全 文 ：淡竹叶中竹叶黄酮的纯化工艺研究*
初阳1，杨倩2
(1．中国医科大学附属第一医院药学部，沈阳 110001;2．沈阳药科大学，110024)
摘 要 目的 优选淡竹叶中竹叶黄酮纯化工艺。方法 以淡竹叶中总黄酮含量为指标，对树脂上样浓度、上样液
pH、上柱吸附流速、树脂药材比、乙醇洗脱浓度、洗脱速度进行优化。结果 pH为 6． 0 的高浓度竹叶黄酮提取液上样，水
洗至流出液无色，以 80%乙醇、2． 0 mL·min －1洗脱至流出液无黄酮颜色反应，收集洗脱液。洗脱液固形物中总黄酮的平
均纯度为 57． 5%。结论 采用该工艺纯化竹叶总黄酮，有效成分含量高，方法重复性好，适于工业化生产。
关键词 淡竹叶;黄酮;大孔树脂;纯化
中图分类号 R284． 2;R927． 1 文献标识码 A 文章编号 1004 － 081(20012)05 － 0648 － 03
淡竹叶为禾本科植物淡竹叶 Lophatherum gracile
Brongn．的干燥茎叶，其味甘、淡，性寒，归心、胃、小肠
经，具有清热除烦、利尿功效，多用于热病烦渴、口舌生
疮、小便赤色、淋痛等症［1］。竹叶黄酮是淡竹叶中黄
酮类物质的总称，也是淡竹叶发挥主要治疗作用的有
效成分。目前市售竹叶黄酮含量一般为 24%，笔者在
本实验中探索一种安全易行且适于工业化大生产的提
高竹叶黄酮的方法。
1 仪器与试药
1． 1 仪器 UV-9100 紫外-可见分光光度计(北京瑞
利分析仪器公司) ，FA1104 电子天平(上海民桥精密
科学仪器有限公司) ，电热恒温水浴锅(天津市泰斯特
仪器有限公司) ，真空干燥箱(上海医用仪器厂) ，
RE52CS旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂) ，SZ-97 自
动三重纯水蒸馏器(上海亚荣生化仪器厂)。
1． 2 试药 淡竹叶饮片(陕西天士力植物药业有限
责任公司，批号:20090110，经沈阳药科大学陆金才教
授鉴定为淡竹叶 Lophatherum gracile Brongn 茎叶) ，芦
丁对照品(中国食品药品检定研究院，批号:100080-
200707) ，D101 型非极性大孔吸附树脂(河北沧州宝恩
化工 有 限 公 司，净 品 型)。无 水 乙 醇 (批 号:
20101023)、石油醚(批号:20100315)均为天津市富宇
精细化工有限公司提供，分析纯。95%乙醇(沈阳市
富康消毒药剂厂，批号:20100315)。亚硝酸钠
(NaNO2，批号:20090509)、氢氧化钠(NaOH，批号:
20101102)、硝酸铝［Al(NO3)3，批号:20100820］均由
天津市博迪化工有限公司提供。盐酸(HCl，沈阳经济
技术开发区试剂厂，批号:20110320) ，三重蒸馏水(实
收稿日期 2011 － 09 － 14 修回日期 2011 － 12 － 13
基金项目 * 沈阳市科学技术计划项目(1091142-9-00)
作者简介 初阳(1980 －) ，女，辽宁沈阳人，讲师，主管药
师，硕士，主要从事中药药剂学研究。电话:024 － 83282156，E-
mail:chuyang1980@ yahoo． com． cn。
验室自制，批号:20110109)。
2 方法与结果
2． 1 上柱液的制备 取淡竹叶 10 g，70 ℃下以 70%
乙醇 250 mL水浴回流 2 h，将提取液浓缩，得到竹叶黄
酮供试品溶液［2］。
2． 2 竹叶黄酮的测定 将“2． 1”项下竹叶黄酮供试
品溶液加入 50 mL量瓶，80%乙醇定容。精密吸取上
述溶液 2 mL置 50 mL量瓶，并以 80%乙醇补充至 12．
0 mL。加入 5% NaNO2溶液 1． 5 mL，混匀，放置 6 min
后加入 10% Al(NO3)3溶液 1． 5 mL，混匀，6 min 后再
