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第 36 卷 第 5 期温 州 医 学 院 学 报
·论 著·
豹皮樟黄酮类提取物抗氧化作用机制的研究
叶辉1、2， 金丽琴1， 郁建平3，吴建章4
（1.温州医学院 基础医学院 生化教研室 浙江 温州 325035；2.四川农业大学 生命科学院，四川 雅安
625014；3.贵州大学 生化营养研究所，贵州 贵阳 550025；4.温州医学院 药学院 浙江 温州 325035）
收稿日期:2006-02-23
作者简介:叶辉(1965-)，男，四川大竹人，生物化学与分子生
物学在读博士。
开发新药的物质可以来自天然资源与合成的化
合物[1]，但天然产物所提供的活性物质往往有结构
新颖、疗效高、毒副作用小等优点，所以它们是制
药工业中新药研究的主要来源。
另据资料报道[2,3]：某些植物叶中所含有的黄
酮类化合物不仅疗效显著、毒副作用小且具有多种
生理活性，其中仅仅抗氧化的生理活性就足以使黄
酮化合物成为极具开发前景的天然抗氧化剂，因此
对从来源广泛的南方多民族民间饮料——贵州豹皮
樟中进行黄酮类化合物的研究大有必要。
豹皮樟Litsea Coreana(Levl.Var. Lanuginose)
[摘　要]目的:探讨豹皮樟黄酮类提取物抗氧化作用的机制。方法:运用二苯代苦味肼基自由基法对山奈
酚、山奈酚 -3-O-β -D-葡萄糖甙、槲皮素 -3-O-β -D-葡萄糖甙三种贵州豹皮樟（Litsea Coreana）黄酮类
提取物进行了抗氧化活性研究；同时，还采用了组织匀浆丙二醛比色法测定了以上三种化合物对大鼠离体
心、脑、肝、肾四种组织脂质过氧化的影响。结果:无论是采用二苯代苦味肼基自由基法还是组织匀浆丙
二醛比色法，以上三种化合物均具有明显的抗氧化活性，并呈量效关系。且抗氧化活性为：山奈酚>槲皮
素 -3-O-β -D-葡萄糖甙＞山奈酚 -3-O-β -D-葡萄糖甙；另外，在组织匀浆丙二醛比色法中，以上三种物质
对SD大白鼠四种离体组织丙二醛抑制率为：肾组织＞心组织＞肝组织＞脑组织。结论:豹皮樟黄酮类提取
物抗氧化作用可能是通过清除自由基而实现的。
[关键词] 豹皮樟；山奈酚；山奈酚 -3-O-β -D-葡萄糖甙；槲皮素 -3-O-β -D-葡萄糖甙；抗氧化
[中图分类号]　R285.5[文献标识码]　A [文章编号]　1000-2138(2006)05-0424-04
Research on the mechanism of antioxidation of flavoniods from leaves of Litsea
coreana YE Hui*, JIN Li-qin, YU Jian-ping, et al.*Department of Biochemistry，School of Basic
Medical Sciences，Wenzhou Medical College, Wenzhou 325035
Abstract: Objective:To xplore the mechanism of antioxidation of flavoniods from leaves of
Litsea coreana. Methods: The antioxidiantion of three flavoniods from leaves of Litsea Coreana
was tested using the methods of DPPH and tissue homogenate MDA. Results:These compounds had obvious
effects of antioxidiantion and inhibition with dose effect relationship. and their effect was
Kaempferol＞Querctin-3-O-β -D-glucopyranoside＞Kaempferol-3-O-β -D-glucopyranoside; Moreorer,
compared with the inhibitory rate of tissue homogenate MDA of heart、brain、liver a d kidney, it was
found that their effect was kidney＞h ar＞liver＞brain. Conclusion: The flavoniods from leaves
of Litsea coreana have antioxidation through elimination free radical in vivo.
Key words: Litsea coreana; Kaempferol; Kaempfero-3-O-β -D-Glu; Quercetin-3-O-β -D-Glu.
antioxidation.
原产于大娄山，现在仍处于野生和半野生状态[4]，
其嫩茎叶作为饮料，具有较悠久的历史，尤以四
川、重庆及贵州遵义地区少数民族饮用历史悠久.
