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RP-HPLC同时测定白花檵木花中的槲皮素和山奈酚



全 文 :第 29卷 ,第 3期 光 谱 实 验 室 Vol . 2 9 , No . 3
2 0 1 2年 5月 Chinese Journal of Spectroscopy Laboratory May , 2 0 1 2
RP-HPLC同时测定白花 木花中的
槲皮素和山奈酚
① 联系人 ,电话: ( 0577) 86699572;传真: ( 0577) 86689983; E-mail: pxj666@ 163. com
作者简介:潘晓军 ( 1978— ) ,男 ,江西省宜春市人 ,讲师 ,在读博士 ,主要从事中药资源及质量控制研究工作。
收稿日期: 2012-03-12;接受日期: 2012-03-21
潘晓军① a ,b 吕圭源a 陈素红b 胡淑平b
a(浙江中医药大学药学院 杭州市滨江区滨文路 548号  310053)
b(温州医学院药学院 浙江省温州市高教园区中心北路 3号  325035)
摘 要 建立用反相高效液相色谱法同时测定白花 木花中槲皮素和山奈酚含量的方法。 采用
Eclipse XDB-C18色谱柱 ( 4. 6mm× 250mm, 5μm ) ; 柱温: 25℃ ; 流 动相为乙腈 -0. 4%磷 酸水溶液
( 35∶ 65, V /V ) ;流速为 1. 0m L· min- 1;检测波长为 360nm。 槲皮素在 1. 08× 10- 3— 1. 08× 10- 1μg· μL- 1
的范围内具有良好的线性关系 ( r= 0. 9999) ,平均回收率 97. 23% , RSD为 1. 26% ;山奈酚在 1. 04× 10- 3—
1. 04× 10- 1μg· μL- 1的范围内具有良好的线性关系 (r= 0. 9999) ,平均回收率 99. 78% , RSD为 0. 46% 。方
法简便、准确、可靠 ,可作为白花 木花中槲皮素和山奈酚的定量分析方法。
关键词 白花 木花 ;槲皮素 ;山奈酚 ;高效液相色谱法
中图分类号: O657. 7+ 2   文献标识码: B   文章编号: 1004-8138( 2012) 03-1717-04
1 引言
白花 木为金缕梅科 ( Hamamelidaceae ) 木属 ( Loropetalum R. Br. )植物 [Loropetalum
Chinensis( R. Br. ) Oliv. ] ,在我国华东、华南、西南等各省区广有分布。白花 木根、叶、花、果均可入
药 [1 ] ,其中白花 木花具有止血、止泻、止痛、生肌的功效 ,用于子宫出血、腹泻、烧伤和外伤出血等
症的治疗。
对白花 木花成分研究的文献报道很少 ,唐克华等用 T LC对白花 木的变种红花 木
(Loropetalum Chinense Var. rubrum)的花色素进行分离与定性研究 ,结果表明红花 木花中的色素
主要成分属二氢黄酮醇类 [ 2] ;杨鑫宝等用 GC-M S联用法分析了白花 木花中的挥发油成分 ,测得
其挥发油中主要化学成分为十五烷等烷烃类成分 [ 3]。测定白花 木花中槲皮素和山奈酚的含量 ,未
见相关报道。
而考察白花 木其他部位 ,即叶子中槲皮素和山奈酚的含量 ,已有相关文献报道:李雪晶等用
反相高效液相色谱法测定了 木及红花 木的叶中槲皮素的含量 [4 ] ;游璐茜等用反相高效液相色
谱法同时测定了福建产 木叶中槲皮素和山奈酚的含量 [5 ]。参考相关色谱条件 ,本文建立反相高效
液相色谱法同时测定白花 木花中槲皮素和山奈酚的含量 ,为进一步开发白花 木花的药材资源
提供实验依据。
2 实验部分
2. 1 仪器与试剂
Agilent 1100 Series型高效液相色谱仪 ( G1379A在线脱气泵 , G1311A四元比例阀 , G1316A柱
温箱 , G1314A紫外检测器 ,美国 Agilent公司 ) ; Eclipse XDB-C18色谱柱 ( 4. 6mm× 250mm, 5um ,美
国 Agilent公司 ) ;舒美 KQ-500DE型医用数控超声清洗器 (昆山市超声仪器有限公司 ) ; BS210S型
电子分析天平 (北京赛多利斯仪器系统有限公司 ) ; 3号筛 ( 50目筛 ,安平县文宁不锈钢网门市部 ) ;
U PWS型超纯水器 (杭州永洁达净化科技有限公司 ) ; 101-1-BS型电热恒温鼓风干燥箱 (上海跃进
医疗器械厂 )。
乙腈 (色谱纯 ,天津四友生物医学技术有限公司 ) ;甲醇 (分析纯 ,中国上海试剂总厂 ) ;盐酸 (分
析纯 ,中国浙江衢州巨化试剂有限公司 ) ;槲皮素 (批号: 117-39-5,纯度≥ 98% )、山奈酚 (批号: 520-
18-3,纯度≥ 98% ) ,均购于成都曼思特生物科技有限公司 ; 木花采于温州市大罗山 ,经温州医学
院药学院蔡进章老师鉴定为白花 木 [Loropetalum Chinensis ( R. Br. ) Oliv . ]的花。实验用水为超纯
水。
2. 2 实验方法
2. 2. 1 色谱条件
色谱柱: Eclipse XDB-C1 8 ( 4. 6mm× 250mm , 5μm,美国 Agilent公司 ) ;流动相: 乙腈 -0. 4%磷酸
