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金钱松化学成分及生物活性研究现状与展望



全 文 :第 28卷 第 1期                 西 南 林 学 院 学 报        Vol.28 No.1
  2008年 2月             JOURNALOFSOUTHWESTFORESTRYCOLLEGE      Feb.2008 
* 收稿日期:2007-09-26  **为通讯作者
基金项目:昆明植物所基金项目资助;云南省重点建设专业西南林学院林学专业项目资助.
作者简介:刘洪亮(1981-), 男 , 湖南耒阳人 , 硕士生 , 主要从事园林植物方面的学习与研究.
金钱松化学成分及生物活性研究现状与展望*
刘洪亮 1, 2 ,何承忠 3**
(1.西南林学院 园林学院 ,云南昆明 650224;2.中国科学院昆明植物研究所 植物与西部植物资源持续
利用国家重点实验室 ,云南 昆明 650204;3.西南林学院 资源学院 ,云南昆明 650224)
摘要:金钱松是松科植物 ,其根皮部分称为 “土槿皮 ”,在古代民间作为中药 ,主治癣症.20世纪
80年代以来 ,国内外对金钱松这一药用植物的化学成分及其生理活性的研究进行了综述 ,并
探讨了今后研究的主要方向.
关键词:金钱松;化学成分;生物活性
中图分类号:S791.230.1  文献标识码:A  文章编号:1003 -7179(2008)01-0051-06
  金钱松(PseudolarixkameferiGord.)是我国特
有的著名古老孑遗松科(Pinaceae)树种 ,大约起源
于白垩纪中晚期 ,曾广泛分布于北纬 33°~ 52°地
区 [ 1] .在更新世大冰期后 ,各地金钱松相继灭绝 ,
只有在长江中下游地区幸存下来 ,现在正处于濒
危状态 ,已被列为国家二级保护植物 [ 1-3] .
金钱松材性优良 ,耐水湿 ,树形优美 ,是优良
的建筑 、家具等用材树种和园林绿化树种 [ 1] .该树
种的根皮和近根皮部分被称为土槿皮 ,因为性辛 ,
温 ,有毒 ,具有止痒 、杀虫 、治疗癣症等功效 ,在我
国民间作为中药入药已有悠久的历史 [ 4] .自 20世
纪 80年代以来 ,金钱松的化学成分及其药理作用
再次受到关注.研究发现:金钱松的化学成分主要
有二萜类化合物 、三萜类化合物 、木脂素类化合
物 、倍半萜类化合物以及其他类型化合物 [ 5-13] .现
代药理实验表明:这类化合物具有抗真菌 、抗肿瘤
等功效 [ 10-11, 14-19] .本文对国内外金钱松化学成分
及其药理研究进行概述 ,对后期研究的方向进行
讨论 ,以供相关研究参考.
1 化学成分
1.1 二萜类化合物(1 ~ 18)
金钱松土槿皮的主要化学成分为土槿酸 ,而
土槿酸并非纯体 [ 5] .应用常规及现代分离技术 ,李
珠莲等 [ 5-8]从土槿皮中先后分离出了 8种土槿皮
酸(1 -8),依次为土槿甲酸 ,土槿乙酸 ,土槿丙酸 ,
土槿丙酸 2,土槿甲酸苷 ,土槿乙酸苷 ,土槿皮丁酸
和土槿皮戊酸.Yang等 [ 9-10]又从土槿皮中分离到
9种新的二萜类化合物(9 -17),依次为 Pseudolar-
icacidF, G, H;2 , 3 -dihydroxy-1 -propoxyp-
seudolarateB;6 -O-acetylpseudolaricacidB-O
-β -D-glucopyranoside;PseudolaricacidA2 , B2 ,
B3和 MethylpseudolarateA2.Li等 [ 12]以土槿皮为
材料 ,分离到了 PseudolaricacidB, C.和 Deme-
thoxydeacetoxy-pseudolaricacidB(18).各种化合
物的结构式见图 1.
