全 文 ：＊通讯作者
收稿日期：２０１３－１１－２１；修回日期：２０１４－０３－２１
基金项目：农业部牧草种质资源保护项目“牧草温带备份库的维
护与备份繁殖入库（２０１１－１０）”；科技部“国家多年生牧草种质资源
平台项目”
作者简介：张雪（１９８６－ ），女，吉林公主岭人，在读硕士研究生，主要
从事牧草资源与育种研究，Ｅ－ｍａｉｌ：ｚｈａｎｇｘｕｅ１９８６２１２＠１６３．ｃｏｍ．
文章编号：１６７３－５０２１（２０１４）０３－０１０４－０４
２５份无芒雀麦种质资源遗传多样性的ＩＳＳＲ分析
张　雪１，２，刘青松１，２，师文贵１，＊，李志勇１，刘　磊１，２
（１．中国农业科学院草原研究所，内蒙古　呼和浩特　０１００１０；
２．中国农业科学院研究生院，北京　１０００８１）
摘要：以提取的无芒雀麦基因组ＤＮＡ为模板，通过试验筛选出了ＩＳＳＲ－ＰＣＲ反应体系中最适宜的各组分浓
度，并用ＰＯＰＧＥＮＥ软件对数据进行分析。结果表明，供试２５份无芒雀麦材料总的Ｎｅｉ＇ｓ基因多样性指数为０．２４３４，
Ｓｈａｎｎｏｎ信息指数为０．３７２１；聚类分析研究将供试２５份材料分为五大类，第一类为编号１、４、１１、１４、１５、１８、１９、２１、
２３和１５号材料，第二类为编号２、５、８、９、１０、２２和２４号材料，第三类为编号３、６和１７号材料，第四类为２０号材料，
第五类为７、１２和１６号材料。
关键词：无芒雀麦；种质资源；遗传多样性；ＩＳＳＲ
中图分类号：Ｓ５４３　　　文献标识码：Ａ
　　 无芒雀麦（Ｂｒｏｍｕｓ　ｉｎｅｒｍｉｓ　Ｌｅｙｓｓ）是一种优
良牧草，原产于欧洲，其野生类型广布于亚洲和北
美洲的温带地区［１］。无芒雀麦耐寒性强，在生态建
设、植被恢复等方面具有重要作用［２～３］，有关其生理
生化、种群数量结构、生物量结构以及栽培技术等方
面的研究报道［４～６］较多，而在遗传多样性方面国内
主要对雀麦属牧草进行了研究［７～８］，对无芒雀麦遗
传多样性的研究报道仅见宋旭红等［９～１０］。为此，本
试验在前人研究的基础上对材料进行扩充，应用
ＩＳＳＲ分子标记技术进行遗传多样性分析，以便进一
步发掘利用无芒雀麦优良品质资源。
１　材料与方法
１．１　供试材料
供试２５份无芒雀麦材料及其来源见表１。在
中国农业科学院草原研究所实验室应用恒温培养箱
培养得到２５份材料的幼嫩植株，每份材料采集１０
个植株的鲜嫩叶片备用。
１．２　试验方法
提取植物基因组总ＤＮＡ用ＣＴＡＢ法。得到的
总ＤＮＡ先经ＲＮａｓｅ处理，在２６０ｎｍ和２８０ｎｍ处检
测所提取基因组 ＤＮＡ 的 ＯＤ 值，根据 ＯＤ２６０／
ＯＤ２８０的值来判断其纯度，然后再用８．５ｇ／Ｌ的琼
脂糖凝胶进行电泳，在紫外检测仪上观察并判断
ＤＮＡ分子的大小及一致性。
１．３　引物筛选与ＰＣＲ扩增
引物委托上海生工生物工程技术服务有限公司
负责合成，引物序列参照加拿大哥伦比亚大学所设
计的ＩＳＳＲ引物序列。用混有随机抽取的４份材料
的ＤＮＡ样品的２０μｌ的反应体系对引物进行扩增筛
选。从４５个引物中选出１０条比较好的引物用于全
部样品的分析。优化后的ＰＣＲ扩增体系总体积为
２０μｌ：包括 ２．５Ｕ／μｌ　Ｔａｑ　ＤＮＡ 聚合酶 ０．５μｌ、
１０ＸＰＣＲ－ｂｕｆｆｅｒ　２μｌ、１０ｍｍｏｌ／Ｌ 的ｄＮＴＰ　０．４μｌ、
１０ｍｍｏｌ／Ｌ的Ｍｇ２＋１．２μｌ、２５ｍｍｏｌ／Ｌ的引物０．４μｌ、模