加入 4% NaOH溶液 20． 0 mL，混匀，用水定容。以阴
性对照为空白，于 510 nm波长处测吸光度(A)值［3］。
2． 3 树脂对竹叶黄酮的吸附情况考察
2． 3． 1 静态吸附量与解吸率的测定 室温下，影响大
孔吸附树脂吸附性能的主要因素有上样液浓度和上样
液 pH［4-6］，故笔者分别以供试液浓度和 pH 为考察指
标进行单因素考察，以确定最佳上样条件。
①上样液浓度考察:分别准确称取预处理湿树脂
10． 0 g，置 250 mL 具塞三角瓶，分别精密加入已知浓
度(C0，0． 02，0． 04，0． 06 mg·mL
－1)、pH 6． 0 的竹叶
黄酮水溶液 100 mL，置于摇床上 100 r·min －1振摇 24
h，充分吸附后滤过，测定各滤液中黄酮浓度(C1) ，并
按下式计算黄酮的吸附量(Q，mg·g －1)［6］。Q =(C0
－ C1)× 110 /10。分别取经上法吸附饱和的树脂，置
250 mL锥形瓶，各加入 95%乙醇 100 mL，室温浸泡，置
于摇床，100 r·min －1振摇 24 h，充分解吸后滤过，测
定各滤液中黄酮浓度，以下式计算解析率(R解) :R解 =
C解·V /Q［C解:解吸液浓度(mg·mL
－1) ，V:解吸液体
积(mL) ，Q:黄酮吸附量(mg·g －1) ］。结果见表 1。
当上样液为 0． 06 mg·mL －1时，大孔树脂的 Q和 R解均
达到最大。
·846· Herald of Medicine Vol. 31 No. 5 May 2012
表 1 不同浓度样品静态吸附量与解析率测定结果
浓度
C1 Q C解
(mg·mL －1)
R解 /%
0． 02 0． 006 0． 18 0． 012 6． 67
0． 04 0． 010 0． 34 0． 020 5． 98
0． 06 0． 017 0． 50 0． 033 7． 72
②上样液 pH:分别准确称取经预处理的湿树脂
10． 0 g，置 250 mL 具塞三角瓶，分别精密加入考察
“2． 3． 1”项①中 Q 和 R解较大的浓度 C0的竹叶黄酮水
溶液 100 mL，调节 pH 至 5． 0，6． 0，7． 0，摇床上
100 r·min －1振摇 24 h，充分吸附后滤过，按该项下测
定黄酮的 Q与 R解。结果见表 2，上样液 pH6． 0，大孔
树脂 Q和 R解均达到最大，故粗提液 pH为 6． 0 为树脂
的最佳吸附 pH。
表 2 不同 pH条件下静态吸附量与解析率测定结果
pH
C1 /
(mg·mL －1)
Q /
(mg·g － 1)
C解 /
(mg·mL －1)
R解 /%
5． 0 0． 004 0． 52 0． 037 7． 10
6． 0 0． 006 0． 50 0． 042 8． 40
7． 0 0． 013 0． 43 0． 011 2． 67
2． 3． 2 动态吸附考察 取经预处理的 D101 大孔树
脂湿法装柱，确认无明显气泡及断层后考察竹叶黄酮
的动态吸附。
①上柱吸附流速对黄酮保留率的影响:取竹叶黄
酮提取液，精密吸取 10 mL，分别以 2，4，6，8，
10 BV·h －1(BV:流出液的体积相当于床体积的倍数，
倍床体积)的流速上柱吸附，收集流出液，静止 1 h。
然后以 10 BV·h －1流速清洗，收集流出液。合并两次
流出液，测定竹叶黄酮含量，计算竹叶黄酮在树脂柱的
保留率。结果 2，4，6，8，10 BV·h －1样品保留率分别
为 90． 2%，89． 9%，87． 7%，82． 5%和 74． 9%。表明上
柱吸附流速过快，竹叶黄酮损失较大，当吸附流速 ＜ 4
BV·h －1时，竹叶黄酮保留率较高。
②树脂(干)药材比的考察:调整竹叶黄酮提取液
的上柱量，使树脂药材比(干树脂与水提液中竹叶药
材的质量比)分别为 8∶1，6∶1，4∶1，2∶1，水洗至无
色，以 80%乙醇溶液作为洗脱溶液，2 BV·h －1解吸，