1.2 三萜类化合物(19 ~ 31)
以金钱松种子 、叶片等器官为材料 ,从中分离
到了不同的三萜类化合物.1993 年 , 陈国富
等[ 12-13, 20]从金钱松种子中分离出 8个三萜内脂
(19 ~ 26),依次为 PseudolarolidesA, B, C, D, E, F,
O和 P.Zhou等 [ 21]相继又从其叶中分离到 3个新
的三萜类化合物(27 ~ 29):PseudolarolideQ, R, S.
Yang等[ 11]从土槿皮中不仅分离出了二萜类化合
物 ,还发现两种新的三萜类化合物 , Isopseudolarifu-
roicacidA(30)和 B(31).已报道的金钱松三萜类
化合物结构式见图 2.
1.3 其他类化合物(32 ~ 36)
Li等 [ 22]从土槿皮中分离到两个新的 Auronol,
即 AuronolA(32)和 AuronolB(33),同时还得到
Myricetin(34).Liu等 [ 23]从土槿皮中分离到两个新
的化合物 PseudolarosideA(35)和 B(36).结构式
见图 3.
2 生物活性
2.1 抗真菌活性
土槿皮在我国民间医学中用来治疗由真菌感
染的皮肤病 ,现代医学外用复方土槿皮酊治疗手
癣和脚癣[ 4] .土槿皮乙酸(PAB)为抗真菌主要成
分 , Li等 [ 14]通过活性实验证明:土槿皮乙酸对须
藓毛藓菌(Trichophytonmentagrophytes),球拟酵母
菌(Torulopsispetrophilum), 石膏样小孢子菌(Mi-
crosporumgypseum)和念珠菌(Candidaspp)均有很
强的生物活性 ,但其甲基化或氢化衍生物对这些
菌类无活性.主要是因为 PAB上的乙酰氧基和 C18
原子上的羧酸是保持其抗真菌活性所必需的 [ 14] .
通过用土槿皮药液和两性霉素 B对浅部真菌超微
结构的影响进行观察发现 ,土槿皮药液处理 2 h
后 ,电镜下观察即可见真菌细胞核旁出现小斑片
电子薄区 ,散在或呈半环状分布 ,而处理 3 ~ 8 d
后 ,细胞完全变性 ,细胞结构消失 ,并由电子薄区
占据 ,细胞膜皱缩反折入胞浆内.而经两性霉素 B
作用的真菌细胞尚保留细胞核和线粒体 ,未见细
胞皱缩 [ 19] .然而 , PAB对新型隐球菌(Cryptococcus
neoformans)没有生物活性 ,而两性霉素 B却对其
有生物活性 ,可证明 PAB的抗真菌机制不同于两
性霉素 B[ 14] .
不仅 PAB具有抗真菌活性 ,还发现土槿皮中
的三萜化合物(30)也具有良好的抗菌活性 [ 11] .
将其通过与抗菌药物 Bakuchiol和 Magnolol对各
种菌类药效的比较表明 ,化合物(30)对革兰氏阳
性菌金黄色葡萄球菌和藤黄球菌均显示良好的
活性 ,各自的 MIC值是 0.027和 0.013 mM.同
时 ,当其 MIC值在 0.107 mM时 , 也对革兰氏阴
性菌大肠杆菌有很强的活性.通过实验比较 ,化
合物(30)对于抗革兰氏阳性菌 ,其活性与 Baku-
chiol相当 , 但要强于 Magnolol(表 1).更重要的
是在可比较剂量下 , Bakuchiol和 Magnolol对革兰
氏阴性菌不具有活性时 ,化合物(30)却显示良好
的活性 [ 11] .
表 1 化合物(30)抗菌活性比较
菌株    MIC/mM
a
30 BakuchiolMagnolol
金黄色葡萄球菌 (ATCC25923) 0.027 0.019 0.048
藤黄微球菌 (ATCC9341) 0.013 0.010 0.048
大肠杆菌 (ATCC259277) 0.107 >0.780 >0.750
假担胞杆菌 (ATCC2785) >0.215 >0.780 >0.750
  注:MIC指最小抑菌浓度
最新研究还发现:金钱松内存在着广泛的具
有抗菌活性的内生真菌.以茎和叶为材料 ,共分离
到菌株 105株 ,其中具有抗菌活性的内生真菌占
28.5%,高活性菌株占 15.2%.尤其 JJ18菌株 ,其
发酵粗提物具有强烈的抗细菌 、酵母菌和丝状真
菌的广谱抗菌能力 ,而 JJ314抗细菌 、酵母菌活性
强[ 24] .由此可见 ,不仅从金钱松内分离到的二萜类
和三萜类化合物具有抗真菌活性 ,而且其内生真
菌也是潜在的抗真菌药物资源.
