全 文 ：西北植物学报，２０１６，３６（１１）：２１７３－２１８１
Ａｃｔａ　Ｂｏｔ．Ｂｏｒｅａｌ．－Ｏｃｃｉｄｅｎｔ．Ｓｉｎ．
　　文章编号：１０００－４０２５（２０１６）１１－２１７３－０９　　　　　　　　　　　　　　　ｄｏｉ：１０．７６０６／ｊ．ｉｓｓｎ．１０００－４０２５．２０１６．１１．２１７３
收稿日期：２０１６－０８－１９；修改稿收到日期：２０１６－１０－３１
基金项目：江苏农林职业技术学院院级项目（２０１４ｋｊ１５）；江苏高校品牌专业建设工程资助项目（ＰＰＺＹ２０１５Ｂ１７３）；江苏省自然科学基金
（ＢＫ２０１６０５６７）
作者简介：王媛花（１９８１－）女，博士，讲师，主要从事园艺植物分子生物学研究。Ｅ－ｍａｉｌ：ｗａｎｇｙｕａｎｈｕａ０５１１＠１６３．ｃｏｍ
ＳｌＣＢＬ１基因调控番茄果实
成熟发育的分子机理
王媛花１，２，贾思振１，２，颜志明１，２，冯英娜１，２
（１江苏农林职业技术学院，江苏镇江２１２４００；２江苏现代园艺工程技术中心，江苏镇江２１２４００）
摘　要：以番茄（Ｓｏｌａｎｕｍ　ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｕｍＬ．）品种‘Ｍｉｃｒｏ　Ｔｏｍ’为试材，从其果实中克隆得到番茄类钙调磷酸酶Ｂ基
因（Ｔｏｍａｔｏ　Ｃａｌｃｉｎｅｕｒｉｎ　Ｂ－Ｌｉｋｅ　ｇｅｎｅ，ＳｌＣＢＬ１），构建其带有报告基因的ｅ－ＧＦＰ 植物表达载体，分析番茄果实中
ＳｌＣＢＬ１基因超表达与成熟发育进程的相互关系。结果显示：（１）与对照非转基因植株以及转空载植株相比，转
ＳｌＣＢＬ１基因番茄中ＳｌＣＢＬ１基因过量表达，而且能够使番茄果实成熟期提前３～５ｄ，表明ＳｌＣＢＬ１基因可促进番
茄果实成熟。（２）番茄果实成熟相关基因的表达量也受到不同程度调控，其中番茄成熟过程中的色素合成基因、乙
烯路径基因以及果实成熟相关转录因子都受到强烈的调控，与对照相比表达量分别上调５～１０倍。研究表明，
ＳｌＣＢＬ１基因能够促进番茄果实成熟，而且通过影响色素合成基因以及果实成熟相关转录因子来调控番茄果实成熟。
关键词：番茄‘Ｍｉｃｒｏ　Ｔｏｍ’；ＳｌＣＢＬ１基因；果实发育
中图分类号：Ｑ７８５；Ｑ７８６ 文献标志码：Ａ
Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ　ｏｆ　ＳｌＣＢＬ１Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ
ｄｕｒｉｎｇ　Ｔｏｍａｔｏ　Ｆｒｕｉｔ　Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ
ＷＡＮＧ　Ｙｕａｎｈｕａ１，２，ＪＩＡ　Ｓｉｚｈｅｎ１，２，ＹＡＮ　Ｚｈｉｍｉｎｇ１，２，ＦＥＮＧ　Ｙｉｎｇｎａ１，２
（１Ｊｉａｎｇｓｕ　Ｐｏｌｙｔｅｃｈｎｉｃ　Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ　ａｎｄ　Ｆｏｒｅｓｔｒｙ，Ｚｈｅｎｊｉａｎｇ，Ｊｉａｎｇｓｕ　２１２４００，Ｃｈｉｎａ；２Ｊｉａｎｇｓｕ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ　ａｎｄ
Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　Ｃｅｎｔｅｒ　ｆｏｒ　Ｍｏｄｅｒｎ　Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒｅ，Ｚｈｅｎｊｉａｎｇ，Ｊｉａｎｇｓｕ　２１２４００，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｗｉｔｈ　ｔｏｍａｔｏ（Ｓｏｌａｎｕｍ　ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｕｍ Ｌ．）ｖａｒｉｅｔｙ‘Ｍｉｃｒｏ　Ｔｏｍ’ａｓ　ｔｅｓｔ　ｍａｔｅｒｉａｌｓ，ｗｅ　ｃｌｏｎｅｄ　ｔｈｅ
ｔｏｍａｔｏ　Ｃａｌｃｉｎｅｕｒｉｎ　Ｂ－Ｌｉｋｅ　ｇｅｎｅ（ＳｌＣＢＬ１）ｆｒｏｍ‘Ｍｉｃｒｏ　Ｔｏｍ’ｆｒｕｉｔａｎｄ　ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ　ｉｎｐｌａｎｔ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｖｅｃ－
ｔｏｒ　ｗｉｔｈ　ｅ－ＧＦＰ　ｒｅｐｏｒｔ　ｇｅｎｅ．Ｔｈｅｎ　ｗｅ　ａｎａｌｙｚｅｄ　ｔｈｅ　ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ＳｌＣＢＬ１ｇｅｎｅ　ｏｖｅｒ－ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ａｎｄ
ｔｏｍａｔｏ　ｆｒｕｉｔ　ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗ　ｔｈａｔ：（１）ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｎｏｎ－ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ　ｐｌａｎｔｓ　ａｎｄ　ｅｍｐｔｙ　ｖｅｃ－
ｔｏｒ　ｐｌａｎｔ，ｏｖｅｒ－ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ＳｌＣＢＬ１ｃａｎ　ｐｒｏｍｏｔｅ　ｆｒｕｉｔ　ｍａｔｕｒｅ　ａｎｄ　ｍａｄｅ　ｔｏｍａｔｏ　ｆｒｕｉｔ　ｍａｔｕｒｅ　ｆｏｒ　３ｔｏ　５ｄａｙｓ
ｉｎ　ａｄｖａｎｃｅ．（２）Ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｔｏｍａｔｏ　ｆｒｕｉｔ　ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ｒｅｌａｔｅｄ　ｇｅｎｅｓ　ａｌｓｏ　ｒｅｇｕｌａｔｅｄ　ｉｎ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｄｅ－
ｇｒｅｅｓ．Ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ　ｔｏｍａｔｏｅｓ　ｍａｔｕｒｅ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｐｒｏｃｅｓｓ　ｏｆ　ｐｉｇｍｅｎｔ　ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ｇｅｎｅｓ，ｔｈｅ　ｐａｔｈ　ｏｆ　ｅｔｈｙｌｅｎｅ　ａｎｄ　ｒｉｐｅ
ｒｅｌａｔｅｄ　ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ　ｆａｃｔｏｒｓ　ｈａｖｅ　ｂｅｅｎ　ｓｔｒｏｎｇｌｙ　ｒｅｇｕｌａｔｅｄ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｌｅｖｅｌ　ｒａｉｓｅｄ　ａｂｏｕｔ　５ｔｏ　１０
ｔｉｍｅｓ　ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗ　ｔｈａｔ　ＳｌＣＢＬ１ｇｅｎｅ　ｃａｎ　ｐｒｏｍｏｔｅ　ｔｈｅ　ｆｒｕｉｔ　ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，ａｎｄ　ｂｙ
ｉｎｆｌｕｅｎｃｉｎｇ　ｔｈｅ　ｐｉｇｍｅｎｔ　ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ｇｅｎｅｓ　ａｎｄ　ｒｉｐｅ　ｒｅｌａｔｅｄ　ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ　ｆａｃｔｏｒｓ　ｔｏ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｔｏｍａｔｏ　ｆｒｕｉｔ　ｍａ－
