全 文 ：至刻度，摇匀，即得。
2. 4 标准曲线的绘制 取 2. 2 项下贝母辛贮备液依次精密
稀释 0、1 /8、1 /4、3 /8、1 /2、3 /4 倍，得含量为 0. 56、0. 42、
0. 28、0. 21、0. 14、0. 07 mg /mL 的对照品溶液，每一含量进样
20 μL，按选定的色谱条件进行分析，重复 3 次，记录各峰峰
面积。以对照品含量的自然对数值为横坐标，以峰面积的自
然对数值为纵坐标进行线性回归，结果表明，贝母辛含量在
1. 4 ～ 11. 2 μg与峰面积值呈对数线性关系，回归方程为:Y =
1. 423 2X + 3. 341 8，r = 0. 999 5。
2. 5 精密度试验 取同一供试液连续进样 6 次，结果 RSD
为 1. 96%，表明该方法精密度良好。
2. 6 重复性试验 同批样品，照 2. 3 项下方法制备供试品 5
份，按 2. 1 项下的色谱条件进样检测，结果 RSD = 2. 77%，表
明该方法重复性良好。
2. 7 稳定性试验 取同一供试液于 0、3、5、8、12 h测定贝母
辛含量，RSD为 1. 76%，结果表明贝母辛在 12 h内稳定性良
好。
2. 8 准确度试验 取已知含量的彭泽贝母样品 6 份，各 1. 0
g，精密称定，分成 3 组分别加入相当 0. 8、1. 0、1. 2 倍量贝母
辛的对照品溶液，依 2. 3 项下的操作方法，制备供试液并测
定，计算回收率，得贝母辛的平均回收率为 101. 07%，RSD为
2. 86%。
2. 9 样品含量测定 取彭泽贝母样品 3 份各 2 g，精密称
定，按 2. 3 项下的操作方法制备供试液，以 2. 1 项下的色谱
条件进样分析，计算贝母辛含量为 0. 048 7%(n = 3)，结果见
表 1。
表 1 彭泽贝母中贝母辛的测定结果 (n =3)
样 品 含量 /%
1 0. 048 5
2 0. 048 6
3 0. 049 0
3 讨论
3. 1 生物碱类化合物比较溶于氯仿等极性较弱溶剂，采用
了氯仿作为提取溶剂，可以减少水溶性杂质的提出;但氯仿
的穿透能力较弱，不利于指标成分的溶出，建议在氯仿中加
入醇类作为穿透剂。本实验比较了不同提取溶剂系统、不同
提取方法和提取时间等因素对贝母辛提取效果的影响，结果
表明:氯仿-甲醇(4 ∶ 1)>甲醇 >乙醚 >氯仿;回流法 >超声
法;2 h > 3 h > 4 h > 1 h。提取方法为:精密称取 2 g药材，加
入氨水 4 mL，碱化 1 h，加入混合溶剂氯仿-甲醇(4 ∶ 1)40
mL，80 ℃水浴回流提取 1 次，提取时间 2 h。
3. 2 贝母辛属异甾类生物碱，末端吸收，受流动相干扰，难
于检测。本实验根据文献报道［7］，通过比较研究，调节流动
相 pH值抑制样品组分的解离，调整分离度，确定了彭泽贝母
中贝母辛的最佳流动相为乙腈-0. 03%二乙胺水(36 ∶ 64)。
3. 3 实验对不同药店销售的川贝母和浙贝母中贝母辛的含
量进行了测定，与彭泽贝母中贝母辛的含量做比较，结果市
售川贝母和浙贝母中贝母辛的含量差异较大，但都明显低于
彭泽贝母中贝母辛的含量。
参考文献:
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了哥王中芫花素的提取分离与含量测定
刘丽霞1， 赵 挺2， 陈 扬1， 孙立新1*
(1.沈阳药科大学药学院，辽宁 沈阳 110016;2.辽宁省药物研究院，辽宁 沈阳 110016)
收稿日期:2010-03-28
基金项目:辽宁省教育厅项目(2009A685);沈阳市科技局项目(1091144-9-00)
