全 文 ：第５６卷 第５期
　２０１０年１０月
武汉大学学报（理学版）
Ｊ．Ｗｕｈａｎ　Ｕｎｉｖ．（Ｎａｔ．Ｓｃｉ．Ｅｄ．）
Ｖｏｌ．５６Ｎｏ．５　
Ｏｃｔ．２０１０，５７８～

５８３
　　收稿日期：２０１０－０６－０１　　　通信联系人　Ｅ－ｍａｉｌ：ｈｕｚｈｏｎｇｌｉ＠ｗｈｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
作者简介：刁英，女，博士，副教授，现从事植物资源生物学与生物技术研究．　Ｅ－ｍａｉｌ：ｄｉａｏｙ７８＠１６３．ｃｏｍ．
文章编号：１６７１－８８３６（２０１０）０５－０５７８－０６
利用ＳＲＡＰ和ＩＳＳＲ标记分析五节芒
（Ｍｉｓｃａｎｔｈｕｓ　ｆｌｏｒｉｄｕｌｕｓ）的遗传多样性
刁　英１，２，胡小虎１，郑兴飞１，胡　晖１，瞿　桢３，胡中立１
（１．武汉大学 生命科学学院／植物发育生物学教育部重点实验室，湖北 武汉４３００７２；
２．重庆文理学院 生命科学与技术学院，重庆４０２１６８；
３．湖北光芒能源植物有限公司，湖北 武汉４３００７１）
　　摘　要：对４１个来自于梁子岛上４个居群的五节芒（Ｍｉｓｃａｎｔｈｕｓ　ｆｌｏｒｉｄｕｌｕｓ）进行相关序列扩增多态性（ｓｅ－
ｑｕｅｎｃｅ－ｒｅｌａｔｅｄ　ａｍｐｌｉｆｉｅｄ　ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ，ＳＲＡＰ）和简单重复序列区间标记（ｉｎｔｅｒ　ｓｉｍｐｌｅ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｒｅｐｅａｔ，ＩＳＳＲ）分析．
利用ＰＯＰＧＥＮＥ３２ｖｅｒｓｉｏｎ１．３２软件计算多样性指数，采用 ＮＴＳＹＳ．２．１０ｅ计算软件，得到相似性系数，并用 ＵＰＧ－
ＭＡ法进行聚类分析．结果显示６条ＩＳＳＲ多态性引物，共扩增出１０３条ＤＮＡ条带，其中９８条为多态性条带，占
９５．１５％，样品之间的相似系数为０．６７～０．９５．６对ＳＲＡＰ引物，共扩增出１７３条ＤＮＡ条带，其中１４７条为多态性
条带，占８４．９７％，样品之间的相似系数为０．７５～１．００．两种标记均表明五节芒具有较高的遗传多样性．分别以个
体为单位及以群体为单位进行聚类分析，２种标记分别得到了相似但并不完全相同的个体聚类图及群体聚类图．研
究结果表明五节芒的遗传多样性水平较高．ＳＲＡＰ与ＩＳＳＲ标记均适用于五节芒的遗传多样性分析．
关　键　词：五节芒；相关序列扩增多态性；简单重复序列区间标记；遗传多样性
中图分类号：Ｑ　９４９．９　　　文献标识码：Ａ
０　引　言
　　芒草是芒属（Ｍｉｓｃａｎｔｈｕｓ　Ａｎｄｅｒｓｓ．）植物的总
称，属禾本科多年生高大草类．芒草纤维含量高，是
一种理想的造纸原料；近年来以其高光效、生长快，
产量高、易繁殖、燃值高且污染少等独特的优势［１］，
已经被确定为一种开发潜力巨大的生物质能源；同
时，随着研究的深入，人们发现芒草还是一类具有重
要生态效益的植物资源［２］．中国是世界芒类植物资
源的分布中心，共有１０种在我国分布［３］．研究者分
别从形态学、生态学、生理生化、资源利用等领域对
芒属植物五节芒（Ｍｉｓｃａｎｔｈｕｓ　ｆｌｏｒｉｄｕｌｕｓ （Ｌａｂ．）
Ｗａｒｂ．ｅｘ　Ｓｃｈｕｍ．ｅｔ　Ｌａｕｔ．）进行了研究［４～７］．