ｔｕｒｅ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ｔｏｍａｔｏ‘Ｍｉｃｒｏ　Ｔｏｍ’；ＳｌＣＢＬ１ｇｅｎｅ；ｆｒｕｉｔ　ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ
　　类钙调磷酸酶Ｂ基因（Ｃａｌｃｉｎｅｕｒｉｎ　Ｂ－Ｌｉｋｅ　ｇｅｎｅ
ＣＢＬ）家族是一类钙感应器。ＣＢＬ基因最初在拟南
芥中克隆出来，同酵母中钙调磷酸酶Ｂ和动物中的
神经钙调传感器非常相似，因此被命名为类钙调磷
酸Ｂ［１］。后来在玉米、水稻、豌豆、大豆和大麦中也
发现有ＣＢＬ基因［２－３］。ＣＢＬ１基因是目前ＣＢＬ基因
家族中研究得最多的基因，有研究推测其有可能是
植物中执行 Ｃａｌｃｉｎｅｕｒｉｎ　Ｂ亚基功能的钙结合元
件［４－６］。对ＣＢＬ１基因的研究大多是关于该基因在
非生物胁迫，包括盐、低温、ＡＢＡ、干旱中的作用。
近年来，多个物种中的ＣＢＬ１基因已被成功分离并
进行了功能验证［７－１２］。研究发现ＣＢＬ１基因在不同
逆境胁迫与生长发育过程中呈现不同的表达模式，
是植物逆境信号传导途径中的关键调控节点［１３－１５］。
但是，目前的研究只能够充分说明ＣＢＬ１基因
的功能在于调控植物的抗逆性，而ＣＢＬ１基因对植
物的生长发育的调控研究极少，尤其是对果实的生
长发育调控研究几乎没有。因此，果实中是否有
ＣＢＬ１基因？如果有，基因功能是什么？是否能够
调控果实的生长发育？这些问题是未来研究ＣＢＬ１
基因功能的一个新的方向，不仅对深入解析果实发
育及成熟调控的分子机理具有参考价值，同时对深
入理解植物抗逆的机理及其分子改良也具有重要的
意义。
番茄（Ｓｏｌａｎｕｍ　ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｕｍ Ｌ．）是一种重要
的园艺作物，研究番茄的果实成熟发育近年来取得
了最深入系统的成果［１６－１８］。探讨番茄果实成熟的
调控机制可为定向改善番茄果实品质提供理论依
据。‘Ｍｉｃｒｏ　Ｔｏｍ’是番茄的矮化突变体，它保留了
普通番茄作为模式植物的基本特征，但植株矮小、生
命周期更短，具有节省研究空间、缩短研究时间的巨
大优势［１９］。所以更易于在实验室可控环境条件下
观察，可以进行大量取样记录和拍照，确定番茄果实
成熟发育的进程。本研究克隆了‘Ｍｉｃｒｏ　Ｔｏｍ’番茄
果实基因ＣＢＬ１，以番茄‘Ｍｉｃｒｏ　Ｔｏｍ’为材料转
ＣＢＬ１基因，使ＣＢＬ１基因在番茄果实中过量表达。
通过转基因材料和对照果实的发育进程以及果实相
关成熟基因的表达分析，探究番茄ＣＢＬ１基因在果
实成熟发育中的作用，为深入了解果实发育和成熟
调控的分子机理提供思路。
１　材料和方法
１．１　试验材料
试验于２０１４年５月～２０１６年３月，在江苏农
林职业技术学院组培中心和连栋温室进行。番茄品
种‘Ｍｉｃｒｏ　Ｔｏｍ’种子购买自美国Ｂａｌ　Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒａｌ
Ｃｏｍｐａｎｙ。挑选生长饱满的种子在超净工作台用
７０％乙醇冲洗３０ｓ，无菌水冲洗２次，１０％次氯酸钠
消毒８ｍｉｎ，无菌水冲洗３次，接种于１／２ＭＳ培养基
中，培养番茄无菌苗，１５ｄ以后，选取幼嫩平展的子
叶用于基因转化。
转基因番茄和普通番茄栽培于蛭石和营养土混
合物（１∶１）的培养钵中，栽培于温室中，温室环境温
度为白天２３～２６℃，夜间１５～１８℃，相对空气湿度
８０％以上。培养至番茄开花时开始观察不同发育时
期的番茄果实发育情况，以及取样进行后期基因表
达量检测。
１．２　主要培养基配方
番茄种子培养基（１／２ＭＳ培养基）：１／２ＭＳ＋２０
ｇ／Ｌ 蔗糖 ＋５．５ｇ／Ｌ 琼脂；番茄共培养培养基
（ＭＳ１）：ＭＳ＋２０ｇ／Ｌ蔗糖＋５．５ｇ／Ｌ琼脂 ＋２．０
ｍｇ／Ｌ　ＺＴ ＋０．５ ｍｇ／Ｌ　ＩＡＡ；番茄筛选培养基
（ＭＳ２）：ＭＳ＋２０ｇ／Ｌ蔗糖＋５．５ｇ／Ｌ琼脂 ＋２．０
ｍｇ／Ｌ　ＺＴ ＋０．５ｍｇ／Ｌ　ＩＡＡ，高压灭菌，冷却至
６０℃加入７５ｍｇ／Ｌ卡那霉素、４００ｍｇ／Ｌ羧苄青霉
素，分装培养瓶备用；番茄生根筛选培养基（ＭＳ３）：
１／２ＭＳ＋２０ｇ／Ｌ蔗糖＋５．５ｇ／Ｌ琼脂，高压灭菌，冷
却至６０℃加入５０ｍｇ／Ｌ卡那霉素，３５０ｍｇ／Ｌ羧苄
青霉素，分装培养瓶备用。所有培养基ｐＨ 值均调
至５．８。
１．３　试验方法
１．３．１　番茄果实发育不同时期ＣＢＬ１基因表达量
的检测　按照‘Ｍｉｃｒｏ　Ｔｏｍ’番茄果实的发育周期，
在本实验室的温湿度条件管理下，果实从开花到完
全成熟大约４０～４２ｄ。将‘Ｍｉｃｒｏ　Ｔｏｍ’番茄果实分
为小绿果（花后１０～１２ｄ）、中绿果（花后１６～１８ｄ）、
大绿果（花后２２～２４ｄ）、绿白果（花后２８～３０ｄ）、白
果（花后３４～３６ｄ）、白转红（花后３６～３８ｄ）、黄红果
（花后３８～４０ｄ）、全红果（花后４０～４２ｄ）等８个
时期。
分别提取每个时期果实的ＲＮＡ，反转录为ｃＤ－
ＮＡ。根据ＮＣＢＩ数据库中的番茄ＳｌＣＢＬ１基因序
列（ＧｅｎＢａｎｋ登录号 ＮＭ＿００１２５２１１８．１），在Ｐｒｉｍ－
ｅｒ３Ｐｌｕｓ网站设计目的基因ＳｌＣＢＬ１基因荧光定量
的引物（表１）。采用实时荧光定量 ＰＣＲ（ｑＲＴ－
ＰＣＲ）方法，检测ＳｌＣＢＬ１基因相对表达量。ｑＲＴ－
ＰＣＲ用ＡＢＩ公司的荧光定量Ｓｔｅｐｏｎｅｐｌｕｓ仪操作，
ＳｌＣＢＬ１基因和内标Ａｃｔｉｎ基因总反应体系为１０
４７１２ 西　北　植　物　学　报　　　　　　　　　　　　　　　　　　　３６卷
μＬ，包括３．５μＬ　ｓｕｐｅｒ　Ｍｉｘ，２μＬ　Ｐｒｉｍｅｒ　Ｍｉｘ（１０
μｍｏｌ／Ｌ），１μＬ　ｃＤＮＡ，３．５μＬ 无 核 酸 污 染 的
ｄｄＨ２Ｏ，反应程序：９４℃预变性３ｍｉｎ；９４℃变性１０
ｓ，５５ ℃ 退火 ３０ｓ，４０ 个循环后程序结束，用
Ｓｔｅｐｏｎｅ２．３软件分析基因相对表达量。
１．３．２　目的基因克隆和表达载体构建　使用
ＴＡＫＡＲＡ公司的ＲＮＡ提取试剂盒，提取番茄果实
的ＲＮＡ，反转录获得ｃＤＮＡ，根据 ＮＣＢＩ数据库中
的番茄ＳｌＣＢＬ１基因序列，用ＤＮＡＭＡＮ软件设计
目的基因ＳｌＣＢＬ１基因全长引物（表１），ＰＣＲ扩增
获得ＳｌＣＢＬ１基因全长序列。将ＳｌＣＢＬ１基因正向
构建于ｇａｔｅｗａｙ系列表达载体ｐＫ７ＷＧ２Ｄ上，构建
得到载体ｐＫ７ＷＧ２Ｄ－ＳｌＣＢＬ１载体（以下简称ｐ－Ｓｌ－
ＣＢＬ１载体）。构建好的载体转化农杆菌ＥＨＡ１０５，
穿刺保存于４℃冰箱，用于后续番茄的稳定转化。
１．３．３　番茄稳定转化与转基因植株鉴定　（１）稳定
转化。将含质粒ｐＫ７ＷＧ２Ｄ（空载）和ｐ－ＳｌＣＢＬ１的
农杆菌ＥＨＡ１０５在ＬＢ培养基上（含５０ｍｇ／Ｌ　ＳＰＲ
和５０ｍｇ／Ｌ　Ｒｉｆ）划板，２８℃培养２ｄ，挑取平板上长
得好的单菌落，接种到５０ｍＬ液体ＬＢ培养基中，２８
℃、２　２００ｒ／ｍｉｎ在摇床中振荡培养至ＯＤ６００为０．４，
常温下，５　０００转离心８ｍｉｎ，去掉上清液，在无菌滤
纸上倒扣离心管，尽量将上清液去除后用 ＭＳ液体
培养基悬浮沉淀菌体，振荡培养活化菌液，至菌液
ＯＤ６００值为０．２～０．３后备用。
将１５ｄ叶龄的番茄组培苗，沿叶脉将叶片剪成
大约３ｍｍ２ 叶块。将活化好的菌液倒入剪好的叶
片中，轻微摇匀，浸染３０ｍｉｎ。倒出菌液，叶片放置
于无菌滤纸上吸干表面的菌液。侵染后的叶片接种
于番茄共培养基 ＭＳ１中，２４℃培养箱中黑暗共培
养３ｄ。完成共培养的番茄叶片，接种番茄筛选培养
基 ＭＳ２上，使伤口与培养基充分接触，在培养室中
（２５±２）℃，光照培养。大约４０ｄ左右，可分化出抗
性芽，将抗性芽转入番茄生根筛选培养基 ＭＳ３上生
根。获得完整的抗性苗。
（２）转基因植株鉴定。载体 ｐＫ７ＷＧ２Ｄ 和
ｐ－ＳｌＣＢＬ１上均携带超强表达的绿色荧光蛋白基因
（ｅＧＦＰ），番茄叶片切口部位长愈伤组织时，将培养瓶
