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第 25卷第 3期 阜阳职业技术学院学报 Vol.25No.3
2014年 9月 JOURNAL OF FUYANG VOCATIONAL AND TECHNICAL COLLEGE Sep.2014



铃兰外植体愈伤组织培养与分化体系建立
李东林 1 ，李仁杰 2
（1.阜阳职业技术学院生化工程学院，安徽 阜阳 236031；2.安徽农业大学园艺学院, 安徽 合肥 230036）

摘要：铃兰（Convallaria majalis L.），属百合科铃兰属多年生宿根花卉，由于铃兰的种子采集困难，且分
株繁殖系数低，利用再生离体培养技术可在短期内获得大量品质优良的植株，满足国内外市场需求。本研究用
无菌嫩芽和根茎在 MS 培养基附加低浓度的激素诱导愈伤组织，经过分化和增殖培养获得无根苗，在含有适宜
浓度激素水平生根培养基上使其生根，提高生根率。通过优化组合和重复试验，优选快繁体系，对铃兰种质资
源的保护和开发利用具有一定的现实意义。
关键词：铃兰；外植体；愈伤组织；分化
中图分类号：S-3 文献标识码：A 文章编号：1672-4437（2014）03-0042-03

1 前言

铃兰（Convallaria majalis L.），属百合科铃兰
属多年生宿根花卉，常生于东北、西北、华北地区
针阔混交林林下或林缘灌丛中，是一种名贵的香料
植物，它的花可以提取高级芳香精油，铃兰全草入
药。铃兰有赏花，地植、盆栽、制香用、工业用之
分，俏销国内外草坛。因其体内含有挥发性的芳香
物质备受青睐。在绿化地被、净化空气、美化居室、
给人以美的享受外，特别是在医药领域也作用非
凡。
由于铃兰的种子采集困难，且分株繁殖系数
低，我国至今无批量铃兰花卉供应，利用再生离体
培养技术可在短期内获得大量品质优良的植株，满
足国内外市场需求。有人曾对铃兰进行组织培养及
繁殖技术进行研究，均未取得良好效果。本研究用
无菌嫩芽和根茎在MS培养基附加低浓度的激素诱
导愈伤组织，经过分化和增殖培养获得无根苗，在
含有适宜浓度激素水平生根培养基上使其生根，提
高生根率。基于上述生产需要和研究现状, 我们以
百合鳞片为材料进行了组织培养和快繁,以期为百
合种球生产提供依据。
2 材料与方法

2.1 实验材料
实验材料来源于室外林场阔叶林下野生铃兰
（Convallaria majalis L.），外植体材料选择不
同生长发育时期叶片、叶柄、花柄、芽、芽原基、
根、茎等作为实验材料。
2.2 材料消毒
将采集的铃兰茎、幼叶等外植体材料用软毛刷
先刷净上面的泥土后,用自来水冲洗6min左右,在
超净台上用75%乙醇消毒30S,用0.1%升汞溶液消毒
8min左右, 然后用无菌水冲洗数次,切成带有顶芽
及无顶芽的2段, 约0.5cm×0.5cm, 叶片切成约
1.0cm×l.0cm。
2.3 培养条件
不同外植体材料培养温度设置为 22±3℃，相
对湿度 80%左右，连续光照 12h/d，光照强度 30～
40umol.m-2.s-1，pH 值 6.0 左右。
2.4 培养方法
把不同外植体接种在配制好的不同激素浓度
培养基（MS）上培养（表1）。上述培养基中均加
入蔗糖和琼脂的浓度分别为3.0%和0.7%。不同培养
——————
收稿日期：2014-05-11
基金项目：安徽省优秀青年人才基金项目（2011SQRL194ZD）阶段性成果。
作者简介：李东林，男，安徽利辛人，阜阳职业技术学院副教授，从事植物生产与生理生态学研究。
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基诱导分化及培养实验重复2次，每种处理接种培 养100个生长分化芽。
表1 铃兰外植体再生诱导及分化培养基
培养基
激素
NAA KT 6-BA ZT 2,4-D
S1 0.2 0.8
S2 0.3 1.2
S3 0.1 0.3
S4 0.2 0.8
S5 0.1 0.8

2.5 试管苗移栽与定植
当不定根长至 3～4cm 时，先在自然光照下炼
苗 4d，然后敞开瓶口再炼苗 5d 左右，用镊子从无
菌瓶把再生苗取出，冲洗掉根部附着的培养基，栽
入到由草炭：蛭石：沙（4:4:2）组成的复合基质
中，前期注意避免强烈光照和保持环境湿润，待植
株长出新根时可转入正常环境栽培管理。

