全 文 ：西北农业学报　２０１３，２２（３）：１５２－１５６
Ａｃｔａ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｅ　Ｂｏｒｅａｌｉ－ｏｃｃｉｄｅｎｔａｌｉｓ　Ｓｉｎｉｃａ
金钱松植物愈伤组织诱导和快速增殖条件研究
＊
王跃华，杨小萍，黄　兴，王　丹，袁　畅，张　珏，王　强
（成都大学 生物产业学院，成都　６１００１６）
摘　要　筛选金钱松产生愈伤组织的最佳外植体和愈伤组织快速增殖的最佳培养条件。以金钱松的叶原基、
芽轴和芽为外植体，从不同激素配比、培养温度和光照时间等方面筛选出金钱松产生愈伤组织的最佳培养条
件。金钱松植物叶原基是产生愈伤组织的最佳外植体，愈伤组织增殖的最佳培养基为 ＭＳ＋６－ＢＡ１．０
ｍｇ·Ｌ－１＋ＮＡＡ０．５ｍｇ·Ｌ－１，最适光照时间为每天１２ｈ，最佳培养温度为２５℃。
关键词　金钱松；外植体；诱导；愈伤组织
中图分类号　Ｓ６４１．３　　　文献标志码　Ａ　　　　　文章编号　１００４－１３８９（２０１３）０３－０１５２－０５
Ｔｈｅ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｏｎ　Ｃａｌｕｓ　Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｒａｐｉｄ
Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｐｓｅｕｄｏｌａｒｉｘ　ａｍａｂｉｌｉｓ
ＷＡＮＧ　Ｙｕｅｈｕａ，ＹＡＮＧ　Ｘｉａｏｐｉｎｇ，ＨＵＡＮＧ　Ｘｉｎｇ，ＷＡＮＧ　Ｄａｎ，ＹＵＡＮ　Ｃｈａｎｇ，
ＺＨＡＮＧ　Ｊｕｅ　ａｎｄ　ＷＡＮＧ　Ｑｉａｎｇ
（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｃｈｅｎｇｄｕ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈｅｎｇｄｕ　６１００１６，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ　Ｔｈｅ　ｏｂｊｅｃｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｉｓ　ｔｏ　ｓｃｒｅｅｎ　ｏｕｔ　ｔｈｅ　ｂｅｓｔ　ｅｘｐｌａｎｔ　ａｎｄ　ｏｐｔｉｍａｌ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ　ｆｏｒ
ｃａｌｕｓ　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｒａｐｉｄ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｆｏｒ　Ｐｓｅｕｄｏｌａｒｉｘ　ａｍａｂｉｌｉｓ．Ｌｅａｆ　ｐｒｉｍｏｒｄｉｕｍ，ｂｕｄ　ａｘｉｓ　ａｎｄ
ｂｕｄｓ　ｏｆ　Ｐｓｅｕｄｏｌａｒｉｘ　ａｍａｂｉｌｉｓ　ｗｅｒｅ　ｓｅｌｅｃｔｅｄ　ａｓ　ｔｈｅ　ｅｘｐｌａｎｔｓ，ｃｏｍｂｉｎｅｄ　ｗｉｔｈ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｈｏｒｍｏｎｅ　ｒａｔｉｏ，
ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ａｎｄ　ｌｉｇｈｔ　ｔｉｍｅ，ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍａｌ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ　ｆｏｒ　ｃａｌｕｓ　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｒａｐｉｄ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ
ｗｅｒｅ　ｓｃｒｅｅｎｅｄ　ｏｕｔ．Ｔｈｅ　ｌｅａｆ　ｐｒｉｍｏｒｄｉｕｍ　ｉｓ　ｔｈｅ　ｂｅｓｔ　ｅｘｐｌａｎｔ　ｆｏｒ　ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ　ｃａｌｕｓ，ｔｈｅ　ｂｅｓｔ　ｍｅｄｉｕｍ　ｆｏｒ
ｃａｌｕｓ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｉｓ　ＭＳ＋６－ＢＡ　１．０ｍｇ·Ｌ－１＋ＮＡＡ　０．５ｍｇ·Ｌ－１，ｔｈｅ　ｂｅｓｔ　ｉｌｕｍｉｎａｔｉｏｎ　ｔｉｍｅ　ｉｓ
１２ｈ·ｄ－１　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍａｌ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｉｓ　２５℃．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ　Ｐｓｅｕｄｏｌａｒｉｘ　ａｍａｂｉｌｉｓ（Ｎｅｌｓｏｎ）Ｒｅｈｄ．；Ｅｘｐｌａｎｔ；Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ；Ｃａｌｕｓ
　　金钱松［Ｐｓｅｕｄｏｌａｒｉｘ　ａｍａｂｉｌｉｓ（Ｎｅｌｓｏｎ）Ｒｅ－
ｈｄ．］是中国特有的古老孑遗松科（Ｐｉｎａｃｅａｅ）树
种［１］。根据世界保护联盟（ＩＵＣＮ）新制定的物种
受威胁的分类系统标准和中国植物红皮书的标
准，金钱松均被定为渐危种，并被列为国家二级保
护植物［２－４］。金钱松不仅是重要的庭园植物，同时
更是一种应用前景广阔的药用植物。金钱松主要
的药用成分是从其树皮和根皮中提取出来的二萜
类化合物土槿酸［５］，它具有抗肿瘤、抗真菌、抗早
孕和使胆囊自截等功效，尤其是抗肿瘤的功效使
得金钱松的药用价值更加凸显。现代药理研究发
现，土槿酸及其衍生物能作用于多种癌细胞并具
有明显的量效关系［６］，它的抗癌机制是通过破坏
肿瘤细胞使其凋亡而实现的［７］，这一研究结果预
示着对金钱松植物中的活性成分开发研究具有十
分重要的意义。
目前，对金钱松植物的研究工作主要集中在
药用成分的分析和药理作用，以及对金钱松植物
的内生真菌等方面的研究［８－１１］；本试验对金钱松
植物愈伤组织诱导和快速增殖进行研究，旨在为
＊ 收稿日期：２０１２－１０－２９　　修回日期：２０１２－１２－１０
基金项目：成都大学重点科技项目（２０１２Ａ２３１）。
第一作者：王跃华，女，教授，研究方向为生物技术。Ｅ－ｍａｉｌ：ｗａｎｇｙａｏｈｕａ８８８＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ．ｃｎ
通信作者：张　珏，副教授，博士，主要从事植物组织培养及植物转基因研究。Ｅ－ｍａｉｌ：ｚｊｈｅｂｅｓｔ＠ｇｍａｉｌ．ｃｏｍ
下一步大规模开展悬浮培养生产金钱松有效组分
提供重要的理论基础。
１　材料与方法
１．１　材 料
试验材料采自四川省成都市植物园，经成都
大学植物鉴定室鉴定为金钱松属（Ｐｓｅｕｄｏｌａｒｉｘ
Ｇｏｒｄ．）植物金钱松。
１．２　方 法
１．２．１　金钱松不同外植体的筛选　选取金钱松