表１　实时荧光定量ＰＣＲ所用引物序列
Ｔａｂｌｅ　１　Ｐｒｉｍｅｒｓ　ｆｏｒ　ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ　ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ　ＰＣＲ
引物用途
Ｐｒｉｍｅ　ｕｓａｇｅ
基因Ｇｅｎｅ 引物序列Ｐｒｉｍｅｒ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ（５′→３′）
基因Ｇｅｎｅ 引物序列Ｐｒｉｍｅｒ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ（５′→３′）
荧光定量ＰＣＲ引物
ｑＲＴ－ＰＣＲ　ｐｒｉｍｅｒ
ＳｌＣＨＳ１ ＡＡＡＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＧＧＡＧＧＡＧＴＣＡＡＣＡＣＡＧＴＴＡＧＡＡＧＧＣＧＴＡＧＡＴ ＳｌＮＣＥＤ２
ＴＣＣＴＡＡＡＧＣＴＡＴＴＧＧＴＧＡＡＣＴＣＣ
ＴＣＴＡＣＡＡＧＣＣＣＧＡＡＡＡＣＴＣＣＡ
ＳｌＣＨＩ ＧＧＡＡＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＧＣＴＧＴＡＧＧＴＣＣＴＴＴＧＴＴＧＧＴＴＴＴＧＣＴＧＧＴ ＳｌＡＳＲ１
ＣＴＡＣＧＣＣＴＴＧＣＡＴＧＡＧＡＡＡＣＡ
ＡＡＡＴＣＣＡＣＣＴＧＣＣＣＣＡＡＣ
ＳｌＦ３　Ｈ ＡＴＧＴＣＴＧＧＴＧＧＣＡＡＧＡＡＡＧＧＴＣＡＧＣＣＴＴＧＴＧＧＴＴＴＧＴＣＴＧＧ ＳｌＡＣＳ２
ＧＧＧＡＴＴＴＧＡＧＡＴＴＧＣＡＡＡＧＡＣＣＡ
ＴＴＣＡＧＣＡＡＧＡＣＣＣＡＴＴＴＧＧＡ
ＳｌＰＳＹ１ ＣＴＴＧＴＴＡＴＧＧＧＴＴＧＴＴＴＣＴＣＣＴＴＧＴＴＡＧＴＴＴＧＣＴＴＴＣＣＡＣＣＡＣＣＴＣＴ ＳｌＡＣＯ１
ＧＡＡＴＴＧＧＧＧＣＴＴＣＴＴＴＧＡＧＴＴＧ
ＧＣＡＡＡＡＴＣＴＣＴＣＡＴＣＡＣＣＴＣＴＣＴＧ
ＳｌＥＸＰ１ ＡＧＴＧＣＴＴＣＴＣＧＴＴＧＣＡＴＣＡＴＴＴＡＣＣＡＧＧＧＡＴＴＣＴＴＣＣＴＴＣＡＡＣＡ ＳｌＥＲ１
ＡＡＧＴＣＴＡＴＧＧＴＧＡＡＧＴＴＧＧＴＴＧＣ
ＴＴＴＣＣＡＡＡＴＣＴＴＧＡＧＣＡＧＴＧＡＧＡ
ＳｌＣＥＬ１ ＡＣＴＣＴＣＡＴＴＣＴＧＡＡＣＣＣＡＣＧＡＣＴＡＴＴＴＣＣＣＣＡＴＡＧＴＧＴＴＣＴＣＣＴＴＣＴＴ ＳｌＥＴＲ４
ＴＧＣＡＧＴＡＡＧＧＡＧＡＴＧＧＡＴＧＡＡＧＧ
ＣＴＴＧＧＡＧＧＡＧＴＧＡＧＴＧＴＧＧＡＴＧ
ＳｌＣＥＬ２ ＧＧＧＴＡＧＣＴＣＴＧＴＧＣＣＡＴＣＴＧＴＴＴＴＧＧＧＴＴＴＧＧＧＴＴＴＧＧＴＧ ＳｌＲＩＮ
ＴＧＧＣＡＴＴＧＴＧＧＴＧＡＧＣＡＡＡＧ
ＣＡＴＣＣＡＴＣＣＡＧＧＴＡＣＡＡＣＴＣＣＡ
ＳｌＰＥ ＧＣＡＧＡＧＣＡＡＧＣＡＴＡＡＣＡＣＡＣＡＡＣＡＴＣＡＴＣＡＧＴＴＴＣＡＧＣＴＴＣＡＴＣＡＣＣ ＳｌＭＡＤＳ１
ＣＧＡＴＴＧＴＧＴＴＧＧＧＡＡＧＡＴＧＧ
ＧＣＡＡＴＣＣＡＡＧＡＧＧＣＴＧＡＡＡＧＡ
ＳｌＰＭＥ２．１ ＴＧＡＧＧＴＧＡＧＴＡＧＣＡＧＧＡＡＡＡＴＧＡＣＡＧＣＡＡＧＡＧＴＧＧＣＡＧＡＧＴＧＧ ＳｌＷＲＫＹ３３Ａ
ＡＧＣＴＧＣＡＴＣＡＴＣＡＡＴＣＴＣＴＣＡＡＴＣ
ＣＡＴＴＣＴＧＴＴＴＴＧＴＧＧＧＣＴＣＴＴＧ
ＳｌＸＹＬ１ ＴＧＴＣＧＴＴＴＧＡＧＴＡＡＧＴＧＣＡＡＧＡＣＴＡＧＧＧＴＧＧＴＧＡＡＧＴＧＡＡＣＡＡＧＡＡＡ ＳｌＦＵＬ１
ＣＣＡＧＴＴＧＡＡＧＣＧＡＡＴＡＧＡＧＡＡＣＡ
ＴＣＡＧＣＡＴＣＡＣＡＡＡＧＣＡＣＡＧＡＧＡ
ＳｌＡＤＨ１ ＡＧＴＧＣＧＧＴＴＴＴＡＧＧＧＣＴＣＴＧＴＣＣＡＴＣＴＣＴＣＴＧＣＣＴＴＴＴＣＴＣＴＣＴＣ ＳｌＥＲＦ６
ＧＴＣＣＴＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＡＴＣＣＴＣＡＡＣ
ＴＣＣＡＣＴＡＣＴＣＴＴＣＴＣＣＴＴＣＴＣＡＡＣ
ＳｌＣＢＬ１ ＡＧＡＡＡＡＣＣＴＴＴＴＴＧＣＣＡＡＴＣＧＧＡＣＣＴＴＡＧＡＴＡＧＧＧＡＡＧＴＧＴＣＡＴＴＡＴ ＳｌＡＣＴＩＮ
ＧＡＧＡＣＣＴＴＣＡＡＣＧＴＴＣＣＡＧＣ
ＴＴＣＡＴＧＣＴＧＣＴＴＧＧＡＧＣＣＡＡ
ＳｌＣＢＬ１基因全长扩增
Ｆｕｌ－ｌｅｎｇｔｈ
ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ
ｏｆ　ＳｌＣＢＬ１
ＳｌＣＢＬ１ ＡＴＧＧＧＣＴＧＣＴＴＴＡＡＴＴＣＴＡＡＧＧＴＴＴＡＴＧＴＡＧＣＡＡＣＴＴＣＡＴＣＡＡＣＴ
５７１２１１期　　　　　　　　　　　　　王媛花，等：ＳｌＣＢＬ１基因调控番茄果实成熟发育的分子机理
表２　番茄果实成熟发育相关基因
Ｔａｂｌｅ　２　Ｔｈｅ　ｒｅｌａｔｅｄ　ｇｅｎｅｓ　ｄｕｒｉｎｇ　ｔｏｍａｔｏ　ｆｒｕｉｔ　ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ
基因功能
Ｇｅｎｅ　ｆｕｎｃｔｉｏｎ
基因名称（符号）
Ｇｅｎｅ　ｎａｍｅ（ｓｙｍｂｏｌ）
ＮＣＢＩ登录号ＮＣＢＩ
Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　ｎｕｍｂｅｒ
色素形成相关基因［２０－２２］
Ｐｉｇｍｅｎｔ　ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ｒｅｌａｔｅｄ　ｇｅｎｅ
查尔酮合成酶基因Ｃｈａｌｃｏｎｅ　Ｓｙｎｔｈａｓｅ（ＳｌＣＨＳ）
查尔酮异构酶基因Ｃｈａｌｃｏｎｅ　Ｉｓｏｍｅｒａｓｅ（ＳｌＣＨＩ）
ＮＭ＿００１２４７１０４．２
ＮＭ＿００１２４７４９２．２
果实成熟软化相关基因［１７，２３］
Ｍａｔｕｒｅ　ｓｏｆｔｅｎｉｎｇ　ｒｅｌａｔｅｄ　ｇｅｎｅ
黄烷酮３－羟化酶基因Ｆｌａｖａｎｏｎｅ　３ｂｅｔａ－ｈｙｄｒｏｘｙｌａｓｅ（ＳｌＦ３　Ｈ） ＨＱ００８７７５．１
番茄红素合成酶基因Ｐｈｙｔｏｅｎｅ　ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ（ＳｌＰｓｙ１） ＮＭ＿００１２４７８８３．１
扩张蛋白基因１Ｅｘｐａｎｓｉｎ　Ｅｘｐ１（ＳｌＥＸＰ１） ＮＭ＿００１２４７０２９．２
纤维素酶基因Ｃｅｌｕｌａｓｅ　Ｃｅｌ１（ＳｌＣＥＬ１） ＮＭ＿００１２４７９３３．２
纤维素酶基因Ｃｅｌｕｌａｓｅ　Ｃｅｌ２（ＳｌＣＥＬ２） ＮＭ＿００１２４７９３８．１
果胶脂酶基因Ｐｅｃｔｉｎｅｓｔｅｒａｓｅ（ＳｌＰＥ） ＮＭ＿００１２４７２２２．２
果胶酯酶基因Ｐｅｃｔｉｎ　ｅｓｔｅｒａｓｅ（ＳｌＰＭＥ２．１） ＮＭ＿００１２４７０１９．１
ｂｅｔａ－Ｄ木糖苷酶基因Ｂｅｔａ－Ｄ－ｘｙｌｏｓｉｄａｓｅ　１（ＳｌＸＹＬ１） ＮＭ＿００１２４６９８１．１
乙醇脱氢酶基因Ａｌｃｏｈｏｌ　ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ（ＳｌＡＤＨ１） ＪＱ８０４９９６．１
ＡＢＡ路径基因［２４－２５］
ＡＢＡ　ｐａｔｈ　ｇｅｎｅ
９－顺式－环氧类胡萝卜素二加氧酶基因 ９－ｃｉｓ－Ｅｐｏｘｙｃａｒｏｔｅｎｏｉｄ　Ｄｉｏｘｙｇｅｎａｓｅ
（ＳｌＮＣＥＤ２） ＥＵ９１２３８７．２
乙烯路径基因［２６－２８］
Ｅｔｈｙｌｅｎｅ　ｐａｔｈ　ｇｅｎｅ
果实成熟诱导蛋白Ｆｒｕｉｔ－ｒｉｐｅｎｉｎｇ　ｐｒｏｔｅｉｎ（ＳｌＡＳＲ１） ＮＭ＿００１２４７２０８．２
ＡＣＣ合成酶基因ＡＣＣ　ｓｙｎｔｈａｓｅ　２（ＳｌＡＣＳ２） ＡＹ３２６９５８．１
１－氨基环丙烷羧酸酶基因１－ａｍｉｎｏｃｙｃｌｏｐｒｏｐａｎｅ－１－ｃａｒｂｏｘｙｌｉｃ　ａｃｉｄ　ｏｘｉｄａｓｅ（ＳｌＡ－
ＣＯ１） ＨＱ３２２４９９．１
乙烯响应蛋白酶抑制剂１ｅｔｈｙｌｅｎｅ　ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ　ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ　Ｉ（ＳｌＥＲ１） Ｊ０４０９９．１