ＤＮＡ分子标记技术以蛋白质、核酸分子的突变
为基础，能够检测生物的遗传结构与变异．目前，该
技术在品种鉴定、遗传图谱的构建、基因的定位及克
隆、物种亲缘关系鉴别、遗传多样性分析等方面得到
了广泛的应用［８］．相关序列扩增多态性（ｓｅｑｕｅｎｃｅ
ｒｅｌａｔｅｄ　ａｍｐｌｉｆｉｅｄ　ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ，ＳＲＡＰ）是一种基
于ＰＣＲ反应的分子标记技术，最早是从芸苔属作物
研究中开发出来［９］，具有简便、稳定、中等产率、在基
因组中分布均匀的特点；简单重复序列区间标记
（ｉｎｔｅｒ　ｓｉｍｐｌｅ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｒｅｐｅａｔｓ，ＩＳＳＲ）是一种在简
单序列重复标记（ｓｉｍｐｌｅ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｒｅｐｅａｔｓ，ＳＳＲ）基
础上创建、基于 ＰＣＲ 扩增的新型的分子标记技
术［１０］．由于ＩＳＳＲ引物碱基数量多，退火温度高，可
重复性好，非特异性扩增少，真核生物富含ＳＳＲ序
列且变异最快，故ＩＳＳＲ扩增出的条带多且多态性
要比 ＲＡＰＤ（ｒａｎｄｏｍ　ａｍｐｌｉｆｉｅｄ　ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ，ＤＮＡ）、
ＳＳＲ、ＲＦＬＰ（ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ　ｆｒａｇｍｅｎｔ　ｌｅｎｇｔｈ　ｐｏｌｙｍｏｒ－
ｐｈｉｓｍｓ）等更加丰富．
芒属植物是多年生的异花授粉植物，自然界分
布广，很易杂交，遗传背景十分复杂，目前，还未见对
五节芒的自然群体进行遗传多样性研究的报道．因
此，本研究利用ＳＲＡＰ和ＩＳＳＲ分子标记技术对湖
北省梁子岛生长的五节芒自然野生群体进行遗传学
第５期 刁　英 等：利用ＳＲＡＰ和ＩＳＳＲ标记分析五节芒（Ｍｉｓｃａｎｔｈｕｓ　ｆｌｏｒｉｄｕｌｕｓ）的遗传多样性
分析，初步了解芒的遗传变异状况，同时为利用分子
标记对芒属植物进行研究提供基础数据．
１　材料与方法
１．１　样品
供试样品采集地为湖北省鄂州市梁子岛，采集
时间为２０１０年５月；五节芒生长成丛分布，每丛采
样１～２个分株，共采集４１株个体，共４个居群；荻
（Ｍｉｓｃａｎｔｈｕｓ　ｓａｃｃｈａｒｉｆｌｏｒｕｓ （Ｍａｘｉｍ．）Ｂｅｎｔｈ．）２
株（外类群）．所采材料均经过武汉大学生命科学学
院潘明清高级工程师鉴定．材料的具体信息见表１．
１．２　仪器与试剂
ＰＣＲ扩增是在ＢＩＯ－ＲＡＤ　ＭＹ　Ｃｙｃｌｅｒ　Ｔｈｅｒｍａｌ
Ｃｙｃｌｅｒ　ＰＣＲ仪上进行．主要试剂１０×Ｔａｑ　Ｂｕｆｅｒ（不
含 Ｍｇ２＋），２ｍｍｏｌ／Ｌ　ＭｇＣｌ２，１０ｍｍｏｌ／Ｌ　ｄＮＴＰｓ，２
Ｕ／μＬ　Ｔａｑ　ＤＮＡ聚合酶，ＤＮＡ　Ｍａｒｋｅｒ　ＤＬ　２０００均
购于北京鼎国生物技术服务有限公司．ＩＳＳＲ引物及
ＳＲＡＰ引物（表２）均由北京奥科生物技术有限责任
公司合成，稀释至２０μｍｏｌ／Ｌ备用．
表１　研究所用材料
样品序号 名称　　　　 采集地 经纬度 居群编号
１～１４，
