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图5 林地乌头赤道面观与极面观
Fig.5Polar and equatorial view of Aconitum nemorumPopov.
图6 拟黄花乌头赤道面观与极面观
Fig.6Polar and equatorial view of Aconitum anthoroideumD.C.
图7 川乌赤道面观与极面观
Fig.7Polar and equatorial view of Aconitum carmichaeli Debx.
3 讨论
本文报道的乌头属植物花粉粒形态上与川乌有
一定差异。川乌极面观为三角圆形且一端有带帽,极
面观可作为地产乌头与川乌的鉴别依据,但6种地产
乌头属植物之间仅有微小的差异变化。花粉粒均属
于中等大小范围,其中最大的是空茎乌头28.56
(27.28~29.84)×15.14(14.86~15.62),川乌21.27
(19.94~23.48)×11.69(9.74~13.64),与地产乌头
相比体积显著偏小。极面观除空茎乌头是三角形外,
其他都是三角圆形;赤道面观除了拟黄花乌头是椭圆
形,其他均为细椭圆形。6种乌头属植物花粉粒表面
均有点状突起,萌发孔除了白喉乌头和空茎乌头为赤
道分布外,其余均呈球面分布,且都具有三沟。6种
乌头属植物花粉粒之间没有明显的规律变化,因此,
乌头属植物间的分类及鉴别不能仅以花粉形态特征
为依据。
结果表明,虽然不同地区的花粉粒之间存在一定
的差异,但是造成这种差异的因素也有很多,例如气
候因素、土壤因素和遗传因素等。因此,综合多方面
的研究结果和信息,对药材进行综合鉴别,才能更全
面、更准确地对植物进行分类。
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(收稿日期:2013-04-17)
羊红膻的显微及薄层鉴别研究
石会丽,杨智锋,李富贤,米彩峰,冯一凡(陕西省中医药研究院,西安710003)
摘要:目的 建立羊红膻(Pimpinella thellungiana Wolff.)显微及薄层鉴别方法。方法 采用光学显微镜观察其组织与药材粉
末显微特征;薄层色谱方法对有效成分进行鉴定。结果 组织与粉末鉴定中可见纤维、导管、分泌物块、薄壁细胞、石细胞、厚角
细胞、油管、非腺毛、淀粉粒;β-谷甾醇、黄酮苷薄层色谱特征明显。结论 该显微与薄层鉴定方法操作简便,快捷,重复性好,可
作为羊红膻药材鉴别及质量控制的有效方法。
关键词:羊红膻;显微鉴定;薄层鉴定
doi:10.3969/j.issn.1004-2407.2013.05.006
中图分类号:R282.5 文献标志码:A 文章编号:1004-2407(2013)05-0453-04
Study on the microscopic and TLC identification of Pimpinela thelungiana Wolff.
SHI Huili,YANG Zhifeng,LI Fuxian,MI Caifeng,FENG Yifan(Shaanxi Provincial Academy of Traditional Chinese Medicine,
Xi′an 710003,China)
基金项目:陕西省中医管理局基金项目(编号:2005-91)
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Abstract:Objective To establish microscopic and thin layer chromatography(TLC)identification methods for Pimpinella thel-
lungiana Wolff..Methods Optical microscope was used to observe the plant organization structure and microscopic characteristics
of the powder.TLC was applied to identify the effective components qualitatively.Results Fibers,catheter,secretion piece,pa-
renchyma cels,stone cels,thick horn cels,oil pipe,the glandular hairy,and starch grains could be used as characteristic index
in morphology;β-sitosterol and flavonoids nucleoside could be used as index on TLC.Conclusion The microscopic and TLC iden-
tification methods were simple,quick,and wel repeatable,and could be used as effective methods for the identification and quali-
ty control of Pimpinella thellungiana Wolf..