乙烯受体基因Ｅｔｈｙｌｅｎｅ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｈｏｍｏｌｏｇ（ＳｌＥＴＲ４） ＮＭ＿００１２４７２７６．２
番茄成熟相关转录因子［１６，２９－３０］
Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ　ｆａｃｔｏｒｓ　ｒｅｌａｔｅｄ
ｔｏ　ｔｏｍａｔｏ　ｆｒｕｉｔ　ｒｉｐｅｎｉｎｇ
ＭＡＤＳ－ｂｏｘ　ＲＩＮ转录因子 ＭＡＤＳ－ｂｏｘ　ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ　ｆａｃｔｏｒ（ＳｌＲＩＮ） ＮＭ＿００１２４７７４１．２
ＭＡＤＳ－ｂｏｘ蛋白１ＭＡＤＳ－ｂｏｘ　ｐｒｏｔｅｉｎ　１（ＳｌＭＡＤＳ１） ＮＭ＿００１２４７４５１．２
ＷＲＫＹ转录因子３３ＷＲＫＹ　ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ　ｆａｃｔｏｒ　３３Ａ（ＳｌＷＲＫＹ３３） ＮＭ＿００１３１９９８１．１
ＴＤＲ４转录因子ＴＤＲ４ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ　ｆａｃｔｏｒ（ＳｌＦＵＬ１） ＮＭ＿００１２４７２４４．２
ＥＲＦ６转录因子ＥＲＦ６ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ　ｆａｃｔｏｒ（ＳｌＥＲＦ６） ＪＮ６１６２６５．１
放在体式荧光显微镜下，抗性植株愈伤组织有明显
的绿色光发出。愈伤组织分化出芽以后抗性植株的
芽在荧光显微镜下发绿光，而非抗性植株发红光，可
以直接将抗性植株筛选出来。将抗性植株移栽后可
用体视荧光显微镜再次分别检测番茄的不同组织器
官的荧光。荧光检测的同时，用ＰＣＲ法检测ＣａＭ－
３５ｓ启动子序列，并且用ＲＴ－ｑＰＣＲ方法检测目的基
因ＳｌＣＢＬ１的表达量。通过以上３种方法检测，确
认基因转化成功。
１．３．４　转基因番茄的ＳｌＣＢＬ１基因功能分析　将
经检测后获得的１０个转基因株系的番茄，在生根培
养基中生根后移栽大田，开花结果之后收取 Ｔ１ 代
转基因种子。Ｔ１ 收取的种子经低温春化处理之后，
同一时间将转空载、转ＳｌＣＢＬ１基因和非转基因的
种子播种于直径１８ｃｍ的育苗盆中，基质按照泥炭
土和蛭石１∶１的比例混匀使用。番茄培养在白天
温度２５～２８℃，夜间１５～１８℃的温室中。
（１）转基因番茄果实发育进程：观察番茄果实生
长过程，从播种到开花结果，每天拍照记录，观察转
ＳｌＣＢＬ１基因番茄和空载对照以及非转基因对照的
表型差异以及果实成熟时间差异。
（２）转基因番茄与成熟相关基因的表达量变化
分析：用ＲＴ－ｑＰＣＲ方法检测转ＳｌＣＢＬ１基因番茄
与空载对照相比较，在果实发育不同３个阶段（绿果
期花后２２ｄ、白果期花后３４ｄ、红果期花后４０ｄ）的
成熟相关基因表达量变化。共选取与番茄成熟相关
的基因２２个，基因名称、基因功能以及 ＮＣＢＩ登录
号见表２，ｑＲＴ－ＰＣＲ引物见表１。表达量按照上调
下调倍数的方式，以不同颜色作为表达量上调或者
下调的倍数。
１．４　数据统计分析方法
所有基因表达量采用２ΔΔＣｔ法来计算相对表达
量。番茄不同发育时期的ＳｌＣＢＬ１基因相对表达量
以第一个时期绿果期为对照。转基因番茄的２２个
６７１２ 西　北　植　物　学　报　　　　　　　　　　　　　　　　　　　３６卷
成熟相关基因的表达量均以空载对照植株的相应基
因表达量为对照。
２　结果与分析
２．１　番茄果实发育不同时期ＳｌＣＢＬ１基因表达量
的检测
　　番茄果实发育的８个不同时期ＳｌＣＢＬ１基因的
表达量检测显示，在绿果期ＳｌＣＢＬ１基因表达量变
化不大，基本维持在一个水平。随着果实成熟，果实
向绿白期过渡时，ＳｌＣＢＬ１基因表达量急剧上升，在
果实发育至白果期时，ＳｌＣＢＬ１基因表达量达到最
高。而后，随着果实变色转红，ＳｌＣＢＬ１基因表达量
又会很快下降，到果实成熟完全变红后ＳｌＣＢＬ１基
因表达量降到最低（图１）。这个结果初步说明，在
番茄果实成熟过程中，ＳｌＣＢＬ１基因有调节成熟的
作用，而且在绿果期是正向调节果实成熟的，而随着
番茄果实转色变红，表达量会急剧下降。
２．２　目的基因克隆和表达载体构建
根据ＮＣＢＩ数据库中的番茄ＳｌＣＢＬ１基因序列
（ＧｅｎＢａｎｋ登录号 ＮＭ＿００１２５２１１８．１），ＳｌＣＢＬ１全
长６４１ｂｐ，设计引物克隆ＳｌＣＢＬ１基因。克隆得到
的基因片段大小与慕斯基因片段大小一致（图２），
对基因进行测序分析，测序结果和 ＮＣＢＩ数据库中
的ＳｌＣＢＬ１基因序列比对后一致性为１００％。为了
缩短后期转基因植株的筛选检测时间，以及检测时
更加便利，选择了 ｇａｔａｗａｙ系列植物表达载体
ｐＫ７ＷＧ２Ｄ。ｐＫ７ＷＧ２Ｄ载体上携带有超表达报告
基因ｅ－ＧＦＰ（图２），便于后期的转基因植株的检测。
２．３　番茄稳定转化与转基因植株鉴定
本试验中用到的载体比较特殊，因此转基因周
期较短。得到完整的转基因植株需要１５０ｄ左右。
图３，Ａ～Ｄ是从开始转基因、愈伤组织生长、植株生
长到结果的全过程。过程中，在体式荧光显微镜下
检测荧光，可以将大部分非转基因植株去除，留下荧
光下绿色的植株继续做后期检测，确认转基因是否
成功。图３，Ｅ～Ｈ 分别是转基因植株的愈伤组织、
花和果实的荧光照片。转基因成功的植株，能够在
发育的不同阶段检测到荧光。图３，Ｈ中，将非转基
因的果实和转基因果实放置于荧光显微镜下，非转
基因果实为紫红色，而转基因植株为绿色，通过荧光
检测能够初步确定转基因成功。
荧光检测后，必须通过分子检测进一步确认转基
ＳＧＦ．小绿果；ＭＧＦ．中绿果；ＢＧＦ．大绿果；ＧＷＦ．绿白果；
ＷＦ．白果；ＷＲＦ．白转红；ＹＲＦ．黄红果；ＲＦ．全红果．
图１　番茄果实不同发育阶段ＳｌＣＢＬ１基因表达水平
ＳＧＦ．Ｓｍａｌ　ｇｒｅｅｎ　ｆｒｉｕｔ；ＭＧＦ．Ｍｉｄｄｌｅ　ｇｒｅｅｎ　ｆｒｉｕｔ；ＢＧＦ．Ｂｉｇ
ｇｒｅｅｎ　ｆｒｉｕｔ；ＧＷＦ．Ｇｒｅｅｎ　ｗｈｉｔｅ　ｆｒｕｉｔ；ＷＦ．Ｗｈｉｔｅ　ｆｒｕｉｔ；
ＷＲＦ．Ｗｈｉｔｅ　ｒｅｄ　ｆｒｕｉｔ；ＹＲＦ．Ｙｅｌｏｗ　ｒｅｄ　ｆｒｕｉｔ；ＲＦ．Ｒｅｄ　ｆｒｕｉｔ．
Ｆｉｇ．１　ＳｌＣＢＬ１ｇｅｎｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｉｎ　ｔｏｍａｔｏ　ｆｒｕｉｔｓ　ｏｆ
ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ｓｔａｇｅｓ
图２　植物表达载体ｐＫ７ＷＧ２Ｄ－ＳｌＣＢＬ１构建过程
Ｆｉｇ．２　Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐｌａｎｔ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｖｅｃｔｏｒ　ｐＫ７ＷＧ２Ｄ－ＳｌＣＢＬ１
７７１２１１期　　　　　　　　　　　　　王媛花，等：ＳｌＣＢＬ１基因调控番茄果实成熟发育的分子机理
Ａ．侵染后的番茄叶片；Ｂ．不定芽；Ｃ．抗性植株；Ｄ．完整的转基因番茄；Ｅ．愈伤组织荧光；Ｆ．花荧光；Ｇ．小绿果荧光；
Ｈ．非转基因果实和转基因果实荧光对比
图３　番茄转基因过程以及绿色荧光检测
Ａ．Ｔｏｍａｔｏ　ｌｅａｆ　ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ；Ｂ．Ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ　ｂｕｄｓ；Ｃ．Ｔｏｍａｔｏ　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ　ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ；Ｄ．Ｃｏｍｐｌｅｔｅ　ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ　ｔｏｍａｔｏ；