3 结果与分析

3.1 不同培养基对铃兰外植体诱导及愈伤组织的
形成
从表2中可以看出, 几种培养基接种不同铃兰
外植体材料获得了不同的诱导和分化效果, S2 和
S4两种培养基应用效果优于其它培养基, 这表明
铃兰不同外植体愈伤组织形成及芽的分化对激素
的种类和浓度有较大的适应, 这也正是我们实验
中所期望达到的目的。
表2 铃兰不同外植体材料接种愈伤组织形成
外植体
培养基
S1 S2 S3 S4 S5
芽 有芽的分化
叶片 有芽的分化 浅黄色愈伤组织
根 浅棕色愈伤组织
茎
花柄 有芽的分化 有芽的分化

取实验材料铃兰幼嫩的根，置于S1培养基中，
约4周后可见浅色坚硬的愈伤组织，继代培养至相
同的培养基上，生长缓慢，转入分化培养基后未见
有芽的分化。铃兰花柄作为外植体时，置于S5培养
基中效果稍好，约30天后有浅黄色愈伤组织形成，
继代培养至配制好的相同新鲜培养基上，在此期间
更换几次新鲜培养基，愈伤组织慢慢生长，8周后
形成黄色愈伤组织。将愈伤组织转至S3分化培养基
后，也会出现芽的分化。
铃兰地下茎上芽，在S3培养基中培养4周后在
基本有小芽的形成。把铃兰幼叶处理后置于S1培养
基中，培养约1个月后开始有黄色颗粒状愈伤诱导
组织，继续培养10周后再将愈伤组织转至S4培养基
中进行分化培养，约60天左右愈伤组织出现绿色小
芽的分化。
3.2 不同培养基对铃兰分化生根培养的影响
表3 不同培养基对铃兰分化生根培养的影响
外植体
分化生根状况
S1 S2 S3 S4 S5
芽 差 较好 一般 一般 差
叶片 差 一般 差 较好 差
根 较好 差 一般 差 差
茎 差 一般 差 一般 差
花柄 差 差 一般 一般 一般
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2.3 铃兰试管苗的移栽与定植的差异
本次培养试验移栽共成活686 株，成活率为
87.6%。通过实验观察表明，铃兰试管苗容易移栽
成活。即使移栽初期地上部已经死亡，再过1周左
右，地下部的根茎也会萌发使其成活。定植后一个
月， 统计证明成活了483 株，成活率为78.8%。定
植的试管苗不仅保持了铃兰的生物学性状，而且后
期生长旺盛整齐，但开花时间较正常栽培的延迟。
表4 不同培养基对铃兰试管苗生长的影响
外植体
生长状况
S1 S2 S3 S4 S5
芽 差 一般 较好 差 差
叶片 差 一般 差 较好 差
根 较好 差 一般 差 差
茎 差 一般 差 一般 差
花柄 差 差 一般 差 一般

4 讨论

利用组织培养快繁技术生产铃兰优质种苗,
是一种有效的途径。有报道用铃兰种子进行无菌发
芽组织的外植体进行培养。但是铃兰种子在自然生
长发育情况下，当年秋播要经过2个低温阶段才可
发芽，于第三年出苗，通过物理或化学处理措施处
理后，也要6个月才能萌发，需要时间较长，所以，
本实验直接以天然地下根状茎作为外植体材料，但
由于根状茎生长在地下，需要长时间灭菌处理，为
避免培养过程中的污染问题，可先将材料上泥土等
附属物处理后，用自来水 冲洗干净，用纸吸干水
分，浸入75%酒精消毒3分钟，再用0.1%汞溶液消毒
一段时间，但仍有部分材料污染，部分材料在一定
时间过后又有污染。
不同外植体的培养结果不同，本实验中采用的
幼嫩花柄、芽和幼叶都较容易诱导出愈伤组织，并
且有芽的分化，而用根进行外植体培养，只能诱导
出愈伤组织，未获得芽的分化。因而外植体部位对
于培养成功有较大影响。
不同部位外植体在诱导愈伤组织过程中，生长
素2.4-D是不可缺少的，而不同部位对激动素的要
求不同，
实际上铃兰植物许多部分的器官和组织都可
用组织培养方法诱导成苗，本试验是以铃兰部分器
官和组织为外植体进行组织培养，通过组织培养的
方法快速繁殖，不仅减少了病毒重新感染的机会，
而且通过外植体接种培养，进一步降低了基础苗中
病毒的含量，使快繁得到的脱毒，种苗更健壮，以
提高生长后应用价值。应用组织培养方法快速繁殖
铃兰种苗虽然是较好的途径，但由于生产成本较高,
技术要求严格，目前在实际应用中还有一定困难,
降低生产成本是把这一技术应用到生产中去的首
要问题。
在试管苗的培养中，由于环境条件的变化，试
管苗易发生变异。但在本研究中定植的试管苗保持
了铃兰的生物学性状。研究以液体培养基取代琼脂
固体培养基是否也会节省经费。这些措施使铃兰大
量繁殖生产推广应用成为可能, 并为今后快繁技
术的应用积累一定的经验。
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