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GC法测定芫荽茎叶中4种挥发性成分的含量



全 文 :第 29 卷 第 12 期
2 0 1 2 年 1 2 月
沈 阳 药 科 大 学 学 报
Journal of Shenyang Pharmaceutical University
Vol. 29 No. 12
Dec. 2012 p. 938
收稿日期:2012-03-06
作者简介:姜振元(1985-) ,男(汉族) ,辽宁大连人,硕士研究生,E-mail 444502241@ qq. com;* 通讯作者:毕开顺
(1956-) ,男(汉族) ,河北唐山人,教授,博士,主要从事药品质量标准和中药现代化研究,Tel. 024-23986296,E-mail
bikaishun@ yahoo. com。
文章编号:1006-2858(2012)12-0938-04
GC法测定芫荽茎叶中 4 种挥发性成分的含量
姜振元,李 清,赵龙山,郑晓娇,陈晓辉,毕开顺*
(沈阳药科大学 药学院,辽宁 沈阳 110016)
摘要:目的 建立一种芫荽茎叶中芳樟醇、癸醛、正癸醇和十一醛的 GC 含量测定方法。方法 以挥
发油提取器蒸馏制备供试液;HP-5MSI毛细管色谱柱(30 m × 0. 25 mm,0. 25 μm) ,以氮气为载气,
FID检测器,采用程序升温,内标法测定(柠檬烯为内标物)含量。结果 芳樟醇、癸醛、正癸醇和十
一醛进样质量浓度分别在 31. 5 ~ 315. 0 mg·L -1(r = 0. 999 6)、269. 0 ~ 2 690. 0 mg·L -1(r =
0. 999 7)、95. 3 ~ 953. 0 mg·L -1(r = 0. 999 6)、58. 1 ~ 581. 0 mg·L -1(r = 0. 999 7)内呈良好线性关
系,平均回收率分别为 102. 0(RSD = 1. 5%)、102. 0(RSD = 0. 6%)、101. 9(RSD = 1. 1%)、102. 6
(RSD = 0. 9%)。结论 所建立的方法可用于芫荽茎叶中 4 种挥发性成分含量测定。
关键词:芫荽;气相色谱;芳樟醇;癸醛;正癸醇;十一醛;含量测定
中图分类号:R 917 文献标志码:A
芫荽(Coriandrum sativum L.)又名胡荽,俗称
香菜,英文名为 Coriander。芫荽属伞形科植物,
为一年生香辛叶类蔬菜,是人类历史上用于药用
和调味食品最古老的芳香蔬菜之一,全国各地均
有栽培。芫荽有抗菌、抗铝和铝沉积、促毛发生
长、抗肿瘤和抗氧化作用[1]荽中芳樟醇有抗菌镇
静作用[2],癸醛、正癸醇和十一醛有抗菌作用[3]。
目前,国内研究芫荽挥发性成分仅利用气相色谱-
质谱(GC-MS)对其进行定性研究,尚未见气相色
谱法测定芫荽中挥发性成分含量的报道。本文作
者建立了气相色谱法对芫荽中芳樟醇、癸醛、正癸
醇和十一醛成分含量进行测定的方法,方法简便,
结果令人满意,为芫荽的质量评价提供了一个可
行的方法。芳樟醇、癸醛、十一醛和正癸醇的化学
结构式见图 1。
Fig. 1 Structures of linalool(1),decanal(2),n-decanol
(3),undecanal(4)
图 1 芳樟醇(1)、癸醛(2)、+ -醛(3)和正癸醛(4)的结
构式
1 仪器与材料
7890A气相色谱仪(美国 Agilent公司) ,氢火
焰离子检测器(美国 Agilent 公司) ,1 μL 微量进
样器(北京捷安杰公司)。
正己烷(色谱纯,山东禹王实业有限公司) ,
柠檬烯(纯度质量分数为 96%,美国 Fisher Scien-
tific公司) ,芳樟醇、癸醛、十一醛和正癸醇(纯度
质量分数分别为 98%、97%、97%、≥99. 5%,批
号分别为 33710、22760、22703、30421,上海晶纯
实业有限公司)。
芫荽样品购自于辽宁沈阳、辽宁大连、辽宁丹
东、黑龙江哈尔滨、内蒙古赤峰、河北石家庄、山东
临沂、河南信阳、贵州毕节、云南昆明。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件与系统适用性试验
色谱柱:Agilent HP-5MSI(30 m × 0. 25 mm,
0. 25 μm) ;载气:氮气;进样口:280 ℃;FID 检测
器温度:300 ℃;流速:1 mL·min -1;分流比:1 ∶ 1;
柱温:初始温度 90 ℃,保持 2 min,以 2 ℃·min -1
升至 98 ℃,保持 24 min;进样量:1 μL。
在上述色谱条件下分别取混合对照品溶液和
供试品溶液各 1 μL 进样分析,芳樟醇、癸醛、正癸
醇和十一醛色谱峰与相邻其他色谱峰的分离度大
DOI:10.14066/j.cnki.cn21-1349/r.2012.12.005
于 1. 5,拖尾因子符合要求,理论塔板数不低于
1. 33 × 104。加入内标物标准品气相色谱图、样品
气相色谱图、加入内标物样品气相色谱图见图 2。
1—Iinternal standard(limonene) ;2—Linalool;3—Decanal;4—n-Decanol;5—Undecanal
Fig. 2 Gas chromatograms of control substance(A),samples(B)and samples added internal standard substance(C)
图 2 加入内标物的标准品(A)、样品(B)和加入内标物的样品(C)的气相色谱图