Ｅ．Ｃａｌｕｓ　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ；Ｆ．Ｆｌｏｗｅｒ　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ；Ｇ．ＳＧＦ　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ；Ｈ．Ｎｏｎ－ｇｍｏ　ｆｒｕｉｔ　ａｎｄ　ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ　ｆｒｕｉｔｓ　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ　ｃｏｎｔｒａｓｔ
Ｆｉｇ．３　Ｔｈｅ　ｔｏｍａｔｏ　ｇｅｎｅｔｉｃａｌｙ　ｍｏｄｉｆｉｅｄ　ｐｒｏｃｅｓｓ　ａｎｄ　ｇｒｅｅｎ　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ
因成功。因为番茄本身有ＳｌＣＢＬ１基因，因此选取
了载体上３５Ｓ启动子进行检测，检测结果显示（图
４，Ａ），转基因的１０个株系，以及转空载体的１个株
系中均有３５Ｓ基因表达，而非转基因植株中没有表
达。进一步对ＳｌＣＢＬ１基因本身的表达量进行检
测，检测结果表明（图４，Ｂ），ＳｌＣＢＬ１基因超表达的
１０个转基因株系中的ＳｌＣＢＬ１基因表达量都显著
高于空载对照和非转基因植株。通过以上结果能够
确认ＳｌＣＢＬ１基因已经成功转入番茄中。
２．４　转基因番茄的ＳｌＣＢＬ１基因功能分析
转ＳｌＣＢＬ１基因、转空载体以及非转基因的种
子同时播种后，放置于相同环境条件下，观察果实发
育。结果发现转ＳｌＣＢＬ１基因的果实成熟更快（图
５）。通过大量果实的观察发现转ＳｌＣＢＬ１基因的果
实能够比转空载和非转基因对照平均提前成熟３～
５ｄ，该结果更进一步说明ＳｌＣＢＬ１基因在番茄果实
成熟中是起作用的，能够促进番茄果实成熟。
分析了３个不同发育时期果实中影响番茄果实
成熟的２２个相关基因表达量变化，结果表明Ｓｌ－
ＣＢＬ１基因超表达对果实成熟相关基因都有不同程
度的影响。其中影响最大的是对色素合成相关基因
ＳｌＣＨＳ１、ＳｌＣＨＩ、ＳｌＦ３　Ｈ、ＳｌＰＳＹ１，与对照相比，这
些基因的表达量都有５～１０倍或者超过１０倍的上
调（图６）。这说明ＳｌＣＢＬ１基因促进番茄果实成熟
Ｍ．ＤＮＡ　ｍａｒｋｅｒ；Ｓ１～Ｓ１０．１０个不同转基因株系；
Ｎ－ＣＫ．非转基因；ＣＫ．空载对照．
图４　转基因番茄ＰＣＲ和荧光定量ＰＣＲ检测
Ｍ．ＤＮＡ　ｍａｒｋｅｒ；Ｓ１－Ｓ１０．１０ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｇｍ　ｓｔｒａｉｎｓ；Ｎ－ＣＫ：Ｎｏｎ－
ｇｅｎｅｔｉｃａｌｙ　ｍｏｄｉｆｉｅｄ；ＣＫ．Ｅｍｐｔｙ　ｖｅｃｔｏｒ　ｃｏｎｔｒｏｌ
Ｆｉｇ．４　Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ　ｔｏｍａｔｏ　ＰＣＲ　ａｎｄ　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ
ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ　ＰＣＲ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ
首先是通过调控色素代谢相关基因完成的。除此以
外，影响最明显的还有与番茄成熟相关的一些转录
因子 也 受 到 强 烈 上 调，其 中 ＳｌＷＲＫＹ３３Ａ 和
ＳｌＥＲＦ６上调也超过１０倍以上。综合以上结果可
以初步说明ＳｌＣＢＬ１基因超表达会影响色素代谢基
８７１２ 西　北　植　物　学　报　　　　　　　　　　　　　　　　　　　３６卷
ＳＧＦ．小绿果；ＭＧＦ．中绿果；ＢＧＦ．大绿果；ＧＷＦ．绿白果；ＷＦ．白果；ＷＲＦ．白转红；ＹＲＦ．黄红果；ＲＦ．全红果．
图中的转ＳｌＣＢＬ１基因植株为株系Ｓ３
图５　番茄的成熟过程对比
ＳＧＦ．Ｓｍａｌ　ｇｒｅｅｎ　ｆｒｉｕｔ；ＭＧＦ．Ｍｉｄｄｌｅ　ｇｒｅｅｎ　ｆｒｉｕｔ；ＢＧＦ．Ｂｉｇ　ｇｒｅｅｎ　ｆｒｉｕｔ；ＧＷＦ．Ｇｒｅｅｎ　ｗｈｉｔｅ　ｆｒｕｉｔ；ＷＦ．Ｗｈｉｔｅ　ｆｒｕｉｔ；
ＷＲＦ．Ｗｈｉｔｅ　ｒｅｄ　ｆｒｕｉｔ；ＹＲＦ．Ｙｅｌｏｗ　ｒｅｄ　ｆｒｕｉｔ；ＲＦ．Ｒｅｄ　ｆｒｕｉｔ．ＳｌＣＢＬ１ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ　ｐｌａｎｔ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｆｉｇｕｒｅ　ｉｓ　ｓｔｒａｉｎ　Ｓ３
Ｆｉｇ．５　Ｍａｔｕｒｅ　ｐｒｏｃｅｓｓ　ｏｆ　ｔｏｍａｔｏ
ＭＧＦ．中绿果；ＷＦ．白果；ＲＦ．全红果．图中的转ＳｌＣＢＬ１基因植株为株系Ｓ３
图６　转ＳｌＣＢＬ１基因番茄果实成熟相关基因分析
ＭＧＦ．Ｍｉｄｄｌｅ　Ｇｒｅｅｎ　Ｆｒｉｕｔ；ＷＦ．Ｗｈｉｔｅ　Ｆｒｕｉｔ；ＲＦ．Ｒｅｄ　Ｆｒｕｉｔ．ＳｌＣＢＬ１ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ　ｐｌａｎｔ　Ｉｎ　ｔｈｅ　ｆｉｇｕｒｅ　ｉｓ　ｓｔｒａｉｎ　Ｓ３
Ｆｉｇ．６　Ｔｈｅ　ｒｉｐｅ　ｒｅｌａｔｅｄ　ｇｅｎｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｔｏｍａｔｏ　ｇｅｎｅｔｉｃａｌｙ　ｍｏｄｉｆｉｅｄ　ｗｉｔｈ　ＳｌＣＢＬ１ｇｅｎｅ
因、乙烯路径基因以及和成熟相关转录因子的表达，
进而影响果实成熟。
３　讨　论
番茄作为一种重要的园艺作物，其品质形成及
成熟调控研究是近年来研究的重要问题之一。多年
来，科研工作者围绕番茄果实发育及成熟机理开展
了很多研究，但这些研究主要集中在激素包括乙烯、
茉莉酸、水杨酸，一些多胺类物质以及相关酶
类［１６－１９］，相关研究也多针对果实发育及成熟过程中
某些生理、生化过程变化的探讨上，而对果实发育及
成熟调控的分子基础了解甚少。
９７１２１１期　　　　　　　　　　　　　王媛花，等：ＳｌＣＢＬ１基因调控番茄果实成熟发育的分子机理
目前已经从番茄中分离鉴定出１３个ＣＢＬ 基
因，并对它们的基因组分布、分子特征、系统进化以
及顺式元件进行了分析，为研究番茄ＣＢＬ 的功能
提供线索［３１］。而尽管相关的研究很多，但是目前几
乎所有关于ＣＢＬ基因的研究都是研究其在抗逆中
的作用，很少有研究其在果实发育及成熟调控中的
作用。本研究首先分析了番茄果实发育不同阶段
ＳｌＣＢＬ１基因的表达量差异，结果表明，番茄在不同
的发育阶段，表达量差异很大，说明在番茄果实成熟
过程中，ＳｌＣＢＬ１基因是起作用的。为了进一步验
证ＳｌＣＢＬ１基因在果实成熟中的作用，通过稳定转
基因，将ＳｌＣＢＬ１基因成功转入番茄品种‘Ｍｉｃｒｏ
Ｔｏｍ’。对转基因番茄和对照的果实发育进程观
察，初步确定ＳｌＣＢＬ１基因超表达能够促进番茄果
实发育成熟。对番茄成熟相关的２２个基因表达量
分析结果也表明。ＳｌＣＢＬ１基因超表达会影响包括
色素代谢基因、成熟软化相关基因、乙烯路径基因以
及与成熟相关转录因子的表达量变化。很多基因受
到强烈的调控，因涉及基因较多，详细机理还有待进
一步研究。
综上所述，ＳｌＣＢＬ１在番茄中的功能除了操纵
植物的抗逆性，还能够调控植物的生长和发育。番
茄果实中ＳｌＣＢＬ１基因超表达可以调控果实成熟相
关基因的表达，因而操纵番茄果实的发育和成熟进
程。虽然目前本研究不能够详细解释相关机理，但
是对深入解析番茄果实发育及成熟调控的分子机理
具有参考价值，同时对ＣＢＬ基因家族的研究提供了
一条新的思路。
参考文献：
［１］　ＺＨＵ　Ｊ　Ｋ，ＬＩＵ　Ｊ，ＸＩＯＮＧ　Ｌ．Ｇｅｎｅｔｉｃ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｓａｌｔ　ｔｏｌｅｒａｎｃｅ