2.2 抗肿瘤活性
PAB不仅具有良好的抗真菌作用 ,而且还有
良好的抗肿瘤活性 , PAB对 CNS, TE671, SK-MEL
-5, A2780等瘤株具有细胞毒活性[ 14] .经研究证
明:PAB能抑制新生血管 VEGF(vascularendotheli-
algrowthfactor)的增殖和移殖 ,且与控制牛胚胎血
清血管和人体静脉内皮细胞血管的形成呈明显的
浓度依赖关系.从鸡尿囊绒膜的测定更显示 PAB
(10 nmol/egg)能显著抑制体内新生血管的合成.
而新生血管的生成在肿瘤的形成过程中起着重要
的作用[ 18] .通过对人体乳腺癌细胞 MDA-MB-
468的研究 , ELISA数据显示 , PAB能通过降低缺
氧诱导因子 (HIG-12)的蛋白水平从而减少从
MDA-MB-468细胞中分泌的 VEGF[ 18] .PAB还
能有效抑制 LiBr细胞 (人黑素瘤细胞)的体外增
殖 ,且能诱导其凋亡 [ 16] .50 μmol/LPAB处理 Li-
Br细胞后 ,活细胞数较对照组减少达 66%, 48h后
到 89%,并随时间的延长对细胞的抑制率增加 ,其
抑制率与药物浓度呈剂量依赖关系[ 16] .对 LiBr细
胞的 p21WAF1基因表达检测结果显示 , PAB处理
53第 1期                刘洪亮等:金钱松化学成分及生物活性研究现状与展望
后 ,该基因表达明显增强 ,表明 PAB能阻止 LiBr
细胞进入 S期 ,达到抑制细胞增殖的目的 ,从而初
步阐明了 PAB抑制肿瘤细胞生长的作用机制 [ 16] .
研究结果还表明:PAB体外诱导 A375 -S2细胞凋
亡呈明显的时间 -剂量依赖性关系 , 细胞经 5
μmol/LPAB处理 36 h后有明显的凋亡小体出现 ,
细胞内抑制凋亡蛋白 Bcl-2, Bcl-xL和 caspase
激活的 DNA酶抑制物(ICAD)表达量呈时间依赖
性地减少 ,而促凋亡蛋白 Bax表达量增加 ,从中可
以看出:PAB是通过下调 ICAD蛋白的表达和降低
Bcl-2 /Bax的比例来诱导 A375 -S2 细胞凋
亡 [ 17] .同时 , PAB还能通过降低 Bcl-2蛋白的表
达 ,而增加 Bax和 p53蛋白表达来诱导 Hela细胞
的凋亡 [ 15] .
目前 ,以土槿皮乙酸为原料 ,人工合成了 8个
土槿皮乙酸衍生物 ,经 MTT法筛选其抗肿瘤活性.
结果表明:8个化合物均为新化合物 ,其中 7个具
有抗肿瘤作用 ,而且有 2个化合物的抗性显著高
于土槿皮乙酸[ 25] .通过构效分析表明:4位乙酰氧
基和 7位酯基为土槿乙酸抗肿瘤活性所必需 ,同
时土槿乙酸双键及所形成的土槿乙酸空间结构在
土槿乙酸的抗肿瘤活性中也起着至关重要的作
用 ,对 l8位共轭双烯酸侧链的改造则可能获得体
外抗肿瘤效果更好的衍生物[ 25] .
