全 文 ：收稿日期:2016-01-29; 修订日期:2016-06-02
基金项目:国家自然科学基金(No． 21272136);
湖北省自然科学基金(No． 2014CFB692)
作者简介:汪 蕾(1989 －)，男(土家族)，湖北恩施人，三峡大学在读硕
士研究生，学士学位，主要从事天然产物化学研究工作．
* 通讯作者简介:程 凡(1973 －)，男(汉族)，湖北宜昌人，三峡大学生物
与制药学院副教授，博士学位，主要从事天然产物化学研究工作．
耳叶杜鹃化学成分研究
汪 蕾，邹 坤，张清清，程 凡 *
［天然产物研究与利用湖北省重点实验室(三峡大学)，三峡大学生物与制药学院，湖北 宜昌 443002］
摘要:目的 对耳叶杜鹃化学成分进行研究。方法 采用正相硅胶柱层析、制备薄层层析及制备型 HPLC 等方法分离纯
化，利用 NMＲ、MS等波谱学方法鉴定化合物结构。结果 从耳叶杜鹃中分离并鉴定了 7 个化合物(化合物 1 ～ 7)，分别为
蒲公英赛醇(1)、白桦酯酸(2)、东莨菪素(3)、苯甲酸(4)、(+)－(7Ｒ，8Ｒ)－ 4 － hydroxy － 3，3＇，5＇－ trimethoxy － 8＇，9＇－ di-
nor － 8，4＇－ oxyneoligna － 7，9 － diol － 7＇－ aldehyde(5)、threo － 2，3 － bis(4 － hydroxy － 3 － methoxyphenyl)－ 3 － ethoxypropan
－ 1 － ol(6)、(+)－丁香脂素(7)。结论 其中所有化合物均是首次从耳叶杜鹃中分离得到，化合物 5、6 是首次从杜鹃花
中分离得到。
关键词:耳叶杜鹃; 化学成分; 结构鉴定
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2016． 08． 009
中图分类号:Ｒ284． 2 文献标识码:A 文章编号:1008-0805(2016)08-1818-02
耳叶杜鹃 Ｒhododendron auriculatum Hemsl． 是杜鹃花科杜鹃
属植物，产自陕西南部、湖北西部、四川东部和贵州东北部，生长
于海拔 600 ～ 2000 m的山坡或沟谷森林中，有多种人工栽培的品
种，具有较高的园艺观赏价值［1］。杜鹃花科植物的记载，最早见
于汉代《神农本草经》，书中将“羊踯躅”列为有毒植物。明代的
《本草纲目》记载了羊踯躅的毒性:“花、根、叶有大毒。羊食其
叶，踯躅而死，曾有人以其根入酒饮，遂至于毙也”，民间将其用
于治疗内伤、风湿、痛疮、咳嗽、温疟、慢性支气管炎等［2，3］。杜鹃
花科植物含黄酮类、苷类、挥发油类、酚类、酚酸类、香豆素类及四
环二萜类等化学成分［3，4］。杜鹃花科植物化学成分有抗菌、消
炎、镇咳祛痰的作用，同时对心血管系统、神经系统也具有一定的
药理作用［5］。耳叶杜鹃在三峡地区资源丰富，以根、皮入药，用
于理气、止咳［6］。目前文献中未见耳叶杜鹃化学成分及药理活
性的报道。为明确其药效成分，本文首次对耳叶杜鹃进行了化学
成分的系统分离，从中分离得到 7 个化合物，利用理化分析和波
谱数据对其结构进行鉴定，所有化合物均首次从耳叶杜鹃中分离
得到，化合物 5、6 首次从杜鹃花属中分离得到。
1 仪器与材料
1． 1 仪器 Amozon SL + 1200 液相色谱 －双重漏斗传输离子阱
质谱仪，德国布鲁克·道尔顿公司;Bruker AV 400 核磁共振波谱
仪，瑞士布鲁克公司;Dionex Ultimate 3000 型高效液相色谱仪，美
国戴安公司;Venusil XBP C18 色谱柱(10 μm，250 × 10 mm 半制
备型;5 μm，250 × 4． 6 mm 分析型);低温冷冻干燥机，美国
Labconco公司;正相色谱硅胶，烟台化学工业研究所;反相色谱硅
胶，日本 YMC公司;Sephadex LH － 20，美国 Pharmacia 公司;高效
液相用甲醇、乙腈均为色谱纯，水为三蒸水，其它试剂均为分析
纯。
1． 2 耳叶杜鹃药材 2014 年 11 月采集自湖北长阳贺家坪，经三
峡大学生物与制药学院王玉兵博士鉴定为 Ｒhododendron auricu-
latum Hemsl．植物标本现保存于三峡大学天然产物研究与利用湖
北省重点实验室。
2 方法与结果
2． 1 提取与分离 干燥的耳叶杜鹃茎枝 8． 6 kg，粉碎，用 95%乙