ｉｎ　Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ［Ｊ］．Ｔｈｅ　Ｐｌａｎｔ　Ｃｅｌｌ，１９９８，１０（７）：１　１８１－１　１９１．
［２］　ＭＡＲＴíＮＥＺ－ＡＴＩＥＮＺＡ　Ｊ，ＪＩＡＮＧ　Ｘ，ＧＡＲＣＩＡＤＥＢＬＡＳ　Ｂ，
ｅｔ　ａｌ．Ｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｓａｌｔ　ｏｖｅｒｌｙ　ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ　ｐａｔｈｗａｙ　ｉｎ　ｒｉｃｅ
［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ　Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，２００７，１４３（２）：１　００１－１　０１２．
［３］　ＷＡＮＧ　Ｍ　Ｙ，ＧＵ　Ｄ，ＬＩＵ　Ｔ　Ｓ，ｅｔ　ａｌ．Ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ａ　ｐｕ－
ｔａｔｉｖｅ　ｍａｉｚｅ　ｃａｌｃｉｎｅｕｒｉｎ　Ｂ－ｌｉｋｅ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｉｎ　Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ　ｃｏｎｆｅｒｓ
ｓａｌｔ　ｔｏｌｅｒａｎｃｅ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｂｉｏｌｏｇｙ，２００７，６５（６）：
７３３－７４６．
［４］　ＳＨＩ　Ｓ　Ｓ，ＣＨＥＮ　Ｗ，ＳＵＮ　Ｗ　Ｎ．Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ　ｐｒｏｔｅｏｍｉｃ　ａｎａｌ－
ｙｓｉｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ　ｃｂｌ１ｍｕｔａｎｔ　ｉｎ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｔｏ　ｓａｌｔ　ｓｔｒｅｓｓ
［Ｊ］．Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ，２０１１，１１（２４）：４　７１２－４　７２５．
［５］　ＡＬＢＲＥＣＨＴ　Ｖ，ＷＥＩＮＬ　Ｓ，ＢＬＡＺＥＶＩＣ　Ｄ，ｅｔ　ａｌ．Ｔｈｅ　ｃａｌｃｉｕｍ
ｓｅｎｓｏｒ　ＣＢＬ１ｉｎｔｅｒｇｒａｔｅｓ　ｐｌａｎｔ　ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ　ｔｏ　ａｂｉｏｔｉｃ　ｓｔｒｅｓｓｅｓ［Ｊ］．
Ｔｈｅ　Ｐｌａｎｔ　Ｊｏｕｒｎａｌ，２００３，３６（４）：４５７－４７０．
［６］　ＣＨＥＯＮＧ　Ｙ　Ｈ，ＫＩＭ　ＫＮ，ＰＡＮＤＥＹ　Ｇ　Ｋ，ｅｔ　ａｌ．ＣＢＬ１，ａ
Ｃａｌｃｉｕｍ　ｓｅｎｓｏｒ　ｔｈａｔ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｙ　ｒｅｇｕｌａｔｅｓ　ｓａｌｔ，ｄｒｏｕｇｈｔ，ａｎｄ
ｃｏｌｄ　ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ　ｉｎ　Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ［Ｊ］．Ｔｈｅ　Ｐｌａｎｔ　Ｃｅｌｌ，２００３，１５
（８）：１　８３３－１　８４５．
［７］　马齐军，胡大刚，由春香，等．苹果 ＭｄＣＢＬ家族基因表达分析
及ＭｄＣＢＬ１的功能鉴定［Ｊ］．园艺学报，２０１４，４１（６）：１　０５３－
１　０６２．
ＭＡ　Ｑ　Ｊ，ＨＵ　Ｄ　Ｇ，ＹＯＵ　Ｃ　Ｘ，ｅｔ　ａｌ．Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｅｘ－
ｐｒｅｓｓｉｏｎ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ａｐｐｌｅ　ＭｄＣＢＬ　ｆａｍｉｌｙ　ｇｅｎｅｓ　ｗｉｔｈ　ａ　ｆｕｎｃ－
ｔｉｏｎａｌ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＭｄＣＢＬ１［Ｊ］．Ａｃｔａ　Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒａｅ
Ｓｉｎｉｃａ，２０１４，４１（６）：１　０５３－１　０６２．
［８］　韩金龙，李　慧，丛　郁，等．杜梨ＣＢＬ１和ＣＢＬ７基因对非
生物逆境的响应［Ｊ］．果树学报，２０１４，３１（４）：５２９－５３５．
ＨＡＮ　Ｊ　Ｌ，ＬＩ　Ｈ，ＣＯＮＧ　Ｙ，ｅｔ　ａｌ．Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ　ｏｆ　ｔｗｏ　ＣＢＬ
ｇｅｎｅｓ　ｏｎ　ｓｔｒｅｓｓ　ｔｏｌｅｒａｎｃｅ　ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ　ｆｒｏｍ　Ｐｙｒｕｓｂｅｔｕｌａｅｆｏｌｉａ
［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｆｒｕｉｔ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，２０１４，３１（４）：５２９－５３５．
［９］　许园园，蔺　经，李晓刚，等．梨ＣＢＬ基因家族全基因组序列
的鉴定及非生物胁迫下的表达分析［Ｊ］．中国农业科学，
２０１５，４８（４）：７３５－７４７．
ＸＵＹ　Ｙ，ＬＩＮ　Ｊ，ＬＩ　Ｘ　Ｇ，ｅｔ　ａｌ．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ａ－
ｎａｌｙｓｉｓ　ｕｎｄｅｒ　Ａｂｉｏｔｉｃ　Ｓｔｒｅｓｓｅｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ＣＢＬｇｅｎｅ　ｆａｍｉｌｙ　ｉｎ　Ｐｅａｒ
［Ｊ］．Ｓｃｉｅｎｔｉａ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａ　Ｓｉｎｉｃａ，２０１５，４８（４）：７３５－７４７．
［１０］　ＧＡＯ　Ｐ，ＺＨＡＯ　Ｐ　Ｍ，ＷＡＮＧ　Ｊ，ｅｔ　ａｌ．Ｃｏ－ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ａｎｄ
ｐｒｅｆｅｒｅｎｔｉａｌ　ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｔｗｏ　ｃａｌｃｉｎｅｕｒｉｎ　Ｂ－ｌｉｋｅ　ｐｒｏ－
ｔｅｉｎｓａｎｄａＣＢＬ－ｉｎｔｅｒａｃｔｉｎｇ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｋｉｎａｓｅ　ｆｒｏｍ　ｃｏｔｔｏｎ［Ｊ］．
Ｐｌａｎｔ　Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００８，４６ （１０）：
９３５－９４０．
［１１］　赵晋锋，余爱丽，田　岗，等．谷子ＣＢＬ基因鉴定及其在干
旱、高盐胁迫下的表达分析［Ｊ］．作物学报，２０１３，３９（２）：
３６０－３６７．
ＺＨＡＯ　Ｊ　Ｆ，ＹＵ　Ａ　Ｌ，ＴＩＡＮ　Ｇ，ｅｔ　ａｌ．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＣＢＬ
ｇｅｎｅｓ　ｆｒｏｍ　ｆｏｘｔａｉｌＭｉｌｅｔ（Ｓｅｔａｒｉａ　ｉｔａｌｉｃ［Ｌ．］Ｂｅａｕｖ．）ａｎｄ　Ｉｔｓ
Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｕｎｄｅｒ　ｄｒｏｕｇｈｔ　ａｎｄ　ｓａｌｔ　ｓｔｒｅｓｓｅｓ［Ｊ］．Ａｃｔａ　Ａｇｒｏ－