板ＤＮＡ　２．５μｌ，最后用无菌双蒸水补充体系到
２０μｌ。ＰＣＲ反应程序为９４℃ 预变型４ｍｉｎ，９４℃变
形４０ｓ，５２～６２℃退火４５ｓ，７２℃延伸１ｍｉｎ５０ｓ，７２℃
延伸１０ｍｉｎ，４℃条件保存。
１．４　ＰＣＲ产物检测
电泳在１０ｇ／Ｌ琼脂糖凝胶上进行并加入核酸
染料。用凝胶成像系统对电泳后的胶拍照。根据
ＤＬ２０００Ｍａｒｋｅｒ对条带大小进行估计。
１．５　数据处理
电泳图谱中ＤＮＡ条带有时记为１，无带时记为
０。利用ＮＴｓｙｓ２．１ｅ软件进行如下分析：用ＳＡＨＮ
程序中的 ＵＰＧＭＡ 方法进行聚类分析，用 ＰＯＰ－
ＧＥＮＥ３２软件分析全部材料的遗传参数。
２　结果与分析
２．１　无芒雀麦基因组ＤＮＡ的检测
—４０１—
第３６卷　第３期
Ｖｏｌ．３６　Ｎｏ．３
　　　　　　　　　
中　国　草　地　学　报
Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｇｒａｓｓｌａｎｄ
　　　　　　　　　
２０１４年５月
Ｍａｙ　２０１４
表１　供试材料及来源
Ｔａｂｌｅ　１　Ｎａｍｅｓ　ａｎｄ　ｓｏｕｒｃｅ
ｏｆ　Ｂｒｏｍｕｓ　ｉｎｅｒｍｉｓ　ａｎａｌｙｚｅｄ　ｉｎ　ｔｈｉｓ　ｓｔｕｄｙ
代号
Ｎｏ．
种质名称
Ｇｅｒｍｐｌａｓｍ　ｎａｍｅ
拉丁名
Ｌａｔｉｎ　ｎａｍｅ
来源
Ｓｏｕｒｃｅ
１ 杂交雀麦 Ｂｒｏｍｕｓ　ｂｉｅｂｅｒｓｔｅｉｎｎｉ×
Ｂ．ｉｎｅｒｍｉｓ
加拿大
２ 无芒雀麦 Ｂ．ｉｎｅｒｍｉｓ　Ｌｅｙｓｓ 甘肃
３ 无芒雀麦 Ｂ．ｉｎｅｒｍｉｓ　Ｌｅｙｓｓ 新疆
４ 无芒雀麦 Ｂ．ｉｎｅｒｍｉｓ　Ｌｅｙｓｓ 加拿大
５ 无芒雀麦 Ｂ．ｉｎｅｒｍｉｓ　Ｌｅｙｓｓ 额左旗
６ 无芒雀麦 Ｂ．ｉｎｅｒｍｉｓ　Ｌｅｙｓｓ 黄土高原
７ 无芒雀麦 Ｂ．ｉｎｅｒｍｉｓ　Ｌｅｙｓｓ 美国
８ 无芒雀麦 Ｂ．ｉｎｅｒｍｉｓ　Ｌｅｙｓｓ 山西
９ 杂交雀麦 Ｂｒｏｍｕｓ　ｂｉｅｂｅｒｓｔｅｉｎｎｉ×
Ｂ．ｉｎｅｒｍｉｓ
加拿大
１０ 无芒雀麦 Ｂ．ｉｎｅｒｍｉｓ　Ｌｅｙｓｓ 加拿大
１１ 无芒雀麦 Ｂ．ｉｎｅｒｍｉｓ　Ｌｅｙｓｓ 加拿大
１２ 无芒雀麦 Ｂ．ｉｎｅｒｍｉｓ　Ｌｅｙｓｓ 美国
１３ 杂交雀麦 Ｂｒｏｍｕｓ　ｂｉｅｂｅｒｓｔｅｉｎｎｉ×
Ｂ．ｉｎｅｒｍｉｓ
加拿大
１４ 无芒雀麦 Ｂ．ｉｎｅｒｍｉｓ　Ｌｅｙｓｓ 加拿大
１５ 无芒雀麦 Ｂ．ｉｎｅｒｍｉｓ　Ｌｅｙｓｓ 锡盟
１６ 无芒雀麦 Ｂ．ｉｎｅｒｍｉｓ　Ｌｅｙｓｓ 美国
１７ 无芒雀麦 Ｂ．ｉｎｅｒｍｉｓ　Ｌｅｙｓｓ 新疆谢家沟
１８ 无芒雀麦 Ｂ．ｉｎｅｒｍｉｓ　Ｌｅｙｓｓ 锡盟
１９ 无芒雀麦 Ｂ．ｉｎｅｒｍｉｓ　Ｌｅｙｓｓ 加拿大
２０ 无芒雀麦 Ｂ．ｉｎｅｒｍｉｓ　Ｌｅｙｓｓ 河北
２１ 无芒雀麦 Ｂ．ｉｎｅｒｍｉｓ　Ｌｅｙｓｓ 呼盟
２２ 无芒雀麦 Ｂ．ｉｎｅｒｍｉｓ　Ｌｅｙｓｓ 海拉尔
２３ 无芒雀麦 Ｂ．ｉｎｅｒｍｉｓ　Ｌｅｙｓｓ 锡盟多伦县
２４ 无芒雀麦 Ｂ．ｉｎｅｒｍｉｓ　Ｌｅｙｓｓ 陕西陇县
２５ 无芒雀麦 Ｂ．ｉｎｅｒｍｉｓ　Ｌｅｙｓｓ 山西繁峙县
　　提取高质量的无芒雀麦基因组ＤＮＡ是ＩＳＳＲ
扩增反应成功与否的关键。本试验用康为世纪试剂
盒提取得到的 ＤＮＡ，用琼脂糖凝胶电泳检测的
ＤＮＡ为一条清晰完整的条带，无明显拖尾，无ＲＮＡ
条带（图１），表明提取的ＤＮＡ大小比较一致，纯度
