全 文 ：檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶
黄碱斑点清晰，无干扰。白芍的定性鉴别虽然斑点
大体分开，但还有待进一步改善。麻黄为该制剂的
君药之一，因而选择盐酸麻黄碱含量作为该制剂的
定量指标。通过对提取溶剂、提取时间、溶剂收集量
的考察，同时结合专属性验证，最后建立了盐酸麻黄
碱的定量方法，并规定其最低含量限度。
［参考文献］
［1］ 姚琳，邓康颖，罗佳波． 麻黄总生物碱与麻黄碱镇咳
平喘作用比较研究［J］． 中药药理与临床，2008，24
(2) :18.
［2］ 虞金宝，宋友昕，陆萍，等．洗尔冻洗液薄层鉴别方法
的研究［J］．中国新药杂志，2001，10(9) :680.
［3］ 谢卫锋，高玉珍，陈莉琳． 感冒滴丸质量标准研究
［J］．中成药，2008，30(8) :1171.
［4］ 王宝琴，苏健，韩敏彩，等．麻黄及其制剂中麻黄类生
物碱的含量测定方法研究进展［J］．中国中医药信息
杂志，2004，11(3) :274.
［5］ 陈玉祥． 育英颗粒剂的质量标准研究［J］． 中草药，
2001，32(3) :208.
［6］ 国家药典委员会．中华人民共和国药典．一部［S］．北
京:化学工业出版社，2005:553.
［7］ 洪巧瑜．双龙颗粒药学研究和平喘作用研究［D］．北
京:北京中医药大学，2007.
［8］ 郭东艳，史亚军，宋逍． HPLC测定复方麻黄止咳颗粒
中盐酸麻黄碱的含量［J］． 陕西中医，2005，26
(4) :373.
［责任编辑 仝燕］
［收稿日期］ 20130324(005)
［基金项目］ 辽宁省科技厅项目(2011412004) ;辽宁省高校创新团队支持计划项目(LT 2012018)
［第一作者］ 卢雪飞，在读硕士，从事中药质量控制研究，Tel:18040014983，E-mail:zylxf2010@ 163. com
［通讯作者］ * 孙立新，教授，博士，博士生导师，从事药物分析研究，Tel:024-23986365，E-mail:slx04@ 163. com
HPLC同时测定了哥王中 4 种香豆素的含量
卢雪飞1，2，邓振雪1，魏岚1，佟立今1，孙立新1*
( 1. 沈阳药科大学药学院，沈阳 110016; 2. 沈阳药科大学中药学院，沈阳 110016)
［摘要］ 目的:建立 HPLC同时测定了哥王中伞形花内酯、西瑞香素-7-O-β-D-葡萄糖苷、triumbelletin、西瑞香素含量的方
法。方法:采用依利特 Hypersil-ODS 色谱柱(4. 6 mm × 200 mm，5 μm) ，流动相乙腈-0. 1%磷酸水溶液梯度洗脱，检测波长
345 nm，流速 1. 0 mL·min －1，柱温 30 ℃，进样量 20 μL。比较 9 个产地了哥王中 4 种香豆素含量的差异。结果:伞形花内酯、
西瑞香素-7-O-β-D-葡萄糖苷、triumbelletin、西瑞香素线性范围分别为 0. 070 ～ 0. 770(r = 0. 999 9) ，0. 190 ～ 2. 09(r = 0. 999 9) ，
0. 765 ～ 8. 42(r = 0. 999 8) ，4. 08 ～ 44. 9 mg·L －1(r = 0. 999 9) ，平均回收率分别为 98. 0%(ＲSD 1. 9%) ，96. 6%(ＲSD 1. 2%) ，
96. 5%(ＲSD 1. 7%) ，101. 3%(ＲSD 1. 1%)。不同产地了哥王中 triumbelletin和西瑞香素含量明显高于伞型花内酯和西瑞香
素-7-O-β-D-葡萄糖苷，伞形花内酯和西瑞香素含量差异较小，西瑞香素-7-O-β-D-葡萄糖苷和 triumbelletin 含量差异较大，其中
云南产地 2 的西瑞香素-7-O-β-D-葡萄糖苷含量最高，四川产地的含量最低;江西产地的 triumbelletin含量最高，云南产地 1、广
西产地 3 和贵州产地均未测到 triumbelletin。结论:该方法简便、快速、准确，可作为了哥王药材的质量控制方法。
［关键词］ 了哥王;高效液相色谱;伞形花内酯;西瑞香素-7-O-β-D-葡萄糖苷;triumbelletin;西瑞香素;含量测定
［中图分类号］ Ｒ284. 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2013)20-0042-04
［doi］ 10． 11653 /syfj2013200042
Simultaneous Determination of Four Coumarins
in Wikstroemia indica by HPLC