植株上的芽，剥去芽上的芽鳞后放在超净工作台
上，先用ｗ＝０．１％升汞溶液消毒１５ｍｉｎ，菌水洗
涤３次后，并用吸水纸吸干外植体上的水分，最后
将消毒后的芽以及由芽分割的叶原基和芽轴３部
分外植体接入 ＭＳ＋６－ＢＡ　１．０ｍｇ·Ｌ－１＋ＮＡＡ
０．３ｍｇ·Ｌ－１＋ＩＡＡ　０．１ｍｇ·Ｌ－１的愈伤组织诱
导培养基中进行培养。每种外植体接种４０个，培
养４０ｄ统计愈伤组织的诱导率，以上试验重复
３次。
１．２．２　愈伤组织快速增殖的最佳激素配比研究
　选取 ＭＳ培养基为基本培养基，并附加不同质
量浓度的植物激素６－ＢＡ、ＮＡＡ和ＩＡＡ共配制成
９种增殖培养基。选择生长状况良好的愈伤组织
接入不同培养基中，每种培养基接种４０个外植
体，培养４０ｄ统计愈伤组织的增殖情况，以上试
验重复３次。
１．２．３　不同光照时间对愈伤组织增殖生长的影
响　将愈伤组织切成适当大小接入 ＭＳ＋６－ＢＡ
１．０ｍｇ·Ｌ－１＋ＮＡＡ　０．５ｍｇ·Ｌ－１培养基中，分
别放置在无光照、每天光照１２ｈ和每天光照２４ｈ
的条件下，培养４０ｄ统计愈伤组织的增殖情况。
１．２．４　不同培养温度对愈伤组织增殖生长的影
响　将愈伤组织切成适当大小接入 ＭＳ＋６－ＢＡ
１．０ｍｇ·Ｌ－１＋ＮＡＡ０．５ｍｇ·Ｌ－１培养基中，分
别放置在５℃ 、１５℃ 、２５℃和３０℃的培养条件
下，４０ｄ统计愈伤组织在不同温度条件下的增殖
生长情况。
１．２．５　计算公式及数据分析　愈伤组织诱导
率＝产生愈伤组织的外植体数／ 接种外植体
数［１２］，愈伤组织增殖倍数＝（收获量一接种量）／
接种量；用ＳＰＳＳ　１９．０统计学软件进行方差分析，
采用Ｄｕｎｃａｎ’ｓ法进行多重比较；其中Ｐ＜０．０５
为显著差异，Ｐ＜０．０１为极显著差异。
２　结果与分析
２．１　金钱松不同外植体的愈伤组织诱导
选取金钱松植物的３个不同部位外植体接种
到 ＭＳ＋６－ＢＡ　１．０ ｍｇ·Ｌ－１ ＋ ＮＡＡ　０．３
ｍｇ·Ｌ－１ ＋ＩＡＡ　０．１ｍｇ·Ｌ－１培养基上，在培养
４０ｄ后统计各外植体的愈伤组织诱导率，结果
见表１。
　　从表１可以看出，３个不同部位外植体在接
入培养基培养４０ｄ后，都能不同程度地诱导出愈
伤组织，并且相互之间差异极显著（Ｐ＜０．０１），具
有统计学意义；其中以叶原基外植体的愈伤组织
诱导率（９７．４３％±１．４３％）最高，叶原基外植体接
入培养基后６ｄ左右开始膨大，使得包在叶原基
外面的鳞片叶开始裂开，鳞片叶颜色由最初的绿
色逐渐变为褐色，愈伤组织开始产生在叶原基的
基部，随后逐渐向叶原基的上部生长；观察发现叶
原基外植体产生的愈伤组织生长速度快、颜色也
都由最初的浅绿色变为翠绿色（图１）。完整芽外
植体产生愈伤组织的诱导率为（６５．００±１．２５）％；
但芽外植体的启动时间较早，在接入培养基４ｄ
左右就产生明显膨大，使得原本在芽轴上紧密排
列的叶原基变得向四周放射状生长（图２），随后
芽体上产生颜色为翠绿色、质地较疏松的愈伤组
织（图３）。而将芽轴外植体接入培养基后２５ｄ才
可观察到有明显的体积膨大，并随着培养时间的
延长，可观察到在芽轴上表面有质地较紧密、颜色
为淡黄绿色的愈伤组织产生（图４）；但在芽轴的
下部并未观察到有明显的膨大和愈伤组织的产
生，而是随着培养时间的延长，芽轴外植体的颜色
会变为深褐色，培养４０ｄ后统计愈伤组织的诱导
率仅为（３２．７２±１．５２）％。
表１　金钱松不同外植体的愈伤组织诱导率（珔ｘ±ｓ，ｎ＝３）
Ｔａｂｌｅ　１　Ｃａｌｕｓ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｅｘｐｌａｎｔｓ
外植体类型
