全 文 ：６０８－６１４
４／２０１６
草　业　科　学
ＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＬ　ＳＣＩＥＮＣＥ
第３３卷第４期
Ｖｏｌ．３３，Ｎｏ．４
ｈｔｔｐ：??ｃｙｋｘ．ｌｚｕ．ｅｄｕ．ｃｍ
ＤＯＩ：１０．１１８２９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００１－０６２９．２０１５－０４７２
廖丽，王晓丽，刘建秀，刘洋，白昌军，徐毓皎，张欣怡，王志勇．地毯草种质资源ＩＳＳＲ标记遗传多样性分析．草业科学，２０１６，３３（４）：
６０８－６１４．
Ｌｉａｏ　Ｌ，Ｗａｎｇ　Ｘ　Ｌ，Ｌｉｕ　Ｊ　Ｘ，Ｌｉｕ　Ｙ，Ｂａｉ　Ｃ　Ｊ，Ｘｕ　Ｙ　Ｊ，Ｚｈａｎｇ　Ｘ　Ｙ，Ｗａｎｇ　Ｚ　Ｙ．Ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ａｘｏｎｏｐｕｓ　ｃｏｍｐｒｅｓｓｕｓ　ｕｓｉｎｇ
ＩＳＳＲ　ｍａｒｋｅｒｓ．Ｐｒａｔａｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，２０１６，３３（４）：６０８－６１４．
地毯草种质资源ＩＳＳＲ标
记遗传多样性分析
廖 丽１，王晓丽１，刘建秀２，刘 洋１，白昌军３，
徐毓皎１，张欣怡１，王志勇１
（１．热带作物种质资源保护与开发利用教育部重点实验室 海南大学农学院，海南 海口５７０２２８；
２．江苏省中国科学院植物研究所，江苏 南京２１００１４；３．中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所，海南 儋州５７１７３７）
摘要：地毯草（Ａｘｏｎｏｐｕｓ　ｃｏｍｐｒｅｓｓｕｓ）是华南地区使用的多年生草本植物，本研究通过ＩＳＳＲ标记对华南地区６４份地毯
草种质资源的遗传多样性和亲缘关系进行分析。结果表明，２５对ＩＳＳＲ引物共扩增出２０８条清晰谱带，大小在３００～
１　５００ｂｐ，其中多态性条带有１９６条，多态性比率为９４．２３％，２５对引物扩增条带数在４～１５条，平均每对引物８．３２条，
遗传相似系数是０．４６～０．９９。通过ＵＰＧＭＡ方法对６４份地毯草材料进行聚类分析。结果表明，来自相同采集地区的
材料并没有完全聚在一类，供试材料间出现较大的遗传差异。本研究结果可为今后开展地毯草种质资源遗传保护、品
种鉴定、新品种选育提供基础。
关键词：地毯草；种质资源；ＩＳＳＲ；遗传多样性
中图分类号：Ｓ５４０．３　　　文献标识码：Ａ　　　文章编号：１００１－０６２９（２０１６）４－０６０８－０７＊
Ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ａｘｏｎｏｐｕｓ　ｃｏｍｐｒｅｓｓｕｓ
ｕｓｉｎｇ　ＩＳＳＲ　ｍａｒｋｅｒｓ
Ｌｉａｏ　Ｌｉ　１，Ｗａｎｇ　Ｘｉａｏ－ｌｉ　１，Ｌｉｕ　Ｊｉａｎ－ｘｉｕ２，Ｌｉｕ　Ｙａｎｇ１，Ｂａｉ　Ｃｈａｎｇ－Ｊｕｎ３，
Ｘｕ　Ｙｕ－ｊｉａｏ１，Ｚｈａｎｇ　Ｘｉｎ－ｙｉ　１，Ｗａｎｇ　Ｚｈｉ－ｙｏｎｇ１
（１．Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ　Ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｔｒｏｐｉｃａｌ　Ｃｒｏｐ　Ｇｅｒｍｐｌａｓｍ　Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ，
Ｍｉｎｉｓｔｒｙ　ｏｆ　Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ，Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ　Ａｇｒｏｎｏｍｙ　Ｈａｉｎａｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈａｉｋｏｕ　５７０２２８，Ｃｈｉｎａ；
