全 文 ：第 2 3 卷第 4 期
199 8 年 1 2 月 云南林业调查规划设计
V o !
.
2 3 No
.
4
D e e
、
19 9 8
云南方竹外植体组织培养成苗技术
谢庆华 谭宏超 尹
(云南师范大学生命科学系
芳
昆明
周 涛
6 5 00 92 )
摘要 采用云南方竹一年生以内的幼苗节芽 . 用 M s培养基 , 添加不同浓度的植物激素和抗 生素 , 对 方竹外 植
体组培成苗技术进行研究 。 结果表明 : 方竹 的外 植体基部节芽和 中部节芽均能培养成苗 . 成苗率 基部节芽平均 为
7 7
.
8 %
, 中部节芽平均 为 5 6 . 7 % , 生根 率荃部 节芽平均 为 6 4 % , 中部 节芽平均 为 31 % , 污 染 率平均为 17 % 和
14
.
5%
, 为方竹的工厂化育苗提供 了一条有效途径 。
关键词 云南方竹 , 外植休 , 组织培养
1 试验材料和方法
1
·
1 试验材料
云南方竹 , 一年生以内的幼苗节芽 。
1
·
2 试验方法
用 M S 作为基本培养基 , 同时添加不 同浓
度的 I A A 、 IB A 、 B A 、 N A A 、 G A 3 、 抗 生 素 、
活性炭等 , p H S . 8一 6 . 0 , 在超净工作台上将外
植体消毒后转入 培养基中 , 置 于温 度为 25 士
5℃ , 每 日光照 10 小时的培养 室进行初 代培
养 , 经过初代培养诱导出芽丛和根 系 , 使其成
苗后进行继代培养 , 在试管中大量繁殖竹苗 。
2 试验结果
2
.
1 幼苗节芽不同节段长度初代培养结果
剪一年生以内幼苗 , 将基部节芽和中部节
芽分 开 , 各设 节 段 长 度 为 l e m 、 Z e m 、 3 e m 、
4 c m
、
s c m
、
6 c m
, 共 6 个处理二次重复的外植
体不同节段长度初代培养试验 。 准备好外植体
材料以后 , 消毒前 , 将所有节段放进装有无菌
水的溶器里浸泡 2 一 3 小时 , 用 95 % 酒精 消毒
15 秒钟 , 无菌水洗一次 , 再用 0 . 1% 升汞消毒
8 分钟 , 无菌水洗 5 次各 5 一 6 分钟 。 经初代培
养 , 基部节芽和中部节芽最高成苗率为 9 1 % 和
6 5 %
、 最低为 6 6 % 和 4 5 % , 平均 生根率最高
为 5 4 % 和 2 1 . 5% 、 最低为 4 3 % 和 14 % , 污染
率最高为 2 5 . 5% 和 17 % 、 最低为 16 % 和 1 %
(详见表 l ) 。
表 1 云南方竹幼苗节芽不同节段长度初代培养结果
不 同节段长度 ( 。 : 了i )
矛才 杆 处理方法 平均成苗率 ( % ) 平均生根率 ( % ) 平均污染丰 ( % )
1 2 3 4 5 6 1 2 3 4 5 6 1 2 3 4 5
剥 去叶 片和 叶 栖 . 分 钊 剪
中月`节芽 取 相应 的 节段 长度 , 消毒 4 5 5 4 5 2 60 6 4 6 5 14 13 18 17 , 5 ] 7 2 1 . 5 1 1 14 13 16 12 . 5 17
后转 入 l 处理培养基
基部 节芽一 般 没 有叶 子 .
基州`节茅 不 作任 何 处理 , 剪取 相应 6 6 7 1 7 2 7 8 8 8 9 1 4 3 4 8 4 7 5( ) 5 3 . 5 5 4 16 2 0 2 3 2
的节段长度浦毒等同上
19 2 5
.
云南林业调查规划设计 第 2 3 卷
2
.
2 不同方式消毒处理对初代培养的影响
采用不同方式对节芽 (不 包括顶芽 ) 进行
消毒处理的初代培养及顺序观察结果表 明 , 1
处理和 3 处理 除用无菌水浸泡 2 一 3 小时 , 其
它消毒方式相同的情况下 , 其规律是通过用无
菌水浸泡处理的成苗率高 , 处理结果见表 2 。
表 2 不同方式消毒处理对初代培养的影响
处 理
编号
消 毒 酒精 次氛
前 消毒 酸钠
消毒
新洁
尔 灭
消毒
升永
消毒
消毒
后
培养
基配
万
成苗率
( % )
生才民浮李
(% )
污染率
( % )
中部基部中部墓部中那基部
节芽节芽节 茅节芽节芽节芽
用 无
菌 水
浸公包 2
一 3
, 卜时
用 9 5 % 酒
扮 消 毒 15
秒 钟 , 无
菌 水 洗 一
`尺
用 0 . 1% 溶
液 消 毒 8
分钟
用 无 菌 水
洗 5 次各 5
一 6 分钟
M S
+ B A
0
.
