全 文 ：高效液相色谱法快速分析红松、云杉针叶中的维生素C
刘海玲　杜英君　杨志勇　(中国科学院沈阳应用生态研究所, 沈阳 110015)
H igh effective l iquid chromatograph ic analysis of v itam in C in P inus kora iens is and P icea
kora iens is leaves. L iu H ailing, D u Y ingjun and Yang Zh iyong ( Institu te of A pp lied E colo2
gy , A cad em ia S in ica , S heny ang 110015). 2Ch in. J. A pp l. E col. , 1994, 5 (4) : 442- 443.
T h is paper in troduces a h igh effective ligu id ch rom atograph ic m ethod fo r analysing vita2
m in C in needles of con iferous trees. T he m in im um detection lim it is 5. 0×1028g, average
recovery rate is 89. 2- 91. 8% , and varia t ion coefficien t is less than 5%.
Key words　H igh effective ligu id ch rom atography, P inus kora iensis, P icea kora iensis, V i2
tam in C.
　　1994 年 4 月 15 日收到, 5 月 11 日改回.
1　引　　言
红松苗越冬伤害是一种光氧化伤害. 这种伤
害与低温下强光诱导自由基过剩积累有关, 而V c
对各种自由基具有清除作用[2, 3 ]. 因此, 研究红松、
云杉针叶体中的V c 浓度对探求红松苗越冬伤害
及机理有十分重要的意义. 本文采用反相 C18烷基
键合相色谱柱有效分离, 紫外检测器检测, 测定红
松、云杉针叶中的V c 含量, 现将分析结果报道如
下.
2　材料与方法
2. 1　样品制备
将红松及云杉针叶清洗干净, 用滤纸吸掉多
余水分. 剪碎、准确称取 500m g 样品, 加入 2m l
0. 05mo l 磷酸缓冲溶液 (pH 7. 8) , 在研钵中研磨,
匀浆液在 7500r. m in2下离心 7m in, 吸取一定量的
上清液直接进行H PL C 分析.
2. 2　色谱分析
2. 2. 1 色谱条件　日立胶 3056 (OD S) 色谱柱, Υ4
×250mm (自装) , 流动相为 0. 5% 磷酸二氢铵, 用
HC l 调pH 至 2. 5, 流速为 0. 9m l·m in21, 检测波长
为 254nm , 灵敏度为 0. 08AU FS.
2. 2. 2 定性定量　样品中V c 采用色谱保留时间
比较法定性, 外标法测定其含量.
3　结果与讨论
3. 1　流动相的选择
为了使V c 在色谱上有适当的保留值, 选择
pH 为 2. 5 时的 0. 5%N H 4H 2PO 4 为流动相, 如图 1
所示,V c 峰只需 4m in 就可流出, 并可与杂质峰完
全分开, 10m in 内可完成一个样品的分析. 流动相
的 pH 值对V c 的分离起重要作用, 当 pH 在 2. 0
- 3. 0, V c 峰的容量因子 (K′) 较为理想, 如果 pH
增大, V c 在流动相的稳定性降低, 而且峰脱尾现
象愈来愈严重, 但当 pH 接近 2. 0 时, 键合相的硅
胶和烷基化合物之间形成的化学键会被解离 [1, 4 ] ,
图 1　维生素C 的色谱图
F ig. 1 Ch rom atogram of vitam in C.
A : 标准 V c 色谱图 Ch rom atogram of standard vitam in
C, B: 红松针叶V c 色谱图 Ch rom atogram of vitam in C
in P inus kora iensis needles.
应 用 生 态 学 报　1994 年 10 月　第 5 卷　第 4 期　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
CH IN ESE JOU RNAL O F A PPL IED ECOLO GY,O ct. 1994, 5 (4)∶442—443
图 2　V c 含量和色谱峰高的关系
F ig. 2 Relationsh ip betw een V c con ten t and peak heigh t.
因此选择流动相的 pH 为 2. 5 时最佳.
3. 2　线性范围和最小检出量
配制 5×1022Λg·Λl21的V c 标准溶液, 进样 1
- 25Λl. 所得色谱峰高对V c 含量绘图 (图 2) , V c
含量与峰高为直线关系. 当信噪比为 2∶1 时, V c
的最小检出量为 5×1028g.
3. 3　回收率
向红松和云杉针叶样品中添加一定量的V c
标准品, 按上述方法测定V c 含量, 同时测定样品
本底, 计算回收率 (表 1). 在分析过程中, 只要操作
迅速, 注意避免V c 氧化, 用 0. 05mo l 的磷酸缓冲
液提取样品可得到 89. 2- 91. 8% 的平均回收率,
且变异系数< 5%.
表 1　Vc 回收率测定结果 (n= 5)
Table 1 D etected result of Vc recovery (n= 5)
1 2 3 4 5 Xϖ 本底 (m g)Background 加入量 (m g)A ddition 回收率 (% )Recovery 变异系数 (% )V ariation
coefficien t
红　松
P inus kora iensis 1. 792 1. 762 1. 775 1. 630 1. 601 1. 712 0. 820 1. 000 89. 2 4. 67
云　　杉
P icea kora iensis 1. 687 1. 537 1. 573 1. 592 1. 611 1. 600 0. 682 1. 000 91. 8 3. 12
表 2　红松、云杉针叶中 Vc 的测定结果 (mg·g-1 )
(1989. 10)
Table 2 D etected result of Vc in P inus kora iens is and
P icea kora iens is (1989. 10)
云　　杉
P icea kora iensis
全光苗
So lar expo sed
遮荫苗
Shaded
红　　松
P inus kora iensis
全光苗
So lar expo sed
遮荫苗
Shaded
V c 含量
V c con2
ten t
0. 524 0. 658 0. 403 0. 153
3. 4　实际样品的测定
　　按照本方法分析了大量的红松、云杉样品, 表
2 为 1989 年 10 月的一个分析实例. 从表 2 可看
出, 云杉全光苗及遮荫苗V c 含量均高于红松全
光苗及遮荫苗, 从两种苗木对低温强光下的光氧
化伤害来看, 云杉苗抗性强于红松, 这可能与其
V c 含量高能清除自由基有关.
4　结　　论
　　用高效液相色谱法分离测定红松、云杉针叶
中的V c, 样品预处理简单, 试剂消耗少, 分析速度
快, 灵敏度高, 结果可靠, 并可应用于其它植物样
品中V c 含量测定.
致谢　承蒙靳月华副研究员审阅, 谨此致谢.
参考文献
[ 1 ]　李连朝等. 1986. 用反相高效液相色谱法测定食
物、药物和生理体液中的维生素C. 色谱, 4 (6) : 334
- 338.
[ 2 ]　陶大立等. 1992. 越冬针叶有机自由基产额对低温
和光照的反应. 应用生态学报, 3 (2) : 120- 124.
[ 3 ]　靳月华等. 1990. 红松越冬针叶的电子自旋共振
(ESR )波谱. 应用生态学报, 1 (2) : 172- 176.
[ 4 ]　Ho rvath, C. 1980. H ighPerfo rm anceL iqu idCh ro2
m atography, A dvances and Perspectives. A ca2
dem ic P ress, N ew Yo rk, V o l. 2, p. 162.
3444 期　　　　　刘海玲等: 高效液相色谱法快速分析红松、云杉针叶中的维生素 C