Ｅｘｐｌａｎｔ　ｔｙｐｅ
启动时间／ｄ
Ｓｔａｒｔ　ｔｉｍｅ
愈伤组织诱导率／％
Ｃａｌｕｓ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｒａｔｅ
叶原基
Ｌｅａｆ　ｐｒｉｍｏｒｄｉａ ６　 ９７．４３±１．４３ａＡ
芽Ｂｕｄ　 ４　 ６５．００±１．２５ｂＢ
芽 轴Ｂｕｄ　ａｘｉｓ　 ２５　 ３２．７２±１．５２ｃＣ
注：培养４０ｄ后统计的结果；同列不同小写字母表示差异显著（Ｐ
＜０．０５），不同大写字母表示差异极显著（Ｐ＜０．０１）［１２］。下表同。
Ｎｏｔｅ：Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ａｒｅ　ｃｏｕｎｔｅｄ　ａｆｔｅｒ　ｃｕｌｔｉｖａｔｉｎｇ　４０ｄａｙｓ；ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ
ｌｏｗｅｒｃａｓｅ　ｌｅｔｔｅｒｓ　ａｎｄ　ｃａｐｉｔａｌ　ｌｅｔｔｅｒｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｓａｍｅ　ｃｏｌｕｍｎ　ｍｅａｎ　ｓｉｇ－
ｎｉｆｉｃａｎｔ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ　ａｔ　Ｐ＜０．０５ａｎｄ　Ｐ＜０．０１ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ［１２］．Ｔｈｅ
ｓａｍｅ　ｂｅｌｏｗ．
·３５１·３期　　　　　　　　　　　王跃华等：金钱松植物愈伤组织诱导和快速增殖条件研究
２．２　不同激素配比对愈伤组织增殖的影响
选取诱导产生的颜色为翠绿色愈伤组织切成
适当的大小，接入不同激素配制的９种培养基中，
培养４０ｄ后统计愈伤组织的增殖情况，结果见
表２。
　　从表２可知，将愈伤组织接入Ａ０未加任何激
素的 ＭＳ培养基（ＣＫ）后，在培养４０ｄ后未见有明
显的愈伤组织增殖，说明植物激素对金钱松愈伤
组织的增殖生长有十分重要的促进作用。
另外，观察６－ＢＡ与ＮＡＡ组合的Ａ１～Ａ４号
培养基和６－ＢＡ与ＩＡＡ组合的Ａ５～Ａ８号培养基
中各愈伤组织的增殖生长情况可以发现，激素
图１　叶原基愈伤组织
Ｆｉｇ．１　Ｃａｌｕｓ　ｆｏｒｍ　ｌｅａｆ　ｐｒｉｍｏｒｄｉａｌ
图２　膨大的芽
Ｆｉｇ．２　Ｅｘｐａｎｄｅｄ　ｂｕｄ
图３　芽愈伤组织
Ｆｉｇ．３　Ｃａｌｕｓ　ｆｏｒｍ　ｂｕｄ
图４　芽轴愈伤组织
Ｆｉｇ．４　Ｃａｌｕｓ　ｆｏｒｍ　ｂｕｄ　ａｘｉｓ
表２　不同激素配比对金钱松愈伤组织增殖的影响（珔ｘ±ｓ，ｎ＝３）
Ｔａｂｌｅ　２　Ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｈｏｒｍｏｎｅ　ｒａｔｉｏ　ｏｎ　ｃａｌｕｓ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ
培养基编号
Ｍｅｄｉｕｍ　Ｎｏ．
激素配比／（ｍｇ·Ｌ－１）Ｈｏｒｍｏｎｅ　ｒａｔｉｏ
６－ＢＡ　 ＮＡＡ　 ＩＡＡ
增殖倍数
Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｍｕｌｔｉｐｌｅ
愈伤组织生长状况
Ｃａｌｕｓ　ｇｒｏｗｔｈ　ｓｔａｔｕｓ
Ａ０（ＣＫ） ０　 ０　 ０．０　 ０．００±０．００ｈＨ 未见明显生长 Ｎｏ．ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ｇｒｏｗｔｈ