较高，可用于后续反应。
２．２　ＩＳＳＲ引物筛选及无芒雀麦遗传多态性
从４５条ＩＳＳＲ引物中筛选出１０条能扩增出稳
定性和重复性较好结果的引物（表２），１０条引物共
检测出ＤＮＡ条带７９条，其中６６条为多态条带，多
态性比例为８３．６％，每条引物产生的条带数在４～９
之间，条带大小从５００ｂｐ到２０００ｂｐ均有分布，２５份
无芒雀麦材料总的 Ｎｅｉ＇ｓ基因多样性指数（ｈ＊）为
０．２４３４，Ｓｈａｎｎｏｎ信息指数（Ｉ＊）为０．３７２１，总的遗
传多样性较高。上述数据表明，无芒雀麦具有丰富
的遗传多样性。其中引物８３４和引物８４５对不同无
芒雀麦品种（系）的扩增结果如图２和图３。从电泳
图中可以看出，２５份无芒雀麦材料扩增条带清晰，
多态性较好，显示出较高的遗传多样性。
表２　无芒雀麦ＩＳＳＲ扩增反应的引物序列、
扩增条带数、多态性条带数
Ｔａｂｌｅ　２　ＩＳＳＲ　ｐｒｉｍｅｒ　ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ　ｕｓｅｄ　ｆｏｒ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　Ｂｒｏｍｕｓ
ｉｎｅｒｍｉｓ，ｗｉｔｈ　ｎｕｍｂｅｒ　ｏｆ　ａｍｐｌｉｆｉｅｄ　ｂａｎｄｓ，ａｎｄ　ｎｕｍｂｅｒ　ｏｆ
ａｍｐｌｉｆｉｅｄ　ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ　ｂａｎｄｓ
引物
Ｐｒｉｍｅｒ
引物序列
（５＇－３＇）
Ｐｒｉｍｅｒ　ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ
（５＇－３＇）
扩增条带数
Ｎａｍｅ　ｏｆ
ａｍｐｌｉｆｉｅｄ
ｂａｎｄｓ
多态性条带数
Ｎｕｍｂｅｒ　ｏｆ
ａｍｐｌｉｆｉｅｄ
ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ
ｂａｎｄｓ
多态性条
带比例
（％）
Ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ　ｏｆ
ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ　ｂａｎｄｓ
ＵＢＣ８０７ ＡＧＡ　ＧＡＧ　ＡＧＡ　ＧＡＧ　ＡＧＡ　ＧＴ　 ８　 ６　 ７５．０
ＵＢＣ８１０ ＧＡＧ　ＡＧＡ　ＧＡＧ　ＡＧＡ　ＧＡＧ　ＡＴ　 ５　 ４　 ８０．０
ＵＢＣ８１１ ＧＡＧＡＧＡＧＡＧＡＧＡＧＡＧＡＣ　 ７　 ５　 ７１．４
ＵＢＣ８１７ ＣＡＣ　ＡＣＡ　ＣＡＣ　ＡＣＡ　ＣＡＣ　ＡＡ　 ５　 ５　 １００．０
ＵＢＣ８２３ ＴＣＴ　ＣＴＣ　ＴＣＴ　ＣＴＣ　ＴＣＴ　ＣＣ　 ８　 ６　 ７５．０
ＵＢＣ８２６ ＡＣＡ　ＣＡＣ　ＡＣＡ　ＣＡＣ　ＡＣＡ　ＣＣ　 ８　 ８　 １００．０
ＵＢＣ８３１ ＡＴＡ　ＴＡＴＡＴＡ　ＴＡＴ　ＡＴＡＴＹＡ　 ７　 ４　 ５７．１
ＵＢＣ８３４ ＡＧＡ　ＧＡＧ　ＡＧＡ　ＧＡＧ　ＡＧＡ　ＧＹＴ　 ９　 ９　 １００．０
ＵＢＣ８３５ ＡＧＡ　ＧＡＧ　ＡＧＡ　ＧＡＧ　ＡＧＡ　ＧＣＴＣ　 ７　 ５　 ７１．４
ＵＢＣ８４５ ＣＴＣＴＣＴＣＴＣＴＣＴＣＴＣＴＲＣ　 ６　 ５　 ８３．３
ＵＢＣ８５６ ＡＣＡ　ＣＡＣ　ＡＣＡ　ＣＡＣ　ＡＣＡ　ＣＣＴＡ　 ９　 ９　 １００．０