２．Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｂｏｔａｎｙ，Ｊｉａｎｇｓｕ　Ｐｒｏｖｉｎｃｅ　ａｎｄ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｎａｎｊｉｎｇ　２１００１４，Ｃｈｉｎａ；
３．Ｔｒｏｐｉｃａｌ　Ｐａｓｔｕｒｅ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｃｅｎｔｅｒ，Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　Ｔｒｏｐｉｃａｌ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｄａｎｚｈｏｕ　５７１７３７，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ａｘｏｎｏｐｕｓ　ｃｏｍｐｒｅｓｓｕｓ　ｉｓ　ｐｅｒｅｎｎｉａｌ　ｈｅｒｂａｃｅｏｕｓ　ｐｌａｎｔｓ　ａｎｄ　ｕｓｅｄ　ｉｎ　ｓｏｕｔｈ　Ｃｈｉｎａ．Ｇｅｎｅｔｉｃ　ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　６４
ｃａｒｐｅｔｇｒａｓｓ　ａｃｃｅｓｓｉｏｎｓ（ｃｕｌｔｉｖａｒ）ｗａｓ　ａｎａｌｙｚｅｄ　ｕｓｉｎｇ　ｔｈｅ　ＩＳＳＲ　ｍａｒｋｅｒｓ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　２５ＩＳＳＲ　ｐｒｉｍ－
ｅｒｓ　ｇｅｎｅｒａｔｅｄ　２０８ｄｉｓｔｉｎｃｔ　ｂａｎｄｓ（３００～１　５００ｂｐ），１９６（９４．２３％）ｏｆ　ｗｈｉｃｈ　ｗｅｒｅ　ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ　ｂａｎｄｓ．Ｔｈｅ　ｎｕｍ－
ｂｅｒ　ｏｆ　ｏｂｓｅｒｖｅｄ　ｂａｎｄｓ　ｒａｎｇｅｄ　ｆｒｏｍ　４ｔｏ　１５，ｗｉｔｈ　ａｖｅｒａｇｅ　ｏｆ　８．３．Ｔｈｅ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ　ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ　ｉｓ　ｂｅｔｗｅｅｎ　０．
４６～０．９９．Ｕｎｗｅｉｇｈｔｅｄ　ｐａｉｒ－ｇｒｏｕｐ　ｍｅｔｈｏｄ　ｗｉｔｈ　ａｒｉｔｈｍｅｔｉｃ　ｍｅａｎｓ（ＵＰＧＭＡ）ｃｌｕｓｔｅｒｅｄ　６４ａｃｃｅｓｓｉｏｎｓ（ｃｕｌｔｉｖａｒ）
ｉｎｔｏ　ｔｈｒｅｅ　ｇｒｏｕｐｓ，ａｎｄ　ｎｏｔ　ａｌ　ｓａｍｐｌｅｓ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｓａｍｅ　ｒｅｇｉｏｎ　ｂｅｌｏｎｇｅｄ　ｔｏ　ｔｈｅ　ｓａｍｅ　ｇｒｏｕｐ．ＩＳＳＲ　ｍａｒｋｅｒｓ　ｈａｓ　ｐｏ－
ｔｅｎｔｉａｌ　ｉｎ　ｍａｒｋｅｒ－ａｓｓｉｓｔｅｄ　ｂｒｅｅｄｉｎｇ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ　ｏｆ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｉｎ　ｗｉｌｄ　ｇｅｒｍｐｌａｓｍ　ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ　ｏｆ　ｃａｒ－
＊ 收稿日期：２０１５－０８－２４　　接受日期：２０１５－１２－０８
基金项目：国家自然科学基金项目（３１０６０２６６）；海南省自然科学基金项目（３１００３１）