Ａ１　 １．０　 ０．１　 ０．０　 １．６３±０．１３ｄＤ 淡绿色，质地疏松Ｌｉｇｈｔ　ｇｒｅｅｎ，ｌｏｏｓｅ　ｔｅｘｔｕｒｅ
Ａ２　 １．０　 ０．３　 ０．０　 ２．６１±０．１２ｃＣ 绿色，质地紧密 Ｇｒｅｅｎ，ｃｌｏｓｅ　ｔｅｘｔｕｒｅ
Ａ３　 １．０　 ０．５　 ０．０　 ３．９２±０．２２ａＡ
翠绿色，质地较紧密
Ｅｍｅｒａｌｄ，ｒｅｌａｔｉｖｅｌｙ　ｃｌｏｓｅ　ｔｅｘｔｕｒｅ
Ａ４　 １．０　 １．０　 ０．０　 ３．０３±０．０３ｂＢ
黄绿色，质地较疏松
Ｃｈａｒｔｒｅｕｓｅ，ｒｅｌａｔｉｖｅｌｙ　ｌｏｏｓｅ　ｔｅｘｔｕｒｅ
Ａ５　 １．０　 ０．０　 ０．１　 ０．６３±０．１３ｇＧ
黄色，质地疏松
Ｙｅｌｏｗ，ｌｏｏｓｅ　ｔｅｘｔｕｒｅ
Ａ６　 １．０　 ０．０　 ０．３　 ０．９６±０．０８ｆＦ
浅黄色，质地较紧密
Ｂｕｆｆ，ｒｅｌａｔｉｖｅｌｙ　ｃｌｏｓｅ　ｔｅｘｔｕｒｅ
Ａ７　 １．０　 ０．０　 ０．５　 １．８３±０．１３ｄＤ
黄绿色，质地较疏松
Ｃｈａｒｔｒｅｕｓｅ，ｒｅｌａｔｉｖｅｌｙ　ｌｏｏｓｅ　ｔｅｘｔｕｒｅ
Ａ８　 １．０　 ０．０　 １．０　 １．２９±０．０８ｅＥ
浅黄绿色，质地疏松
Ｌｉｇｈｔ　ｙｅｌｏｗ－ｇｒｅｅｎ，ｌｏｏｓｅ　ｔｅｘｔｕｒｅ
·４５１· 西　北　农　业　学　报　　　　　　　　　　　　　　　　　　２２卷
６－ＢＡ与ＮＡＡ组合的培养基更有利于金钱松的
愈伤组织增殖生长，愈伤组织不仅增殖倍数高，而
且产生的愈伤组织也多为质量状况好的绿色；而
在６－ＢＡ与ＩＡＡ激素组合的培养基上生长的愈
伤组织，不仅增殖的速度慢，而且产生的愈伤组织
质量状况不佳，多为黄色、水浸状。
由表２结果分析发现，在植物激素６－ＢＡ质
量浓度为１ｍｇ·Ｌ－１时，随着ＮＡＡ和ＩＡＡ的质
量浓度由０．１升高到０．５ｍｇ·Ｌ－１，其愈伤组织
的增殖倍数均表现为增高的趋势，其中以 Ａ３培
养 基 ＭＳ＋６－ＢＡ　１．０ ｍｇ· Ｌ－１ ＋ ＮＡＡ
０．５ｍｇ·Ｌ－１的愈伤组织增殖倍数（３．９２±０．２２）
最高，显著高于其他各组培养基中愈伤组织的增
殖倍数（Ｐ＜０．０１）；但当 ＮＡＡ和ＩＡＡ的质量浓
度继续升高到１．０ｍｇ·Ｌ－１，其愈伤组织增殖倍
数反而下降，并且产生的愈伤组织还出现部分的
褐变情况。由此可以得出，在一定的质量浓度范
围内，生长素ＮＡＡ和ＩＡＡ促进金钱松愈伤组织
的增殖生长，过高质量浓度的ＮＡＡ和ＩＡＡ对金
钱松愈伤组织的增殖生长起抑制作用。
２．３　不同光照时间对愈伤组织增殖的影响
由表３可知，金钱松愈伤组织在每天光照
１２ｈ下其愈伤组织的增殖倍数最高，为（３．６３±
０．０６）倍，明显高于无光照条件下的增殖倍数
（１．１２±０．１２）和每天光照２４ｈ下的增殖倍数
（２．８９±０．１９）。
　　不同光照条件下金钱松愈伤组织的增殖状况
极显著不同（Ｐ＜０．０１）。其中以每天光照１２ｈ下
增殖产生的翠绿色愈伤组织生长速度最快，品质
也最佳；在无光照条件下产生的绿黄色和浅黄色
愈伤组织不仅生长速度慢，而且品质也不太好；而
在每天２４ｈ光照下增殖产生的愈伤组织尽管生
长速度也较快，但增殖产生的黄绿色愈伤组织有
部分出现褐变的情况。从上述试验分析可以得
出，金钱松愈伤组织增殖的最适光照时间为每天
光照１２ｈ。
２．４　不同培养温度对愈伤组织增殖的影响
将叶原基外植体产生的翠绿色愈伤组织接入
ＭＳ＋６－ＢＡ　１．０ｍｇ·Ｌ－１＋ＮＡＡ　０．５ｍｇ·Ｌ－１培
养基中，分别放置在５℃、１５℃、２５℃和３０℃
４种不同温度下培养，４０ｄ后统计愈伤组织增殖
倍数，结果见表４。
　　由表４得知，金钱松愈伤组织在增殖生长过