Key words:Pimpinella thellungiana Wolff.;The microscopic identification;TLC identification
羊红膻原植物为伞形科茴芹属植物缺刻叶茴芹
(Pimpinella thellungiana Wolff.),药用全草。为陕
西省一民间草药[1]。其化学成分研究较多,经鉴定的
有30多种[2];对其根中所含挥发油,通过气相色谱法
进行了成分分析[3];用紫外分光光度法对其全草所含
的总黄酮苷进行了含量测定方法研究[4];药理实验证
明,其中黄酮苷类成分具有强心作用[5]。2010年版
《中国药典》一部已收载的正心降脂片中含有羊红膻,
且为君药[6]。陕西省中医药研究院临床长期用于心、
脑、血管、脂肪代谢等方面疾病的防治,疗效确切。为
确保临床用药安全,依据2010年版《中国药典》附录
显微及薄层鉴别的基本方法[6],对羊红膻进行了植物
组织及其粉末的显微鉴定,并对其中所含有效成分进
行了薄层鉴定研究。
1 仪器与试药
1.1 仪器 LEICA DM750显微镜(德国生物显微
系统制造公司);KQ-100超声波发生器(昆山市超声
仪器有限公司);电热恒温水浴锅;UV-265型三用紫
外仪;分析天平(BS210S型,北京赛多利斯公司)。
1.2 试药 石油醚、正己烷、氯仿、甲醇、乙酸乙酯、
丙酮、硫酸、三氯化铝、甘油、水合氯醛均为分析纯;硅
胶G(青岛海洋化工厂);羊红膻对照药材及实验用药
材分为地上与地下2个部位,采至陕西黄龙县北,经
杨智锋研究员鉴定为伞形科茴芹属植物缺刻叶茴芹
(Pimpinella thellungiana Wolff.)。 采 集 号 为
20080718,20080720,20080722;对照品(羊红膻黄酮
苷B和D,β-谷甾醇),均由作者于羊红膻植物中分离
纯化所得,并经四大光谱鉴定确认[7]。
2 方法与结果
2.1 组织显微鉴别 横切面制作方法 取新鲜样
品,用FAA液(乙醇\甲醛\乙酸混合液)固定,切片
时取出,徒手切片,切叶片时用支持物夹住,徒手切
片。切好片子后,挑选薄厚均匀合适者装片、透化,封
永久性装片。置于镜下观察。
根横切面(直径5.5mm) 木栓层3~8层;皮
层宽广,有圆形油管,其他薄壁细胞中充满淀粉粒;韧
皮部细胞形态不清,较窄;木质部,导管多圆形,射线
细胞中充满淀粉粒。见图1。
图1 羊红膻根横切面组织结构显微特征
Fig.1The plant organization structure characteristics of the root
transection of Pimpinella thellungiana Wolff.
茎横切面 表皮细胞1层,(长)方形,周向壁加
厚;非腺毛,单细胞,表面有突起。皮层棱角处有支持
纤维束,皮层有油管,含叶绿素之皮层细胞呈长方形
存在。韧皮部在棱角处较宽。木质部导管呈圆形、三
角形和圆多角形,多被纤维束包围。髓部细胞呈圆多角
形,大小不一,有的具点状纹孔,有黄色分泌物。见图2。
图2 羊红膻茎横切面组织结构显微特征
Fig.2The plant organization structure characteristics of the
stem transection of Pimpinella thellungiana Wolff.
茎纵切面 可见支持纤维、螺纹导管、具缘纹孔
导管。见图3。
叶横切面 表皮细胞1列,外被角质层,具非腺
毛。中脉在叶背面呈脊状隆起,在腹面呈棱状隆起,
多位厚角细胞(支持纤维);二元维管束,外韧型;皮层
细胞正多角形,油管1~2个。叶肉,在腹面有栅栏细
胞2层,长轴垂直于叶面,在背面有海绵组织,均含叶
绿素。见图4。
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图3 羊红膻茎纵切面组织结构显微特征
Fig.3The plant organization structure characteristics of the
stem longitudinal section of Pimpinella thellungiana
Wolff.