收集洗脱液，测定竹叶黄酮的转移率。结果树脂药材
比为 8∶1，6∶1，4∶1，2∶1 时，转移率分别为 89．
0%，89． 3%，88． 6%和 86． 2%。表明随着树脂药材比
的增大，竹叶黄酮的转移率有所增加。树脂药材比在
4∶1 ～ 8∶1 纯化效果较好，考虑到大孔吸附树脂的成
本，选择树脂药材比为 4∶1。
③乙醇浓度:将 0． 057 mg·mL －1竹叶黄酮浓缩液
上树脂柱，先以水洗至洗脱液无色，分别选取 20%，
40%，60%，80%，95%乙醇溶液以 2． 0 mL·min －1连
续洗脱，收集不同浓度洗脱液各 100 mL，分取 2 mL洗
脱液至 5 个 10 mL量瓶，测定总黄酮浓度，并计算提取
物纯度，以确定最佳洗脱液浓度。结果见表 3。当乙
醇浓度为 80%时，总黄酮含量最高。
表 3 不同乙醇浓度对提取物总黄酮含量的影响
乙醇浓度 /% C /(mg·mL －1) P /%
20 0． 021 23． 3
40 0． 032 41． 6
60 0． 050 51． 1
80 0． 051 57． 3
95 0． 047 52． 7
④ 洗 脱 速 度:经 以 上 条 件 确 定，将
0． 057 mg·mL －1竹叶黄酮浓缩液上树脂柱，先以水洗
至洗脱液无色，然后选取 80%乙醇溶液分别以1． 5，2．
0，2． 5，3． 0 mL·min －1流速洗脱至洗脱液无黄酮显色
反应，达到洗脱完全，收集不同流速洗脱液，浓缩，冷冻
干燥，测定总黄酮含量，计算提取物纯度，结果洗脱速
度分别为 1． 5，2． 0，2． 5，3． 0 mL·min －1时，提取物纯
度分别为 52． 8%，58． 1%，49． 5%，43． 2%。当洗脱速
度为2． 0 mL·min －1时总黄酮含量最高，故洗脱速度确
定为2． 0 mL·min －1。
2． 3． 3 D101 大孔树脂最佳纯化工艺的确定 经以上
吸附条件的筛选，确定 D101 大孔树脂的最佳纯化工
艺。即:pH 6． 0 竹叶黄酮提取液以树脂药材比 4∶1，
吸附流速 4 BV·h －1上样，先以水洗至流出液无颜色，
然后以 80%乙醇、2． 0 mL·min －1洗脱至流出液无黄
酮颜色反应。将洗脱液浓缩，减压蒸发，真空干燥称质
量并以“总黄酮含量测定”项下方法测定总黄酮含量，
计算提取物纯度。结果表明，3 次平行实验结果分别
为56． 8%，58． 2%，57． 6%，平均纯度 57． 5%。
3 讨论
上样液浓度对大孔吸附树脂的吸附与解吸附有明
显影响。在一定的浓度范围内，浓度越高，大孔吸附树
脂的吸附与解吸附越高，但浓度不可能无限升高，若浓
度超过 0． 06 mg·mL －1，则提取物过浓，流动性不好，
不易上样，且损失较多。提取物为0． 06 mg·mL －1时，
竹叶黄酮提取物溶液与大孔树脂接触充分，吸附较好，
同时保证了解吸附率的提高。pH 对 D101 型大孔吸
·946·医药导报 2012 年 5 月第 31 卷第 5 期
附树脂吸附与解吸附有较大影响。在酸性条件下对竹
叶黄酮的吸附性能较好，解吸附性能也较好。这可能
与提取物呈弱酸性有关，当 pH≤6 时，黄酮提取物为
分子形态，利于大孔树脂的吸附。采用 20% ～ 95%乙
醇冲洗，竹叶总黄酮含量在 80%时纯度较高，乙醇浓
度较高，能将总黄酮洗脱完全。但当浓度达到 95%
时，不仅竹叶黄酮被洗脱，其他脂溶性物质也被洗脱，
反而使纯度降低。
采用大孔树脂法对淡竹叶中黄酮类化合物的提取
液进行分离和纯化，经纯化后得到的固形物中总黄酮
的平均纯度为 57． 5%，比市售的竹叶黄酮制剂纯度
(24%)提高约 34%，含量较高，满足中药有效部位的
制剂要求。
洗脱速度对总黄酮含量也有明显影响，当洗脱速
度过快时，洗脱溶液没有与大孔吸附树脂上的总黄酮
充分接触，洗脱不完全。洗脱速度过慢时，无法带动总
黄酮流出大孔树脂。因此，洗脱流速也是关键。