４０～４１ Ｍｉｓｃａｎｔｈｕｓ　ｆｌｏｒｉｄｕｌｕｓ
梁子岛池塘旁 Ｅ　１１４°３４′２５４″，Ｎ　３０°１５′８９８″ Ｒ１
１５～１９　 Ｍｉｓｃａｎｔｈｕｓ　ｆｌｏｒｉｄｕｌｕｓ 梁子岛北路旁 Ｅ　１１４°３４′３１１″，Ｎ　３０°１５′９６５″ Ｒ２
２０～２９　 Ｍｉｓｃａｎｔｈｕｓ　ｆｌｏｒｉｄｕｌｕｓ 梁子岛北部　 Ｅ　１１４°３４′３３５″，Ｎ　３０°１５′９８４″ Ｒ３
３０～４０　 Ｍｉｓｃａｎｔｈｕｓ　ｆｌｏｒｉｄｕｌｕｓ 梁子岛观音庙 Ｅ　１１４°３４′３５９″，Ｎ　３０°１５′９３３″ Ｒ４
４２，４３　 Ｍｉｓｃａｎｔｈｕｓ　ｓａｃｃｈａｒｉｆｌｏｒｕｓ 梁子岛南部　 Ｅ　１１４°３４′４０７″，Ｎ　３０°１５′９５０″ Ｒ５
　　　　注：样品２和３来自于同一丛五节芒的不同分株，４和５，６和７，１０和１１，４０和４１均是如此
表２　ＩＳＳＲ和ＳＲＡＰ引物名称与序列
ＩＳＳＲ引物 ＳＲＡＰ引物
引物名称 序列 上游引物名称 序列
下游引
物名称 序列
ｕｂｃ１　 ５′－ＡＣＡＣＡＣＡＣＡＣＡＣＡＣＡＣＴＧ－３′ ｍｅ３　 ５′－ＴＧＡＧＴＣＣＡＡＡＣＣＧＧＡＡＴ－３′ ｅｍ１０ ５′－ＧＡＣＴＧＣＧＴＡＣＧＡＡＴ－ＴＣＡＴ－３′
ｕｂｃ３ ５′－ＧＴＣＡＧＴＧＴＣＴＣＣＴＣＣＴＣＣＴＣ－ＣＴＣＣ－３′ ｍｅ４　 ５′－ＴＧＡＧＴＣＣＡＡＡＣＣＧＧＡＣＣ－３′ ｅｍ１１
５′－ＧＡＣＴＧＣＧＴＡＣＧＡＡＴ－
ＴＣＴＡ－３′
ｕｂｃ８３５　 ５′－ＡＧＡＧＡＧＡＧＡＧＡＧＡＧＡＧＹＣ－３′ ｍｅ６　 ５′－ＴＧＡＧＴＣＣＡＡＡＣＣＧＧＡＣＡ－３′ ｅｍ１３ ５′－ＧＡＣＴＧＣＧＴＡＣＧＡＡＴ－ＴＣＴＧ－３′
ｕｂｃ８６０　 ５′－ＴＧＴＧＴＧＴＧＴＧＴＧＴＧＴＧＲＡ－３′ ｍｅ８　 ５′－ＴＧＡＧＴＣＣＡＡＡＣＣＧＧＡＣＴ－３′ ｅｍ１４ ５′－ＧＡＣＴＧＣＧＴＡＣＧＡＡＴ－ＴＣＴＴ－３′
ｕｂｃ８１０　 ５′－ＧＡＧＡＧＡＧＡＧＡＧＡＧＡＧＡＴ－３′ ｅｍ１５ ５′－ＧＡＣＴＧＣＧＴＡＣＧＡＡＴ－ＴＧＡＴ－３′
ｕｂｃ８４１　 ５′－ＧＡＧＡＧＡＧＡＧＡＧＡＧＡＧＡＹＣ－３′
　　注：Ｙ＝（Ｃ，Ｔ）；Ｒ＝（Ａ，Ｇ）．ＳＲＡＰ标记所采用的引物组合为 ｍｅ３＋ｅｍ１４，ｍｅ４＋ｅｍ１５，ｍｅ６＋ｅｍ１１，ｍｅ６＋ｅｍ１４，ｍｅ６＋ｅｍ１０，ｍｅ８＋
ｅｍ１３
１．３　ＤＮＡ提取
用植物基因组ＤＮＡ提取试剂盒（北京天根生
化科技有限公司）提取基因组ＤＮＡ．通过紫外检测
和琼脂糖凝胶电泳检测其质量和浓度，取部分基因
组ＤＮＡ稀释至５０ｍｇ／Ｌ，置于－２０℃冰箱保存备
用．
１．４　ＩＳＳＲ分子标记体系的优化及分析
参照文献［１０］的方法进行，采用单因素法，对反
应体系中的 Ｍｇ２＋、ｄＮＴＰｓ、ＴａｑＤＮＡ聚合酶浓度进
行了优化，最后确定最佳的反应体系如下：１μＬ　１０
×Ｔａｑ　Ｂｕｆｆｅｒ、ＤＮＡ　２０ｎｇ、Ｍｇ２＋１．６ ｍｍｏｌ／Ｌ、
ｄＮＴＰｓ　０．５ｍｍｏｌ／Ｌ、ＴａｑＤＮＡ聚合酶０．６Ｕ、正反
向引物浓度均为０．８μｍｏｌ／Ｌ，总体系为１０μＬ．
ＰＣＲ扩增程序为：９５℃预变性５ｍｉｎ；９５℃变
性４５ｓｅｃ、５２℃复性４５ｓｅｃ、７２℃延伸１ｍｉｎ，４０个
循环；７２℃延伸５ｍｉｎ，４℃保温．
１．５　ＳＲＡＰ分子标记分析