5
1 11 9 / m l
+ IB A
`) . s m g / 。 l
+ ( 分A 3
0
.
Z m g / m l
十 其它
5 9 8 7 3 4 4 6 13 ] 6
用
( ) ( )5 %
青 霉
2 素
浸泡
2 一 3
, 朴时
用 7 5 % 酒
精 消 毒 15
秒 钟 , 无
菌 水 洗 一
次
用 1 . 5 % 沂容
液 消 毒 I ( J
分钟
用 3 % 溶液
消 毒 l ( ) 分
手中
用 0 . 1% 溶
液 护肖 毒 8
分钟
用 无 菌 水
洗 5 次各 5
一 6 分钟
M S + B A
0
.
s m岁 m l
+ I B A
0
.
s m岁 ; , LI
+ (二A 3
0
.
Zm g / m l
+ 其它
2 5 3 3 5 8 7 9
用 (} 5 `场 酒
精 :肖毒 15
秒 钟 , 无
菌 水 :先 一
次
用 ( ) . 1 ’沦沂容
液 二肖毒 8
分钟
用 无 菌 水
洗 5 次各 5
一 6 分钟
M S + B A
(一 5。 : g / m l
+ IB A
0
.
s m g / m l
+ ( 三A 3
( )
.
Zm g / m l
+ 其 `忿
2 0 2 4 ( ) 0 1(飞 12
2
.
3 相同处理方法和节段长度 、 不同节芽部
位的初代培养结果 (消毒方法同表 2 处理编号
l )
。
剪一年生幼苗节芽 , 将基部节芽和中部节
芽与顶芽分开 , 分别剪取相同的节段 (剥去叶
片和叶柄 ) , 在相同的培养基培 养条件下观察
初代培养结果 , 表 明其分化发 育程度差异较
大 , 处理结果 见表 3 。
第 4 期 谢庆华等 : 云 南方竹外植体组 织培养成苗技术
表 3 相同处理方法和节段长度 、 不同节芽部位的初代培养结果
处 理
编号 材料 处理才法
长叶
时间
( d)
分粟
时问
( d)
成苗
率
( % )
生根
率
( % )
污染
率
( % )
士吝养基
配方 消毒过程及方法
联啊() d
剥 去 叶 片 和 叶 柄 ,
留 节段 带 芽 2 . 5 一 O
3 e m
表 4 中
5 的 l 号
配方
元 菌水泡 2 一 3 小 时 , 用 95 % 酒情 消
毒 2 0一 3 0 秒钟 , 无 菌水洗一次 , 再
用 0 . 1 % 升汞消毒 6 一 8 分钟 , 无 菌
水洗 5 次各 5 一 6 分钟
项芽
中部
节芽
剥 去 叶 片 和 叶 柄 .
留节段 带 芽 2 . 5 一 7
3
e
m
表 4 中
15 的 l 号
配方
无菌 水泡 2 一 3 小 时 , 用 95 % 酒情消
毒 20 一 3 0 秒钟 , 无菌水洗一 次 , 再
用 0 . 1 % 升汞消毒 6 一 8 分钟 , 无菌
水洗 5 次各 5一 6 分钟
塞部
节芽
剥 去 叶 片 和 叶 柄 ,
留 节段 带 芽 2 . 5 一 5
3 e m
1 1 3 9 8 1
表 4 中
5 7 17 的 l 号
配方
无菌水泡 2一 3 小时 , 用 95 % 酒精消
毒 2 0 一 3( ) 秒钟 . 元 菌水洗一次 , 再
用 0 . 1% 升 汞消毒 6 一 8 分钟 , 无 菌
水洗 5 次各 5 一 6 分钟
2
.
4 筛选幼苗节芽生长分化成苗的最适培养
基配方
经过筛选 , 在相同材料同等条件消毒方式
下 , 将外植体转 入 1 一 7 号培养基中 , 培养 1
周后开始观察其结 果为 1 、 3 、 5 号配方较理
想 , 其处理结果见表 4 。
表 4 不同植物激素对节芽生长分化结果
处理编号 少咨 养 基 设 计 成苗率
( % )
M s + B A ( )
.
5
, n
g/ m l
+ 一B A (一 s m g / : n l+ G A 3( )
.
2
, n g / m l + 其 ’之
M s + 211八 o . Z n 、g / ; , , l + B A I叫 / m l + N A八 (飞. 2 m g / m l + 其 `仑
M s + IA A o
.
s m盯 , , , l + BA o . 5呷八 , 1一+ ( ; A 3 o . 2 : 丁19 /。 ,一+ 其它
M S + 1; ZA m
g / m l + IA A Z m酬 I n l + N A A ( ) . s m g / n , 1+ 其 ’之
M s + ( ;八 , (一 2 ;眼 / : n l + 其它
M s + N A A0
.