( 35∶ 65, V /V ) ;流速: 1mL· min- 1;检测波长: 360nm;柱温: 25℃ ;进样量: 10μL。在此色谱条件下 ,
以槲皮素和山奈酚的峰计算理论塔板数分别为 7600和 6800,分离度良好 ,见图 1。
图 1 槲皮素和山奈酚对照品色谱图
A—— 槲皮素 ; B—— 山奈酚。
2. 2. 2 对照品溶液制备
准确称取槲皮素对照品 5. 4mg和山奈酚对照品 5. 2mg ,用 80%甲醇溶解并定容至 50mL容量
瓶中 ,即得混合对照品母液。
2. 2. 3 供试品溶液的制备
取烘干至恒重的 木花 ,粉碎后过 3号筛 ,称取粉末约 0. 5g于圆底烧瓶中 ,加入 80%甲醇
50mL,称重 ,回流提取 1h,再称重 ,补足减失重量。过滤 ,取 25mL滤液 ,依次加入 5% HCl 10mL、
80%甲醇 5mL,回流 30min,放冷 ,用 80%甲醇定容于 50mL容量瓶中 ,摇匀 ,得供试品液。
1718 光谱实验室 第 29卷
3 结果与讨论
3. 1 线性关系的考察
分别准确量取对照品母液 0. 1、 0. 25、 0. 5、 1、 2. 5、 5mL,各置于 10mL容量瓶中 ,用 80%甲醇稀
释至刻度 ,摇匀 ,按 2. 2. 1节色谱条件进行测定。以峰面积 A对浓度 C进行线性回归 ,得槲皮素的
校准曲线方程为 A = 78844. 9267C - 22. 8135, r = 0. 9999; 山奈酚的校准曲线方程为
A= 68530. 6229C- 15. 0331, r= 0. 9999。结果表明: 槲皮素在 1. 08× 10- 3— 1. 08× 10- 1μg·μL- 1的
范围内具有良好的线性关系 ,山奈酚在 1. 04× 10- 3— 1. 04× 10- 1μg·μL- 1的范围内具有良好的线
性关系。
3. 2 精密度实验
准确吸取槲皮素和山奈酚混合对照品母液 10μL,按 2. 2. 1节色谱条件重复进样 6次 ,测定峰
面积 ,结果槲皮素峰面积的 RSD为 1. 36% ,山奈酚峰面积的 RSD为 1. 54% 。
3. 3 重复性实验
准确称取同一批样品粉末 5份 ,每份约 0. 5 g ,按 2. 2. 3节制备样品溶液 ,按 2. 2. 1节下色谱条
件测定 ,结果测得槲皮素的平均含量为 0. 962% , RSD为 0. 73% ;山奈酚的平均含量为 0. 526% ,
RSD为 1. 64%。
3. 4 加标回收率实验
准确称取已测知含量 (槲皮素含量为 0. 975% ,山萘酚含量为 0. 511% )的 木花 6份 ,每份约
0. 5g ,置于圆底烧瓶中 ,分别准确加入对照品母液 3mL3份 , 6mL 3份 ,挥干溶剂 ,按 2. 2. 3项制备
供试品溶液 ,按 2. 2. 1节色谱条件测定 ,计算回收率 ,实验结果见表 1、 2。
表 1 槲皮素回收率实验结果 (n= 3)
试验号 取样量
( g)
样品中量
( mg)
加入量
(mg )
测得量
( mg)
回收率
(% )
平均回收率
(% )
RSD
(% )
1 0. 5004 4. 8789 0. 324 5. 1981 98. 52
2 0. 5001 4. 8760 0. 324 5. 1918 97. 47
3 0. 5001 4. 8760 0. 324 5. 1890 96. 60
4 0. 5002 4. 8770 0. 648 5. 5166 98. 70 97. 23 1. 26
5 0. 5004 4. 8789 0. 648 5. 5038 96. 44
6 0. 5001 4. 8760 0. 648 5. 4957 95. 63
表 2 山萘酚回收率实验结果 (n= 3)
试验号 取样量
( g)
样品中量
( mg)
加入量
(mg )
测得量
( mg)
回收率
(% )
平均回收率
(% )
RSD
(% )
1 0. 5004 2. 5570 0. 312 2. 8695 100. 16
2 0. 5001 2. 5555 0. 312 2. 8674 99. 97
3 0. 5001 2. 5555 0. 312 2. 8640 98. 88 99. 78 0. 46
4 0. 5002 2. 5560 0. 624 3. 1798 99. 97
5 0. 5004 2. 5570 0. 624 3. 1803 99. 89
6 0. 5001 2. 5555 0. 624 3. 1783 99. 81
  由表 1、 2可知 ,槲皮素和山奈酚的回收率都比较理想 ,平均回收率分别为 97. 23% 、 99. 78% ,
RSD分别为 1. 26%和 0. 46% ,表明该方法稳定、可靠。
3. 5 样品的含量测定
按拟定的含量测定方法测定白花 木花中槲皮素、山奈酚的含量 ,按外标法计算 ,结果见表 3,
1719第 3期 潘晓军等: RP-HPLC同时测定白花 木花中的槲皮素和山奈酚
图 2。
表 3 样品含量测定结果 (n= 3,% )
样品名 槲皮素含量 平均含量
山奈酚
含量 平均含量
0. 975 0. 511
白花 木花 0. 984 0. 984 0. 513 0. 516
