全 文 ：1.3　试虫　致倦库蚊 、德国小蠊 ,均为实验室敏感
品系。
1.4　测试条件　温度(26±2)℃,相对湿度(60±
5)%。
1.5　方法　生物药效测试按照 GB13917.2-1992
和 GB/T17322.2-1998农药登记用杀虫剂室内药
效对气雾剂的测试方法进行 ,采用密闭圆筒法进行
测试。气雾剂经充分摇匀后立即按每组喷射 1.0 g
进行直接喷雾。喷雾完后 ,计时 ,观察不同时间被击
倒的试虫数 ,连续观察 20 min,然后将试虫移入清洁
笼内正常饲养 ,并分别计算 KT50及 24 ～ 72 h后蚊 、
蠊的死亡率 。每组试验重复 3次 ,并设空白对照组 。
2　结果与讨论
药效结果(表 1)。各试验组含有由 0提高至
15%渗透剂煤油 ,对致倦库蚊 KT50依次由 3.96 min
下降为 2.65 min,对德国小蠊由 6.93 min下降为
4.03 min,增效作用非常明显 ,并均一直保持药效上
升趋势。在渗透剂加入量超过 10%后 ,这种上升趋
势在两种试虫中药效的上升趋势均明显减弱 ,相信
这与渗透剂对昆虫表面渗透的影响量有关。试验结
果还显示渗透剂煤油对德国小蠊的增效效果优于对
致倦库蚊 ,相信这与小蠊表面几丁质层结构与致倦
库蚊的差异有关。
表 1　渗透剂(D80)对两种昆虫药效的影响
虫种 药 效 煤油含量(%)
0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0
致倦库蚊 KT50(min) 3.96 3.64 3.35 3.02 2.79 2.70 2.65
24h死亡率(%) 100 100 100 100 100 100 100
德国小蠊 KT50(min) 6.93 5.70 5.21 4.83 4.46 4.25 4.03
24h死亡率(%) 100 100 100 100 100 100 100
　　实验中因考虑到雾粒直径对药效影响很大 ,采
用 0.5% ～ 1%的不同表面活性剂组合实现良好乳
化体系以获得相同的雾化效果 ,因表面活性剂不具
备生物活性 ,而低含量的表面活性剂对昆虫表面渗
透作用的影响亦很小 ,故忽略其对药效的影响 。煤
油作为渗透剂用于杀虫气雾产品 ,其增效作用非常
突出 ,这在油基杀虫气雾剂中已得到充份验证 ,原理
在于油性的雾粒接触昆虫表面后 ,能很好协助有效
成分渗透通过昆虫表面的几丁质蜡层 。而在水基杀
虫气雾剂中保留较低含量的煤油(约 10%)作为渗
透剂 ,就能起到良好的增效作用。
参考文献:
[ 1] 　吴木春 ,谢敬松 ,张　瑜.几种拟除虫菊酯在水基气雾剂中的
稳定性研究 [ J] .中华卫生杀虫药械 , 2003, 9(1):32.
[ 2] 　吴木春.改善水基气雾剂雾化效果的几点建议 [ J].气雾剂通
讯 , 2002, 4(88):1.