LU Xue-fei1，2，DENG Zhen-xue1，WEI Lan1，TONG Li-jin1，SUN Li-xin1*
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第 19 卷第 20 期
2013 年 10 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 19，No． 20
Oct．，2013
(1. School of Pharmacy，Shenyang Pharmaceutical University，Shenyang 110016，China;
2. School of Traditional Chinese Medicine，Shenyang Pharmaceutical University，Shenyang 110016，China)
［Abstract］ Objective:To establish a reversed-phase high performance liquid chromatographic method for
simultaneous determination of 4 coumarins (umbelliferone，daphnoretin-7-O-β-D-glucoside， triumbelletin and
daphnoretin)in Wikstroemia indica． Method:Chromatographic separation was performed on an Elite Hypersil-
ODS column (4. 6 mm ×200 mm，5 μm)with a gradient elution of acetonitrile-0. 1% phosphoric acid aqueous
solution as mobile phase，UV detection wavelength was set at 345 nm，flow rate was 1. 0 mL·min －1，column
temperature was maintained at 30 ℃ and injection volumn was 20 μL． Difference of four coumarins in W． indica
from nine regions was compared． Ｒesult:All the standard compounds showed a good linearity in the range of
0. 070-0. 770 (r = 0. 999 9) ，0. 190-2. 09 (r = 0. 999 9) ，0. 765-8. 42 (r = 0. 999 8) ，4. 08-44. 9 mg·L －1
(r = 0. 999 9)for umbelliferone，daphnoretin-7-O-β-D-glucoside， triumbelletin and daphnoretin， respectively．
Under these conditions， the average recoveries of these four coumarins were 98. 0%，96. 6%，96. 5%，
101. 3%，respectively and ＲSD were 1. 9%，1. 2%，1. 7%，1. 1%，respectively． Contents of triumbelletin and
daphnoretin were significantly higher than umbelliferone and daphnoretin-7-O-β-D-glucoside in W． indica from nine
regions，difference between umbelliferone and daphnoretin was small，but difference between daphnoretin-7-O-β-
D-glucoside and triumbelletin was big，the content of daphnoretin-7-O-β-D-glucoside was highest from Yunnan
region2，Sichuan region was the lowest;The content of triumbelletin was highest from Jiangxi origin，but this