2.3 抗生育活性
土槿皮乙酸(PAB)是我国研制的女性抗生育
药 ,对大鼠 、兔和狗有明显的抗早孕作用 [ 26] .其抗
早孕的有效剂量能使妊娠大鼠的蜕膜细胞变性 ,
出现出血和坏死等症状.不同浓度的 PAB注入仓
鼠排卵前卵巢囊 ,卵子的受精能力被抑制 ,但对精
子的活力和受精能力无影响.高于 50 μg/mL的
PAB处理卵子 ,不管卵丘保留与否 ,卵子的受精率
明显下降;5 μg/mL的 PAB处理 ,只影响除去卵丘
的卵子.若在雌鼠交配前 4 d每日口服 PAB20
mg/kg,只有部分抗生育效果 [ 27] .PAB还可以通过
减少大鼠子宫肌层和内膜层血流量而导致胚胎死
亡 ,从而达到抗生育的作用 [ 28] .同样地 ,土槿皮甲
酸(PAA)也具有抗生育活性.将 PAA混悬于 1%
羧甲基纤维素中 ,经口服给药 ,对大鼠 、仓鼠及狗
均可产生明显的抗早孕作用 ,其抗早孕的有效剂
量各为 7.5, 60, 0.5 mg/kg.将 PAA经皮下及阴道
给药也能产生明显的抗早孕作用 ,其对大鼠口服
的 ED50 , LD50及 95%可信限是 14.5(11.7 ~ 17.7)
mg/kg和 219.8(193 ~ 250)mg/kg,得治疗指数为
10.2[ 29] .王伟成等 [ 30] 还发现:土槿皮甲酸和乙酸
无雌激素和抗雌激素样活性 ,也无抗黄体酮活性.
3 讨论与展望
近年来的抗真菌药物研究取得了较大进展 ,
但由于当前众多的抗真菌药物存在抗药性和对神
经系统的毒副作用 ,故迫切需要开发一种新的更
有效 、毒性较小的抗真菌药物 [ 10] .金钱松作为药用
植物已有悠久的历史 ,其中的主要成分土槿皮乙
酸不仅具有良好的抗真菌作用 ,且其抗真菌机制
不同于其他类药物 [ 14] .同时 ,土槿皮乙酸对肿瘤等
恶性疾病也具有一定的疗效 [ 15 -18] .但是 ,对其药
理与靶点的作用机制尚不完全清楚 ,有待进一步
研究.
金钱松为我国特有的单属种国家二级保护植
物 ,也是一种应用前景广阔的药用植物.但有限的
植物资源 ,极大地限制了其活性产物的开发与利
用[ 31] .植物内生真菌能产生大量新的天物产物 ,有
些内生真菌还能够产生与宿主植物相同或相近的
代谢产物 ,是新的天然产物的重要来源 [ 32 -34] .金
钱松的茎和叶中均有内生真菌分布 ,种类繁多 ,且
多种菌株具有抗菌活性.为其开发利用开辟了新
的思路和途径 ,也是今后研究的重要领域之一.
综上所述 ,在后期的研究中 ,应将真菌基因组
学 、现代分子生物学 、生物信息学和组合化学技术
等新方法 、新技术应用于金钱松药效成分的药理
机制研究 ,以期开发出作用专一 、高效 、低毒的抗
真菌 、抗肿瘤和抗生育等新药物.
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LIUHong-liang1, 2 , HECheng-zhong3
(1.FacultyofLandscapeArchitecture, SouthwestForestryColege, KunmingYunnan650224, China;2.StateKeyLabofPhytochemistry
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3.FacultyofResources, SouthwestForestryColege, KunmingYunnan650224, China)
Abstract:PseudolarixkamepferibelongstoPinaceaefamily, anditsrootbarkisknownas“TuJinPi”
commonlyusedintraditionalChinesemedicinefortreatmentofskindiseasescausedbymicrobialinfection.The
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ZHANGShao-zhi, WANGYi, LIUXiao-zhu
(FacultyofResources, SouthwestForestryColege, KunmingYunnan650224, China)
Abstract:ThedegeneratingprimerwasdesignedandsynthesizedaccordingtospsgenesequenceofZea
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bamboospecieswasisolatedandclonedbymeansofTD-PCRmethod, and474 bpfragmentwasobtainedby
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Keywords:Dendrocalamussinicus;sucrosephosphatesynthase;degenrateprimers;genecloning
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