醇 200 L回流提取 3 次，每次 4 h，减压浓缩得总浸膏 350 g，依次
用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取，萃取液浓缩后得到石油醚
部位 50 g，乙酸乙酯部位 67 g，正丁醇部位 135 g。取石油醚部位
3 g，经薄层制备分离，得到 5 个馏分 Fr． 1 ～ 5，其中 Fr． 3 经中压
制备液相制备纯化，用乙腈 －水(83∶ 17，V/V)进行恒梯度洗脱，
得化合物 1(7 mg)，Fr． 4 经中压制备液相制备纯化，用乙腈 －水
(85∶ 15，V/V)进行恒梯度洗脱，得到化合物 2(9 mg);取乙酸乙
酯部位浸膏 67 g，经正相硅胶柱层析色谱分离，以氯仿 － 甲醇
(100∶ 0 ～ 1∶ 1，V/V)梯度洗脱，经薄层色谱分析合并后，得到
79 个馏分 Fr． 1 ～ 79。其中 Fr． 55 ～ 69 经过反相硅胶柱层析色
谱，以乙腈 －水(10∶ 90 ～ 100 ∶ 0，V/V)进行梯度洗脱，得到 23
个馏分 Frr． 1 ～ 23，其中 Frr． 9 ～ 13 经中压制备液相制备纯化，用
乙腈 －水(63∶ 37，V/V)进行恒梯度洗脱，得到化合物 3(4 mg)
和 4(3 mg)。Frr． 16 ～ 19 经中压制备液相制备纯化，用乙腈 －水
(66∶ 34，V/V)进行恒梯度洗脱，得到化合物 5(4 mg)、6(6 mg)
和 7(6 mg)。
2． 2 结构鉴定 7 种化合物结构见图 1。
2． 2． 1 化合物 1 白色粉末状物质。mp 278 ～ 281℃;EI － MS m/
z:426． 39［M］+;C30 H50 O。
1H － NMＲ(400 MHz，CD3OD)δ:5． 53
(1H，dd，J = 8． 1，3． 0 Hz，H －15)，3． 20(1H，dd，J = 11． 1，4． 6 Hz，
H －3) ，1． 09(3H，s，H －25) ，0． 98(3H，s，H － 26) ，0． 95(3H，s，H
－29) ，0． 93(3H，s，H － 28) ，0． 91(3H，s，H － 27) ，0． 91(3H，s，H
－30) ，0． 82(3H，s，H －24) ，0． 80(3H，s，H － 23) ;13 C － NMＲ(100
MHz，CD3OD)δ:158． 08(C － 14)，116． 87(C － 15) ，79． 07(C － 3) ，
55． 52(C － 5) ，49． 27(C － 18) ，48． 74(C － 9) ，41． 32(C － 19) ，
38． 97(C － 4) ，38． 76(C － 8) ，37． 99(C － 17) ，37． 71(C － 1，13) ，
37． 56(C － 10) ，36． 67(C － 16) ，35． 79(C － 12) ，35． 11(C － 7) ，
33． 69(C － 21) ，33． 35(C － 29) ，33． 09(C － 22) ，29． 92(C － 28) ，
29． 82(C － 26) ，28． 80(C － 20) ，27． 99(C － 23) ，27． 14(C － 2) ，
25． 90(C － 27) ，21． 31(C － 30) ，18． 79(C － 6) ，17． 50(C － 11) ，
15． 44(C － 24，25)。以上数据与文献［7，8］中数据对照基本一致，
故鉴定该化合物为蒲公英赛醇。
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时珍国医国药 2016 年第 27 卷第 8 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2016 VOL． 27 NO． 8
图 1 化合物 1 ～ 7 结构
2． 2． 2 化合物 2 白色粉末状物质。mp 275 ～ 278℃;EI － MS m/
z:456． 36［M］+;C30 H48 O3。
1H － NMＲ(400 MHz，CD3OD)δ:4． 74
(1H，s，H － 29b)，4． 61(1H，s，H － 29a) ，3． 19(1H，dd，J = 11． 2，
4． 9 Hz，H －3) ，3． 00(1H，ddd，J = 10． 4，4． 2 Hz，H － 19) ，1． 96