ｎｏｍｉｃ　Ａｓｉｎｉｃａ，２０１３，３９（２）：３６０－３６７．
［１２］　ＺＨＡＯ　Ｊ　Ｆ，ＳＵＮ　Ｚ　Ｆ，ＺＨＥＮＧ　Ｊ，ｅｔ　ａｌ．Ｃｌｏｎｉｎｇ　ａｎｄ　ｃｈａｒａｃ－
ｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａ　ｎｏｖｅｌ　ＣＢＬ－ｉｎｔｅｒａｃｔｉｎｇ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｋｉｎａｓｅ　ｆｒｏｍ
ｍａｉｚｅ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｂｉｏｌｏｇｙ，２００９，６９（６）：６６１－６７４．
［１３］　ＴＯＫＡＳ　Ｉ，ＰＡＮＤＥＹ　Ａ，ＰＡＮＤＥＹ　ＧＫ．Ｒｏｌｅｏｆｃａｌｃｉｕｍ－ｍｅｄｉａ－
ｔｅｄ　ＣＢＬ－ＣＩＰＫ　ｎｅｔｗｏｒｋ　ｉｎ　ｐｌａｎｔ　ｍｉｎｅｒａｌ　ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ　ａｎｄ　ａｂｉｏｔｉｃ
ｓｔｒｅｓｓ［Ｍ］．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｓｔｒｅｓｓ　Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ　ｏｆ　Ｐｌａｎｔｓ，２０１３：
２４１－２６１．
［１４］　ＤＲＥＲＵＰ　Ｍ　Ｍ，ＳＣＨＬＵＣＫＩＮＧ　Ｋ，ＨＡＳＨＩＭＯＴＯ　Ｋ，ｅｔ　ａｌ．
Ｔｈｅ　ｃａｌｃｉｎｅｕｒｉｎ　Ｂ－ｌｉｋｅ　ｃａｌｃｉｕｍ　ｓｅｎｓｏｒｓ　ＣＢＬ１ａｎｄ　ＣＢＬ９ｔｏ－
ｇｅｔｈｅｒ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅｉｒ　ｉｎｔｅｒａｃｔｉｎｇ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｋｉｎａｓｅ　ＣＩＰＫ２６ｒｅｇｕｌａｔｅ
ｔｈｅ　Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ　ＮＡＤＰＨ　ｏｘｉｄａｓｅ　ＲＢＯＨＦ［Ｊ］．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
Ｐｌａｎｔ，２０１３，６（２）：５５９－５６９．
［１５］　ＭＡＨＳ　Ａ，ＳＴＥＩＮＨＯＲＳＴ　Ｌ，ＨＡＮ　Ｊ　Ｐ，ｅｔ　ａｌ．Ｔｈｅ　ｃａｌｃｉ－
ｎｅｕｒｉｎ　Ｂ－ｌｉｋｅ　Ｃａ２＋ｓｅｎｓｏｒｓ　ＣＢＬ１ａｎｄ　ＣＢＬ９ｆｕｎｃｔｉｏｎ　ｉｎ　ｐｏｌｅｎ
０８１２ 西　北　植　物　学　报　　　　　　　　　　　　　　　　　　　３６卷
ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｐｏｌｅｎ　ｔｕｂｅ　ｇｒｏｗｔｈ　ｉｎ　Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ［Ｊ］．Ｍｏ－
ｌｅｃｕｌａｒ　Ｐｌａｎｔ，２０１３，６（４）：１　１４９－１　１６２．
［１６］　汪　莹，孔俊花，陈微微，等．番茄果实成熟相关转录因子
的研究进展［Ｊ］．园艺学报，２０１４，４１（９）：１　８１１－１　８２０．
ＷＡＮＧ　Ｙ，ＫＯＮＧ　Ｊ　Ｈ，ＣＨＥＮ　Ｗ　Ｗ，ｅｔ　ａｌ．Ｆｒｕｉｔ　ｒｉｐｅｎｉｎｇ－
ｒｅｌａｔｅｄ　ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ　ｆａｃｔｏｒｓ　ｉｎ　ｔｏｍａｔｏ［Ｊ］．Ａｃｔａ　Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕ－
ｒａｅ　Ｓｉｎｉｃａ，２０１４，４１（９）：１　８１１－１　８２０．
［１７］　左进华，陈安均，孙爱东，等．番茄果实成熟衰老相关因子研
究进展［Ｊ］．中国农业科学，２０１０，４３（１３）：２　７２４－２　７３４．
ＺＵＯ　Ｊ　Ｈ，ＣＨＥＮ　Ａ　Ｊ，ＳＵＮ　Ａ　Ｄ，ｅｔ　ａｌ．Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｐｒｏｇｒｅｓｓ
ｏｎ　ｔｈｅ　ｆａｃｔｏｒｓ　ｒｅｌａｔｅｄ　ｔｏ　ｔｏｍａｔｏ　ｆｒｕｉｔ　ｒｉｐｅｎｉｎｇ　ａｎｄ　ｓｅｎｅｓｃｅｎｃｅ
［Ｊ］．Ｓｃｉｅｎｔｉａ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａ　Ｓｉｎｉｃａ，２０１０，４３（１３）：２　７２４－
２　７３４．
［１８］　肖　东，肖　阳，蔡应繁，等．番茄果实成熟相关基因
ＳｌＰＥＬ和ＳｌＡＰＬ的表达特性［Ｊ］．作物学报，２０１０，３６（７）：
１　１３５－１　１４２．
ＸＩＡＯＤ，ＸＩＡＯＹ，ＣＡＩ　Ｙ　Ｆ，ｅｔ　ａｌ．Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ
ｏｆ　ｔｗｏ　ｆｒｕｉｔ　ｒｉｐｅｎｉｎｇ　ｒｅｌａｔｅｄ　ｇｅｎｅｓ　ＳｌＰＥＬａｎｄ　ＳｌＡＰＬｉｎ　ｔｏ－
ｍａｔｏ（Ｓｏｌａｎｕｍ　ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｕｍ）［Ｊ］．Ａｃｔａ　Ａｇｒｏｎｏｍｉｃａ　Ｓｉｎｉｃａ，
２０１０，３６（７）：１　１３５－１　１４２．
［１９］　刘小花，张岚岚，朱长青，等．Ｍｉｃｒｏ－Ｔｏｍ番茄矮化微型机
制及其在植物功能基因组学研究中的应用［Ｊ］．遗传，２００８，
３０（１０）：１　２５７－１　２６４．
ＬＩＵ　Ｘ　Ｈ，ＺＨＡＮＧ　Ｌ　Ｌ，ＺＨＵ　Ｃ　Ｑ，ｅｔ　ａｌ．Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ　ｆｏｒ
ｍｉｎｉａｔｕｒｅ　ｄｗａｒｆ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ　ｏｆ　Ｍｉｃｒｏ－Ｔｏｍ　ｔｏｍａｔｏ　ａｎｄ　ｉｔｓ
ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｉｎ　ｐｌａｎｔ　ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ　ｇｅｎｏｍｉｃｓ　ｓｔｕｄｉｅｓ［Ｊ］．Ｈｅｒｅｄｉ－
ｔａｓ，２００８，３０（１０）：１　２５７－１　２６４．
［２０］　ＥＳＰＡＮＡ　Ｌ，ＨＥＲＥＤＩＡ－ＧＵＥＲＲＥＲＯ　ＪＡ，ＲＥＩＮＡ－ＰＩＮＴＯ
ＪＪ，ｅｔ　ａｌ．Ｔｒａｎｓｉｅｎｔ　Ｓｉｌｅｎｃｉｎｇ　ｏｆ　ＣＨＡＬＣＯＮＥ　ＳＹＮＴＨＡＳＥ
ｄｕｒｉｎｇ　ｆｒｕｉｔ　ｒｉｐｅｎｉｎｇ　ｍｏｄｉｆｉｅｓ　ｔｏｍａｔｏ　ｅｐｉｄｅｒｍａｌ　ｃｅｌｓ　ａｎｄ　ｃｕｔｉ－
ｃｌｅ　ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ　Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，２０１４，１６６（３）：１　３７１－
１　３８６．
［２１］　ＫＡＮＧ　ＪＨ，ＭＣＲＯＢＥＲＴＳ　Ｊ，ＳＨＩ　Ｆ，ｅｔ　ａｌ．Ｔｈｅ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄ　ｂｉ－
ｏｓｙｎｔｈｅｔｉｃ　ｅｎｚｙｍｅ　ｃｈａｌｃｏｎｅ　ｉｓｏｍｅｒａｓｅ　ｍｏｄｕｌａｔｅｓ　ｔｅｒｐｅｎｏｉｄ
ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｉｎ　ｇｌａｎｄｕｌａｒ　ｔｒｉｃｈｏｍｅｓ　ｏｆ　ｔｏｍａｔｏ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ　Ｐｈｙｓｉ－
ｏｌｏｇｙ，２０１４，１６４（３）：１　１６１－１　１７４．