程中受温度影响较大，不同的培养温度对金钱松
愈伤组织的增殖影响差异极显著（Ｐ＜０．０１）。试
验观察发现，５℃下接入培养基中生长的愈伤组
织多数为黄色，并还有部分呈现水浸状，愈伤组织
的增殖生长速度极慢，培养４０ｄ后其愈伤组织增
殖倍数还不到１倍；而当培养温度为２５℃时，培
养４０ｄ后其愈伤组织的增殖倍数可高达（３．９７±
０．２２）倍；但当温度继续升高为３０℃时，尽管愈伤
组织的生长速度快、增殖倍数也较高（３．４１±
０．０４），但产生的深绿色愈伤组织在后续的继代生
长过程中发现较易出现褐变的情况。
表３　不同光照时间下金钱松外植体愈伤组织增殖及生长状况（珔ｘ±ｓ，ｎ＝３）
Ｔａｂｌｅ　３　Ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｌｉｇｈｔ　ｔｉｍｅ　ｏｎ　ｃａｌｕｓ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ
光照时间／（ｈ·ｄ－１）
Ｌｉｇｈｔ　ｔｉｍｅ
增殖倍数
Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｍｕｌｔｉｐｌｅ
愈伤组织生长状况
Ｃａｌｕｓ　ｇｒｏｗｔｈ　ｓｔａｔｕｓ
０　 １．１２±０．１２ｃＣ 生长慢，绿黄色和浅黄色Ｓｌｏｗ　ｇｒｏｗｔｈ，ｇｒｅｅｎ　ｙｅｌｏｗ　ａｎｄ　ｌｉｇｈｔ　ｙｅｌｏｗ
１２　 ３．６３±０．０６ａＡ 生长快，翠绿色Ｆａｓｔｅｓｔ　ｇｒｏｗｔｈ，ｅｍｅｒａｌｄ
２４　 ２．８９±０．１９ｂＢ 生长较快，黄绿色，部分褐变Ｇｒｏｗ　ｆａｓｔｅｒ，ｃｈａｒｔｒｅｕｓｅ，ｂｒｏｗｎｉｎｇ　ｐａｒｔｌｙ
注：光照度１　０００ｌｘ。
Ｎｏｔｅ：Ｔｈｅ　ｌｉｇｈｔ　ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ　ｉｓ　１　０００ｌｘ．
表４　不同培养温度下金钱松愈伤组织增殖及生长状况（珔ｘ±ｓ，ｎ＝３）
Ｔａｂｌｅ　４　Ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｏｎ　ｃａｌｕｓ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ
培养温度／℃
Ｃｕｌｔｕｒｅ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ
增殖倍数
Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｍｕｌｔｉｐｌｅ
愈伤组织生长状况
Ｃａｌｕｓ　ｇｒｏｗｔｈ　ｓｔａｔｕｓ
５　 ０．６９±０．１０ｄＤ 生长极慢，黄色，质地疏松Ｓｌｏｗｅｓｔ　ｇｒｏｗｔｈ，ｙｅｌｏｗ，ｌｏｏｓｅ　ｔｅｘｔｕｒｅ
１５　 １．９７±０．１１ｃＣ
生长较慢，浅黄色，质地较紧密Ｓｌｏｗｅｒ　ｇｒｏｗｔｈ，ｌｉｇｈｔ　ｙｅｌｏｗ，ｒｅｌａｔｉｖｅｌｙ　ｃｌｏｓｅ
ｔｅｘｔｕｒｅ
２５　 ３．９７±０．２２ａＡ 生长快，翠绿色，质地紧密Ｆａｓｔｅｒ　ｇｒｏｗｔｈ，ｅｍｅｒａｌｄ，ｃｌｏｓｅ　ｔｅｘｔｕｒｅ
３０　 ３．４１±０．０４ｂＢ 生长较快，深绿色，质地疏松Ｆａｓｔｅｒ　ｇｒｏｗｔｈ，ｄａｒｋ　ｇｒｅｅｎ，ｌｏｏｓｅ　ｔｅｘｔｕｒｅ
·５５１·３期　　　　　　　　　　　王跃华等：金钱松植物愈伤组织诱导和快速增殖条件研究
３　小结与讨论
目前，金钱松人工种植方式主要为有性繁殖
和营养繁殖２种。金钱松植物对环境适应力不
强、结实率低、结实间隔期较长，一般３～５ａ结实