(1H，m，H －18) ，1． 69(3H，s，H － 30) ，0． 97(3H，s，H － 27) ，0． 96
(3H，s，H －26) ，0． 93(3H，s，H － 23) ，0． 82(3H，s，H － 25) ，0． 75
(3H，s，H － 24) ;13 C － NMＲ(100 MHz，CD3OD)δ:181． 03(C －
28)，150． 57(C － 20) ，109． 84(C － 29) ，79． 16(C － 3) ，56． 48(C －
17) ，55． 49(C － 5) ，50． 65(C － 9) ，49． 42(C － 19) ，47． 05(C －
18) ，42． 58(C － 14) ，40． 83(C － 8) ，39． 01(C － 4) ，38． 86(C － 1) ，
38． 55(C － 13) ，37． 36(C － 10) ，37． 19(C － 22) ，34． 47(C － 7) ，
32． 30(C － 16) ，30． 71(C － 15) ，29． 85(C － 21) ，28． 14(C － 23) ，
27． 54(C － 2) ，25． 64(C － 12) ，20． 99(C － 11) ，19． 53(C － 30) ，
18． 43(C － 6) ，16． 27(C － 26) ，16． 21(C － 25) ，15． 49(C － 24) ，
14． 84(C － 27)。以上数据与文献［9］中数据对照基本一致，故鉴
定该化合物为白桦酯酸。
2． 2． 3 化合物 3 淡黄色粉末状物质。mp 224 ～ 226℃;EI － MS
m/z:192． 04［M］+;C10 H8O4。
1H － NMＲ(400 MHz，CD3OD)δ:
10． 32(1H，s，OH)，7． 91(1H，d，J = 9． 5 Hz，H － 4) ，7． 22(1H，s，H
－5) ，6． 78(1H，s，H － 8) ，6． 21(1H，d，J = 9． 4 Hz，H － 3) ，3． 36
(3H，s，OMe) ;13 C － NMＲ(100 MHz，CD3OD)δ:160． 67(C － 2)，
151． 13(C － 7) ，149． 50(C － 9) ，145． 24(C － 6) ，144． 49(C － 4) ，
111． 69(C － 5) ，110． 53(C － 10) ，109． 58(C － 3) ，102． 76(C － 8) ，
56． 00(OMe)。以上数据与文献［10］中数据对照基本一致，故鉴定
该化合物为东莨菪碱。
2． 2． 4 化合物 4 白色粉末状物质。mp121 ～ 123℃;EI － MS m/
z:122． 04［M］+;C7H6O2。
1H － NMＲ(400 MHz，CD3OD)δ:7． 71
(2H，m，H － 2，6)，7． 59(1H，dd，J = 7． 4，1． 6 Hz，H － 4) ，7． 51
(2H，td，J = 7． 4，2． 9 Hz，H －3，5) ;13 C － NMＲ(100 MHz，CD3OD)
δ:165． 74(C = O)，132． 18(C － 4) ，132． 08(C － 6) ，131． 96(C －
2) ，131． 94(C － 1) ，128． 58(C － 5) ，128． 46(C － 3)。以上数据与
文献［11］中数据对照基本一致，故鉴定该化合物为苯甲酸。
2． 2． 5 化合物 5 无色油状物质。EI － MS m/z:378． 13［M］+;
C19H22 O8。
1H － NMＲ(400 MHz，CD3OD)δ:9． 90(1H，s，H － 7)，
7． 19(2H，s，H － 2，6) ，6． 98(1H，s，H － 2) ，6． 96(1H，d，J = 1． 8
Hz，H －6) ，6． 90(1H，d，J = 8． 4 Hz，H － 5) ，5． 09(1H，d，J = 8． 6
Hz，H －7) ，4． 04(1H，dt，J = 8． 5，2． 6 Hz，H － 8) ，3． 99(6H，s，3，
5 － OMe) ，3． 90(3H，s，3 － OMe) ，3． 60(1H，dd，J = 12． 8，2． 8 Hz，