第一作者：廖丽（１９８１－），女，江西乐安人，副教授，博士，研究方向为植物种质资源遗传多样性与质量评价。Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｉａｏｌｉ＠ｈａｉｎｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
通信作者：王志勇（１９７９－），男，江西乐平人，副教授，博士，研究方向为热带草坪草种质资源遗传多样性与遗传育种。
Ｅ－ｍａｉｌ：ｗａｎｇｚｈｉｙｏｎｇ＠ｈａｉｎｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
第４期 廖丽　等：地毯草种质资源ＩＳＳＲ标记遗传多样性分析
ｈｔｔｐ：／／ｃｙｋｘ．ｌｚｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
ｐｅｔｇｒａｓｓ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ａｘｏｎｏｐｕｓ　ｃｏｍｐｒｅｓｓｕｓ；ｇｅｒｍｐｌａｓｍ；ＩＳＳＲ；ｇｅｎｅｔｉｃ　ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ
Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ：Ｗａｎｇ　Ｚｈｉ－ｙｏｎｇ　Ｅ－ｍａｉｌ：ｗａｎｇｚｈｉｙｏｎｇ＠ｈａｉｎｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
　　地毯草（Ａｘｏｎｏｐｕｓ　ｃｏｍｐｒｅｓｓｕｓ），别名大叶油草，
属禾本科地毯草属多年生草本植物，暖季型草坪草。
其中地毯草属约有４０个种，在我国主要分布在热带和
亚热带等气候温暖湿润地区，但是地毯草不耐寒，气温
变低时叶色就会呈现紫红色，植株枯黄，影响观赏价值
和使用价值［１］。目前世界各国对地毯草种质资源的研
究还只停留在一些简单的调查上，还没有把性状的鉴
定与控制性状的基因以及基因的传递和变异规律的研
究结合起来，但在地毯草属的形态多样性［２－４］、抗逆
性［５－９］、分子标记［１０－１１］等方面的研究较多。
目前，ＩＳＳＲ标记技术［１２］具有操作简单、成本低、
快速灵敏、多态性高、所需ＤＮＡ 量少以及无需预知研
究对象的基因组序列等优点，同时也具有ＳＳＲ 的稳
定性。且ＩＳＳＲ标记技术已经广泛地应用于品种鉴
定［１３］、遗传多样性分析［１４－１７］等研究，然而，地毯草种质
资源分子标记研究甚少［１０－１１，１８］。席嘉宾等［１９］利用１５
个野生地毯草品系建立了ＩＳＳＲ的反应体系并进行了
遗传多样分析。本研究在此基础上，利用ＩＳＳＲ标记
对国内外６３份野生地毯草种质和１份育成品种的遗
传多样性和亲缘关系进行研究，为今后地毯草种质开
发利用提供基础。
１　材料与方法
１．１　试验材料
６４份材料分别来源于中国的海南、广州、广西、云
南、福建和贵州以及澳大利亚（表１），种植在海南大学
儋州校区农学院基地并统一管理。
１．２　基因组ＤＮＡ的提取和检测
地毯草基因组 ＤＮＡ 的提取参照改良的 ＣＴＡＢ
法［２０］，并做了适当的修改。取ＤＮＡ原液５μＬ，加入１
μＬ的上样缓冲液，混匀，然后用０．８％琼脂糖凝胶进
行电泳检测（其中电泳缓冲液为０．５×ＴＢＥ，电压３～４
Ｖ·ｃｍ－１电泳３０ｍｉｎ），最后稀释成５０ｎｇ·μＬ
－１备
用。
１．３　ＩＳＳＲ－ＰＣＲ扩增体系
ＩＳＳＲ反应体系（２０μＬ）和扩增程序为
［１６，１９］：２μＬ
１０×ｂｕｆｆｅｒ（１００ｍｍｏｌ·Ｌ－１　Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ　ｐＨ　８．３，５００
