全 文 ：HPLC法同时测定旱芹中木犀草素和
旱芹素的含量
李敏，孙莲*，孟磊
（新疆医科大学药学院，新疆乌鲁木齐 830011）
摘 要：建立 HPLC法同时测定旱芹中木犀草素和旱芹素含量的方法。采用 C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）柱，流动相为乙
腈 ∶ 0.01 mol/L醋酸铵（pH=4.8）=40 ∶ 60，等强度洗脱，检测波长 330 nm，柱温 25℃，流速 1.0 mL/min。木犀草素和旱芹素
的质量浓度分别在 0.93 μg/mL～4.94 μg/mL（r=0.999 1）及 1.03 μg/mL～5.06 μg/mL（r=0.999 4）范围内与峰面积呈现良好的
线性关系，平均加样回收率依次为 99.7 %（RSD为 2.4 %），99.0 %（RSD为 1.8 %）。
关键词：旱芹；木犀草素；旱芹素；高效液相色谱法
Determination of Luteolin and Apigenin in Apium graveolen L. by HPLC
LI Min，SUN Lian*，MENG Lei
（College of Pharmacy，Xinjiang Medical University，Urumqi 830011，Xinjiang，China）
Abstract：To establish a method for simultaneous determination of Luteolin and Apigenin in Apium graveolen L.
byHPLC. The sepration was performed on an C18 columnwith acetonitrile 0.01mol/L ammonium acetate （pH=4.8）=
60 ∶ 40 as a mobile phase at a flow rate of 1.0 mL/min. The detection wavelength was 330 nm at 25 ℃. There were
good linear relationships between the mass concentrations and the peak areas of luteolin and apigenin in the
ranges of 0.93 μg/mL-4.94 μg/mL（r=0.999 1）and 1.03 μg/mL-5.06 μg/mL （r=0.999 4） respectively. The average
recoveries were 99.7 % with RSD 2.4 % and 99.0 % with RSD 1.8 % respectively. The method was quick，simple
and repeatable for the determination of Luteolin and Apigenin in Apium graveolen L.
Key words：Apium graveolen L.； luteolin； apigenin； HPLC
作者简介：李敏（1983—），女（汉），讲师，硕士，研究方向：天然产物活
性成分研究与利用。
*通信作者：孙莲（1961—），女（汉），教授，硕士，研究方向：药物分析。
食品研究与开发
Food Research And Development
2014年 5月
第 35卷第 10期
DOI：10.3969/j.issn.1005-6521.2014.010.029
旱芹（Apium graveolens L.）是伞形科旱芹属的草
本植物。我国古代已有研究，具有“补血、祛风、健脾
利湿”的作用，自古有“药芹”之誉。旱芹为药食两用植
物[1-2]，被称为“厨房中药材”。旱芹含有丰富的黄酮类
化合物，黄酮是旱芹中主要的活性成分，旱芹中的黄
酮类成分主要为木犀草素和旱芹素等，旱芹黄酮具有
抗氧化，镇静，止痛，抗肝炎，降压，降脂作用以及抗肿
瘤作用[3-5]。由此可见，旱芹是一种具有很高药用价值
和营养价值的植物，研究旱芹黄酮具有重要的意义，
本文建立了 HPLC法同时检测旱芹中的木犀草素和旱
芹素含量[6-7]的方法，为旱芹的质量控制和开发利用提
供基础资料。
1 仪器与试剂
1.1 仪器
Agilentl200高效液相色谱仪（包括 G1322A 脱气
装置、G1312B 二元高压泵、G1367C 高性能自动进样
器、GI316B 柱温箱、G1315C 二极管阵列检测器）：美
国，安捷伦科技有限公司，XS105型十万分之一电子天
平：德国，梅特勒一托利多仪器有限公司。
1.2 供试品与试剂
乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯，水为纯净
水：娃哈哈饮用水；木犀草素标准品（22803）：上海晶纯