叶表皮 非腺毛,1~6个细胞;气孔椭圆形,直
径22~30μm;叶脉表皮细胞,多为长多角形细胞,壁
加厚成串珠状,外周璧上有纵条状角质纹。见图4。
图4 羊红膻叶的组织结构显微特征
Fig.4The plant organization structure characteristics of the leaf
of Pimpinella thellungiana Wolff.
2.2 羊红膻粉末显微鉴定 粉末制作方法 取羊红
膻全草,在70℃以下烘干,完全粉碎,过5号筛,粉末
置于载玻片上透化即可,淀粉粒鉴定时稀甘油装片,
显微镜下观察结果。
粉末米黄色,具羊膻气。纤维成束或散在,无色
或淡绿色,壁厚,长方形,直径10~40μm,壁厚2.5
~10μm,孔沟、纹孔可见;导管网纹、螺纹和具缘纹
孔,10~80μm;分泌物块黄棕色,大小不一;薄壁细
胞(长)方形或多角形,大型,具点状或钩状纹孔,孔沟
偶见,直径40~80μm;石细胞无色或淡黄色,长方形
或多角形,直径35~50μm,壁厚2.5~7.5μm,纹孔
椭圆形,孔沟可见;厚角细胞淡绿色,多角形,直径20
~40μm;油管可见,暗黄色;非腺毛,1~6个细胞,表
面有突起,直径18~24μm;淀粉粒圆形、盔帽形,脐
点点状、短缝状,直径3~15μm,复粒由2~4个单粒
构成。见图5。
2.3 薄层鉴定
2.3.1 β-谷甾醇薄层鉴定 β-谷甾醇鉴别的供试样
品为羊红膻药材地上与地下部位。取本品粉末约1g,
加三氯甲烷-甲醇(3∶1)混合溶液25mL,超声处理
30min,提取液过滤,蒸干,残渣加丙酮1mL,使溶
解,作为供试品溶液。另取羊红膻对照药材0.5g,同
法制成对照药材溶液。再取β-谷甾醇对照品适量,加
丙酮制成每1mL含1mg的溶液,作为对照品溶液。
照薄层色谱法《中国药典》2010年版(附录(Ⅵ B)实
验,吸取上述2种溶液各4~8μL,分别点于以羧甲
基纤维素钠为黏合剂的硅胶 G薄层板上,以三氯甲
烷-丙酮(25∶1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以
100mL·L-1的硫酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点
显色清晰,分别置于日光与紫外光灯下(365nm)检
视。供试品色谱在与对照药材色谱相应的位置上,显
相同的颜色荧光斑点。结果见图6。
图5 羊红膻全草粉末显微鉴定特征(10×15)
1.纤维;2.导管;3.分泌物块;4.薄壁细胞;5.石细胞;6.厚角
细胞;7.油管;8.非腺毛;9.淀粉粒。
Fig.5Powder microscopic characteristics of Pimpinella thel-
lungiana Wolff.
1.fiber;2.catheter;3.the secretion piece;4.parenchyma
cels;5.stone cels;6.thick horn cels;7.oil pipe;8.the
glandular hairy;9.starch grains.
2.3.2 羊红膻中黄酮苷B和D的薄层鉴别 取本
品全草(根)粉末1g,加稀乙醇50mL,回流1h,挥去
乙醇,用盐酸调pH2~3,乙酸乙酯萃取2次,第1次
30mL,第2次20mL,萃取液合并,用20mL蒸馏
水,分洗2次,水浴蒸干,用甲醇1mL溶解,作为供试
品溶液。另取羊红膻对照药材0.5g,同法制成对照药
材溶液。取羊红膻黄酮苷B和D适量,制成每1mL
各含1mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法
(附录ⅥB)实验,吸取上述3种溶液各5~10μL,分别
点于同一硅胶G羧甲基纤维素钠薄层板上,以乙酸乙
酯-丁酮-甲酸-水(8∶0.5∶0.5∶0.5)为展开剂,展开,
取出,晾干,再进行二次展开之后晾干,喷以20g·L-1
的三氯化铝乙醇溶液,分别置于日光与紫外光灯(365
nm)下检视。供试品色谱在与对照药材色谱和对照品
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色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点或荧光斑点。
全草TLC结果见图7,根TLC结果见图8。
图6 羊红膻中β-谷甾醇TLC
1.对照药材地上;2,3,4.3个批号药材地上;5.β-谷甾醇;6.对
照药材根;7,8,9.3个批号药材根
Fig.6TLC ofβ-sitosterol in Pimpinella thellungiana Wolff.