2. 2 混合标准品溶液的制备
分别精密量取芳樟醇、癸醛、正癸醇和十一醛
对照品适量,置 50 mL量瓶中,用正己烷稀释至刻
度,摇匀,制成 3. 152、26. 89、9. 531、5. 814 g·L -1
的对照品储备液,即得。
2. 3 内标溶液的制备
精密量取柠檬烯适量,置 100 mL 量瓶中,用
正己烷稀释至刻度,摇匀,制成 4. 20 g·L -1的内标
储备液,即得。
2. 4 供试品溶液的制备
芫荽样品洗净,沥干,根茎分离,称取新鲜芫
荽茎叶 120 g,置于 2 000 mL圆底烧瓶,参照 2010
年版《中华人民共和国药典》(一部)附录“挥发油
测定法”中甲法[4],用挥发油提取器提取 5 h得到
油状液体,将其转移至2 mL量瓶中,精密加入内
标液0. 2 mL,加入正己烷定容至刻度,即得。
2. 5 标准曲线的制备
精密吸取混合标准品溶液 1. 0、2. 0、4. 0、
6. 0、8. 0、10. 0 mL置 100 mL量瓶中,精密加入内
标溶液 10 mL,用正己烷定容至刻度。进样1 μL,
按“2. 1”条色谱条件测定。以标准品峰面积与内
标峰面积比值作为纵坐标(Y) ,以对照品质量浓
度为横坐标(ρ)求出回归方程。求出芳樟醇、癸
醛、正癸醇和十一醛的回归方程分别为:Y =
1. 219ρ - 3. 997 × 10 -4 (r = 0. 999 6)、Y =
1. 807ρ - 1. 545 × 10 -2 (r = 0. 999 7)、Y =
2. 421ρ - 8. 118 × 10 -3(r = 0. 999 6)、Y = 8. 226 ×
10 -1ρ + 2. 479 × 10 -3(r = 0. 999 7)。结果表明,
芳樟醇质量浓度在 31. 5 ~ 315. 0 mg·L -1内,癸醛
质量浓度在 269. 0 ~ 2 690. 0 mg·L -1内,正癸醇质
量浓度在 95. 3 ~ 953. 0 mg·L -1内,十一醛质量浓
度在 58. 1 ~ 581. 0 mg·L -1内线性关系良好。
2. 6 精密度试验
精密吸取同一混合标准品溶液 1 μL,连续进
样 6 次,分别计算计算芳樟醇、癸醛、正癸醇和十
一醛与内标物峰面积比值相对标准偏差。结果芳
樟醇的 RSD为 2. 4%,癸醛的 RSD为 1. 7%,正癸
醇的 RSD为 2. 1%,十一醛的 RSD 为 2. 9%。表
明仪器精密度良好。
2. 7 稳定性试验
取同一批样品,按“2. 4”条方法制备供试品
溶液,室温下放置分别在 0、2、4、8、12、24 h 测定
含量。结果芳樟醇的 RSD 为 2. 3%,癸醛的 RSD
为 1. 2%,正癸醇的 RSD 为 0. 74%,十一醛的
RSD为 2. 1%。表明样品在 24 h内稳定性良好。
2. 8 重复性试验
取同一批样品,按“2. 4”条方法制备供试品
溶液,测定含量。结果芳樟醇的 RSD为 0. 7%,癸
醛的 RSD为 0. 6%,正癸醇的 RSD为 1. 1%,十一
醛的 RSD为 1. 0%。表明该方法重复性良好。
2. 9 回收率试验
称取已知含量的芫荽样品(辽宁沈阳)9 份,
每份 120 g,按低、中、高浓度分别精密加入对照品
溶液,每一浓度 3 份,按“2. 4”条方法制备供试品
溶液,按“2. 1”条色谱条件进行测定结果见
表 1-4。
939第 12 期 姜振元等:GC 法测定芫荽茎叶中 4 种挥发性成分的含量
Table 1 Result of recovery of linalool(n =9)
表 1 芳樟醇回收率结果(n =9)
moriginal /mg madded /mg mfound /mg Recovery /% 珋x /% RSD /%
0. 251 0. 213 0. 472 103. 8
0. 251 0. 213 0. 468 101. 9
0. 251 0. 213 0. 466 100. 9
0. 251 0. 256 0. 513 102. 3
0. 251 0. 256 0. 509 100. 9 102. 0 1. 5
0. 251 0. 256 0. 511 101. 6
0. 251 0. 301 0. 557 101. 7
0. 251 0. 301 0. 553 100. 3
0. 251 0. 301 0. 567 105. 0
Table 2 Result of recovery of decanal(n =9)
表 2 癸醛回收率结果(n =9)
moriginal /mg madded /mg mfound /mg Recovery /% 珋x /% RSD /%
2. 15 1. 72 3. 91 102. 3
2. 15 1. 72 3. 92 102. 9
2. 15 1. 72 3. 91 102. 3
2. 15 2. 15 4. 37 103. 2
2. 15 2. 15 4. 35 102. 3 102. 6 0. 6
2. 15 2. 15 4. 38 103. 7
2. 15 2. 58 4. 80 102. 7
2. 15 2. 58 4. 77 101. 6
2. 15 2. 58 4. 79 102. 3
Table 3 Result of recovery of n-decanol(n =9)
表 3 正癸醇回收率结果(n =9)
moriginal /mg madded /mg mfound /mg Recovery /% 珋x /% RSD /%
0. 763 0. 610 1. 38 101. 1
