全 文 ：中国民族民间医药
Ｃｈｉｎｅｓｅ ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｅｔｈｎｏｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ ｅｔｈｎｏｐｈａｒｍａｃｙ
藏药绿萝花超临界萃取工艺优化及降血糖作用研究
曾艺玲 李 莉
中山大学附属第一医院黄花岗街社区卫生服务中心， 广东 广州 ５１００９５
【摘 要】： 目的： 筛选超临界 ＣＯ２流体萃取藏药绿萝花挥发性成分的最佳工艺， 并研究萃取物的降血糖作用。 方法：
采用正交试验设计， 以萃取物得率为指标， 考察萃取压力、 萃取温度、 解析压力及解析温度四个因素的影响； 采用单次给
药和多次给药的方式研究绿萝花提取物对正常大鼠和四氧嘧啶糖尿病大鼠血糖的影响。 结果： 最佳萃取工艺条件为萃取压
力 ２０Ｍｐａ、 萃取温度 ４５℃、 解析压力 ８Ｍｐａ、 解析温度 ５０℃； 糖尿病大鼠血糖显著降低， 并呈现良好的剂量关系。 结论： 提
取工艺简单可行， 适用于工业化生产。 绿萝花萃取物具有显著的药理作用， 具有一定的研究开发价值。
【关键词】： 绿萝花 超临界 ＣＯ２萃取 降血糖 药理作用
【中图分类号】 Ｒ９１７； Ｒ９６５．２ 【文献标识码】 Ａ 【文章编号】 １００７－８５１７ （２００８） １０－０００７－０３
Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ｏｎ ｃｒａｆｔ ａｎｄ ｈｙｐｏｇｌｙｃｅｍｉｃ ｅｆｆｅｃｔ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｏｆ ＳＦＥ－ ＣＯ２
Ｅｘｔｒａｃｔｉｖｅ ｆｏｒ Ｌｕｌｕｏｈｕａ
Ｚｅｎｇｙｉｌｉｎｇ， Ｌｉｌｉ
(Ｆｉｒｓｔ ＡｆｆｉＬｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ ＳｕｎＹａｔ－Ｓｕｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ ５１００９５， ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ: Ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｏｐｔｉｍａｌ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｏｆ ｓｕｐｅｒｃｒｉｔｉｃａｌ－ ＣＯ２ ｆｌｕｉｄ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ (ＳＦＥ－ＣＯ２) ｏｎ Ｌｕｌｕｏｈｕａ ａｎｄ ｔｈｅ ｈｙｐｏ-
ｇｌｙｃｅｍｉｃ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｅｘｔｒａｃｔｉｖｅ．Ｍｅｔｈｏｄｓ: Ｔｈｅ ｙｉｅｌｄ ｏｆ ｅｘｔｒａｃｔａｎｔ ｗａｓ ｕｓｅｄ ａｓ ｉｎｄｅｘ ｔｏ ｅｖａｌｕａｔｅ ｔｈｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｄｅ-
ｓｉｇｎ , ｉｎ ｗｈｉｃｈ ４ ｆａｃｔｏｒｓ ｃｏｎｓｉｄｅｒｅｄ ｗｅｒｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ａｎｄ ｐｒｅｓｓｕｒｅ , ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ａｎｄ ｐｒｅｓｓｕｒｅ; ｔｈｅ ＡＩｌｏｘａｎ ｈｙ-
ｐｏｇｌｙｃｅｍｉｃ ｍｏｄｅｌ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｈｙｐｏｇｌｙｃｅｍｉｃ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｅｘｔｒａｃｔｉｖｅ．Ｒｅｓｕｌｔｓ: Ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｕｍ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｉｓ : ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ
ｐｒｅｓｓｕｒｅ ２０ＭＰａ , ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ４５℃, ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ ｐｒｅｓｓｕｒｅ ８ＭＰａ , ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ５０℃ ; Ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔ ｃｏｕｌｄ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｌｏｗｅｒ ｔｈｅ ｂｌｏｏｄ
ｇｌｕｃｏｓｅ ｌｅｖｅｌｓ ｗｈｉｃｈ ｗａｓ ｒｅｌａｔｅｄ ｗｅｌｌ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｄｏｓａｇｅ ｏｆ ｔｈｅ ｄｒｕｇｓ．．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ: Ｓｕｐｅｒｃｒｉｔｉｃａｌ ｆｌｕｉｄｓ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ ｉｓ ｆｅａｓｉｂｌｅ ｆｏｒ
ｔｈｅ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｏｆ Ｌｕｌｕｏｈｕａ, ａｎｄ ｕｓｅｆｕｌ ｆｏｒ ｔｈｅ ｌａｒｇｅ ｓｃａｌｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ．ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｖｅ ｈａｓ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｈｙｐｏｇｌｙｃｅｍｉｃ ｅｆｆｅｃｔ ａｎｄ ｉｓ ｗｏｒｔｈｙ ｔｏ
ｆｕｒｔｈｅｒ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ。
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ: Ｌｕｌｕｏｈｕａ ＳＦＥ－ＣＯ２ ｈｙｐｏｇｌｙｃｅｍｉｃ ｅｆｆｅｃｔ ｐｈａｒｍａｃｏｄｙｎａｍｉｃｓ
藏药绿萝花， 别名黄金葛、 石柑子、 马蹄金，
产于西藏寒冷地带， 性微寒， 具有浓烈的香气。
是西藏特有的珍贵植物， 民间用于治疗糖尿病、
冠心病、 高血压及各种血管炎症， 具有良好的效
果， 在当地应用较为普遍。 但目前尚未见绿萝花
提取工艺及药理作用的研究报道。 作者采用超临
界二氧化碳流体萃取技术提取绿萝花中的脂溶性
成分， 并优化工艺， 参考相关文献 [１， ２] 用四氧嘧
啶糖尿病动物模型对萃取物进行降血糖作用研究。
结果报道如下：
１ 仪器、 试药与动物
１．１ 仪器 ＨＡ２３１－５０－０６ 型超临界萃取装置， 江
苏南通华安超临界实业公司。
１．２ 药物与试剂 绿萝花 （西藏福神药材开发有
限公司）； 四氧嘧啶为 ＢＤＨ 公司产品 （英国）； 甲
苯磺丁脲为广东华南药业有限公司产品； 血清葡
萄糖测定试剂盒为浙江温州东欧生物工程有限公
司产品。
１．３ 实验动物 Ｗｉｓｔａｒ 大鼠 （合格证号 ： ２６ －
２００３Ａ００２）， 体重 （２００±２０） ｇ， 雌雄各半， 由广
东省卫生厅医用动物中心提供。
２ 方法与结果
２．１ ＳＦＥ－ＣＯ２法提取工艺的基本流程 将 ２００ｇ 绿
萝花粉末投入萃取釜中， 对萃取釜、 解析釜Ⅰ、
贮罐分别进行加热， 当达到所选定的温度时， 开
启 ＣＯ２ 气瓶对系统进行加压， 当达到所选定的压
药 物 研 究
Ｔｈｅ ｍｅｄｉｃｉｎｅ ｓｔｕｄｙ 7· ·
中国民族民间医药
Ｃｈｉｎｅｓｅ ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｅｔｈｎｏｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ ｅｔｈｎｏｐｈａｒｍａｃｙ
表 １ 提取工艺四因素三水平正交实验方案及结果
表 ２ 萃取率方差分析表
表 ３ 单次灌胃给药对正常大鼠空腹血糖的影响 (Ｘ±Ｓ， ｍｍｏｌ ／ Ｌ)
力时， 开始循环萃取， 并保持恒温恒压。 待达到
选定的萃取时间后， 从解析釜Ⅰ出料口出料， 得
淡黄色的油状绿萝花萃取物， 计算萃取率 (萃取率
为每 １００ｇ药材得到的提取物的量)。
２．２ 正交试验选择萃取条件 选择萃取压力 （Ａ）、
萃取温度 （Ｂ）、 解析压力 （Ｃ）、 解析温度 （Ｄ） ４