(收稿日期:2005-07-19)
【国外信息】 中图分类号:S482.3;R384.1　　文献标识码:B　　文章编号:1671-2781(2005)05-0336-04
旱芹籽粗提取物对埃及伊蚊的效果评定＊
WejChoochote等(著), 郑剑宁 ,裘炯良 , 杨定波 (译)
(宁波出入境检验检疫局 , 浙江　宁波　315012 )
　　埃及伊蚊(Aedesaegypti)是众所周知的虫媒病
毒性疾病———登革热的传播媒介 ,分布于东南亚 、太
平洋岛屿 、非洲和美洲。它也是中美 、南美和西非传
播黄热病的媒介。登革热因报告的病例数逐年上
·336· 中华卫生杀虫药械 2005年第 11卷第 5期 CHINESEJOURNALOFHYGIENICINSECTICIDES＆EQUIPMENTSVol.11NO.5 2005
＊ 【作者简介】　郑剑宁(1963-), 男 ,浙江杭州市人 ,副主任医师 , 主要从事卫生检疫监督工作。
升 ,尤其是因该病有多种类型———登革出血热 、登革
休克综合症和其他诸如侵犯中枢神经系统等少见类
型 ,已成为当今社会严重的公共卫生问题。据 2003
年世界卫生组织的报告 ,全球受到登革热威胁的人
口约占全球人口总数的 40%。目前 ,减少该病发生
的最有效措施是加强个人防护和控制埃及伊蚊 。
虽然已有许多有关天然植物防蚊和其他害虫的
研究 ,但是随着化学合成品的出现 ,以草本植物为基
础的产品却日益减少 。由于持续使用化学合成品 ,
目前有害生物已普遍出现了抗药性 ,天然植物防蚊
产品因此重现生机。
旱芹 ,原产于欧亚 ,为伞形科草本植物 ,目前在
世界各地都有种植 ,其叶茎和菜籽是人们喜欢的食
物和调味品 。旱芹籽中的某些生物活性成分已证明
对线虫 (Caenorhabditiselegans和 Panagrelusredivi-
vus)具有杀虫作用 ,对真菌(Candidaalbican, C.kru-
sei和 C.parapsilasis)具有杀菌作用以及对Ⅳ龄埃
及伊蚊幼虫有杀灭作用。但文献未能提供其灭蚊和
防蚊的相关数据资料 。本次研究目的是要了解旱芹
籽提取物对泰国登革出血热传播的主要媒介埃及伊
蚊的防制效果 ,以便在开发天然产品 ,尤其是在控制
登革热再次流行时替代使用。
1　材料与方法
1.1　植物提取物　旱芹籽 ,从泰国清迈省的一个
商品供应商处(E.A.R.Samunpri)购得。将 2 kg菜
籽干粉浸渍于3 L95%的乙醇中 ,在室温下放置 2d
后 ,连续提取 3次 。提取物用毕希纳(Buchner)漏斗
进行吸滤 ,并用旋转式蒸发器在 60℃进行浓缩 ,直
至溶剂全部蒸发 ,得到旱芹籽乙醇提取物滤渣 ,冷冻
干燥 ,置于 -20 ℃的冰箱中保存 ,供检测杀幼虫 、成
虫毒性试验和防蚊试验用。在制备试验用浓度时 ,
将冷冻干燥的提取物用纯乙醇或吐温 80稀释至试
验所需的浓度。
1.2　供试蚊虫　埃及伊蚊幼虫 ,取自泰国北部清
迈省内不同死水中的幼虫 ,并自 1997年起在清迈大
学医学系寄生虫研究室连续进行种群传代 。饲养室
无菌 、无杀虫剂和驱避剂污染 , 温度控制在 25 ～
30 ℃,相对湿度为 80% ～ 90%,日 /昼为 14 h∶10h。
在这种环境下 ,由卵发育到成虫约 3 ～ 4周 。幼虫饲
料以粉碎成细粒的宠物饼干 ,成虫供以 10%的蔗糖