ｔｏｔａｌ　 ７９　 ６６　 ８３．６
Ｍ为ＤＬ２０００Ｍａｒｋｅｒ；电泳图谱上的编号即为表１中无芒雀麦代号，下图同
Ｍ　ｉｓ　ｔｈｅ　ＤＬ２０００Ｍａｒｋｅｒ；Ｔｈｅ　ｎｕｍｂｅｒｓ　ｉｎ　ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔ　ａｒｅ　ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ　ｔｏ　ｔｈｅ　ｎｕｍｂｅｒｓ　ｏｆ　Ｂｒｏｍｕｓ　ｉｎｅｒｍｉｓ　ｉｎ　Ｔａｂｌｅ１，ｔｈｅ　ｓａｍｅ　ａｓ　ｂｅｌｏｗ
图１　无芒雀麦基因组ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳检测
Ｆｉｇ．１　Ａｇａｒｏｓｅ　ｇｅｌ　ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ　ｏｆ　Ｂｒｏｍｕｓ　ｉｎｅｒｍｉｓ　ｇｅｎｏｍｉｃ　ＤＮＡ
—５０１—
张　雪　刘青松　师文贵　李志勇　刘　磊　　２５份无芒雀麦种质资源遗传多样性的ＩＳＳＲ分析
图２　引物８３４对２５份无芒雀麦的ＩＳＳＲ扩增图谱
Ｆｉｇ．２　ＩＳＳＲ　ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔ　ｗｉｔｈ　ａ　ｐａｒｔ　ｏｆ　Ｂｒｏｍｕｓ　ｉｎｅｒｍｉｓ　ａｍｐｌｉｆｉｅｄ　ｗｉｔｈ　ｐｒｉｍｅｒ　８３４
图３　引物８４５对２５份无芒雀麦的ＩＳＳＲ扩增图谱
Ｆｉｇ．３　ＩＳＳＲ　ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔ　ｗｉｔｈ　ａ　ｐａｒｔ　ｏｆ　Ｂｒｏｍｕｓ　ｉｎｅｒｍｉｓ　ａｍｐｌｉｆｉｅｄ　ｗｉｔｈ　ｐｒｉｍｅｒ　８４５
２．３　供试２５份种质材料聚类分析
聚类分析结果（图４）表明，供试２５份无芒雀
麦种质材料的遗传相似系数为０．４３～１．００，其中
来自山西的８号材料和来自陕西陇县的２４号材
料、来自美国的７号材料和１６号材料相关系数最
大（接近１），说明这两对材料每对的２个材料遗传
差异最小，亲缘关系最近。此外，来自加拿大的１
号材料和４号材料、来自新疆的３号材料和来自
黄土高原的６号材料之间亲缘关系也较近，相关
系数均高于０．９。在相似系数０．７４处，可将供试
２５份种质材料分为五大类：第一类包括１号、４
号、１１号、１４号、１５号、１８号、１９号、２１号、２３号
图４　依据ＤＩＣＥ相似性系数的２５份无芒雀麦材料ＵＰＧＭＡ聚类分析亲缘关系树状图
Ｆｉｇ．４　Ｄｅｎｄｒｏｇｒａｍ（ＵＰＧＭＡ　ｍｅｔｈｏｄ）ｏｆ　２５　Ｂｒｏｍｕｓ　ｉｎｅｒｍｉｓ　ｂａｓｅｄ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ　ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ　ｏｆ　Ｊａｃｃａｒｄ
—６０１—
中国草地学报　２０１４年　第３６卷　第３期
和２５号共１０份材料，其中１、４、１１、１４和１９号材料
起源地均为加拿大，１５和１８号材料起源地为锡盟，
２１号材料起源地为呼盟，２３号材料起源地为锡盟多
伦县，２５号材料来源于山西繁峙县；第二类包括２
号、５号、８号、９号、１０号、２２号和２４号共８份种材