１次［１３］；金钱松植物采种一般需要母树年龄在
１００ａ左右为最好，种子需低温贮藏。金钱松为菌
根性树种，宜在海拔５００ｍ左右的山地建立永久
性育苗基地或在土内有菌的林间育苗；植物生长
周期长，并易受金钱松小卷蛾的严重危害［１４］。因
此，金钱松现有的栽培技术极大地限制金钱松植
物的快速繁殖，同时也限制其活性产物的开发与
利用。
本试验利用组织培养技术成功地建立金钱松
植物的无菌繁殖体系，并实现对其愈伤组织的快
速增殖生产，从而探索出一条利用生物技术开发
药物资源的有效途径，确保植物资源可持续利用，
并在一定程度上缓解金钱松植物资源的匮乏，为
进一步开展利用金钱松细胞大规模生产其有效组
分奠定理论基础。
参考文献：
［１］　ＬＩＵ　Ｈｏｎｇｌｉａｎｇ（刘洪亮），ＨＥ　Ｃｈｅｎｇｚｈｏｎｇ（何承忠）．Ｒｅ－
ｓｅａｒｃｈ　ｓｔａｔｕｓ　ａｎｄ　ｐｒｏｓｐｅｃｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｃｈｅｍｉｃａｌ　ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓ　ａｎｄ
ｂｉｏａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ　ｏｆ　Ｐｓｅｕｄｏｌａｒｉｘ　ｋａｍｅｆｅｒｉ［Ｊ］．Ｓｏｕｔｈｗｅｓｔ　Ｆｏｒ－
ｅｓｔｒｙ　Ｃｏｌｅｇｅ（西南林学院学报），２００８，２８（１）：５２－５５（ｉｎ
Ｃｈｉｎｅｓｅ　ｗｉｔｈ　Ｅｎｇｌｉｓｈ　ａｂｓｔｒａｃｔ）．
［２］　ＦＡＮＧ　Ｙｕａｎｐｉｎｇ（方元平），ＨＵ　Ｚｈａｎｇｘｉ（胡章喜），ＸＩＡＮＧ
Ｊｕｎ（项　俊），ｅｔ　ａｌ．Ｒｅｓｏｕｒｃｅ　ａｎｄ　ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｎａｔｉｏｎａｌ
ｋｅｙ　ｐｒｅｓｅｒｖｅｄ　ｗｉｌｄ　ｐｌａｎｔｓ　ｉｎ　Ｄａｂｉｅｓｈａｎ，ｅａｓｔｅｒｎ　ｏｆ　Ｈｕｂｅｉ
［Ｊ］．Ｅｃｏｌｏｇｉｃ　Ｓｃｉｅｎｃｅ（生态科学），２００６，２５（４）：３１２－３１５（ｉｎ
Ｃｈｉｎｅｓｅ　ｗｉｔｈ　Ｅｎｇｌｉｓｈ　ａｂｓｔｒａｃｔ）．
［３］　ＦＵ　Ｌｉｇｕｏ（博立国）．Ｃｈｉｎａ　Ｐｌａｎｔ　Ｒｅｄ　Ｄａｔａ　Ｂｏｏｋ　Ｒａｒｅ　ａｎｄ
Ｅｎｄａｎｇｅｒｅｄ　Ｐｌａｎｔｓ（Ｖｏｌｕｍｅ　ｏｎｅ）（中国植物红皮书－稀有
濒危植物）［Ｍ］．Ｂｅｉｊｉｎｇ：Ｓｃｉｅｎｃｅ　Ｐｒｅｓｓ，１９９２．
［４］　Ｔｈｅ　Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ　Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ　Ａｇｅｎｃｙ（国家环境
保护局），Ｔｈｅ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ
Ｂｏｔａｎｙ（中国科学院植物研究所）．Ｄｉｒｅｃｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｒａｒｅ　ａｎｄ
Ｍｏｖｉｎｇ　Ｅｎｄａｎｇｅｒｅｄ　Ｐｌａｎｔ　Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ　ｉｎ　Ｃｈｉｎａ（Ｖｏｌｕｍｅ　ｏｎｅ）
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·６５１· 西　北　农　业　学　报　　　　　　　　　　　　　　　　　　２２卷