质 , 硫酸 -苯酚比色法测总糖含量。结果　大理百合粗多糖含量
为 82.9%。结论　实验表明百合多糖得率较高 , 本实验结果对开发利用大理地区百合资源具有一定意义。
【关键词】　大理百合　多糖　醇沉水提法　Sevag法　硫酸 -苯酚比色法
　　百合为百合科百合属植物 , 内含多种活性多糖 [ 1, 2] , 具有镇
静 、消炎 、抗疲劳 、改善呼吸功能 、增强机体免疫功能 [ 3] 、抗肿瘤 、
抗氧化 、降血糖等作用 [ 4 , 5] 。大理百合产量丰富 ,亦药亦食 , 颇具
开发利用价值。但对大理百合中多糖的提取与总糖含量的测定
的研究未见相关报道 。本研究对于开发 、利用大理百合资源具有
一定的参考价值。
1　材料与方法
1.1　材料　市售食用大理百合;丙酮 、 95 %乙醇 、乙醚 、石油醚 、
氯仿 、正丁醇等试剂均为国产分析纯;苯酚(AR.重蒸后使 用);
5.55 mmol/L标准葡萄糖溶液(四川省迈克科技有限责任公司);
所加水均为蒸馏水。
1.2　仪器　UV-754分光光度计(上海分析仪器总厂);722 MC
型可见分光光度计(上海第三分析仪器厂);低速离心机(LD4 -
2A台式离心机 ,北京医用离心机厂);恒温水浴锅(HH -4数显
恒温水浴锅 , 国华电器有限公司);旋转蒸发器(RE-52AA型 ,上
海亚荣生化仪器厂);电子分析天平(梅特勒 -托利多仪器(上
海)有限公司)。
1.3　实验方法
1.3.1　提取方法　新鲜市售大理百合洗净后低温烘干 , 切碎备
用。准确称取一定量的碎百合 ,加入 2倍量石油醚 ,于 80℃水浴
中回流 1.5 h, 留沉渣。加 8倍量的 60℃水于沉渣中 , 60℃水浴
浸提 7 h。 3 000 r/min离心混合 10 min, 留其上清液。在上清
液中加 4倍量的 95%乙醇 , 置于 4℃ 冰箱静置过夜。 3 000 r/
min离心混合液 , 取其沉淀 ,加适量 45℃水使其溶解。 重复醇沉
水提 3次。所得沉淀溶解后加入 1/2倍量 Sevag试剂(氯仿 /正
丁醇 , 体积之比为 5∶1), 混匀分液 , 弃氯仿混合液层 , 水相继续
加入稍多于 1/2倍量的 Sevag试剂 , 重复操作 7次 , 每次适量增
加 Sevag比量。收集水相 , 加入 4倍量体积 95 %乙醇 , 置于 4℃
冰箱保存过夜 , 3 000 r/min离心混合液 20 min, 收集沉淀 , 重复
醇提 3次。所得沉淀分别用无水乙醚 、丙酮各洗涤 3次。收集洗
净后的沉淀 ,于 44℃恒温鼓风干燥箱中干燥 ,即可得灰白色粗百
合多糖。
1.3.2　分析方法
1.3.2.1　标准曲线的制备　准确量取 2.22 mmom/L葡萄糖标
准液 1.6 ml并加入蒸馏水 38.4 ml,浓度相当于 0.04 mg/ml。精
密吸取此溶液 0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6、1.8 ml, 加水
至溶液总量皆为 2.0 ml,摇匀。加 6 %苯酚 1.0 ml, 混匀。快速
加入浓硫酸 5.0 ml,摇匀。静置 20 min后 , 按分光光度法于 490
nm波长处测定吸光度 ,绘制标准曲线。结果对照浓度在 20 ～ 80
g/ml范围内与吸光度呈良好线性关系 , 建立回归方程为:
A=51.28 C+ 0.0136r=0.9968
1.3.2.2　样品液制备　精密称取干燥(44℃)至恒重的百合粗
多糖 0.1 g定容于 100 ml容量瓶中 , 精密量取 2.0 ml此溶液于
50ml容量瓶中定容 , 摇匀 ,使浓度相当于 0.04mg/ml的样品液 ,
备用。
1.3.2.3　样品的测定　精密吸取样品液 1.0 ml, 按照制备标准
曲线的步骤测定其吸光度 ,重复 3次。根据回归方程计算溶液浓
度 ,进而计算出总糖含量。百合粗多糖中总糖含量为 82.9 %。
1.3.2.4　回收率试验　精密吸取 1 ml样品液 3份 , 精密加入一
定量的标准葡萄糖 ,按样品测定的方法进行操作。计算出回归率
的平均值为 99.93 %, 变异系数(RSD)为 0.54 %, n=3。回收
率实验结果见表 1。
表 1　回收率实验结果
样品 第 1份 第 2份 第 3份
回收率(%) 97.90 99.97 101.92
1.3.2.5　稳定性实验　取样品 1.0 ml, 按样品的测定的方法测
其吸光度。每隔 30 min测定 1次吸光度 ,共测 5次。稳定性实验
结果见表 2。
表 2　稳定性实验结果
测定次数 第 1次 第 2次 第 3次 第 4次 第 5次
RSD 0.166 0.165 0.162 0.170 0.159
2　结果与讨论
　　热水法提取多糖 , 并不能一次将百合中的多糖提取得较干
净 ,本实验在提取过程中发现 ,第一次和第二次提取得到的多糖
量之比为 1.4∶1。
　　硫酸 -苯酚比色法测总糖含量简单 、快速 、灵敏度高 、重现性
好 ,且无需多糖纯品和贵重仪器 , 适合一般实验室对多糖含量进
行测定。
实验表明百合多糖得率较高 ,本实验结果对开发利用大理地
区百合资源具有一定意义。
参考文献
[ 1] 　刘成梅 ,万菌 ,涂宗财 ,等.百合多糖脱蛋白方法的研究 [ J] .食品科
学 , 2002, 23(1):89-90.
[ 2] 　张唯杰 ,主编.复合多糖生化研究技术 [ M].2版.杭州:浙江大学出
版社 , 1994:366-370.
[ 3] 　苗明三 ,杨林莎.百合多糖的免疫兴奋作用 [ J] .中药药理与临床 ,
2003, 19(1):15-16.
[ 4] 　赵国华 ,李志孝 ,陈宗道.百合多糖的化学结构与抗肿瘤活性 [ J] .
食品与生物技术 , 2002, 21(1):62-66.
[ 5] 　刘成梅 ,付桂明 ,涂宗财 ,等.百合多糖降血糖功能研究 [ J] .食品科
学 , 2002, 23(6):113-114.
(收稿日期:2006-05-13)　　
·735·临床和实验医学杂志　2006年 6月　第 5卷　第 6期