ｍｍｏｌ·Ｌ－１　ＫＣｌ，１５ｍｍｏｌ·Ｌ－１　ＭｇＣｌ２）；１．８μＬ　２．５
ｍｍｏｌ·Ｌ－１　ｄＮＴＰ，１μＬ　５０ｎｇ模板 ＤＮＡ；１μＬ　１０
μｍｏｌ·ｍＬ
－１　ＩＳＳＲ引物（表２）；１μＬ　５Ｕ·μＬ
－１　Ｔａｑ
ＤＮＡ聚合酶；无菌去离子水补至２０μＬ。ＰＣＲ反应程
序为：９４℃预变性５ｍｉｎ，９４℃变性４５ｓ，４５～５５℃退
火１ｍｉｎ，７２℃延伸９０ｓ，共４５个循环；最后７２℃延
伸７ｍｉｎ，４℃保存。
１．４　ＩＳＳＲ－ＰＣＲ扩增产物凝胶电泳检测
扩增结束后，取扩增产物８．５μＬ与２μＬ　６×
Ｌｏａｄｉｎｇ　Ｂｕｆｆｅｒ（ＴａＫａＲａ）混匀，在１．５％琼脂糖凝胶
上电泳，电压４Ｖ·ｃｍ－１，时间１．５～２ｈ，电泳缓冲液
为０．５×ＴＢＥ，电泳结束后取出凝胶，在凝胶成像仪上
检测照相，进行分析。
１．５　数据处理与分析
根据ＩＳＳＲ扩增出来的电泳图谱进行人工读带，
对电泳图谱上清晰可辨且可重复出现的条带记为“１”，
无则记为“０”，从而生成原始数据矩阵，根据 ＵＰＧＭＡ
（Ｕｎｗｅｉｇｈｔｅｄ　Ｐａｉｒ　Ｇｒｏｕｐ　Ｍｅｔｈｏｄ　ｗｉｔｈ　Ａｒｉｔｈｍｅｔｉｃ
Ｍｅａｎｓ　Ｃｌｕｓｔｅｒ　Ａｎａｌｙｓｉｓ）法对数据进行遗传相似性聚
类分析。遗传相似系数（ＧＳ）＝２　Ｎｉｊ／（Ｎｉ＋Ｎｊ），式
中，Ｎｊ为第ｊ个品种的扩增条带数目，Ｎｉ为第ｉ个品
种的扩增条带数，Ｎｉｊ代表第ｉ、ｊ个品种间共有的扩增
条带数［２１］。
２　结果与分析
２．１　ＩＳＳＲ标记对地毯草种质扩增的多态性分析
本研究按最佳反应程序及体系最终从ＩＳＳＲ　８０１
到ＩＳＳＲ　９００共１００对引物中筛选出２５对稳定性好、
多态性高、条带清晰且重复性好的引物，用于６４份地
毯草种质的扩增。２５对引物共扩增出２０８条条带清
晰谱带，大小在３００～１　５００ｂｐ，其中多态性条带有
１９６条，单对引物扩增条带数在４～１５条，平均每对引
物８．３２条，多态性比率为９４．２３％（表２）。引物ＩＳＳＲ
８１１扩增产物的多态性条带数为１５条，其多态性最丰
富，但是ＩＳＳＲ　８５６的扩增产物图谱最清晰（图１）。
２．２　遗传相似性分析
相似系数是用来比较群体或个体间亲缘关系的远
近程度，相似系数越高，则说明材料间亲缘关系越近，
遗传背景一致性越强。６４份地毯草种质遗传相似系
９０６
草　业　科　学 第３３卷
ｈｔｔｐ：／／ｃｙｋｘ．ｌｚｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
表１　供试材料
Ｔａｂｌｅ　１　Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　ｍａｔｅｒｉａｌｓ
序号
Ｎｏ．
品系（种）
Ａｃｃｅｓｓｉｏｎｓ（ｓｐｅｃｉｅｓ）
来源
Ｏｒｉｇｉｎ
序号
Ｎｏ．
品系（种）
Ａｃｃｅｓｓｉｏｎｓ（ｓｐｅｃｉｅｓ）
来源
Ｏｒｉｇｉｎ
１ Ａ２ 海南儋州Ｄａｎｚｈｏｕ，Ｈａｉｎａｎ　 ３３ Ａ８２ 广西扶绥Ｆｕｓｕｉ，Ｇｕａｎｇｘｉ
２ Ａ３ 海南定安Ｄｉｎｇ’ａｎ，Ｈａｉｎａｎ　 ３４ Ａ８３ 福建厦门Ｘｉａｍｅｎ，Ｆｕｊｉａｎ
３ Ａ４ 海南定安Ｄｉｎｇ’ａｎ，Ｈａｉｎａｎ　 ３５ Ａ８４ 福建漳浦Ｚｈａｎｇｐｕ，Ｆｕｊｉａｎ
４ Ａ５ 海南儋州Ｄａｎｚｈｏｕ，Ｈａｉｎａｎ　 ３６ Ａ８６ 福建长泰Ｃｈａｎｇｔａｉ，Ｆｕｊｉａｎ
５ Ａ７ 海南白沙Ｂａｉｓｈａ，Ｈａｉｎａｎ　 ３７ Ａ８７ 广西大新Ｄａｘｉｎ，Ｇｕａｎｇｘｉ
６ Ａ１５ 海南琼海Ｑｉｏｎｇｈａｉ，Ｈａｉｎａｎ　 ３８ Ａ８８ 广西扶绥Ｆｕｓｕｉ，Ｇｕａｎｇｘｉ
７ Ａ１６ 海南三亚Ｓａｎｙａ，Ｈａｉｎａｎ　 ３９ Ａ９４ 广西崇左Ｃｈｏｎｇｚｕｏ，Ｇｕａｎｇｘｉ
８ Ａ１９ 海南文昌 Ｗｅｎｃｈａｎｇ，Ｈａｉｎａｎ　 ４０ Ａ９５ 格林纳达Ｇｒｅｎａｄａ