和 10%的多种维生素糖浆 ,并定期用试验鼠供其吸
血 。实验所用的幼虫和雌性成虫均由该饲养室
提供。
1.3　健康志愿者　从清迈大学医学系学生和寄生
虫研究室的全体教员中选择既往对节肢动物叮咬无
过敏反应的男女健康志愿者(年龄为 16 ～ 50岁 ,体
重为 43 ～ 65 kg)。在参加防蚊剂生物学测定前得
到他们书面同意。
1.4　杀灭幼虫　杀灭幼虫的生物学毒性测定 ,依照
世界卫生组织推荐的标准略作修改 。试验时 , 在一
个500ml的搪瓷碗中倒入 224 ml蒸馏水 ,再加入1 ml
溶于纯乙醇的旱芹籽提取物 , 轻轻摇动使溶液混合
均匀 。然后 ,将 25条Ⅳ龄埃及伊蚊幼虫放入 25 ml
的蒸馏水中 ,再转移到碗中。每个浓度的试验重复
4次 ,共用幼虫 100条 。用 1 ml乙醇溶于 249 ml的蒸
馏水中制成对照液 ,供对照组使用;用 250 ml的蒸馏
水作为未处理液 ,供未处理组使用 。每隔一定时间
观察并及时记录幼虫出现的症状 ,在此期间不为幼
虫提供食物。当幼虫接触溶液 24h后 ,统计幼虫死
亡和存活的数量。累计 4次重复试验中垂死状态和
死亡的幼虫 ,计算该浓度幼虫死亡的百分率。凡用
探针轻轻接触幼虫呼吸管或头部区域无反应的幼
虫 ,均判定为死亡。凡幼虫无能力上升至水面(在
一定时间范围内)或当水晃动时出现特异性的下沉
反应 ,判定幼虫为垂死状态。垂死状态的幼虫也可
出现变色 、体态不自然 、颤动 、动作不协调或僵硬。
对存活的幼虫分开进行饲养 ,饲养室温度维持在 25
～ 30 ℃,相对湿度控制在 80% ～ 90%。记录幼虫化
蛹和羽化的数量 。当最后一只蛹羽化后 3 d结束试
验。试验重复 4次 。
1.5　杀灭成虫　对世界卫生组织标准方法 (WHO
1981 b)略作修改 ,将旱芹籽乙醇提取物滴在纸面
上以测定其灭虫效果。旱芹籽乙醇提取物的吐温
80液或吐温 80 (对照组用)与乙醚按 1∶2的比例配
制浓度均匀的混合物 ,取 1.9ml不同的混合物分别
滴在 1号华特门(Whatman)滤纸 (12cm×15 cm)。
将浸渍的滤纸悬挂在阴暗处过夜 ,使所有的乙醚挥
发完 ,提取物溶液扩散均匀。将饥饿 5 ～ 7d的雌性
埃及伊蚊缓慢转移到普通塑料管内 ,每管放置 25
只。经1 h适应后再转移到试验用塑料管内(内放有
提取物浸渍的滤纸),暴露 1 h。结束后 ,把蚊虫放回
普通塑料管内 ,将浸有 10%蔗糖和 10%多种维生素
糖浆的棉花羊毛垫放在筛网上 ,饲养 24 h。每个浓
度的试验重复 4次 ,共用蚊虫 100只。凡对机械刺
激无反应的蚊虫即判为死亡 ,观察 24 h后计算死亡
百分率。所有试验在 25 ～ 30℃进行 ,并重复 4次。
1.6　防蚊效果　使用二种不同的处理方法(剂量
效应研究和确定保护时间)检测旱芹籽乙醇提取物
用于人体皮肤后对实验室饲养的埃及伊蚊的防护效
果。在剂量效应测试中 , 按照美国材料与试验学会
修正的标准 ED951-83(ASTM 1983)的程序 ,确定
植物提取物对饥饿蚊虫的有效剂量。这种以固定的
时间为基础 ,测试剂量变化的试验方法 ,被 Buescher
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等称为 “自由选择法”(1982),也类似于 Coleman等
描述的方法 (1993, 1994)。由于埃及伊蚊是在白天
