全 文 ：植 物检凌 Z H IW U J IAN Y I 19 89, 3 ( 6)
国外鸡蛋果新病毒病研究进展 ’
郑冠标
〔华南农业大学植保系)
黄鸡蛋果 (又名金鸡蛋果 、 百香果 )
尸协韶必匆 。 du 肠 is m s . .f 加v ica 护aP 一D eg . 是
近士多年来拉丁美洲 (巴西 、 哥伦比亚 、
秘鲁等国 ) 、 亚洲 (马来西亚 、 印尼 、 印
度 、 台湾省 、 福建省等 ) 及大洋洲 (澳大
利亚 、 新西兰 ) 迅速发展的水果作物之
一 80 年代初 , 在巴西 B a h ia 州爆发了鸡
蛋果木质病毒病后 , 巴西和秘鲁等国开展
了鸡蛋果病毒病的系统调查 。 现在世界各
栽培国的鸡蛋果病毒病以木质化病毒病及
CM V 引起的花叶病为主 , 且分布普遍 。
19 86 年巴西报道了属芜脊黄花叶病毒组的
一个新病毒所致的病害 , 命名为鸡蛋果黄
色花叶病毒 ( p a s s i o n fr u i t y e l l o w m o s a ic
vi ur s
. 简称 PY M v) 。 19 87 年秘鲁报道 了
属于烟草花叶病毒组的一种新病毒病 , 建
议命名为鸡蛋果花叶病毒 (M a ar c uj a (西
班牙语 ) m o s a ie vi usr , 简称 M rM V ) 。 以
下简介这两种新报道的病毒的特点 :
一 、 卜鸡蛋果黄色花叶病毒
( P YM V )
症状 接种叶不表现症状 。 幼苗嫩叶
上 先出现不清楚的明脉 , 后变为叶脉黄
化 , 成为典型的黄色网状 , 后引起黄色斑
块 。 病害后期厂黄斑块融合 , 只在沿主脉
处留下几个绿区 , 褪绿区会变成白化 。 这
些症状伴随有轻微的叶卷缩 . 机械传播率
约 90% 。
寄主 「范围 在约 10 0 个供试植物种和
品种 中 , 只有西番莲属 5 种植物能感染
PY M V
。 它们是紫鸡蛋果 P沼幽念 , 黄鸡
蛋果 , 西番莲 p . cae ur lea , .P se r ar ot 一
ids iat at 及 P一姗物ar ` pp . 有一些品种如
c h价 e 一 d e 一 ve ad 。 和 M a ar cuj a 一 d。 一
M at 。 ( 尸次姑梦勿尸。 sp p .) 只能 靠嫁 接 侵
染 。
种子带毒问颐 用 60 粒种子发芽 , 全
部幼苗均无症状表现 。 用血清也未检测出
有 PY M V 的存在 。
昆虫传播 桃蚜 、 棉蚜 、 蚕豆蚜 、 桔
二岔蚜 、 菜蚜及长管蚜六种蚜虫均不能传
播 PY M V 。 只有鸡蛋果叶 甲 D iab r ot ic a
聊 c io sa 可 传播 此 病 毒 . 但 叶 甲 .D
b i
v it t u la 及豆叶甲 山 r口勿脚口 召尹` “ 口at 拒食
鸡蛋果叶片 , 故在自然界不是传病介体 。
物理特性 在 50 ℃下加热 10 分钟仍
有致病力 , 5 ℃ 10 分钟失活 ; 稀释终点
10礴 , 在室温下保存 8 天仍有活力 , 再长
时间未测定 。 在 4℃冰箱内保存 60 天的病
叶 , 仍有致病力 . 在真空下用硅胶保存于
一 20℃的冰箱 内 , 其侵染力可持续到 180
日 。
提纯及血清学 ’ P Y M v 提纯制命中的
产量是 6 一 s m g / 100 9 叶片组织 。 以
T M V 粒子直径为标准 ( 18 n m ) , 电镜检
查提纯病毒 , 分别量度 P Y M V 及 T M V 粒
子各 100 个 , P Y M V 粒子直径为 28 n m ,
此病毒 功% ~ 30 % 的粒子为 负染 剂
( 1% 钨硅酸钠 ) 所穿透 。 P Y M V 的两种
类型粒子可藉蔗糖密度梯度离心而区分为