９ Ａ２３ 海南万宁 Ｗａｎｎｉｎｇ，Ｈａｉｎａｎ　 ４１ Ａ９７ 云南腾冲Ｔｅｎｇｃｈｏｎｇ，Ｙｕｎｎａｎ
１０ Ａ２５ 广西贵港Ｇｕｉｇａｎｇ，Ｇｕａｎｇｘｉ　 ４２ Ａ９８ 广东怀集 Ｈｕａｉｊｉ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ
１１ Ａ２８ 海南澄迈Ｃｈｅｎｇｍａｉ，Ｈａｉｎａｎ　 ４３ Ａ９９ 广东怀集 Ｈｕａｉｊｉ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ
１２ Ａ３０ 海南琼中Ｑｉｏｎｇｚｈｏｎｇ，Ｈａｉｎａｎ　 ４４ Ａ１００ 广东佛岗Ｆｏｇａｎｇ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ
１３ Ａ３４ 海南乐东Ｌｅｄｏｎｇ，Ｈａｉｎａｎ， ４５ Ａ１０１ 广西桂平Ｇｕｉｐｉｎｇ，Ｇｕａｎｇｘｉ，
１４ Ａ３７ 海南儋州Ｄａｎｚｈｏｕ，Ｈａｉｎａｎ， ４６ Ａ１０２ 海南屯昌Ｔｕｎｃｈａｎｇ，Ｈａｉｎａｎ
１５ Ａ３８ 海南海口 Ｈａｉｋｏｕ，Ｈａｉｎａｎ　 ４７ Ａ１０３ 海南五指山 Ｗｕｚｈｉｓｈａｎ，Ｈａｉｎａｎ
１６ Ａ４１ 云南勐海 Ｍｅｎｇｈａｉ，Ｙｕｎｎａｎ　 ４８ Ａ１０５ 海南昌江Ｃｈａｎｇｊｉａｎｇ，Ｈａｉｎａｎ
１７ Ａ４２ 海南乐东Ｌｅｄｏｎｇ，Ｈａｉｎａｎ　 ４９ Ａ１０６ 广西合浦 Ｈｅｐｕ，Ｇｕａｎｇｘｉ
１８ Ａ４５ 广东英德Ｙｉｎｇｄｅ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ　 ５０ Ａ１０７ 广西合浦 Ｈｅｐｕ，Ｇｕａｎｇｘｉ
１９ Ａ４６ 澳大利亚Ａｕｓｔｒａｌｉａ　 ５１ Ａ１０８ 广西合浦 Ｈｅｐｕ，Ｇｕａｎｇｘｉ
２０ Ａ４７ 云南河口 Ｈｅｋｏｕ，Ｙｕｎｎａｎ　 ５２ Ａ１１１ 广西玉林Ｙｕｌｉｎ，Ｇｕａｎｇｘｉ
２１ Ａ４９ 贵州册亨Ｃｅｈｅｎｇ，Ｇｕｉｚｈｏｕ　 ５３ Ａ１１３ 广东雷州Ｌｅｉｚｈｏｕ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ
２２ Ａ５１ 福建漳浦Ｚｈａｎｇｐｕ，Ｆｕｊｉａｎ　 ５４ Ａ１１４ 海南海口 Ｈａｉｋｏｕ，Ｈａｉｎａｎ
２３ Ａ５２ 广西梧州 Ｗｕｚｈｏｕ，Ｇｕａｎｇｘｉ　 ５５ Ａ１１６ 广东茂名 Ｍａｏｍｉｎｇ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ
２４ Ａ５４ 广东惠州 Ｈｕｉｚｈｏｕ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ　 ５６ Ａ１１８ 广东电白Ｄｉａｎｂａｉ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ
２５ Ａ５７ 福建漳州Ｚｈａｎｇｚｈｏｕ，Ｆｕｊｉａｎ　 ５７ Ａ１２０ 广西玉林Ｙｕｌｉｎ，Ｇｕａｎｇｘｉ
２６ Ａ５８ 广东广州Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ　 ５８ Ａ１２１ 广东雷州Ｌｅｉｚｈｏｕ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ
２７ Ａ５９ 福建南靖Ｎａｎｊｉｎｇ，Ｆｕｊｉａｎ　 ５９ Ａ１２２ 广东徐闻Ｘｕｗｅｎ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ
２８ Ａ６３ 云南芒市 Ｍａｎｇｓｈｉ，Ｙｕｎｎａｎ　 ６０ Ａ１２３ 广东廉江Ｌｉａｎｊｉａｎｇ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ
２９ Ａ６７ 云南芒市 Ｍａｎｇｓｈｉ，Ｙｕｎｎａｎ　 ６１ Ａ１２６ 广东遂溪Ｓｕｉｘｉ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ
３０ Ａ７０ 云南瑞丽Ｒｕｉｌｉ，Ｙｕｎｎａｎ　 ６２ Ａ１３９ 海南琼中Ｑｉｏｎｇｚｈｏｎｇ，Ｈａｉｎａｎ
３１ Ａ７２ 云南瑞丽Ｒｕｉｌｉ，Ｙｕｎｎａｎ　 ６３ Ａ１４０ 广西上思Ｓｈａｎｇｓｉ，Ｇｕａｎｇｘｉ
３２ Ａ８１ 福建长泰Ｃｈａｎｇｔａｉ，Ｆｕｊｉａｎ　 ６４ Ａ１４１ 海南五指山 Ｗｕｚｈｉｓｈａｎ，Ｈａｉｎａｎ
数范围为０．４６～０．９９。遗传相似系数最高的是来自
广西合浦的Ａ１０７和Ａ１０８品系，相似系数为０．９９，表
示亲缘关系最近；亲缘关系最远的是来自广东惠州的
Ａ５４品系和广东遂溪的 Ａ１２６品系，其遗传相似系数
为０．４６，表明这些种质具有比较高的遗传多样性。
２．３　ＩＳＳＲ标记的聚类分析
用ＵＰＧＭＡ法对６４份地毯草材料进行聚类分析
（图２），从绘出的树状聚类图可以看出，在遗传相似系
数０．７４处，将６４份地毯草种质材料分为３类：第Ⅰ类
由２５个材料组成，分别来自海南（Ａ２、Ａ３、Ａ４、Ａ５、
Ａ７、Ａ１５、Ａ１６、Ａ３７、Ａ３０、Ａ３８、Ａ１０２、Ａ１４１）、福建
（Ａ５７、Ａ５９、Ａ８１、Ａ８３、Ａ８４）、广东（Ａ４５、Ａ５８、Ａ９９）、
广西（Ａ８２）、云南（Ａ４７、Ａ６３）、贵州（Ａ４９）和澳大利亚
（Ａ４６）；第Ⅱ类也包括２５个材料，分别来自海南（Ａ１９、
Ａ１１４、Ａ１３９、Ａ１０５）、福建（Ａ５１）、广东（Ａ９８、Ａ１１３、
Ａ１１８、Ａ１１６、Ａ１２１、Ａ１２３、Ａ１２２、Ａ１２６、Ａ１００）、广西
０１６
第４期 廖丽　等：地毯草种质资源ＩＳＳＲ标记遗传多样性分析
ｈｔｔｐ：／／ｃｙｋｘ．ｌｚｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
表２　ＩＳＳＲ分析所用的引物序列和扩增结果
Ｔａｂｌｅ　２　Ｐｒｉｍｅｒ　ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ　ａｎｄ　ａｍｐｌｉｆｉｅｄ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　ＩＳＳＲ　ａｎａｌｙｓｉｓ
引物名称
Ｐｒｉｍｅｒ
引物序列
Ｐｒｉｍｅｒ
ｓｅｑｕｅｎｃｅ
（５’－３’）
退火温度
Ａｎｎｅａｌｉｎｇ
ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ／
℃
扩增条带总数
Ｔｏｔａｌ　ｎｕｍｂｅｒ
ｏｆ　ｂａｎｄｓ
多态性条带数
Ｎｕｍｂｅｒ　ｏｆ
ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ
ｂａｎｄｓ
多态性比率
Ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ　ｏｆ
ｐｏｌｙｍｏｒｐｂｉｃ
ｂａｎｄｓ／％
ＩＳＳＲ８０７ （ＡＧ）８Ｔ ５２　 ９　 ９　 １００．００
ＩＳＳＲ８０９ （ＡＧ）８Ｇ ５２　 １１　 １０　 ９０．９１
ＩＳＳＲ８１１ （ＧＡ）８Ｃ ５２　 １５　 １５　 １００．００
ＩＳＳＲ８１５ （ＣＴ）８Ｇ ５２　 ４　 ４　 １００．００
ＩＳＳＲ８１６ （ＣＡ）８Ｔ ５２　 ６　 ６　 １００．００
ＩＳＳＲ８２３ （ＴＣ）８Ｃ ５２　 ５　 ４　 ８０．００
ＩＳＳＲ８２４ （ＴＣ）８Ｇ ５２　 ６　 ５　 ８３．３３
ＩＳＳＲ８２５ （ＡＣ）８Ｔ ５２　 ９　 ８　 ８８．８９
ＩＳＳＲ８２６ （ＡＣ）８Ｃ ５２　 ６　 ５　 ８３．００
ＩＳＳＲ８２７ （ＡＣ）８Ｇ ５２　 ７　 ５　 ７１．００