由于黄酮类化合物对光、热、湿敏感，易分解变质，
因此经提取纯化制备的竹叶黄酮提取液和冻干粉末都
必须置于避光的阴凉干燥处保存。
参考文献
［1］ 马子密，傅延龄．历代本草药性汇解［M］．北京:中国医药
科技出版社，2003:133．
［2］ 杨倩，初阳．淡竹叶中总黄酮物质的提取工艺考察［J］．山
西医药杂志，2010，39(12) :1128 － 1129．
［3］ 国家药典委员会．中华人民共和国药典(一部) ［M］． 北
京:中国医药科技出版社，2010:附录 31．
［4］ 李欣孺，赵峰，龙伟，等．山茱萸总皂苷的大孔吸附树脂分
离与纯化研究［J］．医药导报，2009，28(6) :767 － 770．
［5］ 龙继红．大孔吸附树脂纯化天然药物有效成分的影响因
素［J］．华西药学杂志，2007，22(2) :237 － 238．
［6］ 曾元儿，王凤云，江滨绵，等．茵陈提取液的大孔树脂静态
吸附工艺影响因素考察［J］．中成药，2007，29(2) :199 －
202．
DOI 10． 3870 /yydb． 2012． 05． 035
尼美舒利缓释片的制备与体外释放度考察
郑稳生，方夏琴，王璐璐，张宇佳，马书键
(中国医学科学院药物研究所，药物传输技术与新型制剂北京重点实验室，北京 100050)
摘 要 目的 考察制备尼美舒利骨架缓释片的最佳缓释材料、缓释材料含量和制片压力。方法 采用正交实验，
从片剂外观、释放度确定缓释片处方和工艺。结果 通过指标评价体系比较 3 种缓释材料［羟丙基甲基纤维素
(HPMC)、kollidon和卡波姆］的性能，其中 kollidon压片性能最佳，片剂外观完整光滑，指标得分均达 12 分(总 15 分) ，
HPMC缓释性能最佳。通过最佳处方和工艺制得的 3 批骨架片外观完整光滑，缓释片释放行为最接近 Higuchi释放，12 h
平均累积释放达 96． 05%。结论 该制备工艺简单可行。
关键词 尼美舒利;缓释;正交实验;体外释放
中图分类号 R971． 1;R927． 1 文献标识码 A 文章编号 1004 － 0781(2012)05 － 0650 － 03
尼美舒利(nimesulide)溶解度小，口服给药存在胃
肠道不良反应，生物半衰期较短，普通制剂服用后血药
浓度波动大等问题［1-4］。为减少用药次数，进一步降低
其胃肠道不良反应，笔者运用缓释材料制备每天给药
两次的尼美舒利骨架片，以期避免普通制剂的血药浓
度峰谷现象。笔者采用正交实验考察羟丙基甲基纤维
素(hydroxypropyl methylcellulose，HPMC)、kollidon 及
卡波姆对骨架片释放度的影响，着重研究缓释材料对
制剂释放效果的影响，并评价不同缓释材料的作用特
收稿日期 2011 － 07 － 10 修回日期 2011 － 10 － 04
作者简介 郑稳生(1966 －) ，男，安徽潜山人，副研究员，
博士，主要从事药物传输技术及新型制剂研究。电话:010 －
63165233，E-mail:zhengwensheng@ imm． ac． cn。
点，对缓释制剂处方的设计及优化具有一定参考价
值［9］。
1 仪器与试药
1． 1 仪器 RC-8D 溶出度测试仪(天津市光学仪器
厂)、HP8453 UV检测器、DP30A 单冲压片机(北京国
药龙立科技有限公司)。
1． 2 试药 尼美舒利原料(河北九天生物制品有限
公司，含量 ＞ 99． 0%，批号:091101) ，尼美舒利对照品
(中国食品药品检定研究院，批号:100555-200501) ，羧
甲基纤维素钠(武汉科技有限公司，含量:99%) ，
HPMC(日本信越公司，SH 100000) ，kollidon SR(BASF
公司) ，卡波姆 974P(北京市海淀会友精细化工厂)。
·056· Herald of Medicine Vol. 31 No. 5 May 2012