叮咬人 ,因此试验时间在 8∶00 ～ 16∶00之间 。试验
在 10 m×10 m×3m的房间内进行 ,温度为 25 ～
30 ℃、相对湿度为 60% ～ 80%。用一个圆形塑料模
板(直径为29mm)和标记笔在志愿者前臂腹侧皮肤
上画 5个圆 。用 25ml的稀释液 (对照)和 4个不同
浓度的旱芹籽乙醇提取物随机涂抹在标记区域内 。
通风干燥 5 min后 , 将手臂伸进一个塑料试验笼
(4cm×5cm×18 cm),其内用橡皮圈分隔成 5层 ,
每层隔板上有一活动门 ,并放有 10只饥饿 5 ～ 7 d的
雌性埃及伊蚊 。连续观察 5min并记录每分钟在每
个测试位置上被埃及伊蚊叮咬的数量 。每个区域的
测试重复 3次 ,并在检测物使用后 25 min内完成 。
试验重复 4 次 , 每次 4 名志愿者参加 (男女
各 2名)。
实验室驱蚊效果检测是用来测定驱蚊剂的保护
时间 , 试 验采用 世界 卫生组 织的 标准 方法
(1996)———人诱法(作了一些修改)。用塑料袖套
包裹前臂 ,并在与测试部位相应的地方剪一个 3 cm
×10 cm的洞 ,用双面胶固定。这样 , 戴上橡皮手套
后 ,只有测试区的皮肤暴露在埃及伊蚊中 。将约
0.1ml25 %旱芹籽乙醇提取物溶解在纯乙醇中 ,然
后尽可能均匀地喷在志愿者前臂上 30 cm2的测试
区 。另一前臂使用纯乙醇作为对照(方法同上)。
通风干燥 1min后 ,将测试者的手臂伸入试验笼内
(30cm×30 cm ×30 cm,放有 200只饥饿的埃及伊
蚊)3 min。记录着落和试图叮咬的埃及伊蚊数量 。
如果测试者的手臂在开始 3 min内没有蚊虫叮咬 ,从
笼内撤回 ,每隔 30 min再进行测试。从使用提取物
后到在一个暴露期内(3 min)至少有二只埃及伊蚊
叮咬或在连续的二个暴露期(间隔 30 min)每次只
有一只蚊虫叮咬的时间 ,即为驱蚊剂的保护时间 。
当测试的手臂第一次被叮咬后 ,如果在一个暴露期
间没有观察到再次被叮咬 , 那就将继续进行测试直
到再次被叮咬。试验期间 ,在被测试的手臂插入试
验笼之前 ,用对照的手臂按同样的方法进行试验 ,
以确定笼内的埃及伊蚊具有吸血的能力。相同实验
重复 4次 ,每次 4名志愿者参加(男女各 2名)。实
验室以完全保护时间的中位数来衡量旱芹籽乙醇提
取物对雌性埃及伊蚊的驱避作用。
1.7　资料与统计分析　在本次研究中 ,必须保证死
亡率(驱避率)在 10% ～ 90%的试验数不得少于 3
次 。如果对照组死亡率(杀幼虫和杀成虫测试)或
对照组无叮咬率(驱蚊剂测试)在 5% ～ 20%, 那么
测试组的死亡率 (%)或驱避率 (%)要用 Abbot
的公式进行校正 。
死亡率(驱避率)= A-B
100-B×100%
其中:A为测试组死亡率(无叮咬率);B为对照
组死亡率(无叮咬率)。
用概率单位分析法 (HarvardProgramming;
Hg1, 2)对灭蚊效果(杀幼虫 、杀成虫和驱蚊作用)
的数据进行分析处理 , 计算 LD50 , LD95 , ED50 , ED95
和 95%可信限。
2　结果与讨论
　　1.14% (w/w)的旱芹籽乙醇提取物是浅棕色
略带有芬芳气味的半固体物质 ,它对Ⅳ龄埃及伊蚊
幼虫的杀灭效果(表 1)。埃及伊蚊对不同稀释度旱
芹籽乙醇提取物的敏感性呈剂量依赖关系。当提取