ingredient was not detected from Yunnan region1，Guangxi origin3 and Guizhou origin． Conclusion:This
developed method was accurate，sensitive and reproducible，it could be successfully applied to quality control of
W． indica．
［Key words］ Wikstroemia indica;HPLC;umbelliferone;daphnoretin-7-O-β-D-glucoside;triumbelletin;
daphnoretin;content determination
了哥王始载于《岭南采药录》，盛产于广东、浙
江、广西等地，具有清热解毒、消肿散结、止痛等功
效［1-2］。药理研究证实了哥王具有显著抗肿瘤活
性［3-4］，其主要化学成分包括香豆素类、黄酮类、木
脂素类等。目前，了哥王中西瑞香素［5］、伞形花内
酯［6］、挥发油类成分［7］、微量元素［8］的含量测定已
见发表，但尚未见对了哥王中西瑞香素-7-O-β-D-葡
萄糖苷和 triumbelletin 含量测定的报道。本实验拟
建立 HPLC同时测定了哥王中 4 种香豆素的含量，
并比较不同产地了哥王中 4 种成分的含量差异，为
其质量评价提供依据。
1 材料
LC-20A型高效液相色谱仪(日本岛津，包括
LC-20AT二元泵，SPD-20A 型紫外-可见检测器，LC
solution工作站) ，QE100 型药材粉碎机(浙江省武义
县屹立工具有限公司) ，TG332A 型分析天平(湖南
长沙湘仪天平仪器厂)。伞形花内酯对照品(天津
马克生物技术有限公司，批号 20120308，纯度 ＞
99%) ，西瑞香素-7-O-β-D-葡萄糖苷、triumbelletin、
西瑞香素对照品(自制，经波谱分析鉴定结构，HPLC
测得纯度 ＞ 98. 5%) ，甲醇、乙腈为色谱纯，水为娃
哈哈纯净水，其余试剂均为市售分析纯。9 批了哥
王药材分别购于云南、广西、四川等地，由沈阳药科
大学孙启时教授鉴定为瑞香科荛花属植物了哥王
Wikstroemia indica (L．)C． A． Mey．的干燥根。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件及系统适用性试验 依利特
Hypersil-ODS色谱柱(4. 6 mm × 200 mm，5 μm) ，流
动相乙腈(A)-0. 1%磷酸水溶液(B)梯度洗脱(0 ～
5 min，18% A;6 ～ 20 min，20% A;23 ～ 33 min，30%
A;34 ～ 39 min，50% A;41 ～ 45 min，18% A) ，流速
1. 0 mL·min －1，检测波长345 nm，柱温 30 ℃，进样量
20 μL。在上述色谱条件下，伞形花内酯、西瑞香素-
7-O-β-D-葡萄糖苷、triumbelletin、西瑞香素的理论塔
板数均 ＞ 3 000，与相邻峰间的分离度均 ＞ 1. 5，色谱
峰对称因子均在 0. 95 ～ 1. 05，见图 1。
2. 2 溶液的制备
2. 2. 1 对照品溶液 取伞型花内酯、西瑞香素-7-
O-β-D-葡萄糖苷、triumbelletin、西瑞香素对照品适
量，精密称定，分别置于 25，100，25，25 mL 量瓶中，
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卢雪飞，等:HPLC同时测定了哥王中 4 种香豆素的含量
A．对照品;B．供试品;1. 伞形花内酯;
2. 西瑞香素-7-O-β-D-葡萄糖苷;3. triumbelletin;4. 西瑞香素
图 1 了哥王 HPLC
用 80%甲醇水溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，制成
质量浓度分别为 70. 00，15. 80，85. 0，204. 2 mg·L －1
的对照品储备液。分别精密量取上述对照品储备液
0. 50，6. 0，4. 5，10 mL置于 25 mL量瓶中，用 80%甲
醇水溶液稀释至刻度，摇匀，制成质量浓度分别为
1. 400，3. 792，15. 30，81. 68 mg·L －1的混合对照品储
备液。
2. 2. 2 供试品溶液 取了哥王干燥药材细粉(60
目筛)约 0. 7 g，精密称定，置 50 mL 具塞锥形瓶中，
精密加入 80%甲醇水溶液 30 mL，密塞，精密称定质