个主要因素， 各设定三个水平， 设计 ４ 因素 ３ 水
平正交试验 Ｌ９ (３４)， 对绿萝花进行超临界 ＣＯ２ 萃
取， 萃取时间为 ３ 小时。 因素水平及结果见表 １，
统计分析见表 ２。
以萃取率为指标， 则优化工艺为 Ａ３Ｂ２Ｃ２Ｄ３， 即
萃取压力 ２０ＭＰａ、 萃取温度 ４５℃ 、 解析压力
８ＭＰａ、 解析温度 ５０℃。 方差分析结果表明， 萃取
压力、 萃取温度和解析温度是有显著影响的因素，
各因素影响大小的顺序为 Ａ＞Ｂ＞Ｄ＞Ｃ。
２．３ 最佳工艺验证实验 取绿萝花药材 ５ｋｇ （ｎ＝３）
按最佳工艺条件进行中试放大实验， 各批次的萃
取率分别为 ２．５０％、 ２．５４％及 ２．４８％， 表明重复性
良好， 该工艺切实可行。
２．４ 绿萝花提取物对实验动物血糖的影响
２．４．１ 单次给药降糖实验
２．４．１．１ 对大鼠正常血糖的影响 取 Ｗｉｓｔａｒ 大鼠
３０ 只， 雌雄各半， 随机分为绿萝花组、 甲苯磺丁
脲组和盐水组， 每组 １０ 例， 各组禁食 ２０ｈ 后断尾
取血， 测定空腹血糖。 单次灌胃给药后 １．５、 ３、
５ｈ断尾取血测血糖， 结果见表 ３。
２．４．１．２ 对四氧嘧啶致糖尿病大鼠血糖的影响
取 Ｗｉｓｔａｒ 大鼠 ５０只， 雌雄各半， 尾静脉注射 ２．５％
四氧嘧啶 ３５ｍｇ ／ ｋｇ， １ 周后断尾取血测血糖。 凡血
糖低于 ２ｇ ／ Ｌ 者剔除， 将血糖＞２ｇ ／ Ｌ 随机分为绿萝
花组、 甲苯磺丁脲组和盐水组， 断尾取血测单次
灌胃给药后 １．５， ３， ５ｈ血糖， 结果见表 ４。
２．４．２ 多次给药降糖实验
２．４．２．１ 对大鼠正常血糖的影响 取 Ｗｉｓｔａｒ 大鼠
３０ 只， 雌雄各半， 随机分为绿萝花组、 甲苯磺丁
脲组和盐水组， 每天 ２ 次， 连续灌胃给药 ２０ｄ， 分
别在给药后第 ５、 １０、 １５、 ２０ｄ 断尾取血测血糖，
药 物 研 究
Ｔｈｅ ｍｅｄｉｃｉｎｅ ｓｔｕｄｙ8· ·
中国民族民间医药
Ｃｈｉｎｅｓｅ ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｅｔｈｎｏｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ ｅｔｈｎｏｐｈａｒｍａｃｙ
结果见表 ５。
２．４．２．２ 对四氧嘧啶致实验性糖尿病大鼠血糖的影
响 取 Ｗｉｓｔａｒ 大鼠 ８０ 只， 雌雄各半， 用四氧嘧啶
制备实验性糖尿病模型， 方法同前。 将 １ 周后血
糖超过 ２ｇ ／ Ｌ 大鼠取出， 其余随机分为绿萝花组、
甲苯磺丁脲组和盐水组， 给药方法和测定血糖时
间同前， 结果见表 ６。
２．４．２．３ 有效作用时间确定 取 Ｗｉｓｔａｒ 大鼠 （用四
氧嘧啶制备实验性糖尿病） ３０ 只， 雌雄各半， 连
续灌胃 ２０ｄ， 在末次给药不同时间测血糖， 以测定
有效作用时间， 结果见表 ７。
３ 讨论
藏药绿萝花香气浓烈， 含有较多的挥发性成
分， 因此我们选择超临界二氧化碳萃取技术提取
药材中的亲脂性有效成分， 并对提取工艺进行了
优化， 得到了最佳工艺参数 ： 萃取压力 ２０ＭＰａ、
萃取温度 ４５℃、 解析压力 ８ＭＰａ、 解析温度 ５０℃。
对于超临界萃取后的药渣， 我们将进一步采用水
提或低浓度醇提的方式研究其亲水性成分。 药理
研究结果表明， 绿萝花超临界提取物对实验性糖
尿病大鼠血糖有显著的降血糖作用， 并呈良好的
剂量相关性， 有效作用时间在 ６ 小时以上， 但对
正常大鼠的血糖无明显影响。 但其提取物中的降
血糖作用的化学成分， 还有待进一步研究。 绿萝
花在当地资源丰富， 民间应用广泛， 该研究为其
治疗糖尿病的作用提供了一定的实验依据， 使绿
萝花可望成为开发降血糖药物的新资源。
参考文献
[１] 邓家刚， 李学坚， 覃振林．蒲桃仁提取物降血糖作用的实验研究
[Ｊ] ．广西植物， ２００６， ２６ （２）： ２１４～２１６
[２] 白淑英， 李红梅， 李淑华等．补阳方剂对糖尿病小鼠药理作用的
实验研究 [Ｊ] ．中医药学刊， ２００５， ２３ （５）： ３４２
（收稿日期： ２００８．８．１６）
表 ５ 多次灌胃给药 ２ｈ 后对正常大鼠空腹血糖的影响 (Ｘ±Ｓ， ｍｍｏｌ ／ Ｌ)
表 ６ 多次灌胃给药对四氧嘧啶致实验性糖尿病大鼠血糖的影响 (Ｘ±Ｓ， ｍｍｏｌ ／ Ｌ)
表 ７ 连续给药 ２０ｄ 后对四氧嘧啶致实验性糖尿病大鼠血糖的影响 (Ｘ±Ｓ， ｍｍｏｌ ／ Ｌ)
表 ４ 单次灌胃给药对四氧嘧啶致实验性糖尿病大鼠血糖的影响 (Ｘ±Ｓ， ｍｍｏｌ ／ Ｌ)
药 物 研 究
Ｔｈｅ ｍｅｄｉｃｉｎｅ ｓｔｕｄｙ 9· ·