参照文献［９］的方法，对反应条件进行了优化，
优化后具体反应体系如下：１μＬ　１０ｘＴａｑ　Ｂｕｆｆｅｒ、
ＤＮＡ　２０ｎｇ、Ｍｇ２＋２ｍｍｏｌ／Ｌ、ｄＮＴＰｓ　０．５ｍｍｏｌ／Ｌ、
ＴａｑＤＮＡ聚合酶０．６Ｕ、正反向引物浓度均为０．８
μｍｏｌ／Ｌ，总体系为１０μＬ．
ＰＣＲ扩增程序为：９４℃预变性５ｍｉｎ；９４℃变
性１ｍｉｎ、３５℃复性１ｍｉｎ、７２℃延伸１ｍｉｎ，５个循
环；９４℃变性１ｍｉｎ、５０℃复性１ｍｉｎ、７２℃延伸１
ｍｉｎ，３５个循环，７２℃延伸１０ｍｉｎ，４℃保温．
１．６　产物检测
扩增产物采用６％的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳
９７５
武汉大学学报（理学版） 第５６卷
银染检测，用数码相机照相、记录．
１．７　遗传多样性分析
电泳图谱的每条带（ＤＮＡ片段），均为一个分子
标记，代表一个引物结合位点．根据各分子标记的迁
移率及其有无，统计所有的二元数据，按条带有或无
赋值，有带（显性）记为１，无带（隐性）记为０，强、弱
条带的均赋值，以此作为数据记录的标准．对于多态
性位点，仅在重复实验中能稳定出现差异的条带用
于数据分析．ＳＲＡＰ和ＩＳＳＲ反应条带转换成“０，１”
矩阵后，假定等位基因频率处于 Ｈａｒｄｙ－Ｗｅｉｎｂｅｒｇ
平衡状态下，利用ＰＯＰＧＥＮＥ３２ｖｅｒｓｉｏｎ１．３２软件计
算Ｎｅｉ’ｓ基因多样性指数（Ｈ）和Ｓｈａｎｎｏｎ信息指数
（Ｉ）；采用ＮＴＳＹＳ．２．１０ｅ计算软件，得到Ｄｉｃｅ相似
性系数，并用ＵＰＧＭＡ法进行聚类分析．
２　结果和分析
２．１　ＩＳＳＲ分析结果
利用ＩＳＳＲ技术对五节芒进行了遗传多样性分
析．利用６条ＩＳＳＲ多态性引物，共扩增出１０３条
ＤＮＡ条带，其中９８条为多态性条带，占９５．１５％，
平均每个引物扩增出１７．１条ＤＮＡ带．以个体为单
位，五节芒样品之间的相似系数为０．６７～０．９５，基
因遗传多样性指数 Ｈｔ＝０．２９７　４，Ｓｈａｎｎｏｎ’ｓ信息
指数Ｉ个体＝０．４５２　５．若按居群进行分析，居群间的
相似系数为０．８４～０．９５，总的遗传多样性指数 Ｈｔ＝
０．３１４　４，居群的遗传多样性 Ｈｓ＝０．１６８　２，遗传分化
系数Ｇｓｔ＝０．４６４　８，Ｉ居群＝０．４２８　１．以上结果说明，供
试材料之间差异明显，具有较为丰富的遗传多样性．
在聚类分析树状图（图１）中相似系数０．６６处，
将４１份芒的材料划分为Ａ、Ｂ、Ｃ三大聚类组，而荻
的两份材料与五节芒有明显分化，聚为一支形成外
类群．在ＩＳＳＲ标记结果中，部分个体材料显示出较
大的变异，与其所在居群分化较大，如第７、１８、２１号
样品，均游离于相应的居群材料外；Ｒ４居群在聚类
树中所有个体均聚在一起，说明其个体之间的分化
较小；Ｒ１群体分化为明显的两组，其中一组与 Ｒ４
群体较为接近，而其余个体与Ｒ３群体的部分个体
聚在一起；Ｒ３群体的分化较小，基本聚在一起；从同
一丛五节芒上所取的两个不同的分株，均分别聚在
一起，说明两者之间的变异较小．
当以居群为单位进行ＩＳＳＲ分析时，聚类结果
（图２）表明Ｒ１与Ｒ４居群分化不明显，Ｒ１的群体与
Ｒ４群体相似性最高，说明二者可能有较近的亲缘关
系，而Ｒ２的群体与其他３个群体的差异最大，分化
明显．
２．２　ＳＲＡＰ分析结果