2 m s/’ m ! 十 其 `台
M S + 其它
M S ( (
’
K )
生根率
(% )
4 9
分粱率
(% )
4 8
污染率
( % )
2 0
3 3
2 9
18
! 2
8 5
6 l
3 6
10
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户
q,、078
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,j,一l
6
ùIù气é0n乃6ū 27
5 6
4 1
15
14
3 结果
1 方竹节芽着生部位越低 , 竹芽饱满成
熟度越高 , 即基部竹芽 , 节段 的表面积越大 ,
节段截留长度越长的外植体与组织培养成功率
成正比 , 与污染率成反 比 , 其节芽的分化发育
程度也不一祥 。
2 不同方式进行消毒处理 、 对初代培养
结果有影啊 , 没有经过浸泡的 3 处理成苗率最
低 , 生根率为零 ; 1 、 2 处理虽经浸泡处理 , 但
使用的消毒药品 , 浓度及时间不同 , 成苗率及
生根率差异较大 , 相反 , 不经浸泡处理和使用
次氯酸钠等溶液消毒的污染率 (下转第 51 页 )
第 4 期 刘国龙 : 林 业建设项 目经济分析述评
3
.
2 分析数据过渡报表少
在以往的项 目经济分析中 , “ 财务现金流
量表 ” 名 目繁多 , 数据过渡报表少 , 往往会给
人一种数据来源不明 , 甚至看不懂的感觉 。
3
.
3 分析项 目不全
在经济分析时 , 一些项 目可能会被分析者
忽略 , 如退耕还林地原有效益折算 , 土地租用
资金分析 , 流动资金以及初产品的加工等等 。
3
.
4 计算期限不统一
林业生产产生的效益应该越长越好 , 经济
分析的计算期应该 以效益 期望值最大 时为最
好 。 在同种造林模型中 , 目前存在经济分析计
算期的不一致 , 例如同是杉木速生林 , 有时计
算期为 21 年 , 有时为 20 年 ; 经济林经济计算
期为 18 年 , 有时又是 2 4 年 。
3
.
5 产量预测不一致
在大多数项 目设计中 , 用材林经济分析计
算期最后一年产量预测值为主伐全部材积量 ,
而有的设计中只计算部分材积量 , 另一部分视
作森林永续利 用保 留林 木 , 只计算其 立木价
值 。
3
.
6 蓄水保肥效益的争论
森林有持水保墒的作用 , 但工程造林是否
有绝对的蓄水保肥效果 目前尚有争议 , 尤其是
树种 (如按树 ) 的不同和造林连 片规模的大小
直接关系到水肥流失状况 。 至于将蓄水保肥效
果一成不变地换算成自来水和化肥计算其经济
价值更缺乏一定的科学依据 。
4 建议
针对上述存在间题 , 鉴于林业建设项 目经
济分析直接效益和间接效益 (生态效益和社会
效益 ) 的难以预测性 , 建议经济分析评价时对
林业生产土地使用 (租金或效益折算 ) 作必要
的分析 , 同时以经济效益期望值最大时为经济
分析计算期 。 对于用材林建设项 目 , 应该结合
林业生产永续利用的实际 , 计算期末效益预测
既要有采伐出材经济效益的计算 , 又要有保留
林木生态 、 社会效益的分析 。 项 目经济分析评
估前 , 必须准确掌握各项经 济技术计算参数 ,
杜绝人为意向性调整财务内部收益率 。 在经济
分析整个过程中 , 增加一些数据过渡报表 , 删
除 “ 财务现 金流量表 ” 中与过 渡表重复 的名
目 , 使经济分析表现形式规范化 。
(上接第 63 页 ) 相对偏高 。
3 在相同处理方法和节段长度下 , 截 留
部位不同的初代培养有较大差异 、 其规律是基
部节芽的成苗率明显高于中部节芽 , 污染率相
对偏高 。
4 试验 中 1 、 3 、 5 处理均 未加 N A A 和
BI A
, 其初代培养的成苗率等分化发育程度明
显高于加 N A A 的 处理 ; 5 、 6 处理 只加 G A 3
或 N A A , 其表 现加 G A 3 的培 养基较加 N A A
的成苗率高 , 这其中的原因还有待于进一步研
究 。
4 继代培养研究
经初代培养诱导出芽丛或生根的幼苗 , 将
芽丛 由芽基部切剪下来 , 或将 已生根的健壮幼
苗留下基部一节段后切剪下来 , 转接到继代培
养基中进行继代培养 , 这种以芽繁芽 , 以节繁
苗 , 周而复始的过程 , 在试管里能产生出大量
的竹苗 。 实践证 明 , 继代培 养基应适当加 大
IB A 和 B A 的含量 、 肌醇等营养物质也要在初
代培养的基础上扩大 2 倍 。 I A A 在继代过程中
与 N A A 产替使用 , 从而达到 芽丛和生根壮苗
不过早衰退或褐化表象的出现 。 由于时间和试
验研究水平有限 , 继代培养研究没有设重复 ,
其结果只能作参考 , 还有待作进一步完善和补
充试验 。