实业有限公司；旱芹素标准品（A0113）：成都曼斯特生
物科技有限公司。
新鲜自然成熟的旱芹地上部分，采自乌鲁木齐市
郊区菜园，经新疆医科大学药学院生药教研室帕丽
达·阿不力孜教授鉴定为伞形科旱芹属植物旱芹
检测分析
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（Apium graveolens L.），分离茎和叶，用适量水洗净，干
燥，粉碎。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm），流动相：
乙腈：0.01 mol/L醋酸铵（调 pH为 4.8）=40 ∶ 60，检测波
长 330 nm，柱温：25 ℃，流速为：1.00 mL/min，进样量
为：10 μL，在上述色谱条件下，木犀草素和旱芹素色谱
峰保留时间合适，峰形良好，供试品中木犀草素和旱
芹素与其他组分分离良好，分离度>1.5，木犀草素和旱
芹素的质量浓度分别在 0.93 μg/mL～4.94 μg/mL（r=
0.999 1）及 1.03 μg/mL～5.06μg/mL（r=0.999 4）范围内
与峰面积呈现良好的线性关系，色谱图见图 1。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取木犀草素对照品 4.0 mg，旱芹素对照品
5.8 mg置于 25 mL的容量瓶中，甲醇溶解，并稀释至刻
度，摇匀，即得 0.16 mg/mL木犀草素及 0.23 mg/mL旱
芹素的对照品溶液。
2.3 供试品溶液的制备
精密称取过 60目筛的旱芹茎粉末 1.000 0 g置于
125 mL锥形瓶中，加 80 %甲醇溶液 30 mL，于 40 ℃时
超声提取 30 min，过滤，滤渣再用 30 mL 80 %甲醇，同
法提取 2次，合并滤液和洗涤液，减压浓缩，残渣用少
量甲醇溶解，转移到 10 mL的容量瓶中，用甲醇定溶至
刻线，摇匀，0.22 μm微孔滤膜滤过，即得供试品溶液。
2.4 线性关系考察
分别精密吸取木犀草素对照品溶液 60、70、80、
240、400、600、700 μL和旱芹素对照品溶液 10、25、35、
55、75、96、115 μL于 5 mL容量瓶中，用 80 %甲醇稀释
至刻线，配成不同浓度的混合标液，在上述色谱条件
下进样 10 μL，测定峰面积。以木犀草素和旱芹素进样
量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得回归
方程及线性范围见表 1。
2.5 精密度试验
精密吸取对照品溶液 5 μL，连续进样 6次，测定
峰面积。结果木犀草素、旱芹素峰面积的 RSD分别为
2.9 %、1.7 %，表明精密度良好。
2.6 稳定性试验
取供试品溶液，依上述色谱条件，在 0、1、4、8、12、
24 h分别进样 5 μL，测定峰面积。结果木犀草素、旱芹
素含量的 RSD分别为 1.8 %、2.6 %，表明供试品溶液
在 24 h内稳定。
2.7 重复性试验
精密称取旱芹茎供试品 5份，按“2.3”项下方法制
成供试品溶液，依上述色谱条件，进样 10 μL，测定峰
面积。结果木犀草素、旱芹素含量的 RSD分别为 1.3 %、
1.7 %，表明重复性良好。
2.8 回收率试验
取“2.7”项下已测知木犀草素、旱芹素含量的旱芹
茎供试品共 18份，精密称定，分别置 125 mL锥形瓶
中，再分别以低、中、高 3个浓度精密加入木犀草素、旱
芹素的对照品溶液适量，按“2.3”项下方法制成供试溶
液，依上述色谱条件进样，测定峰面积。结果木犀草素、
旱芹素的平均回收率分别为 99.5 %（RSD=1.1 %）、
100.1 %（RSD=1.3 %），结果见表 2。
2.9 供试品含量测定
取 3批旱芹茎和叶的供试品，分别按照“2.3”项下
方法制备供试品溶液各 3份，依上述色谱条件进样，测
定峰面积，以外标法计算含量，结果见表 3。
30
25
20
15
10
5
0
m
AU
3.5 4.0 6.5
时间/min
4.5 5.0 5.5 6.0
1
2
A
VWD1 A，Wavelength=333 nm（MLY00165.D）
VWD1 A，Wavelength=330 nm（MLY00131.D）
6
5
4
3
2
1
0
m
AU
3.5 4.0 6.5
时间/min
4.5 5.0 5.5 6.0
1 2 B
1.旱芹素 Luteolin；2.木犀草素 Apigenin。
图 1 对照品（A）及供试品（B）色谱图
Fig.1 HPLC chromatograms of refercnce substances（A）and
sample（B）
表 1 回归方程、相关系数及线性范围
Table 1 The regression equation，correlation coefficient and
linear range