料，其中９、１０、１３号材料来源于加拿大，２号材料来
源由于甘肃，５号材料来源于额左旗，８号材料来源
于山西，２２号来源于海拉尔，２４号材料来源于陕西
陇县；第三类包括３号、６号和１７号共３份材料，其
中３号和１７号材料来源于新疆，６号材料来自于黄
土高原；第四类仅有来自河北的２０号材料；第五类
包括７号、１２号和１６号材料，均来源于美国。
３　讨论
分子标记从 ＤＮＡ水平上揭示品种间的差异
性和相关性。目前，关于ＩＳＳＲ技术应用于无芒雀
麦遗传多样性分析方面的研究不多。宋旭红等［９］
通过比较６９份无芒雀麦种质资源的遗传多样性，
通过 ＵＰＧＭＡ聚类分析，将６９份无芒雀麦种质材
料划分成了５个类群，他还通过ＩＳＳＲ分子标记［１０］
技术分析发现，不同的无芒雀麦种质材料之间遗
传多样性丰富。本试验采用ＩＳＳＲ分子标记方法
对２５份无芒雀麦进行分析所得的结果与上述研
究基本一致，将供试２５份无芒雀麦材料分成五大
类，其聚类结果与２５份无芒雀麦种质材料的地域
来源基本相吻合；而将来自加拿大的５份材料和
来自中国内蒙古的４份材料及来自山西的１份材
料聚为一类，可能是无芒雀麦在引种过程中发生
了质变，也可能是由于ＩＳＳＲ分子标记的局限性
以及实验误差等原因所致。雀麦属植物分布广
泛，在长期的历史演化过程中，由于突变、基因交
流、遗传分化、品种选育等自然和人工选择等，使
得各品种（系）和地理种群间产生了较大的遗传
分化。
４　结论
４．１　供试２５份无芒雀麦的多态性条带介于５７．１％～
１００％，总的多态性条带为８３．６％。
４．２　供试２５份无芒雀麦总的Ｎｅｉ’ｓ基因多样性指
数为０．２４３４，Ｓｈａｎｎｏｎ信息指数为０．３７２１，总的遗
传多样性较高。
４．３　聚类分析将供试２５份无芒雀麦种质材料分成
五大类群，呈现出来自同一国家的不同材料之间差
异较小、亲缘关系较近，而来自不同国家的材料则表
现出明显的遗传多样性规律。
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ａｃｃｅｓｓｉｏｎｓ［Ｄ］．Ｈｏｈｈｏｔ：Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｉｎｎｅｒ
Ｍｏｎｇｏｌｉａ，２０１１．
（下转第１２０页）
—７０１—
张　雪　刘青松　师文贵　李志勇　刘　磊　　２５份无芒雀麦种质资源遗传多样性的ＩＳＳＲ分析
Ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　Ｆｌａｖｏｎｏｉｄ　Ｃｏｎｔｅｎｔ　ｉｎ　Ｌｅａｖｅｓ　ａｎｄ　Ｓｔｅｍｓ
ｏｆ　Ｎｉｔｒａｒｉａ　ｔａｎｇｕｔｏｒｕｍ
ＧＡＯ　Ｚｈｅ，ＷＡＮＧ　Ｊｉａ，ＴＥ　Ｂｕ－ｑｉｎ，ＷＡＮＧ　Ｙｉｎｇ－ｃｈｕｎ
（Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｉｎｎｅｒ　Ｍｏｎｇｏｌｉａ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈｏｈｈｏｔ　０１００２１，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｕｓｉｎｇ　ｈｉｇｈ　ｌｉｑｕｉｄ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ－ｔａｎｄｅｍ　ｍａｓｓ　ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ　ｔｈｅ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｍｅｔｈａｎｏｌ
ｅｘｔｒａｃｔ　ｉｎ　ｌｅａｖｅ　ａｎｄ　ｓｔｅｍｓ　ｏｆ　Ｎｉｔｒａｒｉａ　ｔａｎｇｕｔｏｒｕｍ　ｗｅｒｅ　ｑｕａｌｉｔａｔｉｖｅｌｙ　ａｎａｌｙｚｅｄ．Ａ　ｔｏｔａｌ　ｏｆ　１２ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ
ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ　ｗｅｒｅ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ，ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ　ｔｈｒｅｅ　ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ　ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ，ｔｗｏ　ｋａｅｍｐｆｅｒｉｄｅ　ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ，ａｎｄ　ｓｅｖｅｎ
ｉｓｏｒｈａｍｎｅｔｉｎ　ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ．Ｆｏｒ　ｓｅｍｉ－ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ，ｔｈｅ　ｔｏｔａｌ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｉｎ
ｓｔｅｍｓ　ｗａｓ　ｕｐ　ｔｏ　１４．４４ｍｇ／ｇ，ｉｎ　ｌｅａｖｅｓ　ｗａｓ　ｕｐ　ｔｏ　４２．４３ｍｇ／ｇ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｎｉｔｒａｒｉａ　ｔａｎｇｕｔｏｒｕｍ；Ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ；Ｃｏｎｔｅｎｔ　ａｎａｌｙ
檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼
ｓｉｓ
　　（上接第１０７页）
Ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　Ｇｅｎｅｔｉｃ　Ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　２５　Ｂｒｏｍｕｓ　ｉｎｅｒｍｉｓ
Ａｃｃｅｓｓｉｏｎｓ　Ｂａｓｅｄ　ｏｎ　ＩＳＳＲ
ＺＨＡＮＧ　Ｘｕｅ１，２，ＬＩＵ　Ｑｉｎｇ－ｓｏｎｇ１，２，ＳＨＩ　Ｗｅｎ－ｇｕｉ　１，ＬＩ　Ｚｈｉ－ｙｏｎｇ１，ＬＩＵ　Ｌｅｉ　１，２
（１．Ｇｒａｓｓｌａｎｄ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　ＣＡＡＳ，Ｈｏｈｈｏｔ　０１００１０，Ｃｈｉｎａ；