H －9a) ，3． 37(1H，dd，J = 12． 4，2． 2 Hz，H － 9b) ;13 C － NMＲ(100
MHz，CD3OD)δ:190． 63(C － 7)，153． 69(C － 3) ，153． 69(C －
5) ，146． 53(C － 3) ，145． 56(C － 4) ，140． 89(C － 4) ，132． 54(C －
1) ，131． 60(C － 1) ，120． 33(C － 6) ，114． 33(C － 5) ，109． 74(C －
2) ，106． 69(C － 2) ，106． 69(C － 6) ，89． 38(C － 8) ，74． 00(C －
7) ，60． 78(C － 9) ，56． 47(3 － OMe) ，56． 47(5 － OMe) ，56． 01(3
－ OMe)。以上数据与文献［12］中数据对照基本一致，故鉴定该化
合物为(+)－(7Ｒ，8Ｒ)－ 4 － hydroxy － 3，3＇，5＇－ trimethoxy － 8＇，9＇
－ dinor － 8，4＇－ oxyneoligna － 7，9 － diol － 7 － aldehyde。
2． 2． 6 化合物 6 浅黄色油状状物质。EI － MS m/z:348． 16
［M］+;C19H24O6。
1H － NMＲ(400 MHz，CD3OD)δ:6． 74(1H，d，J
=6． 3 Hz，H －5)，6． 72(1H，d，J = 6． 7 Hz，H － 5) ，6． 54(1H，br
s，H －2) ，6． 53(1H，br d，J = 6． 5 Hz，H － 6) ，6． 50(1H，br d，J =
8． 1 Hz，H －6) ，6． 32(1H，br d，J = 1． 8 Hz，H － 2) ，4． 42(1H，
d，J = 9． 2 Hz，H － 3) ，4． 17(1H，dd，J = 10． 9，8． 2 Hz，H － 1a) ，
3． 85(1H，dd，J = 11． 5，5． 1 Hz，H －1b) ，3． 75(3H，s，H －7) ，3． 71
(3H，s，H － 7) ，3． 43(1H，m，H － 1 a) ，3． 36(1H，m，H － 1
b) ，2． 99(1H，ddd，J = 8． 8，8． 5，4． 0 Hz，H － 2) ，1． 23(3H，dd，J =
14． 0，6． 9 Hz，H － 2) ;13 C － NMＲ(100 MHz，CD3OD)δ:146． 27
(C － 3)，146． 18(C － 3) ，144． 95(C － 4) ，144． 36(C － 4) ，
132． 51(C － 1) ，131． 37(C － 1) ，120． 68(C － 6) ，120． 33(C －
6) ，114． 15(C － 5) ，113． 74(C － 5) ，111． 64(C － 2) ，109． 42
(C － 2) ，87． 91(C － 3) ，66． 92(C － 1) ，64． 34(C － 1) ，55． 94(C
－ 7) ，55． 89(C － 7) ，54． 94(C － 2) ，15． 32(C － 2)。以上数
据与文献［13］中数据对照基本一致，故鉴定该化合物为 threo － 2，3
－ bis(4 － hydroxy － 3 － methoxyphenyl)－ 3 － ethoxypropan － 1 － ol。
2． 2． 7 化合物 7 白色粉末状物质。mp 174 ～ 176℃;EI － MS m/
z:418． 16［M］+;C22 H26 O8。
1H － NMＲ(400 MHz，CD3OD)δ:6． 58
(4H，s，H －2，6，2，6)，5． 50(2H，s，OH － 4，4) ，4． 73(2H，d，J =
4． 30 Hz，H －7，7) ，4． 28(2H，dd，J = 6． 9，9． 91 Hz，H － 9e，9e) ，
3． 92(2H，m，H －9a，9a) ，3． 90(12H，s，OMe － 4) ，3． 10(2H，m，H
－8，8) ;13 C － NMＲ(100 MHz，CD3OD)δ:146． 20(C － 3，5，3，
5)，133． 38(C － 4，4) ，131． 14(C － 1，1) ，101． 78(C － 2，6，2，