量，超声处理 45 min，放冷，称定质量，用提取溶剂补
足失重，摇匀，用 0. 45 μm 微孔滤膜滤过，取续滤
液，即得。
2. 3 线性关系考察 分别精密量取混合对照品储
备液 0. 5，1. 5，2. 5，3. 5，4. 5，5. 5 mL 于 10 mL 量瓶
中，用 80%甲醇水溶液稀释至刻度，摇匀，得系列混
合对照品溶液，按 2. 1 项下色谱条件进样测定，以质
量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，得伞型花内酯、
西瑞香素-7-O-β-D-葡萄糖苷、triumbelletin、西瑞香
素的回归方程分别为 Y = 8. 348 × 104X － 3. 292 ×
102(r = 0. 999 9) ，Y = 7. 291 × 104X － 2. 776 × 103
(r = 0. 999 9) ，Y = 7. 203 × 104X + 2. 899 × 102(r =
0. 999 8)，Y =8. 024 ×104X －1. 620 ×104(r =0. 999 9)，
线性范围分别为 0. 070 ～ 0. 770，0. 190 ～ 2. 09，
0. 765 ～ 8. 42，4. 08 ～ 44. 9 mg·L －1。
2. 4 检测限与定量限的确定 分别将伞型花内酯、
西瑞香素-7-O-β-D-葡萄糖苷、triumbelletin、西瑞香
素对照品溶液稀释成不同质量浓度进行 HPLC 分
析，测得检测限(S /N = 3)分别为 3. 5，7. 9，8. 5，
4. 1 μg·L －1，定量限(S /N = 10)分别为 7. 0，15. 8，
21. 3，10. 2 μg·L －1。
2. 5 精密度试验 精密吸取同一混合对照品溶液
20 μL，按 2. 1 项下色谱条件连续进样 6 次，计算伞
型 花 内 酯、西 瑞 香 素-7-O-β-D-葡 萄 糖 苷、
triumbelletin、西瑞香素峰面积的 ＲSD分别为 0. 88%，
0. 56%，1. 1%，0. 31%，表明仪器精密度良好。
2. 6 稳定性试验 取供试品溶液，室温下放置，分
别于 0，2，4，6，8，10，12，24 h 进样测定，结果伞型花
内酯、西瑞香素-7-O-β-D-葡萄糖苷、triumbelletin、西
瑞香素峰面积的 ＲSD 分别为 1. 9%，2. 3%，1. 9%，
1. 8%，表明供试品溶液于室温 24 h内稳定。
2. 7 重复性试验 取同一批次的了哥王细粉适量，
按 2. 2. 2 项下方法平行制备供试品溶液 6 份，按 2. 1
项下色谱条件测定，测得伞型花内酯、西瑞香素-7-
O-β-D-葡萄糖苷、triumbelletin、西瑞香素的平均质量
分数分别为 0. 011，0. 044，0. 272，1. 26 mg·g －1，ＲSD
分别为 1. 3%，1. 5%，1. 2%，1. 3%，表明该方法重
复性良好。
2. 8 加样回收率试验 取已知含量的同批次了哥
王细粉约 0. 35 g(伞型花内酯、西瑞香素-7-O-β-D-
葡萄糖苷、triumbelletin、西瑞香素平均质量分数分
别为 0. 011，0. 044，0. 272，1. 26 mg·g －1) ，共 9 份，精
密称定，分别加入低、中、高 3 个质量浓度的对照品
溶液(分别相当于药材原有含量的 80%，100%，
120%) ，每一质量浓度取 3 份，按 2. 2. 2 项下方法制
备供试品溶液，测定，记录色谱图，计算回收率，结果
平均 回 收 率 分 别 为 98. 0%，96. 6%，96. 5%，
101. 3%，ＲSD 分别为 1. 9%，1. 2%，1. 7%，1. 1%，
表明该方法准确度良好。
2. 9 样品测定 取 9 个产地的了哥王干燥细粉约
0. 7 g，精密称定，分别按 2. 2. 2 项下方法平行制备
供试品溶液 3 份，测定，计算伞型花内酯、西瑞香素-
7-O-β-D-葡萄糖苷、triumbelletin、西瑞香素含量，结
果见表 1。表明了哥王中 triumbelletin 和西瑞香素
含量明显高于伞型花内酯和西瑞香素-7-O-β-D-葡
萄糖苷;不同产地的了哥王中伞形花内酯和西瑞香
素含量差异较小，而西瑞香素-7-O-β-D-葡萄糖苷和
triumbelletin含量差异较大，其中云南产地 2 的西瑞
香素-7-O-β-D-葡萄糖苷含量最高，四川产地的含量
最低;江西产地的 triumbelletin 含量最高，而云南产
地 1、广 西 产 地 3 和 贵 州 产 地 均 未 测 到