其汤色金黄带红，具有强烈的樟科植物芳香味，性
甘甜，有明目消暑解渴和消食去胀之功效，可防
馊、防腐、止泻、止嗝，为消食化积和清凉解热之
饮料[4]。豹皮樟中含有多种活性成分，其药理作用
极少见报道。山奈酚、山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖甙、
槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖甙是贵州大学生化营养研
究所从豹皮樟（Litsea Coreana）中分离出来的
黄酮类化合物，我们首次报告了这三种物质的抗氧
化实验研究。
1 材料和方法
第 3 6 卷第 5 期
2006 年 10 月
温 州 医 学 院 学 报
Journal of Wenzhou Medical College
Vol.36 No.5
Oct.2006
DOI:10.13771/j.cnki.33-1386/r.2006.05.007
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第 36 卷 第 5 期
1.1材料
1.1.1实验用植物:原料豹皮樟购于贵州遵义市
场，标本采自遵义市铁厂镇西花村瓮岩咀，经贵州
大学林学系兰开敏教授、廖海民副教授鉴定为樟科
木姜子属植物豹皮樟[2]（Litsea coreana）。
1.1.2实验用动物:实验用SD大鼠（200～250 g）
雌雄各半，由贵阳医学院实验动物中心提供。
1.1.3主要试剂:三氯乙酸（TCA）为上海试剂三
厂产品；硫代巴比妥酸（TBA）为Sigma公司产品；
四乙氧基丙烷为Sigma公司产品；DPPH( 二苯代苦
味肼基自由基)为日本东京化成工业株式会社产
品；其他试剂均为国产分析纯。
1.2实验方法
1.2.1豹皮樟中抗氧化物质的提取：豹皮樟1 kg，
不经粉碎，用水煮沸提取三次，每次10 min，煮
表1 DPPH实验加样表
Tab.1 The method of compounding samples in DPPH experiment
A0 2.5 ml2.5×10-4 mol/LDPPH溶液 +0.5 ml试样的溶剂（甲醇）（为空白对照）
Ai 2.5 ml2.5×10-4 mol/LDPPH溶液 +0.5 ml试样
Aj 2.5 mlDPPH溶液的溶剂（甲醇） +0.5 ml试样
注：①.试样为豹皮樟黄酮提取物及常见抗氧化剂；②.DPPH溶液的配制：以无水甲醇为溶剂配制成浓度为2.5×10-3 mol/
L的储液，于冰箱存放，临用时将储液以同一种溶剂稀释至2.5×10-4 mol/L；③.试样溶液的配制：仍以无水甲醇为溶剂
配制成浓度分别为：0.01 g/L、 0.10 g/L、1.00 g/L的试样溶液。
提液用多层砂布过滤，合并煮提液，减压浓缩后上
处理好的大孔树脂柱，用水:乙醇梯度洗脱，得到
5个部分，水洗脱部分（120 g），15%乙醇洗脱部
分（26 g），30%乙醇洗脱部分（24 g），45%乙醇
洗脱部分（23 g），60%乙醇洗脱部分（19 g），30%
和45%部分反复上大孔树脂柱，得到3个黄酮类化
合物，经结构鉴定分别为：山奈酚、山奈酚 -3-O-
β -D-葡萄糖甙、槲皮素 -3-O-β -D-葡萄糖甙。
1.2.2豹皮樟黄酮类提取物清除二苯代苦味肼基
自由基（DPPH）活性的测定（DPPH法[5～12]）在最
大波长处（517 nm），于直径1 cm比色皿中，按
表1加样测定各吸光度（A），总体积3.0 ml。每
一吸光度平行测2次，取其平均值。
清除率按下式计算：
1.2.3豹皮樟黄酮类化合物对离体组织脂质过氧
化的抑制作用（组织匀浆MDA比色法[13～16]）：组织
匀浆制备：取正常SD系大鼠（雌、雄各半）禁食
16 h后，脱臼处死，迅速取出内脏组织（心、肝、
脑、肾），用冷生理盐水（4 ℃）洗净血液，于冷
生理盐水中剪碎，加冷生理盐水做5%组织匀浆。
体外组织过氧化脂质测定：取5%新鲜组织匀浆1 ml
（重量比：组织匀浆:蒸馏水=5:95），加入0.1 ml受
试药液[即2.2.1中所提取的黄酮化合物单体溶于甲
醇中(其浓度为0.01 g/L、0.1 g/L、1 g/L)]，对
照管加0.1 ml生理盐水。置37 ℃振荡温育1.5 h。
取出后加入1 ml10%三氯乙酸终止反应（空白管温
育前加）。加0.67%硫代巴比妥酸（TBA）1 ml，沸水
浴15 min，冷却后3500 r/min，于4 ℃离心10 min，
取上清液测吸光度（A532 nm），在四乙氧基丙烷标
准曲线上，查出相应的四乙氧基丙烷浓度，然后乘
以系数68.89，即得MDA nmol/g的含量。
2 结果
2.1DPPH法中豹皮樟黄酮类提取物对自由基的清
除率 豹皮樟黄酮类提取物对二苯代苦味肼基自由
基(DPPH)均有较为明显的清除作用, 其抑制作用由
强到弱的排列顺序为: 山奈酚＞槲皮素-3-O-β-D-
葡萄糖甙＞山奈酚 -3-O-β -D-葡萄糖甙,且其作用
在0.01～ .00 g/L浓度范围内也随剂量增加作用
增强(见表2)。
表2 受试物对DPPH（二苯代苦味肼基自由基）清除率的影响
Tab.2 Effect of Flavoniods on the eliminable rate of DPPH