6) ，85． 09(C － 7，7) ，70． 82(C － 9，9) ，55． 41(OMe) ，53． 37(C －
8，8)。以上数据与文献［14］中数据对照基本一致，故鉴定该化合
物为(+)－丁香脂素。
3 讨论
本文首次对耳叶杜鹃的化学成分进行了研究，从耳叶杜鹃中
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2016 VOL． 27 NO． 8 时珍国医国药 2016 年第 27 卷第 8 期
分离出 7 个化合物，包括 3 个木质素类化合物(5、6、7)、2 个三萜
类化合物(1 和 2)、1 个香豆素类化合物(3)和 1 个芳香酸类化合
物(4)。其中化合物 5、6 是首次从杜鹃花属中分离得到。其中，
化合物 2(白桦酯酸)具有抗黑素瘤的活性［15］;同时，对其他肿
瘤，如神经内胚层脑肿瘤、神经胶质瘤等具有药理活性，此外，在
抗 HIV － 1 感染方面也显示了较高的生物活性［16］。化合物 1(蒲
公英赛醇)具有抗炎活性［17］。
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收稿日期:2015-12-04; 修订日期:2016-05-04
基金项目:国家自然科学基金(No． 81360589);国家教育部科学技术研究重点项目(No． 212153) ;贵阳中医学院“2011 协同创新中心”联合资助
作者简介:刘茜明(1990-)，女(汉族)，江西丰城人，贵阳中医学院硕士研究生，学士学位，主要从事中医基础研究工作．
* 通讯作者简介:何光志(1977-)，男(土家族)，贵州思南人，贵阳中医学院副教授，硕士研究生导师，博士学位，主要从事中医基础研究工作．
FQ － PCＲ技术分析葛根芩连汤对
抗生素相关性腹泻模型肠道双歧杆菌属的影响
刘茜明，杨光勇，何光志* ，田维毅，蔡 琨，王 平，黄 高，梁建东，王文佳
(贵阳中医学院，贵州 贵阳 550002)
摘要:目的 探讨葛根芩连汤对抗生素相关性腹泻模型肠道双歧杆菌在不同肠管内的动态的影响。方法 采用氨苄青霉
素灌胃制备巴马猪抗生素性腹泻动物模型，然后用葛根芩连汤进行治疗，采用实时荧光定量 PCＲ检测葛根芩连汤治疗前
后十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠中双歧杆菌的数量，分析其动态变化。结果 与正常对照组比较，模型组肠道内双歧
杆菌数量显著减低(P ＜ 0． 01)，而用药组 7d与之相比亦有差异(P ＜ 0． 05);与模型组比较，葛根芩连汤治疗组双歧杆菌
属在各个肠段中数量显著上升(P ＜ 0． 05)。结论 氨苄青霉素灌胃会减少肠道优势菌双歧杆菌数量，葛根芩连汤对抗生
素对腹泻模型肠道双歧杆菌具有调理作用。
关键词:FQ － PCＲ;葛根芩连汤;抗生素性相关性腹泻;双歧杆菌
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2016． 08． 010
中图分类号:Ｒ285． 5 文献标识码:A 文章编号:1008-0805(2016)08-1820-04
Analysis of Effects of the Bifidobacterium on Antibiotic － associated diarrhea(AAD)
model treated with Gegen Qinlian Decoction(GQD)by fluorescent quantitative polymer-
ase chain reaction(FQ － PCＲ)
LIU Xi-ming，YANG Guang-yong，HE Guang-zhi* ，TIANG Wei-yi，CAI Kun，WANG Ping，HUANG Gao，LIANG Jian-
dong，WANG Wen-jia
(Guiyang College of Traditional Chinese Medicine，Guiyang 550002，China)
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时珍国医国药 2016 年第 27 卷第 8 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2016 VOL． 27 NO． 8