0. 994 0. 525
3. 6 讨论
结合相关文献 [4, 5 ] ,实验结果表明 ,白花 木花中槲皮素和山奈酚含量较叶子中的更高。
现代研究发现 ,槲皮素及其衍生物是植物界分布最广泛的黄酮类化合物 ,是最强的抗癌剂之
一 ,对肿瘤有化学预防和治疗双重作用 ,对多种致癌剂、促癌剂有拮抗作用 ,且可以抑制多类恶性肿
瘤细胞的生长 ;山奈酚有着逆转肿瘤细胞多药耐药作用、对神经细胞的保护作用以及对蛋白激酶的
抑制作用等 [6 ]。本文将槲皮素和山奈酚定为白花 木花的指标成分 ,并应用 HPLC测定其含量。
4 结论
建立了反相高效液相色谱法同时测定白花 木花中槲皮素和山奈酚含量。实验结果表明 ,该
方法简便可行 ,重现性良好 ,可作为白花 木花中槲皮素和山奈酚的定量分析方法。
参考文献
[1 ]江苏新医学院 .中药大辞典 [M ] .上海:上海人民出版社 , 1977. 1990— 1991.
[2 ]杨鑫宝 ,赵博 ,杨秀伟 .白花 木花挥发油成分的 GC-MS分析 [ J] .中国现代中药 , 2010, 12( 1): 25— 26.
[3 ]唐克华 ,陈璇 ,陈功锡 .红 木花色素 TLC分离与定性研究 [ J ].食品科学 , 2005, 26( 9): 52— 57.
[4 ]李雪晶 ,高叶 ,周小江 . 木叶中槲皮素的含量测定 [ J] .湖南中医药大学学报 , 2008, 28( 2): 46— 48.
[5 ]游璐茜 ,吴振 ,赵玉芳 . 木中槲皮素、山奈酚和杨梅素含量的高效液相色谱法测定 [ J ].化学通报 , 2009, 72( 10): 898— 900.
[6 ]张文志 ,周新 ,赵学增 .黄酮醇苷元山奈酚和槲皮素的研究 [ J] .中国误诊学杂志 , 2007, 7( 22): 5219— 5220.
Simultaneous Determination of Quercetin and Kaempferol in Flowers
of Loropetalum Chinensis( R. Br. ) Oliv. by RP-HPLC
PAN Xiao-Jun
a ,b  LV Gui-Yuana  CHEN Su-Hongb  HU Shu-Pingb
a (Department of Med icine, Zhejiang Chinese Medical University , Hangzhou 310053, P. R. China )
b( Department o f Medicine,Wenzhou Medical College,Wenzhou 325035, P. R. China )
Abstract  A method fo r the simultaneous determination of the contents of quercetin and
kaempferol in the f low er of Loropetalum Chinensis ( R. Br. ) Oliv. by RP-HPLC was established. The
compounds w ere separated by Eclipse XDB-C18 ( 4. 6mm× 250mm, 5μm)column a t 25℃ with a mobi le
phase consisting of acetonit rile-0. 4% phosphoric acid solution ( 35∶ 65, V /V ) at a flow rate of 1. 0mL
· min- 1 . The detection w aveleng th was at 360nm. Quercetin show ed a good linear relationship
(r= 0. 9999) in the range of 1. 08× 10- 3— 1. 08× 10- 1μg· μL- 1 , the average recovery was 97. 23%
w ith RSD of 1. 26% (n= 6) . Kaempferol show ed a good linear relationship(r= 0. 9999) in the range
of 1. 04× 10- 3— 1. 04× 10- 1μg· μL- 1 , the average recovery w as 99. 78% with RSD of 0. 46% (n=
6) . The developed method is simple, accurate and reliable wi th good repeatability, and can be used as
quantitative analysis of quercetin and kaempferod in the f low ers of Loropetalum Chinensis ( R. Br. )
Oliv . .
Key words  Flow ers of Loropetalum Chinensis ( R. Br. ) Oliv . ; Quercetin; Kaempferol; HPLC
1720 光谱实验室 第 29卷