全 文 ：野龙竹竹叶黄酮含量及其抗氧化活性测定实验
*
梁 倩，郑艳玲，刘 云，王军民，赵 平
(西南林业大学 西南山地森林资源保育与利用省部共建教育部重点实验室，云南 昆明 650224)
摘要:以芦丁为对照样品，用 NaNO2 － Al (NO3)3 比色法在 510 nm处测定野龙竹 80 %乙醇提取物的石油醚相、
氯仿相、乙酸乙酯相、水相 4 部分的黄酮含量，建立了芦丁标准曲线的回归方程:A = 10. 735C + 0. 010 9 (R2 =
0. 999 5) ，并用 DPPH·对氯仿相和乙酸乙酯相的抗氧化活性进行了测定。实验结果表明，野龙竹竹叶的石油醚
相黄酮含量为 6. 95 %，氯仿相的黄酮含量为 11. 72 %，乙酸乙酯相的黄酮含量为 12. 72 %，水相的黄酮含量为
5. 35 %。抗氧化实验显示，氯仿相清除 DPPH·的 IC50值为 0. 15 mg /mL，乙酸乙酯相清除 DPPH·的 IC50值为
0. 09 mg /mL，野龙竹醇提物的氯仿相和乙酸乙酯相黄酮含量较高，乙酸乙酯相具有较强的抗氧化作用。
关键词:野龙竹;黄酮;抗氧化活性;比色法;提取物测定
中图分类号:S 795 文献标识码:A 文章编号:1672 － 8246 (2013)02 － 0110 － 03
Flavonoid Contents and Antioxidant Activities of Extracts from Leaves
of Dendrocalamus semiscandens
LIANG Qian，ZHENG Yan-Ling，LIU Yun，WANG Jun-Min ，ZHAO Ping
(Key Laboratory for Forest Resources Conservation and Use in the Southwest Mountains of China，
Ministry of Education，Southwest Forestry University，Kunming Yunnan 650224，P. R. China)
Abstract:The 80 % ethanol extract from leaves of Dendrocalamus semiscandens were divided into four fractions of
petroleum ether extract，chloroform extract，ethyl acetate extract and water extract． They were used to determine
flavonoid content with rutin and investigated by colorimetry of NaNO2 － Al (NO3)3 at 510 nm． The regression e-
quation of rutin standard working curve:A =10. 735C + 0. 010 9 (R2 = 0. 999 5)was established;then free radi-
cal scavenging activities of chloroform extract and ethyl acetate extract were measured with DPPH· method． The
experimental results showed that the flavonoid contents of petroleum ether extract，chloroform extract，ethyl acetate
extract and water extract were 6. 95 %，11. 72 %，12. 72 %，5. 35 % respectively． The DPPH·scavenging value
of chloroform extract IC50 are 0. 15 mg /mL and that ethyl acetate extract IC50 are 0. 09 mg /mL． The research indi-
cates that the flavonoid content of chloroform extract and ethyl acetate extract is higher than that of petroleum ether