作者简介:刘丽霞(1983 －)，女，硕士研究生，研究方向:药物分析。
* 通讯作者:孙立新(1967 －)，女(满族)，副教授，主要从事药物分析学研究。Tel:(024)23986365，E-mail:slx04@ 163. com
关键词:了哥王;芫花素;含量测定;高效液相色谱法
摘要:目的:从中药了哥王中分离提取芫花素(Genkwanin)并进行含量测定。方法:采用醇提、溶剂萃取和色谱分离等手
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段分离得到芫花素;采用高效液相色谱法进行含量测定，色谱条件为依利特-C18色谱柱 (200 mm ×4. 6 mm，5 μm)，流动
相为甲醇-水-冰乙酸(65 ∶ 35 ∶ 2，v /v)，检测波长 332 nm，柱温 40 ℃，流速 1. 0 mL /min。结果:芫花素在 0. 8 ～ 32 μg /
mL内线性关系良好(r = 0. 999 8)。芫花素的平均回收率为 99. 8%，RSD为 2. 1%。结论:该方法准确，重复性良好，适用
于了哥王药材的质量控制。
中图分类号:R284. 1 文献标识码:A 文章编号:1001-1528(2010)11-2010-03
了哥王是瑞香科荛花属植物 Wikstroemia indica(L.)C.
A. Mey的根茎，其性苦味寒、微辛、有毒，具有消肿止痛、清热
解毒、化痰散结等作用，临床应用于肺热咳喘、咽喉肿痛、跌
打损伤等，疗效较好，对肝炎、肝硬化、肾炎等有一定作用［1］，
陈扬［2］等进行药理研究证实了哥王具显著抗肿瘤活性。了
哥王药材化学成分复杂，文献报道主要为香豆素类、黄酮类、
木脂素类、皂苷等，其中黄酮类成分有抗菌、抗炎、镇痛等作
用［3-4］。芫花素为黄酮类化合物，目前有关了哥王药材中芫
花素的含量测定未见报道，本实验从药材中分离得到芫花素
并采用高效液相色谱法对其进行含量测定，为了哥王药材质
量标准的建立提供依据。
1 仪器与材料
依利特高效液相色谱仪(大连依利特分析仪器有限公
司)，UV2000Ⅱ紫外可变波长检测器(大连依利特分析仪器
有限公司)，N3000 色谱工作站，QE100 药材粉碎机(浙江省
武义县屹立工具有限公司)，KQ-100 型超声仪(昆山市超声
波仪器有限公司)，TG332A分析天平(湘仪天平仪器厂)。
对照品:芫花素(本实验室自制，HPLC 法测得纯度质量
分数大于 99. 0%)，甲醇、乙腈(色谱纯，山东禹王实业有限
公司禹城化工厂)，水(娃哈哈饮用纯净水)，其余试剂(分析
纯，市售)。
了哥王药材 9 批，均为市售品，由沈阳药科大学孙启时
教授鉴定为瑞香科荛花属植物了哥王［Wikstroemia indica
(L.)C. A. Mey.］。
2 方法与结果
2. 1 芫花素的分离与鉴定
了哥王药材，粉碎，加入 10 倍量 95%乙醇，回流提取 3
次，1. 5 h /次，合并提取液并浓缩，回收溶剂，所得浸膏用适
量水分散，依次用等量石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取，
回收溶剂得相应萃取物浸膏。将了哥王乙酸乙酯萃取物
(146 g)干浸膏与约 2 倍量的硅胶拌样，上样于硅胶柱，氯
仿-甲醇(100 ∶ 0 ～ 0 ∶ 100)梯度洗脱，共合并收集 16 个流
分。将流分 2 再经硅胶柱层析，环己烷-丙酮(100 ∶ 0 ～ 0
∶ 100)梯度洗脱，在环己烷-丙酮(20 ∶ 1)洗脱液中有黄色结
晶析出，收集结晶，再经重结晶，干燥，即得芫花素(25 mg)。