0. 763 0. 610 1. 38 101. 1
0. 763 0. 610 1. 38 101. 1
0. 763 0. 756 1. 54 102. 8
0. 763 0. 756 1. 55 104. 1 101. 9 1. 1
0. 763 0. 756 1. 54 102. 8
0. 763 0. 915 1. 69 101. 3
0. 763 0. 915 1. 69 101. 3
0. 763 0. 915 1. 69 101. 3
Table 4 Result of recovery of undecanal(n =9)
表 4 十一醛回收率结果(n =9)
moriginal /mg madded /mg mfound /mg Recovery /% 珋x /% RSD /%
0. 458 0. 366 0. 831 101. 9
0. 458 0. 366 0. 834 102. 7
0. 458 0. 366 0. 841 104. 6
0. 458 0. 457 0. 92 101. 5
0. 458 0. 457 0. 92 102. 0 102. 6 0. 9
0. 458 0. 457 0. 93 103. 3
0. 458 0. 549 1. 02 102. 4
0. 458 0. 549 1. 02 102. 4
0. 458 0. 549 1. 02 102. 4
049 沈 阳 药 科 大 学 学 报 第 29 卷
2. 10 供试品含量测定
按“2. 4”条方法制备供试液,按“2. 1”条色谱
条件对 10 批样品进行含量测定。结果见表 5。
Table 5 Contents of linalool,decanal,n-decanol,undecanal in different origin
表 5 不同产地芫荽中芳樟醇、癸醇、正癸醇和十一醛的含量
Origin
w(linalool)/%
(× 10 -4)
w(decanal)/%
(× 10 -4)
w(n-decanol)/%
(× 10 -4)
w(undecanal)/%
(× 10 -4)
Liaoning Shenyang 2. 100 17. 90 6. 358 3. 825
Liaoning Dalian 1. 782 9. 40 2. 944 5. 194
Liaoning Dandong 2. 751 10. 70 2. 133 4. 983
Heilongjiang Haerbin 2. 346 14. 30 6. 265 6. 166
Neimenggu Chifeng 3. 367 25. 00 9. 900 9. 100
Hebei Shijiazhuang 2. 109 8. 95 6. 199 4. 218
Shandong Linyi 3. 234 9. 10 7. 211 4. 028
Henna Xinyang 4. 332 20. 20 3. 653 6. 789
Guizhou Bijie 2. 855 25. 90 6. 257 6. 353
Yunnan Kunming 2. 326 25. 80 6. 162 5. 225
3 结论与讨论
a. 本方法采用气相色谱法对芫荽中的芳樟
醇、癸醛、正癸醇和十一醛含量进行测定,通过对
色谱条件的优化,建立了能有效测定芳樟醇、癸
醛、正癸醇和十一醛的方法,并选用柠檬烯为内标
物,经过方法学验证,结果表明该方法符合含量测
定要求。
b. 考察了 DB-WAX、HP-5MSI、DB-1 三种毛
细管气相色谱柱,实验证明 HP-5MSI 毛细管气相
色谱柱分离度和峰形均较好故选用 HP-5MSI 毛
细管气相色谱柱。
c. 考察了十五烷、十六烷、十七烷、α-蒎烯、β-
蒎烯和柠檬烯 6 种内标物,实验证明柠檬烯出峰
时间合适且与待测组分峰可完全分离,满足内标
物选择标准故选用柠檬烯作为内标物。
d. 芳樟醇、癸醛、正癸醇和十一醛的出峰时
间分别为 7. 8、12. 3、18. 1、21. 8 min。在 30 min
后采用 10 ℃·min -1程序升温将芫荽其他挥发性
成分迅速冲出色谱柱,以达到快速检测的目的。
e. 不同来源的芫荽样品中芳樟醇、癸醛、正
癸醇和十一醛含量存在较大差异。购自与河南信
阳的芫荽样品芳樟醇和十一醛含量较高,内蒙古
赤峰芫荽样品中癸醛含量较高,辽宁沈阳芫荽样
品中正癸醇含量较高。
f. 目前未见报道关于芫荽茎叶中芳樟醇、癸
醛、正癸醇和十一醛的含量测定,陆占国[5]、张京
娜[6]等曾利用 GC-MS 测定某一地区芫荽茎叶中
各挥发性成分的相对含量,本实验采用较之之前
相关研究不同的供试品制备方法和测定方法测定
不同来源的芫荽 4 种挥发性成分,针对性更强,为
今后对于芫荽茎叶中挥发性成分含量测定提供可
靠的基础。
参考文献:
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合,2006,28(4) :218 - 221.
[6]张京娜,陈霞,杨冬,等.云南玉溪芫荽挥发油成分的
GC-MS分析[J].现代中药研究与实践,2009,23(4) :
24 - 26.
(下转至第 980 页)
149第 12 期 姜振元等:GC 法测定芫荽茎叶中 4 种挥发性成分的含量
Abstract:Objective To construct a full length cDNA library from venom gland of Bufo bufo gargarizans.
Methods Total RNA was extracted from the venom gland of B. bufo gargarizsas by TRIzol method. The