extract and water extract;the DPPH· free radical scavenging activities of ethyl acetate extract is better than that of
chloroform extract．
Key words:Dendrocalamus semiscandens;flavonoid;antioxidant activities;colorimetric method;extracts deter-
mination
第 42 卷 第 2 期
2013 年 4 月
西 部 林 业 科 学
Journal of West China Forestry Science
Vol. 42 No. 2
Apr. 2013
* 收稿日期:2013 － 02 － 06
基金项目:国家自然科学基金 (批准号:31201572)和西南林业大学人才引进项目。
第一作者简介:梁 倩 (1975 －) ，女，陕西扶风人，讲师，博士，主要从事药用植物方面的研究。
通讯作者简介:赵 平 (1965 －) ，男，重庆人，教授，博士，主要从事天然产物化学方面的研究。
野龙竹 (Dendrocalamus semiscandens)也叫野
竹、山黄竹，是禾本科 (Gramineae)牧竹属植物，
产云南省南部至西南部，自然分布的海拔为 500 ～
1 000 m。其笋味鲜美，是开发笋用竹的入选竹种，
在产地常零星开花［8］。和其他竹子一样，也具有
生长快、用途多、生态和经济价值高等特点，是重
要的森林资源［1］。除竹材和竹笋被广泛利用以外，
其竹叶在我国也具有悠久的药用和食用历史［2］，
淡竹叶和淡竹沥就是一味传统的清热解毒药［3］，竹
叶中含有大量的黄酮类化合物和其他活性成分，竹
叶黄酮具有优良的抗脂质过氧化［4］、抗衰老、抗
疲劳、增强免疫力、阻断亚硝化反应、抗菌、抑
菌［5］、保护心血管［6］、抑制肿瘤［7］等生物学功效，
在营养、健康和疾病防治上有着广阔的应用前景。
为了充分利用竹叶中的黄酮物质，本项目对野龙竹
竹叶中的黄酮类化合物及其抗氧化活性进行了研
究。
1 材料和方法
1. 1 材料和仪器
1. 1. 1 材料与处理
竹叶于 2012 年 5 月 30 日采自云南省昆明市西
南林业大学校园内的竹园，经西南林业大学林学院
森林系辉朝茂教授鉴定为禾本科牧竹属植物野龙竹
的竹叶。取干燥野龙竹竹叶粉碎样品 710 g，用 80 %
的乙醇提取，在 50℃回流提取 3 次，每次 1 h。得
浸膏 80 g。再将浸膏加适量水，用石油醚萃取得浸
膏 18 g，接着用氯仿萃取得浸膏 19 g，最后用乙酸
乙酯萃取得浸膏 2 g，水相为 51 g。
1. 1. 2 仪器与试剂
仪器有旋转蒸发器 (上海亚荣生化仪器厂，
RE －52A) ，循环水式多用真空泵 (郑州长城科工
贸有限公，SHB － Ⅲ型) ，UX620H 分析天平，紫
外可见分光光度计 (北京莱伯泰科仪器有限公司，
UV －1000)。试剂为芦丁 (中国药品生物制品研究
所，纯度:92. 5 %) ，DPPH· (1，1 －二苯基 － 2
－三硝基苯肼，相对分子质量为 394，分子式为
C18H12N5O6) ，其他药品、试剂均为分析纯。
1. 2 实验内容及方法
1. 2. 1 标准曲线的制作
称取芦丁标准样品 0. 005 5 g，放入 50 mL容量
瓶中，用 80 %乙醇溶液定容至 50 mL (标准样品的
浓度为 0. 11 mg /mL)。取芦丁标准液 0 mL、1. 0
mL、2. 0 mL、3. 0 mL、4. 0 mL、5. 0 mL 分别置于
10 mL容量瓶中，并加入 5 %NaNO2溶液 1 mL，摇
匀;静置 6 min后加入 10 % Al (NO3)3溶液 1 mL，
摇匀;静置 6 min 后再加入 4 % NaOH 溶液 3 mL，
80 % 乙醇定容至刻度，摇匀;静置 15 min 后在
510 nm 波长下用分光光度计测定各标准溶液吸光
度 (A) ，绘制芦丁的标准曲线，求出吸光度值 A
与芦丁的标准溶液浓度 (C，mg /mL)之间的线性
回归方程。
1. 2. 2 总黄酮含量测定
称取石油醚相、氯仿相、乙酸乙酯相、水相 4
部分供试样品分别为 0. 507 0 g、0. 505 7 g、
0. 548 2 g、0. 575 6 g，并用 80 %乙醇溶解在 50
mL容量瓶中，再取 0. 5 mL，加入 25 mL 容量瓶
中，分别精密加入 5 % NaNO2溶液 2. 5 mL，摇匀，
静置 6 min;加入 10 % Al (NO3)3溶液 2. 5 mL 摇