利用６对ＳＲＡＰ引物对五节芒进行了遗传多
样性分析，共扩增出１７３条ＤＮＡ条带，其中１４７条
为多态性条带，占８４．９７％，平均每个引物扩增出
２８．３条ＤＮＡ带．以个体为单位分析，Ｈｔ＝０．１８６　６，
Ｉ个体 ＝０．３０１　８，芒样品之间的相似系数为０．７５～
图１　基于ＩＳＳＲ标记的４１份五节芒的ＵＰＧＭＡ聚类图
其中，１～４１为五节芒，４２、４３为荻
０８５
第５期 刁　英 等：利用ＳＲＡＰ和ＩＳＳＲ标记分析五节芒（Ｍｉｓｃａｎｔｈｕｓ　ｆｌｏｒｉｄｕｌｕｓ）的遗传多样性
图２　基于ＩＳＳＲ标记的４个五节芒居群
的ＵＰＧＭＡ聚类图
其中，Ｒ１～Ｒ４为五节芒，Ｒ５为荻
１．００．若按居群进行分析，居群间的相似系数为
０．９７３　８～０．９７４　２，Ｈｔ＝０．２５４　１，Ｈｓ＝０．１００　８，Ｇｓｔ
＝０．６０３　５，Ｉ居群＝０．２９０　１．分析结果说明，供试材料
之间存在一定程度的分化，遗传多样性较为丰富．
在此基础上建立了聚类分析树状图（图３），在
相似系数０．７５处，将４１份五节芒的材料划分为Ａ、
Ｂ、Ｃ、Ｄ大聚类组，而荻的两份材料与芒有明显分
化，聚为一支形成外类群．在ＳＲＡＰ标记结果中，Ｒ３
群体内个体分化较小，基本聚在一起，其间夹杂分布
了Ｒ４的群体、Ｒ２群体、Ｒ１群体的部分个体；５个
Ｒ１群体的个体单独组成一支，而其余个体则与部分
Ｒ４个体及１个Ｒ２个体组成一支；２１号个体与所有
的五节芒分化均较大．
图３　基于ＳＲＡＰ标记的４１份五节芒的ＵＰＧＭＡ聚类图
其中，１～４１为五节芒，４２、４３为荻
　　当以居群为单位进行ＳＲＡＰ分析时，聚类树
（图４）将４个五节芒的群体分为两组，其中Ｒ１与
图４　基于ＳＲＡＰ标记的４个五节芒居群
的ＵＰＧＭＡ聚类图
其中，Ｒ１～Ｒ４为五节芒，Ｒ５为荻
Ｒ４聚在一起为一组，而Ｒ２与Ｒ３聚在一起为另一
组．说明Ｒ１与Ｒ４群体有较近的亲缘关系，而Ｒ２与
Ｒ３群体亲缘关系较近．
３　讨　论
ＤＮＡ分子标记广泛存在于基因组ＤＮＡ 的各
个区域，通过对随机分布的分子标记的多态性进行
比较，就能够全面评估研究对象的遗传多样性．ＩＳ－
ＳＲ标记呈孟德尔式遗传，在多数物种中是显性的．
目前已广泛用于植物品种鉴定、遗传作图、基因定
位、遗传多样性、进化及分子生态学研究中［１１］．
ＳＲＡＰ标记技术在第二代分子标记技术里相对年
轻，但是自从其开发以来，也得到了广泛应用，特别
１８５
武汉大学学报（理学版） 第５６卷
是在蔬菜类作物中使用较多［１２］．目前，ＤＮＡ分子标
记技术在芒草上的应用相对较少，仅见 ＲＡＰＤ、
ＡＦＬＰ 及 ＩＳＳＲ 标 记 有 相 应 的 报 道［１３，１４］．由 于
ＳＲＡＰ、ＩＳＳＲ标记技术均以ＰＣＲ扩增技术为基础，
因此，本研究中，我们采用单因素法对五节芒的
ＩＳＳＲ－ＰＣＲ和ＳＲＡＰ反应体系进行了相应的优化．
ＳＲＡＰ和ＩＳＳＲ两种标记系统在多态性水平及检测
水平上各有不同．本研究中，从平均扩增条带数和平
均多态条带数上看，ＳＲＡＰ标记略高于ＩＳＳＲ标记，
但从多态条带比率上看ＩＳＳＲ 标记要明显高于
ＳＲＡＰ标记；从遗传相似系数分析看，ＳＲＡＰ标记的
遗传相似性系数的范围比ＩＳＳＲ标记略小．因此，在
芒的研究中ＩＳＳＲ标记相对而言比ＳＲＡＰ标记能反
映较多的遗传信息，检测到个体间较高的遗传差异，
