全 文 ：收稿日期:2012-04-15; 修订日期:2012-09-02
基金项目:广西壮族自治区自然科学基金
(No． 2012GXNSFAA053138)
作者简介:戴 平(1970-) ，女(汉族) ，黑龙江北安人，现任桂林医学院药
学院讲师，硕士学位，主要从事药物质量标准与药效学研究工作．
* 通讯作者简介:曾建红(1972-) ，女(汉族) ，湖北宜昌人，现任桂林医学
院药学院教授，博士学位，主要从事生药的品质评价与药效学研究工作．
不同醇沉浓度对广西莪术多糖含量的影响
戴 平，黄凤香，曾建红* ，杜阿娜，梁木兰
(桂林医学院·药学院，广西 桂林 541004)
摘要:目的 优选广西莪术多糖水提醇沉浓度，为广西莪术的开发和利用提供理论基础。方法 以广西莪术多糖作为指标
性成分，采用热水浸提法提取多糖，以含醇量为 65%，75%，85%，95%优选广西莪术多糖提取液的醇沉浓度，采用苯酚 －
硫酸比色法测定多糖含量。结果 葡萄糖在 2． 857 ～ 14． 286 μg /ml范围内与吸光度呈良好的线性关系，r = 0． 999 2;平均
回收率为 99． 94%，RSD = 0． 20%(n = 6)。65%、75%、85%、95%醇沉浓度下测得的广西莪术多糖分别为 6． 698，8． 499，
6． 855，6． 170 μg /ml，RSD分别为 3． 43%，2． 10%，3． 55%，6． 47%(n = 3)。结论 不同醇沉浓度对广西莪术多糖含量影响
较大，广西莪术多糖最佳醇沉浓度为 75%。
关键词:广西莪术; 醇沉浓度; 多糖含量
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2012． 10． 023
中图分类号:R285 文献标识码:A 文章编号:1008-0805(2012)10-2436-02
Effect of Different Concentrations of Alcohol in Precipitation Method on Polysaccharide
Content in Curcuam kwangsiensis
DAI Ping，HUANG Feng-xiang，ZENG Jian-hong* ，DU Ana，LIANG Mu-lan
(School of Pharmacology，Guilin Medical University，Guilin，Guangxi 541004，China)
Abstract:Objective To optimize the concentrations of alcohol in precipitation method and provide a theoretical basis for the de-
velopment and use of Curcuam kwangsiensis． Methods The Curcuam kwangsiensis polysaccharide(CKP)was used as an index
component，the CKP was extracted by hot water extraction method，the concentrations of alcohol in precipitation method was opti-
mized by the concentrations of alcohol of 65%，75%，85% and 95%，the CKP content was detected by phenol － sulfuric acid
method． Results The concentration glucose within the range of 2． 857 ～ 14． 286 μg /ml was linear with the absorbance，r =
0． 999 2;the average recovery was99． 94%，RSD = 0． 20% (n = 6)． The CKP content was respectively 6． 698μg /ml，8．
499μg /ml，6． 855μg /ml and 6． 170μg /ml，the RSD was respectively 3． 43%，2． 10%，3． 55% and 6． 47% (n = 3)in the al-
cohol precipitation concentration of 65%，75%，85% and 95% ． Conclusion The alcohol precipitation concentration has great
impact on the CKP content，the best concentration of alcohol in precipitation method is 75% ．