匀，静置 6 min;再加入 4 % NaOH 溶液 7. 5 mL，
用 80 %乙醇定容，得待测溶液。
1. 2. 3 抗氧化活性测定
配制浓度为 1 × 10 －4 mol /L 的 DPPH·无水乙
醇溶液。将 1. 1. 1 中得到的氯仿相和乙酸乙酯相用
80 %乙醇配制成浓度分别为 0. 01、0. 04、0. 08、
0. 12、0. 16、0. 20、0. 24、0. 26 的待测样品溶液。
分别取 5 mL 样品溶液和 DPPH·溶液，并混合均
匀，避光放置 30 min，以80 %乙醇调零，在517 nm
处测定吸光度 Ai;同样方法，分别取 5 mL 80 %乙
醇溶剂与样品溶液相互混合均匀，避光放置 30 min
后测定吸光度 Aj;5 mL 80 %乙醇溶剂加 5 mL DP-
PH·溶液混匀，避光放置 30 min，测定吸光度 Ac。
最后按照以下公式计算自由基清除率:IP% = 〔1
－ (Ai － Aj)/ Ac〕 × 100，式中 Ai为样品与 DP-
PH·作用后的吸光度数值;Aj 为样品自身对吸光
度的贡献;Ac为 DPPH·自身的吸收。
2 结果与分析
2. 1 吸光度值与标准溶液浓度的回归方程
吸光度值 A 与芦丁的标准溶液浓度 (C，
mg /mL)之间的线性回归方程为 A = 10. 735C +
0. 010 9 (R2 = 0. 999 5)。分析表明，芦丁质量浓
度在 0. 011 ～ 0. 055 mg /mL时与吸光度值具有良好
的线性关系 (见图 1)。
111第 2 期 梁 倩等:野龙竹竹叶黄酮含量及其抗氧化活性测定实验
图 1 不同芦丁标准溶液浓度的吸光度
Fig. 1 Standard curve of rutin
2. 2 各萃取部分黄酮含量
经测试，野龙竹竹叶的石油醚相黄酮含量为
6. 95 %，氯仿相的黄酮含量为 11. 72 %，乙酸乙
酯相的黄酮含量为 12. 72 %，水相的黄酮含量为
5. 35 %。从实验结果可以看出，各个萃取部分黄
酮含量差异比较显著，氯仿相和乙酸乙酯相的黄酮
含量较高，表明竹叶中的黄酮主要集中在中等极性
部分。
2. 3 氯仿相和乙酸乙酯相清除 DPPH·的能力及
IC50值
对野龙竹竹叶的氯仿相和乙酸乙酯相清除 DP-
PH·的能力测定结果，见表 1。
表 1 氯仿相和乙酸乙酯相对 DPPH·的清除率
Tab. 1 Flavonoid contents of chloroform and ethyl
acetate solvent parts
浓度
/mg·mL －1
氯仿相
/%
乙酸乙酯相
/%
0. 01 0. 67 19. 15
0. 04 11. 95 35. 44
0. 08 15. 62 43. 05
0. 10 32. 73 63. 38
0. 12 41. 37 81. 58
0. 16 52. 50 85. 27
0. 20 61. 27 85. 81
0. 24 68. 10 88. 88
0. 26 75. 51 90. 10
由表 1 可知，其清除 DPPH·的能力随各萃取
部分浓度的增加而增加。当浓度达到 0. 26 mg /mL
时，氯仿相抗氧化活性达到 75. 51 %，乙酸乙酯相
的抗氧化活性达到 90. 10 %。表明乙酸乙酯相清除
自由基的能力比氯仿相强。自由基清除能力通常以
IC50值表示，它的值越小，表明清除自由基的能力
越强，其抗氧化能力越强。氯仿相清除 DPPH·的
IC50值为 0. 15 mg /mL;乙酸乙酯相清除 DPPH·的
IC50值为 0. 09 mg /mL。
3 结语
(1)野龙竹分布于云南西部至南部，生长于
海拔 800 ～ 1 300 m 的山地、沟谷两侧，常形成小
面积的纯林，高 10 ～ 18 m，直径 10 ～ 15 cm，在产
地常零星开花，笋味鲜美，是开发笋用竹的入选竹
种。本项实验为野龙竹在抗氧化及延缓衰老中的应
用提供依据。
(2)野龙竹竹叶黄酮安全无毒，其安全性远
远高于银杏提取物，目前，对野龙竹竹叶中黄酮含
量及抗氧化性未见报道。竹子具有生长快，可反复
采割等特点，是相当丰富的潜在可再生资源［9］。
(3)天然黄酮类化合物是植物中重要的生理
活性物质之一，可用于制备药品、保健食品、化妆
品、香料、食品防腐剂、天然抗氧化剂等产品［2］。
我国竹叶资源丰富，分布广泛，因此充分开发利用
竹叶中的黄酮类成分具有十分重要的现实意义。
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211 西 部 林 业 科 学 2013 年