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2012年
第 2期
2012
№2
辽 宁 林 业 科 技
Journal of Liaoning Forestry Science＆ Technology
收稿日期：2012-01-12
三色堇组织培养技术研究
姚立平
（辽宁省森林经营研究所，辽宁 丹东 118002）
摘 要：以三色堇顶芽为材料，采用升汞消毒，酒精与升汞混合消毒，经不同时间、不同材料、不同培
养基对比试验，结果发现：三色堇初代培养基最适配方为MS+BA 2 mg/L+NAA 0.2 mg/L。顶芽先用
酒精消毒20 s后用升汞消毒，幼嫩顶芽用升汞处理5 min，而较老顶芽处理8～10 min，成活率均最高。
关键词：三色堇；消毒方法；初代培养
中图分类号：S722.3 文献标识码：A 文章编号：1001-1714（2012）02-0026-03
三色堇（Viola tricolor）属堇菜科堇菜属1年生或
多年生草本植物，别名蝴蝶花、鬼脸花、猫儿脸、人
面花等。株高 10～30 cm，茎有分枝，叶互生，有长
叶柄，花期 4～6月，果期 5～7月。花不整齐，花瓣
圆形，通常每花有黄、紫、白等 3种颜色，故名“三色
堇”。三色堇原产南欧，16世纪野生种就被用于庭
院种植，18世纪开始育种，20世纪中期得到花色艳
丽而又纯净的品种，现在世界各地广为栽种，其色
彩丰富，有纯紫、金黄、砖红、橙、纯白色等，是现今
流行的花坛、盆栽及庭院花卉。
传统的三色堇主要采用种子繁殖、扦插繁殖
等，但这些方法的繁殖系数较小，特别是经多代繁
殖后，常造成种性退化，甚至病毒积累，影响三色堇
的产量和品质。利用组织培养技术，能够加快三色
堇的繁殖速度，缩短培育周期。本研究采用三色堇
顶芽作为外植体，分析不同激素对三色堇培养过程
中的污染率、死亡率和成活率的影响，筛选适合的
初代培养基，实现三色堇的快速繁殖，以满足市场
需求。
1 材料与方法
1.1 试验材料
以三色堇顶芽作为供试材料。
1.2 试验方法
1.2.1 外植体消毒
外植体采集后，先用清水冲洗，再用洗衣粉浸
泡、清洗，洗去泥土，最后用蒸馏水冲洗干净。
①使用升汞作为消毒剂处理顶芽。用升汞处
理三色堇幼嫩顶芽3、5、7 min；处理较老顶芽8、10、
12、14 min。
②使用酒精和升汞作为消毒剂处理顶芽。先
用酒精处理 20 s，再用升汞处理幼嫩顶芽 3、5、
7 min，处理较老顶芽8、10、12、14 min。
③不同顶芽消毒试验。对带叶较多和带叶较
少的三色堇顶芽，先使用酒精处理20 s，再使用升汞
分别处理6、8、10 min。
1.2.2 培养基配置及无菌培养
以MS（1/2MS）为基本培养基，添加 3%蔗糖，
0.6%琼脂，pH值 5.8，附加不同质量浓度的激素
（BA、NAA）配制 10种初代培养基（表 1），经过
121℃、0.15 MPa高温高压处理20 min。
表1 三色堇的初代培养基
将配好的培养基分装在洗净控干的三角瓶中，
用双层封口膜封口，然后在高压灭菌锅中高温高压
灭菌 20 min。在超净工作台将三色堇顶芽分别转
序号
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
培养基
MS+BA 2 mg/L+NAA 0.1 mg/L
MS+BA 2 mg/L+NAA0.2 mg/L
MS+BA 2mg/L+NAA 0.5mg/L
（1/2）MS+BA 0.2mg/L+NAA 0.1mg/L
MS+BA 3mg/L+NAA 0.2 mg/L
MS+BA 0.2mg/L+NAA 0.1mg/L
MS+BA 4mg/L+NAA 0.4mg/L
MS+BA 6mg/L+NAA 0.6mg/L
MS+BA 8mg/L+NAA 0.8mg/L
MS+BA 10mg/L+NAA 1.0mg/L
— 27 —
接入1～10号培养基进行培养。
1.2.3 培养条件
温度 23～25 ℃，光照强度 1 200～1 500 lx，光
照9～16 h/d。培养期间定期调查幼苗的生长情况。
2 结果与分析
2.1 不同培养基对三色堇的初代培养效果
观察表明，高浓度的激素虽然能促进侧芽的生
长，但其成活率较低。由表1、2可见，三色堇的最适
初代培养基为：MS+BA 2 mg/L+NAA 0.2 mg/L。
2.2 使用升汞消毒外植体
用升汞对三色堇幼嫩顶芽消毒 3、5、7 min，较
老顶芽消毒 8、10、12、14 min，分别接种在 2号培养
基中，结果见表 3。三色堇幼嫩顶芽，消毒 5 min的
成活率最高，7 min污染率最小，但死亡率最高，
3 min污染率最高，达 90％；而较老顶芽消毒 8～
10 min成活率最高，12 min污染率最小，但死亡率较
高，14 min死亡率最高。可见幼嫩顶芽成活率较高。
表2 初代培养基对三色堇培养效果的影响
序号
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
接种数
20
20
20
20
20
20
20
20
20
20
成活率（%）
45
72
30
68
20
23