triumbelletin。
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中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 19，No． 20
Oct．，2013
表 1 不同产地了哥王中 4 种香豆素的含量测定(n = 3)
No． 药材产地
伞形花内酯 西瑞香素-7-O-β-D-葡萄糖苷 triumbelletin 西瑞香素
平均含量
/μg·g － 1
ＲSD
/%
平均含量
/μg·g － 1
ＲSD
/%
平均含量
/μg·g － 1
ＲSD
/%
平均含量
/μg·g － 1
ＲSD
/%
1 云南 1 5. 843 1. 8 23. 37 1. 8 － 1. 7 889. 0 1. 5
2 云南 2 15. 55 1. 9 235. 3 1. 7 169. 3 1. 6 1516 1. 5
3 广西 1 10. 80 1. 6 44. 00 2. 0 272. 0 0. 6 1260 1. 4
4 广西 2 6. 197 2. 0 67. 79 1. 7 351. 7 1. 2 1572 0. 7
5 广西 3 10. 28 1. 2 183. 8 1. 7 － 2. 2 1462 1. 7
6 四川 6. 528 0. 7 22. 40 1. 1 170. 8 2. 1 744. 4 1. 9
7 江西 9. 547 0. 8 38. 60 1. 0 426. 7 0. 8 1058 0. 9
8 湖南 11. 26 2. 0 25. 60 1. 7 234. 6 1. 3 1476 1. 6
9 贵州 16. 85 2. 0 35. 50 1. 2 － 1. 8 1729 1. 9
注:“ －”表示未检出。
3 讨论
分别取适宜质量浓度的 4 种香豆素对照品溶液
在 200 ～ 400 nm处进行紫外扫描，结果在 345 nm处
4 种香豆素均存在较大紫外吸收，进行 HPLC 检测
时，该波长下干扰小，待测组分达到基线分离，重复
性良好，故选择检测波长 345 nm。
预试验考察了甲醇-水、乙腈-水、甲醇-0. 1%磷
酸水溶液、乙腈-0. 1%磷酸水溶液、乙腈-0. 1%冰醋
酸水溶液等流动相系统，结果显示以乙腈-0. 1%磷
酸水溶液为流动相时分离度及峰形均能达到较好效
果，同时在流动相中加入四氢呋喃并未明显改善分
离效果，故确定以乙腈-0. 1%磷酸水溶液为流动相
系统进行梯度洗脱。
分别选择无水乙醇及体积分数为 25%，50%，
75%，80%，90%，100%的甲醇为提取溶剂，采用超
声法提取了哥王中 4 种香豆素成分，结果表明乙醇
提取物的色谱峰干扰较严重，故不予采用;80%甲醇
提取物中待测成分的含量均较高。以 80%甲醇为
提取溶剂比较加热回流法和超声法，结果超声法的
提取率较高。以 80%甲醇为提取溶剂，超声处理
30，45，60 min，结果表明超声 45 min 时样品中待测
成分已基本提取完全。
与参考文献中数据进行对比［6，9］，了哥王中伞
形花内酯和西瑞香素平均质量分数分别约降低了
10，3 倍，原因可能与药材的产地、生长环境等因素
有关。
［参考文献］
［1］ 张庆荣，夏光成．有毒中草药彩色图鉴［M］．天津:天
津科技翻译出版公司，2006:131.
［2］ 谢宗万．全国中草药汇编．上册［M］． 2 版．北京:人民
卫生出版杜，1996:10.
［3］ 陈扬，李艳春，马恩龙，等．了哥王抗肿瘤活性部位筛
选［J］．中华中医药学刊，2008，26(11) :2520.
［4］ 陈扬，孙立新．中药了哥王研究进展［J］．沈阳药科大
学学报，2009，26(7) :587.
［5］ 李艳敏，姜建国，曾治平． 了哥王中西瑞香素含量的
HPLC法测定［J］．现代食品科技，2009，25(5) :563.
［6］ 刘丽霞，赵挺，孙立新． HPLC法测定中药了哥王中伞
形花内酯的含量［J］． 沈阳药科大学学报，2010，27
(7) :563.
［7］ 梁勇，林德球，郭宝江，等．了哥王挥发油的化学成分
分析［J］．精细化工，2005，22(5) :357.
［8］ 熊友香，尤志勉，卢智玲，等．不同产地了哥王药材中
微量元素含量测定［J］． 江西中医药，2009，40
(3) :54.
［9］ 熊友香，王显武，尤志勉，等． HPLC 测定不同产地了
哥王药材中西瑞香素含量［J］．中成药，2009，31(8) :
附 18.
［责任编辑 仝燕］
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