山奈酚 59.4676.6788.19
山奈酚 -3-O-β -D- 葡萄甙 48.4362.7572.54
槲皮素 -3-O-β -D- 葡萄甙 54.3869.2380.56
0.01 0.10 1.00
不同终浓度（g/L）DPPH清除率受 试 物
（豹皮樟黄酮类提取物）
2.2组织匀浆MDA比色法中豹皮樟黄酮类提取物
对SD大鼠离体组织脂质过氧化的影响 无山奈酚
抑制时，脑、肝、心、肾匀浆孵育2h后MDA生成量
分别为（446.4±66.9）nmol/g、（402.1±53.3）
nmol/g、（268.7±30.5）nmol/g和（149.2± 3.8）
nmol/g组织湿重（n=4），抑制率均为0。在山奈酚、
山奈酚 -3-O-β -D-葡萄糖甙和槲皮素 -3-O-β -D-葡
叶辉，等：豹皮樟黄酮类提取物抗氧化作用机制的研究
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第 36 卷 第 5 期温 州 医 学 院 学 报
萄糖甙作用下，四种离体组织MDA生成抑制率明显
上升(见表3～表5)。
表3 不同浓度山奈酚作用下大鼠四种离体组织MDA生成抑制
率的比较
Tab.3 Comparison of the antioxidation effect in rat
tissues among different concentration of Kaempferol
脑 49.34 62.58 74.49
肝 52.26 65.24 77.73
心 57.52 74.02 80.56
肾 71.42 83.45 89.24
0.01 0.10 1.00
不同终浓度（g/L）MDA生成抑制率离体组织
（SD大鼠）
表4 不同浓度山奈酚 -3-O-β -D-葡萄糖甙作用下大鼠四种离
体组织MDA生成抑制率的比较
Tab.4 Comparison of the antioxidation effect in rat tissues
among different concentration of Kaempferol-3-O-β -D-Glu
脑 36.56 50.04 62.34
肝 45.14 54.46 68.31
心 47.97 57.56 68.52
肾 56.00 71.34 75.54
0.01 0.10 1.00
不同终浓度（g/L）MDA生成抑制率离体组织
（SD大鼠）
表5 不同浓度槲皮素 -3-O-β -D-葡萄糖甙作用下大鼠四种离
体组织MDA生成抑制率的比较
Tab.5 Comparison of the antioxidation effect in rat tissues
among different concentration of Quercetin-3-O-β -D-Glu
脑 41.06 53.86 67.11
肝 50.22 58.61 73.06
心 54.94 65.14 73.85
肾 62.07 75.73 80.31
0.01 0.10 1.00
不同终浓度（g/L）MDA生成抑制率离体组织
（SD大鼠）
3 讨论
表2结果表明：受试物对二苯代苦味肼基自由基
(DPPH)均有较为明显的清除作用，且其作用在0.01～
1.00 g/L浓度范围内也随剂量增加作用增强。豹皮
樟之三种黄酮类提取物的抑制作用由强到弱的排列
顺序基本上也为: 山奈酚＞槲皮素-3-O-β-D-葡萄
糖甙＞山奈酚 -3-O-β -D-葡萄糖甙。表3～表5结
果表明：在豹皮樟三种黄酮类提取物的分别作用
下，大鼠四种离体组织（脑、肝、心、肾）MDA生
成抑制率的比较均为：肾组织＞心组织＞肝组织＞
脑组织，其作用在0.01～ .00 g/L浓度范围内也
随剂量增加作用增强。且这三种提取物的抑制作用
由强到弱的排列顺序基本上也为:山奈酚>槲皮素-
3-O-β -D-葡萄糖甙>山奈酚 -3-O-β -D-葡萄糖甙。
所以无论是用组织匀浆MDA比色法还是DPPH法对
豹皮樟之黄酮类提取物（山奈酚、山奈酚 -3-O-β -
D-葡萄糖甙、槲皮素 -3-O-β -D-葡萄糖甙）进行抗
氧化测试,结果一致（即: 豹皮樟之三种黄酮类提
取物的抑制作用由强到弱的排列顺序均为:山奈酚
＞槲皮素 -3-O-β -D-葡萄糖甙>山奈酚 -3-O-β -D-
葡萄糖甙，且其作用在0.01～ .00 g/L浓度范围
内随剂量增加作用增强），因此豹皮樟黄酮类提取
物抗氧化作用可能是通过清除自由基而实现的。
上述结果与资料所报道的动植物体中天然存
在的黄酮化合物具有显著的抗氧化生理活性,是极
好的天然抗氧化剂的结论一致，再加上天然抗氧
化剂无合成抗氧化剂具有的不同程度的毒副作用，
因此对豹皮樟黄酮化合物的研究,不仅在植物分类
上有理论意义,且在药用植物开发（人体及动物抗
衰老药物的开发）中更有着特殊的价值。另据资料
报道[17]：一般认为，含酚羟基的化合物具有明显的
清除氧自由基的作用。豹皮樟提取物：山奈酚、山
奈酚 -3-O-β -D-葡萄糖甙、槲皮素 -3-O-β -D-葡萄
糖甙均为黄酮醇或黄酮醇甙，其化学结构中含有酚
羟基。因此可推知：以上三种提取物其清除氧自由
基的作用可能也与其带有酚羟基团有关，故本研究
结果为开发和利用贵州豹皮樟叶中黄酮类天然抗氧