样品的1H-NMR谱数据如下1H-NMR (300 MHz ，DMSO-
d6)δ:3. 84 (3 H，s，-OCH3)，6. 34 (1 H，d，J = 2. 0 Hz，H-
6)，6. 72 (1 H，d，J = 2. 0 Hz ，H-8)，6. 80 (1 H，s，H-3)，
6. 93 (2 H，d，J = 8. 8 Hz，H-3′，5′)，7. 94 (2 H，d，J = 8. 8
Hz，H-2′，6′)，10. 34 (1 H，s，4′-OH)，12. 93 (1 H，s，5-OH);
13C-NMR (75 MHz，DMSO-d6)δ:181. 7 (C-4)，165. 0 (C-
7)，163. 8 (C-2)，161. 0 (C-9)，159. 8 (C-4′)，157. 0 (C-
5)，128. 3 (C-2′，6′)，121. 0 (C-1′)，115. 7 (C-3′，5′)，
109. 5 (C-5)，104. 4 (C-10)，103. 0 (C-3)，97. 9 (C-6)，
92. 6 (C-8)，56. 0 (-OCH3)。该化合物光谱数据与文献
［5］
报道的芫花素光谱数据基本一致，故鉴定该化合物为芫花素
(genkwanin)，化学结构如图 1 所示。
图 1 芫花素结构式
2. 2 HPLC法测定芫花素的含量
2. 2. 1 色谱条件
色谱柱:依利特-C18柱 (200 mm ×4. 6 mm，5 μm);流动
相为甲醇-水-冰乙酸(65 ∶ 35 ∶ 2，v /v);检测波长:332 nm;
柱温:40 ℃;流速:1. 0 mL /min;进样量:20 μL。
2. 2. 2 对照溶液的制备
精密称取芫花素对照品约 5 mg，置于 25 mL 量瓶中，用
甲醇溶解，并稀释至刻度，即得 200. 0 μg /mL 的芫花素对照
品贮备液。
2. 2. 3 供试溶液的制备
取了哥王干燥药材细粉(过 60 目筛)约 3 g，精密称定。
加 90%乙醇 90 mL浸泡 12 h后，超声提取 3 次，每次 0. 5 h。
过滤，合并滤液，减压蒸干，所得浸膏用甲醇溶解并定容于
10 mL量瓶中，摇匀，经 0. 45 μm微孔滤膜得续滤液，即为供
试溶液。
2. 2. 4 色谱系统适用性试验
在 2. 2. 1 项色谱条件下，理论板数按芫花素计，不低于
6 000。芫花素与相邻组分峰的分离度及其拖尾因子均符合
要求。色谱图见图 2。
2. 2. 5 线性关系考察
精密量取芫花素对照品贮备液 0. 1、0. 2、0. 5、1. 0、2. 0、
4. 0 mL至 25 mL量瓶中定容，制成芫花素系列对照溶液，质
量浓度分别为 0. 8、1. 6、4. 0、8. 0、16. 0、32. 0 μg /mL。上述系
列溶液各进样 20 μL，以对照溶液的质量浓度(C，μg /mL)为
横坐标，峰面积(A)为纵坐标，绘制标准曲线，芫花素 A =
1. 480 × 104C － 4. 012 × 103，相关系数 r = 0. 999 8。结果表明
芫花素质量浓度在 0. 8 ～ 32 μg /mL 内与峰面积的线性关系
良好。
2. 2. 6 精密度试验
精密吸取芫花素(8. 0 μg /mL)对照溶液 20 μL，按上述
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图 2 了哥王药材 HPLC图谱
A.标准品 B.样品 1.芫花素
色谱条件连续进样 6 次，记录色谱峰面积，计算芫花素峰面
积的 RSD为 2. 2%，表明仪器精密度良好。
2. 2. 7 稳定性试验