ＩＳＳＲ８３６ （ＡＧ）８ＹＡ　 ５２　 ７　 ７　 １００．００
ＩＳＳＲ８４０ （ＧＡ）８ＹＴ　 ５２　 ７　 ７　 １００．００
ＩＳＳＲ８４４ （ＣＴ）８ＲＣ　 ５２　 ６　 ６　 １００．００
ＩＳＳＲ８５１ （ＧＴ）８ＹＧ　 ５２　 ６　 ５　 ８３．３３
ＩＳＳＲ８５５ （ＡＣ）８ＹＴ　 ５５　 １５　 １４　 ９３．３３
ＩＳＳＲ８５６ （ＡＣ）８ＹＡ　 ５５　 １１　 １１　 １００．００
ＩＳＳＲ８５７ （ＡＣ）８ＹＧ　 ５５　 １２　 １１　 ９１．６７
ＩＳＳＲ８５９ （ＴＧ）８ＲＣ　 ５５　 ７　 ７　 １００．００
ＩＳＳＲ８６０ （ＴＧ）８ＲＡ　 ５５　 ６　 ４　 ６６．６７
ＩＳＳＲ８７３ （ＧＡＣＡ）４　 ５５　 １４　 １４　 １００．００
ＩＳＳＲ８７８ （ＧＧＡＴ）４　 ５５　 ４　 ４　 １００．００
ＩＳＳＲ８８０ （ＧＧＡＧＡ）３　 ５５　 ６　 ６　 １００．００
ＩＳＳＲ８８８ ＢＤＢ（ＣＡ）７　 ５５　 ９　 ９　 １００．００
ＩＳＳＲ８９５ ＡＧＡＧＴＴＧＧＴＡＧＣＴＣＴＴＧＡＴＣ　 ５５　 １１　 １１　 １００．００
ＩＳＳＲ８９９ ＣＡＴＧＧＴＧＴＴＧＧＴＣＡＴＴＧＴＴＣＣ　 ５５　 ９　 ９　 １００．００
合计Ｔｏｔａｌ　 ２０８　 １９６　 ９４．２３
平均Ａｖｅｒａｇｅ　 ８．３２　 ７．８４　 ９４．２３
（Ａ９４、Ａ１０１、Ａ１０６、Ａ１０７、Ａ１０８、Ａ１１１、Ａ１２０、Ａ１４０）
和云南（Ａ７２、Ａ９７、Ａ９５）；第Ⅲ类包括１４份种质，分别
来自海南（Ａ２３、Ａ２８、Ａ３４、Ａ４２、Ａ１０３）、广东（Ａ５４）、
广西（Ａ５２、Ａ８７、Ａ８８、Ａ２５）、云南（Ａ４１、Ａ６３、Ａ６７、
Ａ７０）和福建（Ａ８６），从聚类结果来看，来自相同采集
地区的材料并没有完全聚在一类，供试材料间出现较
大的遗传差异。
３　讨论与结论
由于ＩＳＳＲ标记具有较好的稳定性和多态性［１３］。
ＩＳＳＲ标记在研究植物遗传多样性方面被认为是一种
非常有效的方法并具有很大的应用潜质［１２，２２－２４］。在本
研究中，通过ＩＳＳＲ标记分析了６４份地毯草种质，显
示出了丰富的多态性，这表明ＩＳＳＲ标记用于研究地
毯草遗传多样性的可行性，这与席嘉宾等［１９］对野生地
毯草的研究结果一致。
在本研究中，２５对ＩＳＳＲ引物共获得了１９６条多
态性条带，多态性比率为９４．２３％；席嘉宾等［２］用优化
的ＩＳＳＲ反应体系分析中国野生地毯草种质，得到的
多态性比率为８９．６７％；Ｗａｎｇ等［１６］用ＩＳＳＲ标记分析
狗牙根的遗传多样性，多态性比率为８６．７％，以上结
果都显示了ＩＳＳＲ标记具有丰富的遗传多样性。
１１６
草　业　科　学 第３３卷
ｈｔｔｐ：／／ｃｙｋｘ．ｌｚｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
图１　６４份材料ＤＮＡ用ＩＳＳＲ　８５６引物扩增图谱
Ｆｉｇ．１　ＩＳＳＲ　ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔ　ａｍｐｌｉｆｉｅｄ　ｗｉｔｈ　ｐｒｉｍｅｒ　Ｎｏ．８５６ｉｎ　６４ＤＮＡ　ｏｆ　Ａ．ｃｏｍｐｒｅｓｓｕｓ
图２　６４份地毯草种质的ＩＳＳＲ聚类分析结果
Ｆｉｇ．２　ＵＰＧＭＡ　ｃｌｕｓｔｅｒ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｂａｓｅｄ　ｏｎ　ＩＳＳＲ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ｉｄｅｎｔｉｔｉｅｓ　ａｍｏｎｇ　６４　Ａ．ｃｏｍｐｒｅｓｓｕｓ　ａｃｃｅｓｓｉｏｎｓ
２１６
第４期 廖丽　等：地毯草种质资源ＩＳＳＲ标记遗传多样性分析