［２２］　ＫＡＮＧ　Ｂ　Ｓ，ＧＵＱ　Ｓ，ＴＩＡＮ　Ｐ，ｅｔ　ａｌ．Ａ　ｃｈｉｍｅｒｉｃ　ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔ
ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ　Ｐｓｙ１ａｎｄ　ａ　ｐｏｔｅｎｔｉａｌ　ｍＲＮＡ　ｉｓａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｗｉｔｈ
ｙｅｌｏｗ　ｆｌｅｓｈ　ｃｏｌｏｒ　ｉｎ　ｔｏｍａｔｏ　ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　ＰＩ　１１４４９０［Ｊ］．Ｐｌａｎｔａ，
２０１４，２４０（５）：１　０１１－１　０２１．
［２３］　雷东锋，李剑君，张　宴，等．果实成熟过程相关调控基因
研究进展［Ｊ］．西北植物学报，２０００，２０（１）：１４９－１５７．
ＬＥＩ　Ｄ　Ｆ，ＬＩ　Ｊ　Ｊ，ＺＨＡＮＧ　Ｙ，ｅｔ　ａｌ．Ｔｈｅ　ｌａｔｅｓｔ　ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ
ａｂｏｕｔ　ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｃｏｎｔｒｏｌｉｎｇ　ｏｆ　ｆｒｕｉｔ　ｒｉｐｅｎｉｎｇ　ｇｅｎｅ［Ｊ］．
Ａｃｔａ　Ｂｏｔａｎｉｃａ　Ｂｏｒｅａｌ－Ｏｃｃｉｄｅｎｔａｌｉａ　Ｓｉｎｉｃａ，２０００，２０（１）：
１４９－１５７．
［２４］　ＺＨＡＮＧ　Ｍ，ＹＵＡＮ　Ｂ，ＬＥＮＧ　Ｐ．Ｔｈｅ　ｒｏｌｅ　ｏｆ　ＡＢＡ　ｉｎ　ｔｒｉｇｇｅ－
ｒｉｎｇ　ｅｔｈｙｌｅｎｅ　ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ａｎｄ　ｒｉｐｅｎｉｎｇ　ｏｆ　ｔｏｍａｔｏ　ｆｒｕｉｔ［Ｊ］．
Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　Ｂｏｔａｎｙ，２００９，６０（６）：１　５７９－１　５８８．
［２５］　ＣＡＫＩＲ　Ｂ，ＡＧＡＳＳＥ　Ａ，ＧＡＩＬＬＡＲＤ　Ｃ，ｅｔ　ａｌ．Ａ　ｇｒａｐｅ　ＡＳＲ
ｐｒｏｔｅｉｎ　ｉｎｖｏｌｖｅｄ　ｉｎ　ｓｕｇａｒ　ａｎｄ　ａｂｓｃｉｓｉｃ　ａｃｉｄ　ｓｉｇｎａｌｉｎｇ［Ｊ］．Ｔｈｅ
Ｐｌａｎｔ　Ｃｅｌｌ，２００３，１５（９）：２　１６５－２　１８０．
［２６］　ＭＡＲＧＯＳＳＩＡＮ　Ｌ　Ｊ，ＦＥＤＥＲＭＡＮ　Ａ　Ｄ，ＧＩＯＶＡＮＮＯＮＩ　ＪＪ，
ｅｔ　ａｌ．Ｅｔｈｙｌｅｎｅ－ｒｅｇｕｌａｔｅｄ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ａ　ｔｏｍａｔｏ　ｆｒｕｉｔ　ｒｉｐｅｎｉｎｇ
ｇｅｎｅ　ｅｎｃｏｄｉｎｇ　ａｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ　Ｉ　ｗｉｔｈ　ａ　ｇｌｕｔａｍｉｃ　ｒｅｓｉｄｕｅ
ａｔ　ｔｈｅ　ｒｅａｃｔｉｖｅ　ｓｉｔｅ［Ｊ］．Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｎａｔｉｏｎａｌ．Ａｃａｄｅ－
ｍｙ　ｏｆ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｕｎｉｔｅｄ　Ｓｔａｔｅｓ　ｏｆ　Ａｍｅｒｉｃａｎ，１９８８，８５
（２１），８　０１２－８　０１６．
［２７］　ＫＡＭＩＹＯＳＨＩＨＡＲＡ　Ｙ，ＩＷＡＴＡ　Ｍ，ＦＵＫＡＹＡ　Ｔ，ｅｔ　ａｌ．
Ｔｕｒｎｏｖｅｒ　ｏｆ　ＬｅＡＣＳ２，ａ　ｗｏｕｎｄ－ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ１－ａｍｉｎｏｃｙｃｌｏｐｒｏ－
ｐａｎｅ－１－ｃａｒｂｏｘｙｌｉｃ　ａｃｉｄ　ｓｙｎｔｈａｓｅ　ｉｎ　ｔｏｍａｔｏ，ｉｓ　ｒｅｇｕｌａｔｅｄ　ｂｙ
ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ／ｄｅｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｔｈｅ　Ｐｌａｎｔ　Ｊｏｕｒｎａｌ，
２０１０，６４（１）：１４０－１５０．
［２８］　ＪＡＦＡＲＩ　Ｚ，ＨＡＤＤＡＤ　Ｒ，ＨＯＳＳＥＩＮＩ　Ｈ，ｅｔ　ａｌ．Ｃｌｏｎｉｎｇ，
ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ＡＣＣ　ｏｘｉｄａｓｅ　ｇｅｎｅｉｎ－
ｖｏｌｖｅｄ　ｉｎ　ｅｔｈｙｌｅｎｅ　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｐａｔｈｗａｙ［Ｊ］．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｂｉｏｌｏ－
ｇｙ　Ｒｅｐｏｒｔｓ，２０１３，４０（２）：１　３４１－１　３５０．
［２９］　ＬＥＥ　ＪＭ，ＪＯＵＮＧ　ＪＧ，ＭＣＱＵＩＮＮ　Ｒ，ｅｔ　ａｌ．Ｃｏｍｂｉｎｅｄ　ｔｒａｎ－
ｓｃｒｉｐｔｏｍｅ，ｇｅｎｅｔｉｃ　ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ　ａｎｄ　ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅ　ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ　ｉｎ　ｔｏｍａ－
ｔｏ　ｆｒｕｉｔ　ｒｅｖｅａｌｓ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｅｔｈｙｌｅｎｅ　ｒｅｓｐｏｎｓｅｆａｃｔｏｒ　ＳｌＥＲＦ６
ｐｌａｙｓ　ａｎ　ｉｍｐｏｒｔａｎｔ　ｒｏｌｅ　ｉｎ　ｒｉｐｅｎｉｎｇ　ａｎｄｃａｒｏｔｅｎｏｉｄ　ａｃｃｕｍｕｌａ－
ｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｔｈｅ　Ｐｌａｎｔ　Ｊｏｕｒｎａｌ，２０１２，７０（２）：１９１－２０４．
［３０］　ＺＨＯＵ　Ｊ，ＷＡＮＧ　Ｊ，ＺＨＥＮＧ　Ｚ，ｅｔ　ａｌ．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ
ｔｈｅ　ｐｒｏｍｏｔｅｒ　ａｎｄ　ｅｘｔｅｎｄｅｄ　Ｃ－ｔｅｒｍｉｎａｌ　ｄｏｍａｉｎ　ｏｆ　Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ
ＷＲＫＹ３３ａｎｄ　ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｔｏｍａｔｏ　ＷＲＫＹ３３ｈｏｍｏｌｏｇｕｅｓ
ｉｎ　ｐｌａｎｔ　ｓｔｒｅｓｓ　ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　Ｂｏｔａｎｙ，
２０１５，６６（１５）：４　５６７－４　５８３．
［３１］　刘淑梅，王施慧，刘明毓，等．番茄ＣＢＬ家族基因的鉴定和
遗传进化分析［Ｊ］．分子植物育种，２０１５，１３（１０）：２　２６８－
２　２７３．
ＬＩＵ　Ｓ　Ｍ，ＷＡＮＧ　Ｓ　Ｈ，ＬＩＵ　Ｍ　Ｙ，ｅｔ　ａｌ．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ａｎｄ
ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＣＢＬ　ｆａｍｉｌｙ　ｇｅｎｅｓ　ｉｎ　ｔｏｍａｔｏ［Ｊ］．Ｍｏｌｅｃｕ－
ｌａｒ　Ｐｌａｎｔ　Ｂｒｅｅｄｉｎｇ，２０１５，１３（１０）：２　２６８－２　２７３．
（编辑：宋亚珍）　　
１８１２１１期　　　　　　　　　　　　　王媛花，等：ＳｌＣＢＬ１基因调控番茄果实成熟发育的分子机理