取供试品溶液(NO. 4)，室温放置，分别于 0、2、4、8、12、
16、24 h进样 20 μL，记录色谱峰面积。计算芫花素峰面积的
RSD为 4. 1%。结果表明供试品溶液在室温下 24 h 内较稳
定。
2. 2. 8 重复性试验
称取同一了哥王干燥药材细粉(NO. 6)约 3 g，精密称
定，按供试溶液制备方法，平行制备 6 份供试溶液，进样 20
μL，根据芫花素色谱峰面积，计算芫花素含量的平均值为
28. 37 μg /g，RSD为 3. 4%。结果表明方法的重复性良好。
2. 2. 9 回收率试验
精密称取已知含量的了哥王干燥药材细粉(NO. 4)约
1. 5 g (芫花素含量为 28. 37μg /g)，共 9 份，分别加入低、中、
高 3 个质量浓度的对照品溶液(分别相当于药材原有含量的
50%、100%、150%)，每浓度 3 份，按供试溶液制备方法制备
供试液，分别测定，计算含量，芫花素的平均回收率为
99. 8%，RSD为 2. 1%(n = 9)，结果见表 1。
表 1 回收率试验结果
成分
样品含
量 /μg
对照品加
入量 /μg
测得量
/μg
回收率
/%
平均回收
率 /%
RSD
/%
芫花素 42. 47 21 62. 81 96. 9 99. 8 2. 1
42. 59 21 64. 01 102. 0
42. 53 21 63. 44 99. 6
42. 58 42 85. 27 101. 6
42. 52 42 83. 19 96. 8
42. 57 42 85. 14 101. 4
42. 61 63 106. 8 101. 9
42. 52 63 104. 8 98. 9
42. 54 63 105. 2 99. 5
2. 2. 10 样品测定
精密称取 9 个产地的了哥王干燥药材细粉 3. 0 g，按供
试溶液制备方法制备供试溶液，进样分析后，计算芫花素的
含量，结果见表 2。
3 讨论
3. 1 HPLC 分离分析条件的选择 比较甲醇-水-冰醋酸、乙
表 2 不同产地了哥王药材中芫花素含量(n =3)
NO. 产地 芫花素含量(μg /g) RSD(%)
1 贵州 5. 14 0. 6
2 广西梧州 11. 09 1. 1
3 江西 33. 40 1. 0
4 广州 28. 37 1. 1
5 广西桂林 6. 11 0. 3
6 广西 17. 26 1. 3
7 广东 1 23. 18 0. 5
8 广东 2 34. 02 0. 5
9 沈阳 26. 43 1. 6
腈-水-冰醋酸洗脱系统作为流动相，二者对色谱峰的分离无
明显差异，故选择经济的甲醇系统，比较了磷酸、冰醋酸等酸
改性剂，都抑制了峰形的拖尾现象，但冰醋酸的改善峰形的
效果较好。调整流动相比例，选用甲醇-水-冰醋酸(65 ∶ 35
∶ 2，v /v)时，样品中待测成分分离效果较好。
3. 2 了哥王中芫花素提取条件的优化 比较了回流提取法
和超声提取法，结果回流提取 3 次，每次 2 h 与超声提取 3
次，每次 0. 5 h，二者提取含量接近，因此采用方便省时的超
声提取法。比较了甲醇、无水乙醇作提取溶剂，二者提取率
相近，故选用毒性小的无水乙醇，又比较了体积分数为 50%、
70%、90%乙醇，选择提取率高的 90%乙醇。
3. 3 实验结果表明，不同产地了哥王中芫花素含量差别明
显，其中江西和广东产地的了哥王中芫花素含量较高，而贵
州、广西和桂林产地的偏低，可能与药材产地的地理环境差
异有关，东南地区的产量较高，西南地区产量偏低。
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