标准品 回归方程 线性范围/（μg/mL） r
木犀草素 Y=-324.06X+1 801.2 0.933 2~4.938 6 0.999 1
旱芹素 Y=-91.33X+564.29 1.026 9~5.060 6 0.999 4
李敏，等：HPLC法同时测定旱芹中木犀草素和旱芹素的含量检测分析
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3 结论
建立了同时测定旱芹中木犀草素和旱芹素含量
的方法。该方法的线性系数均在 0.999以上，平均加样
回收率为 99.7 %和 99.0 %，相对标准偏差为 2.4 %和
1.8 %。实验结果表明，本方法行之有效，稳定可靠，适
用于测定旱芹中木犀草素和旱芹素的含量。
4 讨论
4.1 检测波长的选择
取木犀草素和旱芹素对照品溶液在 200 nm～
450 nm区间扫描。结果表明，木犀草素在 355 nm处有
最大吸收，而旱芹素在 270 nm处有最大吸收，故选择
330 nm作为检测波长，在此波长下的两种组分都有较
好的吸收，木犀草素和旱芹素在此波长处可获得较好
的分离。
4.2 流动相的选择
分别考察了甲醇-0.01 mol/L醋酸铵，乙腈-0.01mol/L
醋酸铵，甲醇-乙腈-0.01 mol/L醋酸铵溶液等为流动
相，发现乙腈-0.01 mol/L醋酸铵为流动相时，分离较
好，木犀草素和旱芹素在 8 min内完全分离。分别试验
了乙腈 ∶ 0.01 mol/L醋酸铵（pH=4.8）=90 ∶ 10、乙腈∶
0.01 mol/L醋酸铵（pH=4.8）=80 ∶ 20、乙腈 ∶ 0.01 mol/L
醋酸铵（pH=4.8）=70 ∶ 30、乙腈∶0.01 mol/L醋酸铵（pH=
4.8）=60 ∶ 40、乙腈 ∶ 0.01 mol/L醋酸铵（pH=4.8）=50 ∶
50、乙腈 ∶ 0 .01 mol/L 醋酸铵（pH=4.8）= 40 ∶ 60、乙
腈 ∶ 0.01 mol/L醋酸铵（pH=4.8）=30 ∶ 70为流动相，结
果表明乙腈 ∶ 0.01 mol/L醋酸铵（pH=4.8）=40 ∶ 60为流
动相时，木犀草素和旱芹素峰形较好，并且分离较好。
同时还试验了 0.01 mol/L醋酸铵的 pH为 3.5、3.8、4.0、
4.5、4.8、5.0、5.5时的分离效果，发现缓冲盐的 pH为
4.8时，旱芹素和木犀草素分离效果较好，基线较平稳。
故本实验选择乙腈 ∶ 0.01 mol/L醋酸铵（pH=4.8）= 40 ∶
60为流动相，等梯度洗脱，流速为 1.0 mL/min。
参考文献：
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[6] 王克勤,罗军武,陈静萍,等.高效液相色谱法测定旱芹中旱芹素
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HPTLC定量分析研究[J].食品科学,2008,29(4):291-295
收稿日期：2013-03-08
表 2 加样回收率试验结果
Table 2 Recovery test results
化合物
样品
含量/μg
加入
量/μg
测得量/
μg
回收
率/%
平均回
收率/%
RSD/%
木犀草素 22.1 17.7 39.6 99.1
22.2 17.6 39.8 100.0 1.2
22.3 17.7 38.9 95.1
22.0 22.1 44.5 101.8 99.5
22.1 22.2 44.2 99.5 0.8
22.0 22.0 43.8 99.1
22.2 26.4 48.5 99.5
22.1 26.3 48.9 102.3 1.2
22.0 26.0 47.8 99.1
旱芹素 27.1 21.6 49.2 101.8
26.9 21.5 48.8 101.5 1.4
26.7 21.6 47.9 98.5
26.8 27.2 54.1 100.4 100.1
27.2 27.2 53.2 95.6 2.0
27.2 27.2 55.4 103.7
26.8 32.3 58.9 99.3
27.1 32.3 59.1 98.9 0.4
26.9 32.2 59.4 101.1
表 3 供试品的含量测定结果
Table 3 Results of content determination of samples
批号 供试品 木犀草素/（mg/g） 旱芹素/（mg/g）
20120628 茎 0.22 0.27
叶 0.58 0.46
20120720 茎 0.23 0.28
叶 0.55 0.48
20120815 茎 0.24 0.27
叶 0.56 0.47
检测分析李敏，等：HPLC法同时测定旱芹中木犀草素和旱芹素的含量
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