化剂提供了一定的科学依据。
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第 36 卷 第 5 期
·论 著·
IL-13Rα 2 mRNA在脑胶质瘤中的表达及意义
章剑剑，郑伟明，苏志鹏
(温州医学院第一附属医院 神经外科，浙江 温州 325000)
收稿日期:2005-11-03
作者简介:章剑剑（1979-），男，湖北通城人，医学硕士。
白细胞介素13(Interleukin-13,IL-13)是一
种具有多种功能的生物活性多肽，最近的研究发现
[摘　要]目的:探讨白细胞介素13α2受体(IL-13Rα2)与脑胶质瘤发生、发展的关系。方法:采用RT-PCR
半定量法检测在20例脑胶质瘤和5例正常脑组织标本中的IL-13Rα2表达水平。 结果:在5例正常脑组织
中缺乏IL-13Rα2 mRNA的表达，而20例胶质瘤有13例存在IL-13Rα2的表达(阳性率为65%)，两者差异
有显著性(P<0.05)。低级别(Ⅰ、Ⅱ级)和高级别(Ⅲ、Ⅳ级)脑胶质瘤之间IL-13Rα2 mRNA的表达阳性率
差异无显著性(P>0.05)，但两者IL-13Rα2 mRNA表达的A值差异极为显著(P<0.05)。结论:IL-13Rα2在
脑胶质瘤中存在表达，且在高级别脑胶质瘤中表达较强；IL-13Rα2可能在脑胶质瘤发生、发展过程中发
挥重要作用。
[关键词] 白细胞介素13;受体;神经胶质瘤;逆转录 -聚合酶链反应
[中图分类号]　R651.11[文献标识码]　A [文章编号]　1000-2138(2006)05-0427-03
Expression and significance of interleukin-13 r ceptor α2 mRNA in gliomas ZHANG Jian-
jian, ZHENG Wei-ming, SU Zhi-peng. Department of Neurosurgery,the First Affiliated Hospital of
Wenzhou Medical College,Wenzhou 325000
Abstract: Objective:To discuss the relationship between interleukin-13 receptorα2(IL-13R
α2) and the tumorigenesis and progression of gliomas. Methods: Expre sion level of IL-13Rα
2 mRNA was studied by reverse transcription-polymerase chain reaction(RT-PCR) in 20 cases of
glioma and 5 cases of normal brain tissue.Results: There w s no expression of IL-13Rα2 mRNA
in all cases of normal brain tissue, whereas 13 of 20 gliomas expressed IL-13Rα2.Therewas
specially significant difference between them(P<0.05). Although the positive expression rate of
IL-13Rα2 had no significant discrepancy(P>0.05) between low grade gliomas and high grade
gliomas, there was greatly significant difference(P<0.05) between thei op ical ensity ratio (A
Value) of IL-13Rα2. Conclusion: There is expression of IL-13Rα2 in human gliomas, and the
expression levels of IL-13Rα2 mRNA are higher in high grade gliomas.IL-13Rα2 may play an
important role in tumorigenesis and progression of human gliomas.
Key words: interleukin 13; receptor;glioma;RT-PCR
它可能参与某些恶性肿瘤的发生、发展[1]。在脑胶
质瘤中有学者利用核糖核酸酶保护分析 (RNase
pro-tection assay，RPA)方法检测了IL-13和其
受体(Interleukin-13 Recepter，IL-13R)mRNA的
表达情况，发现在胶质瘤中虽不表达IL-13mRNA，
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(本文编辑：胡苗苗，毛文明)
第 3 6 卷第 5 期
2006 年 10 月
温 州 医 学 院 学 报
Journal of Wenzhou Medical College
Vol.36 No.5
Oct.2006