这可能与不同的标记在其基因组内的分布不同有
关．经过优化的这两种分子标记技术，不但保证了扩
增的稳定性，且都能产生各自有效的多态性带，揭示
出五节芒种内个体间在ＤＮＡ 水平上的显著遗传变
异，因此，这两种分子标记均可用于五节芒种质的遗
传多样性研究和其他相关研究．
芒属植物均是异花授粉，可以利用种子进行有
性繁殖，芒草的种子依靠风力进行散播，散布范围较
大；同时也可以利用分蘖或地下茎进行无性繁殖．五
节芒成丛分布就是其分蘖生长的结果．研究发现由
同一丛五节芒中所采集的两个不同分株，利用ＩＳＳＲ
或ＳＲＡＰ分子标记均能检测出差异，但是其变异的
程度明显小于不同丛间的变异．无性繁殖能够保持
物种的特性稳定，但是在自然界无性系的变异也广
泛存在，目前许多作物品种都是通过无性系的变异
选育得到的［１５，１６］．克隆生长一方面有效地保证了物
种的生存和延续，另一方面其克隆个体间的变异又
有效地增加了遗传多样性，避免自交衰退的情况．
从梁子岛上的各个群体内部个体之间的变异来
看，不同群体的内部遗传多样性状况不同，有的群体
表现出较为丰富的变异，如位于池塘旁边的Ｒ１群
体，而有的群体较为保守，检出的个体间的变异较
小，如Ｒ３群体．从其群体分布的环境来看，变异较
为丰富的群体生长环境条件相对优越的地方，而变
异较小的群体则分布在地势较高、土质较差的半坡
位置．因此，我们推测五节芒群体内变异的大小与其
生长的环境有较大关系，其生存环境较好时，有利于
有性繁殖，群体遗传多样性较高；当生长环境较恶劣
时，则促进了无性繁殖，群体多样性相对较低［１６］．Ｒ２
与Ｒ３群体在本研究中表现出较近的亲缘关系，这
可能与这两个群体所处的位置较为接近有关．
本研究的结果显示，不论是在克隆个体间还是
群体之间，五节芒都表现出较为丰富的变异，可能是
因为五节芒为短命多年生植物，繁育系统多样（既可
进行有性繁殖，也可进行营养繁殖）等原因造成的．
五节芒丰富的遗传多样性，使其能够具有很强的适
应性和抗逆性，从而在各种恶劣的环境条件下均能
生长．
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ｐｏｒｐｈｙｒｏｃｏｍａ，Ｍｉｓｃａｍｔｈｕｓ　ｆｌｏｒｉｄｕｌｕｓ　ａｎｄ　Ｅｒｌａｎｔｈｕｓ
ｋｏｃｋｉｉ，ｔｈｅ　ｏｒｐｈｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　ｉｓｏｚｙｍｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｔｈｅｉｒ　ｈｙ－
ｂｒｉｄ　Ｆ１ｃｌｏｎｅｓ［Ｊ］．Ｓｏｕｔｈｗｅｓｔ　Ｃｈｉｎａ　Ｊ　Ａｇｒｉ　Ｓｃｉ，１９９７，
１０（３）：９２－９８（Ｃｈ）．
［６］　Ｋａｏ　Ｗｅｎｙｕａｎ，Ｔｓａｉ　Ｔｙｎｇｔｙｎｇ，Ｃｈｅｎ　Ｗａｎｈｗａ．Ａ　ｃｏｍ－
ｐａｒａｔｉｖｅ　ｓｔｕｄｙ　ｏｆ　Ｍｉｓｃａｎｔｈｕｓ　ｆｌｏｒｉｄｕｌｕｓ（Ｌａｂｉｌ）Ｗａｒｂ
ａｎｄ　Ｍ．ｔｒａｎｓｍｏｒｒｉｓｏｎｅｎｓｉｓ　Ｈａｙａｔａ：Ｐｈｏｔｏｓｙｎｔｈｅｔｉｃ　ｇａｓ
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２８５