２．Ｇｒａｄｕａｔｅ　Ｓｃｈｏｏｌ，ＣＡＡＳ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０００８１，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｅｍｐｌａｔｅ　ＤＮＡ　ｆｏｒ　ＩＳＳＲ　ｗａｓ　ｅｘｔｒａｃｔｅｄ　ｆｒｏｍＢｒｏｍｕｓ　ｉｎｅｒｍｉｓ　ｌｅａｆ　ｔｉｓｓｕｅ，ＩＳＳＲ　ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ
ｓｙｓｔｅｍ　ｗａｓ　ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ，ａｎ　ｏｐｔｉｍａｌ　ｒｅａｃｔｉｏｎ　ｓｙｓｔｅｍ　ｗａｓ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ，ｄａｔａ　ｗｅｒｅ　ａｎａｌｙｚｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｓｏｆｔｗａｒｅ
ＰＯＰＧＥＮＥ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｔｏｔａｌ　Ｎｅｉ＇ｓ　ｇｅｎｅ　ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｉｎｄｅｘ　ｏｆ　５　Ｂｒｏｍｕｓ　ｉｎｅｒｍｉｓ　Ｌｅｙｓｓ　ａｃｃｅｓ－
ｓｉｏｎｓ　ｗａｓ　０．２４３４ａｎｄ　Ｓｈａｎｎｏｎｓ　Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ　Ｉｎｄｅｘ　ｗａｓ　０．３７２１；２５ｍａｔｅｒｉａｌｓ　ｗｅｒｅ　ｄｉｖｉｄｅｄ　ｉｎｔｏ　ｆｏｕｒ　ｇｒｏｕｐｓ，
ｇｒｏｕｐ　ｏｎｅ　ｗａｓ　ｃｏｎｓｉｓｔ　ｏｆ　ｔｅｎ　Ｂｒｏｍｕｓ　ｉｎｅｒｍｉｓ　ｍａｔｅｒｉａｌｓ：Ｎｏ．１，Ｎｏ．４，Ｎｏ．１１，Ｎｏ．１４，Ｎｏ．１５，Ｎｏ．１８，Ｎｏ．１９，
Ｎｏ．２１，Ｎｏ．２３ａｎｄ　Ｎｏ．２５，ｇｒｏｕｐ　ｔｗｏ　ｗａｓ　ｃｏｍｐｏｓｅｄ　ｏｆ　ｅｉｇｈｔ　ｍａｔｅｒｉａｌｓ：Ｎｏ．２，Ｎｏ．５，Ｎｏ．８，Ｎｏ．９，Ｎｏ．１０，
Ｎｏ．２２ａｎｄ　Ｎｏ．２４，ｇｒｏｕｐ　ｔｈｒｅｅ　ｉｎｃｌｕｄｅｓ　ｔｈｒｅｅ　Ｂｒｏｍｕｓ　ｉｎｅｒｍｉｓ　ｍａｔｅｒｉａｌｓ：Ｎｏ．３，Ｎｏ．６ａｎｄ　Ｎｏ．７，ｇｒｏｕｐ　ｆｏｕｒ
ｉｎｃｌｕｄｅｄ　ｏｎｌｙ　ｏｎｅ　Ｂｒｏｍｕｓ　ｉｎｅｒｍｉｓ　ｍａｔｅｒｉａｌｓ：Ｎｏ．２０，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｌａｓｔ　ｇｒｏｕｐ　ｈａｄ　ｔｈｒｅｅ　ｍａｔｅｒｉａｌｓ：Ｎｏ．７，Ｎｏ．１２，
ａｎｄ　Ｎｏ．１６．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｂｒｏｍｕｓ　ｉｎｅｒｍｉｓ；Ｇｅｒｍｐｌａｓｍ　ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ；Ｇｅｎｅｔｉｃ　ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ；ＩＳＳＲ
—０２１—
中国草地学报　２０１４年　第３６卷　第３期