Key words:Curcuam kwangsiensis; Alcohol precipitation concentration; Polysaccharide content
广西莪术 Curcuma kwangsiensis S． G． ． Lee et C． F． Liang 是
2010 年版《中国药典》收载的 3 种基原莪术(蓬莪术 Curcuma
phaeocauLis val．，广西莪术 Curcuma kwangsiensis S． G． ． Lee et C．
F． Liang和温郁金 Curcuma wenyujin Y． H． Chen et C． Ling)中的一
种，为姜科姜黄属植物的干燥根茎，为广西的地道药材［1］。莪术
的主要有效部位为根和根茎，挥发油和多糖是莪术的主要活性成
分［2］。莪术挥发油具有抗肿瘤、抗炎、抗早孕、抗凝血等作
用［2，3］，已广泛应用于临床。目前有关广西莪术的研究主要集中
在莪术油的药效物质基础和临床应用开发上，但有关广西莪术多
糖的药学研究较少［3，4］。而大量的研究证实，多糖具有多方面的
药理活性，是理想的免疫增强剂，是人体必需成分［5］。因此，本
研究对广西莪术多糖提取分离进行研究，优选出其醇沉浓度，旨
在为广西莪术多糖的开发及其综合利用提供理论参考。
1 仪器与材料
1． 1 主要仪器 UV － 2401PC 型紫外可见分光光度计(日本岛
津) ，FW177 型中草药万能粉碎机(天津市泰斯特仪器有限公
司) ，SHJM － 1 型数显恒温搅拌电热套(山东省鄄城现代实验仪
器厂) ，Hei － VAP型旋转蒸发仪(德国 Heidolph 公司) ，80 － 1 型
电动离心机(江苏城西晓阳电子仪器厂) ，电子天平(赛多利斯科
学仪器北京有限公司)。
1． 2 材料 广西莪术样品于 2011 年 11 月采自广西玉林，样品采
收后洗净、切片、晒干、打碎，过 20 目筛，干燥器储藏备用。所有
样品经本教研室曾建红教授鉴定为姜科(Zingiberaceae)姜黄属
Curcuma L． 植物广西莪术(Curcuam kwangsiensis S． G． Leset C． F．
Liang)的根茎。所有乙醇、苯酚、浓硫酸、过氧化氢、葡萄糖、三氯
乙烷、正丁醇、茚三酮均为市售分析纯。
2 方法与结果
2． 1 粗多糖的提取与纯化 称取 150 g 广西莪术粉末于 2 000
ml 圆底烧瓶中，按料液比 1∶ 5 加入蒸馏水，在 80℃浸提 1 h，过
滤，重复 3 次，合并滤液，重复浸提 3 次，合并滤液，于 60℃真空浓
缩至 200 ml。将 50 ml 30% H2O2 加入浓缩液中，水浴脱色 2． 5
h，颜色变为淡黄色后迅速加热，除去 H2O2，加入重蒸水将溶液定
容至 200 ml。采用 Sevage法除蛋白［6］后，倾析法取上清液少许，
加入 1ml 0． 2% 茚三酮溶液，加热煮沸 1 min，无紫色出现，说明
大部分蛋白质已经被除去。然后将上清液加入重蒸水定容至
200 ml。
2． 2 供试品溶液的制备 将纯化后的莪术多糖溶液平均分装到
4 个 500 ml 的平底烧瓶中，每瓶 50 ml，然后分别加入无水乙醇，
使含醇量分别达到 65%，75%，85%，95%，出现大量白色沉淀
后，搅匀，于冰箱中静置过夜，可见大量的白色沉淀析出。取上
清液分别浓缩至 50 ml，即得 65%醇沉、75%醇沉、85%醇沉、95%
醇沉工艺的供试品溶液。
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时珍国医国药 2012 年第 23 卷第 10 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2012 VOL． 23 NO． 10
2． 3 对照品溶液的制备 精密称取 105℃干燥至恒重的葡萄糖
标准品 10． 0 mg，置于 100 ml容量瓶中，蒸馏水溶解并稀释至刻
度，摇匀，制得浓度为 0． 10 mg /ml葡萄糖对照品溶液。
2． 4 最佳波长的选择 精密吸取对照品溶液 0． 5 ml 置于试管
中，加蒸馏水 0． 5 ml和 1． 0 ml 5%苯酚溶液混匀，迅速加入 5． 0
ml浓硫酸，摇匀后放入冰箱冷却。另以 2 ml 蒸馏水加苯酚试剂
和浓硫酸同上平行操作为空白对照液。在 300 ～ 700 nm 范围内
扫描，确定其最大吸收波长为 490 nm。
2． 5 标准曲线的绘制 精密吸取对照品溶液 0． 2，0． 4，0． 6，0． 8，
1． 0 ml置于 10 ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。分别精密
吸取各溶液 1． 0ml ，加入 5%苯酚溶液 1． 0 ml，混匀，迅速加浓硫
酸 5． 0 ml，摇匀，放入冰箱冷却。同步吸取 1． 0ml 蒸馏水，加 5%
苯酚溶液和浓硫酸同上平行操作制备空白对照液。在 490 nm波
长处测量其吸光度，以浓度(C)对吸光度(A)进行线性回归，得回