mRNA was purified with mRNA Purification Kit. In-Fusion SMARTerTM Directional cDNA Library Con-
struction Kit was used to obtain the primary library,and the titer,recombinant rate and the length of insert
fragments of the library were checked. A total of 211 clones were randomly selected for sequencing. Results
The titer of primary library was 1. 3 × 109 cfu·L -1with a recombinant rate of 90% . The length of insert frag-
ments ranged from 0. 4 kbp to 4. 0 kbp,and the average length was about 1. 1 kb. 180 unigenes which were
obtained by EST analysis. Conclusions The constructed full length cDNA library can be used for further
screening and cloning functional genes from the venom gland of B. bufo gargarizans.
Key words:Bufo bufo gargarizans;venom gland;full length cDNA library;

EST analysis
(上接第 941 页)
Determination of four volatile components in leaf of
Coriandrum sativum L. by GC
JIANG Zhen-yuan,LI Qing,ZHAO Long-shan,ZHENG Xiao-jiao,CHEN Xiao-hui,BI
Kai-shun*
(School of Pharmacy,Shenyang Pharmaceutical University,Shenyang 110016,China)
Abstract:Objective To establish a method for determining the contents of linalool,decanal,n-decanol,un-
decanal in Coriandrum sativum L. leaf.Methods The sample solution was distilled in vaporizing oil extrac-
tion apparatus. With HP-5MSI capillary column(30 m × 0. 25 mm,0. 25 μm) ,nitrogen as the carrier gas,
FID as the detector,the programmed temperature-GC and internal standard(Limonene was used for the inter-
nal standard)method were employed to determine the components. Results The results showed that the linear
ranges of linalool,decanal,n-decanol and undecanal were 31. 50-315. 0 mg·L -1(r = 0. 999 6) ,269. 0-
2 690. 0 mg·L -1(r = 0. 999 2) ,95. 3-953. 0 mg·L -1(r = 0. 999 8) ,58. 1-581. 0 mg·L -1(r = 0. 999 7).
The average recovery of the method were 102. 0% (RSD = 1. 5%) ,102. 0% (RSD = 0. 6%) ,101. 9%
(RSD = 1. 1%) ,102. 6% (RSD = 0. 9%). The average recovery of the method were 102. 0(RSD =
1. 5%) ,102. 0(RSD = 0. 6%) ,101. 9(RSD = 1. 1%) ,102. 6(RSD = 0. 9%). Conclusions The results
show that this method is steady,accurate and practical which could be used for the determination of linalool,
decanal,n-decanol and undecanal in Coriandrum sativum L. leaf.
Key words:Coriandrum sativum L.;GC;linalool;decanal;n-decanol;undecanal;content determination
089 沈 阳 药 科 大 学 学 报 第 29 卷