27
35
29
0
生长侧芽数
2
4
1
3
0
0
1
2
1
0
侧芽长度（cm）
2.5
4
1.2
3.6
0
0
1.2
2.8
1.4
0
表3 不同消毒时间对三色堇污染率、死亡率和成活率的影响
外植体
幼嫩顶芽
较老顶芽
消毒时间（min）
3
5
7
8
10
12
14
接种数
20
20
20
20
20
20
20
污染数
16
6
4
8
7
5
3
污染率（%）
80
30
20
40
35
25
15
死亡数
4
2
8
3
3
9
12
死亡率（%）
20
10
40
15
15
45
60
成活率（%）
0
60
40
45
50
30
25
2.3 使用酒精和升汞消毒处理顶芽
将三色堇幼嫩顶芽和较老顶芽先用酒精处理
20 s，然后幼嫩顶芽用升汞消毒 3、5、7 min；而较老
顶芽用升汞消毒 8、10、12、14 min，分别接种在 2号
培养基中，结果见表4。幼嫩顶芽消毒时间5 min成
活率最高，7 min污染率最小，但死亡率最高，3 min
污染率最高。较老顶芽，消毒 8～10 min成活率最
高，12 min污染率最小，但死亡率较高，14 min死亡
率最高。
表4 不同类型三色堇外植体使用酒精和升汞消毒后污染率、死亡率和成活率
外植体
幼嫩顶芽
较老顶芽
消毒时间（min）
3
5
7
8
10
12
14
接种数
20
20
20
20
20
20
20
污染数
16
6
4
8
7
5
3
污染率（%）
80
30
20
40
35
25
15
死亡数
4
2
8
3
3
9
12
死亡率（%）
20
10
40
15
15
45
60
成活率（%）
0
60
40
45
50
30
25
2.4 酒精和升汞处理不同带叶程度的三色堇顶芽
在2号培养基、中等幼嫩顶芽的条件下，先用酒
精处理20 s，再用升汞处理顶芽6、8、10 min，观察发
现：在最佳的时间范围内，在培养基、消毒方法都相
同的情况下，带叶片较多的顶芽生长状况明显优于
带叶片较少的顶芽（表5）。
3 结 论
三色堇外植体接种时，极易污染，建议采用灭
菌能力较强的消毒剂，如升汞，同时与酒精配合使
用，消毒更彻底。幼嫩的顶芽消毒时间应控制在
5 min左右，而对于较老的顶芽消毒时间应控制在
8～10 min。外植体以带有叶片较多的成活率更
高。建议选取中等成熟的顶芽为好。外植体采用带
有一部分茎段的顶芽，成活率较高。（下转第60页）
— 60 —
床），首次晾床时间为1 h，随着扦插日数的增加，晾
床时间逐渐延长，每天延长10 min。
4 插穗生根率和成活率比较
供试材料采用比较难生根的重瓣黄刺梅当年
生半木质化枝条，扦插方法为“拱棚遮阳”、“电子喷
雾”和“全光水膜”方法，每种方法 3次重复。插穗
的剪取、药物处理以及插床基质均相同。插后 3周
调查其生根率、成活率，见表1。
表1 不同扦插方法生根率及成活率比较
由表1可见，由于扦插条件的改善，“全光水膜”
方法插穗生根率和成活率明显提高，生根率“全光
水膜”比“拱棚遮阳”和“电子喷雾”分别提高了26%
和9.6%；成活率“全光水膜”比“拱棚遮阳”和“电子
喷雾”分别提高了29%和14%。
5 结论与讨论
试验证明扦插成活率“全光水膜”方法明显优
于“拱棚遮阳”和“电子喷雾”方法；从成本方面看
“全光水膜”方法和“拱棚遮阳”相比几乎没有差别，
与“电子喷雾”方法相比，“全光水膜”降低成本20%
左右，并且“电子喷雾”方法由于受设备所限，苗床
面积也受到局限，而“全光水膜”方法，其苗床面积
可根据生产实际随意调整。
（责任编辑：韩素梅）
扦插方法
拱棚遮阳
电子喷雾
全光水膜
生根率（%）
56.3
72.7
82.3
成活率（%）
50.0
65.0
79.0
参考文献：
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诱导研究[J].云南农业大学学报，2003，18（4）：397-400.
（责任编辑：张素清）
表5 不同带叶程度的三色堇外植体使用酒精和升汞消毒后污染率、死亡度和成活率
外植体
带叶较多的顶芽
带叶较少的顶芽
消毒时间（min）
6
8
10
6
8
10
接种数
20
20
20
20
20
20
污染数
8
5
4
9
7
5
污染率（%）
40
25
20
45
35
25
死亡数
5
3
8
6
5
10
死亡率（%）
25
15
40
30
25
50
成活率（%）
35
60
40
25
40
25
素 IBA的效果佳，因此也可以增加生长素的种类，
对比筛选最适的激素种类。
3.4 组织培养技术是目前应用于林业繁育领域较
成功的一种繁育技术，东北红豆杉的愈伤诱导率达
到了87%，如果在此基础上进一步研究东北红豆杉
的分化、生根、移栽技术，最后形成一套完整的组织
培养繁育技术，则组织培养技术短周期、大繁殖量
的特点就能满足市场的需求。
参考文献：
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（责任编辑：韩素梅）
（上接第25页）
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