第５期 刁　英 等：利用ＳＲＡＰ和ＩＳＳＲ标记分析五节芒（Ｍｉｓｃａｎｔｈｕｓ　ｆｌｏｒｉｄｕｌｕｓ）的遗传多样性
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Ｕｓｉｎｇ　ＳＲＡＰ　ａｎｄ　ＩＳＳＲ　Ｍａｒｋｅｒｓ
ＤＩＡＯ　Ｙｉｎｇ１，２，ＨＵ　Ｘｉａｏｈｕ１，ＺＨＥＮＧ　Ｘｉｎｇｆｅｉ　１，ＨＵ　Ｈｕｉ　１，ＱＵ　Ｚｈｅｎ３，ＨＵ　Ｚｈｏｎｇｌｉ　１
（１．Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｗｕｈａｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ／Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｍｉｎｉｓｔｒｙ　ｏｆ　Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ　ｆｏｒ
Ｐｌａｎｔ　Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ　Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｗｕｈａｎ　４３００７２，Ｈｕｂｅｉ，Ｃｈｉｎａ；
２．Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ａｒｔｓ　ａｎｄ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ　４０２１６８，Ｃｈｉｎａ；
３．Ｈｕｂｅｉ　Ｓｈｉｎｉｎｇ　Ｅｎｅｒｇｙ　Ｐｌａｎｔ　Ｃｏ．Ｌｔｄ．，Ｗｕｈａｎ　４３００７１，Ｈｕｂｅｉ，Ｃｈｉｎａ）
　　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｏ　ｓｔｕｄｙ　ｔｈｅ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｍｉｓｃａｎｔｈｕｓ　ｆｌｏｒｉｄｕｌｕｓ，ｆｏｒｔｙ－ｏｎｅ　ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓ　ｏｆ　Ｍ．ｆｌｏ－
ｒｉｄｕｌｕｓ　ｆｒｏｍ　Ｌｉａｎｇｚｉ　Ｉｓｌａｎｄ　ｗｅｒｅ　ａｎａｌｙｚｅｄ　ｂｙ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｒｅｌａｔｅｄ　ａｍｐｌｉｆｉｅｄ　ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ（ＳＲＡＰ）ａｎｄ　ｉｎｔｅｒ
ｓｉｍｐｌｅ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｒｅｐｅａｔｓ（ＩＳＳＲ）ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｍａｒｋｅｒｓ．Ｔｈｅ　ｄａｔａ　ｗｅｒｅ　ａｎａｌｙｚｅｄ　ｂｙ　ＰＯＰＧＥＮＥ３２ｖｅｒｓｉｏｎ１．３２
ａｎｄ　ＮＴＳＹＳ．２．１０ｅｓｏｆｔｗａｒｅ　ａｎｄ　ｃｌｕｓｔｅｒｅｄ　ｂｙ　ＵＰＧＭＡ　ｍｅｔｈｏｄ．Ｓｉｘ　ＩＳＳＲ　ｐｒｉｍｅｒｓ　ａｍｐｌｉｆｉｅｄ　１０３ｂａｎｄｓ　ｗｉｔｈ