物的浓度从 40 mg/L增加到 120mg/L时 ,幼虫的死
亡率从 3%增加到 100%。当浓度为 80 ～ 200 mg/L
时 ,出现高死亡率 (死亡率 >50%)。而在对照组和
未经处理组均未见死亡 。在最高浓度时 ,旱芹籽乙
醇提取物的浓度仅为 120×10-6 ,死亡率为 93% ～
100%。在最低浓度时(40 mg/L),幼虫死亡率非常
低(3% ～ 5%)。但是与对照组和未处理组相比
(化蛹率 =98% ～ 100%, 羽化率 =96% ～ 98%),
那些在浓度为 40mg/L时依然生存的多数幼虫不能
发育成蛹 (6.2% ～ 11.3%)和成虫 (11.6% ～
13.2%)。用 LD50和 LD95表示旱芹籽乙醇提取物杀
灭幼虫的效果 ,其值分别为81.0, 176.8mg/L。
表 1　旱芹籽乙醇提取物对Ⅳ龄埃及伊蚊幼虫的杀灭效果
旱芹籽乙醇
提取物(mg/L)
24h死亡率
(%)
杀灭效果(95%可信限 , mg/L)
LD50 LD95
40 3.50±1.0 81.0 176.8
50 13.0±2.2 71.3～ 98.2 129.4 ～ 443.7
60 27.8±1.5 - -
80 44.0±12.8 - -
100 71.2±7.4 - -
120 96.2±2.4 - -
对照组 0　 - -
未处理组 0　 - -
　　在室温下 ,当幼虫接触旱芹籽乙醇提取物溶液
后立即进行观察。起初 ,所有幼虫活动正常 ,并展现
呼吸管向上头向下的常态外观。无论是采集水中的
幼虫还是采集聚集在水面下的幼虫 ,均可清楚看到
它们的活动情况。在接触溶液 5 ～ 10 min后 ,一些幼
虫出现躁动不安 ,常表现为快速下沉随后又迅速上
浮。 15 min后 ,可在容器底部观察到约 2 ～ 3条幼虫
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依然躁动不安 、颤动和痉挛。 45 min后 ,可清楚地观
察到约 4 ～ 5条幼虫出现类似的躁动不安 、颤动 、痉
挛和麻痹。 1h后 ,大约 1 ～ 2条幼虫呈垂死状态或
死亡。 4h后 ,约 1 /3的幼虫麻痹瘫痪并沉入碗底 。
5 ～ 6 h间 ,越来越多的幼虫出现中毒症状。最终在
接触浓度为 120 mg/L溶液 7 h后全部死亡。旱芹籽
乙醇提取物不会导致幼虫快速死亡 ,而呈现迟缓型
的杀虫作用 。试验时所观察到幼虫中毒出现的症状
类似于神经毒类药物引起的症状 ,如兴奋 、抽筋 、麻
痹和死亡。
用 LD50和 LD95来表示旱芹籽乙醇提取物对埃
及伊蚊成虫的杀灭作用 ,其值分别为 6.6 mg/cm2和
66.4mg/cm2。在暴露不同浓度的提取物浸渍的纸
之后 ,提取物能击倒蚊虫 (快速导致可逆转的麻
痹)。在浓度为 3.5 ～ 10.6mg/cm2时 , 暴露 5 ～
15 min,几乎所有的埃及伊蚊出现麻痹症状 ,如不能
行走 、倒在试验管底部 。暴露 1h后 ,所有埃及伊蚊
不能活动。但从试验管转移到普通饲养管后 ,大约
1 /3的成蚊在 1 h内恢复 。 24h饲养结果显示死亡
率范围为 16% ～ 76%,同时也显示成蚊的死亡率与
剂量呈依赖关系(表 2)。
表 2　旱芹籽乙醇提取物对埃及伊蚊成虫的杀灭效果
旱芹籽乙醇
提取物(mg/cm2)
24h死亡率
(%)
杀灭效果(95%可信限 , mg/L)