1.control medicinal material of the ground part;2,3,4.3
colected,herbs on the ground;5.β-sitosterol;6.control me-
dicinal roots;7,8,9.3batches of medicinal roots
图7 羊红膻全草中黄酮苷B和黄酮苷D的TLC
1.对照品(Rf值大者为黄酮苷B、Rf值小者为黄酮苷D);2,3,
4.3个采集号的药材;5.对照药材
Fig.7TLC of flavonoids B,D in Pimpinella thellungiana
Wolff.whole plants
1.control(Rfvalue:the bigger for B,the smaler for flavonoid
glycosides D);2,3,4.3colected medicinal herbs;5.control
medicinal material
图8 羊红膻根中黄酮苷B和黄酮苷D的TLC
1.对照品(Rf值大者为黄酮苷B、小者为黄酮苷D);2,3,4.3
个采集号的药材;5.对照药材
Fig.8TLC of flavonoids B,D in Pimpinella thellungiana
Wolff.roots
1.control(Rfvalue:the bigger for B,the smaler for flavonoid
glycosides D);2,3,4.colected medicinal herbs;5.control
medicinal material
3 讨论
①羊红膻各组织部位与粉末显微鉴定中可见:纤
维(支持纤维和木纤维,存在于茎部);导管;分泌物
块;薄壁细胞(皮层细胞,射线细胞和髓细胞);石细
胞;厚角细胞;油管;非腺毛;淀粉粒。该方法简单、方
便、易行、快捷,适合药材的植物基源鉴定。
②药理实验证明:羊红膻的脂溶性部位对心血管
有较强的药理活性,且β-谷甾醇为其主要有效成分之
一[3],含量较高;β-谷甾醇具有明显的降胆固醇、止咳、
抗癌、抗炎等药理作用,用于Ⅱ型高脂血症及预防动脉
粥样硬化。羊红膻中含有的黄酮苷B和D,有降低心
肌耗氧量、增加冠脉流量等药理活性[5]。因此,在目前
研究状态下,对已知且易得到的活性成分,以药材和对
照品为对照进行薄层鉴定,为羊红膻药材质量控制的
较好方法。
③在薄层鉴别时,样品溶液的制备和β-谷甾醇鉴
别[6]中,利用溶剂石油醚、乙酸乙酯、氯仿与丙酮单一
或不同比例;在黄酮苷D和B鉴定[6]中,用甲醇、乙醇
或稀乙醇等进行提取,用盐酸调pH,用有机溶剂乙醚、
乙酸乙酯等萃取比较。利用热浸、冷浸、超声等提取方
法。展开剂采用不同比例溶剂;鉴定黄酮苷时选用硅
胶板和聚酰胺薄膜,用数种展开剂,进行了反复地实验
研究,结果优选出上述重复性较好的方法作为最终
方法。
④羊红膻文献记载以全草入药,由于地上部位与
地下部位质量之比大约6∶1,且从植物资源继续开
发与利用考虑,临床多用地上部位,采集时偶尔会带
上根部位;在之前的药理实验中发现,根的活性较强;
所以本次实验中特意用了根和地上部位做了比较,地
上部位也就是临床所应用的全草;根是有意选出少量
进行比较的。从实验中可知,根中有效成分含量较
高。以上显微与薄层鉴别方法可作为羊红膻药材制
定质量标准的实验依据。
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