９８（９５．１５％）ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ　ａｎｄ　ｓｉｘ　ＳＲＡＰ　ｐｒｉｍｅｒ　ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ　ａｍｐｌｉｆｉｅｄ　１７３ｂａｎｄｓ　ｗｉｔｈ　１４７（８４．９７％）
ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ．Ｔｈｅ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ　ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ　ｗａｓ　０．６７～０．９５（ｂｙ　ＩＳＳＲｓ）ａｎｄ　０．７５～１．００（ｂｙ　ＳＲＡＰｓ）．
Ｂｏｔｈ　ＳＲＡＰ　ａｎｄ　ＩＳＳＲ　ａｎａｌｙｓｅｓ　ｒｅｖｅａｌｅｄ　ａ　ｈｉｇｈ　ｌｅｖｅｌ　ｏｆ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｉｎ　Ｍ．ｆｌｏｒｉｄｕｌｕｓ．Ｂｙ　ｃｌｕｓｔｅｒ　ａｎａｌｙ－
ｓｉｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓ　ｏｒ　ｔｈｅ　ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ，ｔｈｅ　ｄｅｎｄｒｏｇｒａｍｓ　ｂａｓｅｄ　ｏｎ　ＳＲＡＰ　ａｎｄ　ＩＳＳＲ　ｍａｒｋｅｒｓ　ｗｅｒｅ　ｓｉｍｉｌａｒ
ｂｕｔ　ｎｏｔ　ａｌ　ｔｈｅ　ｓａｍｅ．Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｇｅｒｍｐｌａｓｍｓ　ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｍ．ｆｌｏｒｉｄｕｌｕｓ　ｉｓ　ｈｉｇｈ　ａｎｄ　ＳＲＡＰ　ａｎｄ　ＩＳＳＲ　ｃａｎ　ｂｅ
ｕｓｅｄ　ｉｎ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｓｔｕｄｙ　ｏｆ　Ｍ．ｆｌｏｒｉｄｕｌｕｓ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｍｉｓｃａｎｔｈｕｓ　ｆｌｏｒｉｄｕｌｕｓ；ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｒｅｌａｔｅｄ　ａｍｐｌｉｆｉｅｄ　ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ（ＳＲＡＰ）；ｉｎｔｅｒ　ｓｉｍｐｌｅ
ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｒｅｐｅａｔｓ（ＩＳＳＲ）；ｇｅｎｅｔｉｃ　ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ
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