LD50 LD95
1.8 17.2±1.3 6.6 66.4
3.5 32.0±2.9 5.6 ～ 8.1 38.0～ 173.0
7.0 42.8±4.0 - -
10.6 71.5±3.7 - -
对照组 0 - -
　　在同等实验室条件下 ,虽然旱芹籽乙醇提取物
对埃及伊蚊幼虫和成虫的杀虫效果较其他植物提取
物对埃及伊蚊和其他蚊种的杀虫效果低(Pitasawat
等 , 1998 , Choochote等 1999, Mansour等 2000,
Yang等 2002, 2003), 但它对蚊虫可能产生的神经
毒性作用应当予以足够重视。 Rafikali等(2000)从
旱芹籽己烷提取物中分离出四种化合物 ,前三种化
合物 , b-芹子烯 、3-n-丁基 -4, 5-双氢酜内酯和 5-烯丙
基 -2-对甲氧酚分别在浓度为 50, 25和 200 μg/ml时 ,
对Ⅳ龄埃及伊蚊幼虫产生 100%的致死率 ,而最后
一种化合物 1, 3-双 [ (顺式)-9-十八烷酰基 ] -2-[ (顺
式 ,顺式)-9-12-十八烷酰基 ]丙三醇无生物活性。
此外 ,通过杀虫生物学测定法 ,进一步研究所得到的
对成蚊的击倒作用 ,这对驱避剂的研究是非常有意
义的 。
在驱避作用研究中 , 通过对志愿者的试验 ,表
明旱芹籽乙醇提取物对埃及伊蚊成蚊具有明显的驱
避效果(表 3)。ED50和 ED95分别为2.03mg/cm2 和
28.12 mg/cm2。当使用浓度为 25%时 ,其对埃及伊
蚊的完全保护时间的中位数为3 h(表 4)。
表 3　旱芹籽乙醇提取物对雌性埃及伊蚊成虫的驱避效果
旱芹籽乙醇提
取物(mg/cm2)
驱蚊率
(%)
驱蚊效果(95%可信限 , mg/cm2)
ED50 ED95
1 31.89±1.70 2.03 28.12
2 48.71±3.25 1.63～ 2.50 16.05 ～ 75.53
4 66.38±2.46 - -
6 78.66±3.89 - -
表 4　旱芹籽乙醇提取物对雌性埃及伊蚊成虫的驱避效果
组　别 完全保护时间的中位数(区间 , h)
旱芹籽乙醇提取物(25%) 3.0 (2.5～ 3.0)
对照组(乙醇) 0
　　经 3个月的研究观察和其后的 3个月随访 ,无
皮肤刺激 、灼热感或皮疹。虽然旱芹引起的皮炎和
光毒性皮肤反应在一些农场或食品杂货商店的工作
人员有报道 (Palumbo和 Lynn1953, Seligman等
1987),在泰国准许出售的驱蚊剂其最短的保护时
间为 2h,因此本次研究未对长期使用这种物质的毒
性进行调查。旱芹籽乙醇提取物所提供的保护时间
为 2.5 ～ 3.0 h,可作为提高驱避剂实用性和拓展市
场的理想配方 。这种植物在农村种植广泛 ,而且价
格便宜。若对其进行商业性开发 ,将有助于农村的
经济发展 。
　　总之 ,旱芹籽乙醇提取物对埃及伊蚊有效果 ,尤
其是驱蚊效果更为明显。需要进一步研究作用方
式 、作用机理和制剂 ,以提高其效力和稳定性 ,减少
对非靶生物的毒性和对环境的影响。在蚊虫控制方
案中 ,如果推荐作为灭蚊或防蚊产品 ,还需进行现场
试验 。
(收稿日期:2005-01-21)
·339·中华卫生杀虫药械 2005年第 11卷第 5期 CHINESEJOURNALOFHYGIENICINSECTICIDES＆EQUIPMENTSVol.11 NO.5 2005