归方程:A = 0． 068 C － 0． 049 7，r = 0． 999 2(n = 5)。结果表明，
葡萄糖在 2． 857 ～ 14． 286 μg /ml 范围内与吸光度呈良好的线性
关系。结果见图 1。
图 1 对照品线性关系图
2． 6 稳定性实验 精密称取 75%醇沉工艺下的供试品溶液 1． 0
ml，加入 5%苯酚溶液 1． 0 ml，混匀，迅速加浓硫酸 5． 0 ml，摇匀，
放入冰箱冷却后，在 0，2，4，6，12，24 h内 490 nm波长处测定吸光
度。结果吸光度值的 RSD = 2． 16%，表明供试品溶液在 24 h 内
稳定性良好。
2． 7 精密度实验 分别精密吸取对照品溶液 6 份，每份 1． 0 ml，
加入 5%苯酚溶液 1． 0 ml，混匀，迅速加浓硫酸 5． 0 ml，摇匀，放
入冰箱冷却后在 490 nm 波长处测定吸光度，结果吸光度值的
RSD = 0． 68%(n = 6) ，表明仪器精密度良好。
2． 8 重复性实验 取同批次的广西莪术粉末 5 份，每份约 150 g，
按“2． 1”项下进行粗多糖的提取与纯化，按“2． 2”项下平行制备
供试品溶液(75%醇沉) ，精密称取供试品溶液 1． 0 ml，加入 5%
苯酚溶液 1． 0 ml，混匀，迅速加浓硫酸 5． 0 ml，摇匀，放入冰箱冷
却后在 490 nm 波长处测定吸光度，结果吸光度值的 RSD =
1． 73%(n = 5) ，表明本实验方法重现性良好。
2． 9 加样回收率实验 分别称取已知含量的广西莪术粉末 6 份，
每份约 150 g，按“2． 1”和“2． 2”项下制备供试品溶液(75%醇
沉) ，分别加入一定量的葡萄糖对照品，在 490 nm 波长处测定吸
光度，结果平均回收率为 99． 94%，RSD = 0． 20%(n = 6)。表明本
方法的回收率较好。结果见表 1。
表 1 广西莪术多糖加样回收率实验结果
编号
取样量
m /g
样品中多糖
含量 m /mg
加入对照
品量 m /mg
测得多糖
量 m /mg
回收率
(%)
平均回收率
(%)
1 150． 15 28． 30 30． 05 58． 29 99． 80
2 150． 03 28． 28 29． 94 58． 31 100． 30
3 150． 07 28． 29 29． 97 58． 27 100． 03 99． 94
4 159． 96 28． 27 30． 12 58． 33 99． 80
5 150． 20 28． 31 29． 88 58． 12 99． 77
6 150． 34 28． 33 30． 03 58． 34 99． 93
2． 10 不同醇沉浓度对广西莪术多糖含量的影响 分别取 65%
醇沉、75%醇沉、85%醇沉、95%醇沉工艺的供试品溶液 1． 0 ml，
加入 5%苯酚溶液 1． 0 ml，混匀，迅速加浓硫酸 5． 0 ml，摇匀，放入
冰箱冷却后，在 490 nm波长处测定吸光度，按回归方程计算多糖
含量，结果平均含量分别为 6． 698，8． 499，6． 855 ，6． 170 μg /ml，
RSD分别为 3． 43%，2． 10%，3． 55%，6． 47% (n = 3)。结果见
表 2。
表 2 广西莪术多糖不同醇沉浓度测定结果
醇沉浓度
多糖含量 C /μg·ml － 1
1 2 3
平均含量
C /μg·ml － 1
RDS
(%)
65% 6． 450 6． 904 6． 742 6． 698 3． 43
75% 8． 691 8． 470 8． 337 8． 499 2． 10
85% 6． 860 7． 096 6． 609 6． 855 3． 55
85% 6． 357 6． 402 5． 752 6． 170 6． 47
3 讨论
本实验在莪术多糖提取液除去色素的过程中先用 1%的活
性炭去色素，但发现在脱色时活性炭使用量大，样品损失较多，后
改为 H2O2 脱色除去色素，H2O2 的脱色效果优于活性炭，且煮沸
后易除去，简单方便。因此本实验采用 H2O2 对莪术多糖提取液
进行脱色处理。
本实验选用苯酚 －硫酸法对广西莪术多糖总糖含量进行测
定，但由于苯酚 －硫酸法对有机物十分敏感，可能造成测定结果
差异较大。因此在测定样品之前一定要严格清洗实验器具，避免
有机物污染。同时还要避免空气灰尘污染，待测样品在冷却过程
中要用封口摸密封。
植物多糖提取多采用水提醇沉法除去水溶性杂质，但作为有
效成分之一的多糖在醇沉时也有较大程度的损失，故为了更好地
控制中药的生产工艺，保证中药质量稳定性，应慎重选择醇沉条
件。本实验以莪术多糖为考察指标，对广西莪术多糖水提醇沉法
的醇沉浓度进行优选，结果 65%、75%、95%醇沉工艺由于醇沉
不完全，莪术多糖提取率较低，75%醇沉浓度莪术多糖损失较小，
莪术多糖提取率最高。因此，广西莪术多糖采用水提醇沉提取工
艺，以 75%醇沉浓度较为适宜。
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