ｈｔｔｐ：／／ｃｙｋｘ．ｌｚｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
　　从６４份地毯草的聚类分析结果来看，具有相同或
相近地理来源的材料被聚在了一类，但也有不同来源
的材料被聚在一类。这种现象也出现在其它种类
中［１１，１６－１８，２５］。出现这种现象的原因主要有以下４个方
面：１）有相同地理来源的材料虽然来自相同的环境，但
由于育种材料和选择方向的复杂性，可能会出现遗传
差异比较大的类型，因此，相同地理来源的材料被归入
不同的类群；２）受环境的影响，在长期适应环境的过程
中物种也会出现性状趋同的现象，造成不同性状间的
交叉；３）地毯草属于多倍体［２０］，在决定遗传分化中起
了重要作用［１８］，因此，为了进一步了解不同地毯草种
质间的关系，在本研究的基础上，还需进一步分析地毯
草的倍性，因为倍性分布可能取决于环境的影响，或者
基因型的进化和历史发展［２６－２８］。对狗牙根（Ｃｙｎｏｄｏｎ
ｄａｃｔｙｌｏｎ）［２９］和类地毯草（Ａ．ａｆｆｉｎｉｓ）［１８］遗传多样性
和倍性的研究也得到了类似结果。４）地毯草是多年生
禾本科草和异型杂交繁育体系，也可导致丰富的遗传
变异［１６，１８］，另外，有大的生态隔离也是必要的，例如：
琼州海峡就可导致海南省和其它省份间种质的高变
异，这种地理分布可以显著影响一个物种的遗传多样
性。
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３１６
草　业　科　学 第３３卷
ｈｔｔｐ：／／ｃｙｋｘ．ｌｚｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
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［２２］　Ｐｒｏｖａｎ　Ｊ，Ｐｏｗｅｌ　Ｗ，Ｗａｕｇｈ　Ｒ．Ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｃｕｌｔｉｖａｔｅｄ　ｐｏｔａｔｏ（Ｓｏｌａｎｕｍ　ｔｕｂｅｒｏｓｕｍ）ｕｓｉｎｇ　ｉｎｔｅｒ－ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｉｔｅ　ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ．Ｇｅ－
ｎｏｍｅ，１９９６，３９（４）：７６７－７７９．
［２３］　Ｈｏｄｋｉｎｓｏｎ　Ｔ　Ｒ，Ｃｈａｓｅ　Ｓ　Ａ，Ｒｅｎｖｏｉｚｅ　Ｍ　Ｗ．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ｒｅｓｏｕｒｃｅ　ｃｏｌｅｃｔｉｏｎ　ｆｏｒ　Ｍｉｓｃａｎｔｈｕｓ（Ｓａｃｃｈａｒｉｎａｅ，Ａｎ－
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（ＩＳＳＲ）ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ．Ｐｌａｎｔａ　Ｍｅｄｉｃａ，２００２，６８（１）：６０－６３．
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［２６］　Ｊｏｈｎｓｏｎ　Ｐ　Ｇ，Ｒｉｏｒｄａｎ　Ｔ　Ｐ，Ａｒｕｍｕｇａｎａｔｈａｎ　Ｋ．Ｐｌｏｉｄｙ　ｌｅｖｅｌ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｓ　ｉｎ　ｂｕｆｆａｌｏｇｒａｓｓ　ｃｌｏｎｅｓ　ａｎｄ　ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ．Ｃｒｏｐ　Ｓｃｉ－
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４１６