两条带 二 顶部带于 1 . 3 cm 处 , 底部带在
.2 4 cm 处
。 它们相应的沉淀系数各为 62 5
(顶 ) 和 12 6 5 (底 ) . 顶带组分十分均
一礴 65一
植物检疚 Z H IW U J IA N Y I 19 8 9 , 3 ( 6 )
一 , 含有的粒子大部分为染色剂所穿透 ,
无侵染力 。 底带组分含有的大部分粒子不
为染料所穿透 (但亦有 2% 一 4% 粒子被
穿透 ) , 具侵染力 。
已制备出具高度专化的抗血清 , 用琼
脂双扩散法测定其效价为 卜 20 48 。 与健
株汁液无任何反应 。
在琼脂双扩散中用 P Y M V 与隶属于
10 个组的 31 种等轴球状的植物病毒抗血
清进行测试 , 结果只与 6 种病毒的抗血清
有 阳性 反 应 。 即 O M V ( o kr a m o isa e
vi ur s
,
C Y V V ( C il t o ir a ye l o w v e i n
vi r u s )
,
K Y M V ( K七n n ed ya ye l ow m o s a
·
i e vi ur s )
,
D Y M V ( eD sm
o d iu in y e l o w
m o s a i e v iur s )
,
C o Y M V ( C ac
o ye l o w
m o s ia e vi ur s ) 及 T Y M V ( T u mr iP ye l o w
m o s a ie v iur s )
。 这六种病毒均属芜著黄花
叶病毒组 。 P Y M V 与它们之间在所有病毒
一抗血清组合测试中均有刺状物形成 。 在
这 7 种病毒之间进行同源和异源滴定度比
较表 明 , P Y M V 与 O M V 、 C Y V V 及
K Y M V 的 血 缘 关 系 较 `与 D Y M v 、
T Y M V
、
C o Y M V 三种病 毒近 ; P Y M V
与其他芜蔷黄花叶病毒组成员测试结果无
反应 , 这些病毒是 : D u le a m a ar 斑驳病
毒 , 1 茄子花叶病毒 , 颠茄斑驳病毒及玄参
斑驳病毒 。
提纯制品有一条核蛋白的典型紫外光
吸收光谱 , 一顶峰吸收值在 260 mn 处
,
每厘米光程为 8 . 7 (m g / m l) , 这是组分分
开之前的值 , 用以计算提纯制品的病毒浓
度的。
化学分析 从提纯的 P Y M V 制品中
抽提的蛋白质碎片进行聚丙烯凝胶电泳法
测定产生 一条单一的多肤带 , 估计值是
20
.
5 千道尔顿 ( K D a) , 当使用未碎的提
纯制品或顶部或底部组分时其结果是一样
的 。 从病毒粒子中抽提的核酸易于被核糖
核酸酶 一 A ( R N as e 一 A ) 所降解 , 但脱
一4 6吞一~
氧核糖核酸酶却不能降解它 。 用聚丙烯凝
胶电泳测定 YP M v 的分子量约 .2 05 x 10 6千道尔顿 。 」
电镜检查结果 负染 P Y M V 的病叶
浸出液 , 观察到大量的直径约为 30 n m 的
等轴病毒粒子 。 病叶超薄切片检测可见粗
糙园形的病毒粒子 , 直径为 20 一 25 n m ,
散布在液胞腔内 、 有时可以在木质部的导
管内观察到类似的粒子 , 但在核质内未发
现 。
二 、 鸡蛋果花叶病毒是
烟草花叶病毒组的新成员
症状 在黄鸡蛋果病株上表现花叶及
叶卷曲 。
寄主范围 在 9 科 (觅科 、 凤仙花
科 、 黍科认菊科 、 葫芦科 、 唇形科 、 西番
莲科 、 玄参科及茄科 ) 的 27 种植物 。
在紫鸡蛋果 尸公招沙ar e而汤 及烟草
N ico t ia n a b en ht a m i如 a 两种寄主植物上呈
系统花叶。
接种 6科 2 种植物不表现症状 , 回接
到昆诺阿黎上也没有测到病毒 .
接触传播 用烟草 .N ben ht a m比阴 a 病
叶摩擦接种 , 可将 M rM V 传到鸡蛋果健
苗上 ( 6 / 10) 。
物理特性 烟草病汁液在 20 ~ 24 ℃
下贮藏 6 个月 , 仍有致病力 。一 用其接刹1昆
诺阿黎 , 每 1 / 2 叶片上可诱发出 150 个枯
斑 , 但用蒸馏水稀释 10 倍 , 枯斑数可增
加 3 倍 。 这意味着可能有侵染抑制剂存
在 。 加热 到 95 ℃ 失 活 , 稀释 终点 为
10一 , 3。 由于这种反常的高稀释终点 , 曾进
行如下试验 : 用病汁液 1川稀释至 l r 一
10一 12
, 作电镜直接沾取 , 用 2% 磷钨酸钠
p H .7 0 染色 , 直到 10 一10 仍可观察到病毒
粒子 、 ` 这表示 M r M V 是一种侵染性极强
的病毒 , 它在寄主体内浓度很高。
病毒粒子形态学 病毒粒子直杆状 ,
植物检夜 Z HI W UJ I ANY I 19 89 , 3 ( 6)
具有烟草花叶病毒粒子的典型结构 。 在粗
汁液 中正常长度为 30 4 n m , 宽度约 18
n l n
。
受侵染组织的细胞学 在系统感染的
烟草叶片表面上 , 叶片薄壁细胞内及维管
束薄壁细胞内均含大量厚度为 300 n m 的
片状病毒聚集物 。 片状物横切面大于 12
n m
。 只在木质部导管里见到分散的病毒粒
子 . 在受侵染细胞里可发现细胞质电子稠
密的 .圆形或不规则形内含物 , 直径为 1 ~
3 mn
。 在细胞核、 ` 线粒体或微粒体中未发
现病毒诱发的变化 . 病组织叶绿体含有不
正常的大淀粉粒洲
提纯病毒的性质 提纯病毒有一个
A 260 /
’
A 28
。 峰 , .比例为 卜 、1 , 在 260 n m
处消光系数每厘米光程为 .2 4 (m g / m l) `
核酸百分率据计算为 7% . 标记病毒蔗糖
密度梯度离心 , 绪果表明 , 本病毒的沉降
系数为 19 2 5 , SD S 聚丙烯酞胺凝胶电泳显
示两条接近的空间蛋白带分别为 价 .4 和
巧 . 9 千道尔顿 。 用本病毒侵染的烟叶 10 一 7
稀释液接种昆诺蔡 , 经两次单枯斑分离后
获得两个新枯斑 , 、 用这些分离物繁殖和提
纯后 , 每个分离物再次产生 17 .4 和 巧 .9
千道尔顿蛋白质 , 一电印迹免疫侧定表明两
个蛋白质都与同源 、和异像的抗血清起反
应 。
血情学 制,备的 M r M V 抗血清在载
玻片沉淀测试中一同源效价达 1 : 1 . 0 24 。 它
们与同组的其他病毒包括黄瓜绿色斑驳花
叶 ( C G M M v )’ , 齿 兰 环 斑 病 毒
( O R V )
、
T M V 和 B川 n t 等 报 道 从
lU lu cu s 获得的病毒均无反应 。 在低稀释
度下与鸡蛋果花叶病毒 (M r M V ) 发生反
应或根本不与之反应 。 我们观察到鸡蛋果
花叶病毒与黄瓜绿色斑驳花叶病毒、 鸡蛋
果花叶病毒 (F M V ) 、 烟草花叶病毒的一
些反应 , 但不和烟草病毒组的其他病毒起
反应 。 在兔痊电镜修饰测试中 , 黄鸡蛋果花叶病毒只与它的尚渡扰血清起反应 。 用
窄谱抗血清作免疫电镜测试 , 只观察到
M r M V 与 F M V 及 C G M M V 的抗血清起
弱反应 . 而用广谱抗血清时 , M r M V 与
C G M M V 抗血清的异源反应最强 , 与
FM V 及 T M v 抗血清也有反应、 用 O R V
扰血清做免疫电镜未见反应 . . 在电印迹免
疫测试中 , M全M V 的两种衣壳蛋白和
CG M M V
、
O R V
、和 T M V 等烟草病毒组
成员的抗血清有异撅反应 , 与甜菜坏死黄
脉病毒的抗血清无反应 。 与芜普黄花叶病
毒组 、 番 月茄束矮病毒组 _、 豉豆花叶病毒
组 、 线虫体多面体病毒组 、 马铃薯 X 病毒
组 、 马铃薯 Y 病毒组 : 、 香石竹潜病毒组等
供试病毒均无反应 。 , `
结论 M r M V 具有烟草花叶病毒组的
如下典型特性泛 直杆状病毒粒子 , 长度
30 4 n m
, 接触传播 , ` .钝化温度 90 ℃ , · 沉降
系数 1 925 , 衣壳蛋白分子量 . 17 .4 千道尔
顿 。 因此 , 鸡蛋果花叶病毒 (M r M V ) 是
烟草花叶病毒的一个新成员 , 它和这个组
的其他成员只有远缘血清关系 .
参考文献 `
〔 l 〕 0 . A . C r e s腼 i 等 . 1蛇 6 . P a s s i F ha t y e l ow M o s a ic
vi 比s , a N 七w
p hy t o p
a th o 拓g 夕,
T y m o
v川抬 oF 如d 一抽 B ar 滋
76(
9》: , 5 1沁 9 5 5 .
〔2〕 C . E F ir b o u r g , R . K o . n ig a n d D . E . L e se m a叭 .
1 9 8 7
.
A N e w T 0 b am O’ n r u s fr O加 P as s in o r a de u il s 运
PO r 。 尸勺￡。脚 ht o l奄y . 7 0 ): 4 8 6一 49 1.