全 文 ：产业与科技论坛 2012年第 11卷第 14期
2012.（11）.14Industrial & Science Tribune
药用植物翻白草中黄酮的提取工艺研究
□边树蕊 杨葵华
【内容摘要】本文以翻白草叶为原料，优化山奈素、槲皮素的提取工艺，运用正交实验法考察提取时间、提取次数、料液比对提取
结果影响。试验结论为翻白草叶提取槲皮素、山奈酚最佳条件:15 倍样品量的沸水提取 2 次，每次 2 h。该工艺条
件能够将样品中目标活性成分有效分离提取，且该方法经济、环保。
【关键词】翻白草;槲皮素;山奈酚;正交试验;提取工艺
【作者简介】边树蕊，北京大学生命科学学院。杨葵华，女，绵阳师范学院化学与化学工程学院副教授
翻白草(Potentilla discolor Bge．)为蔷薇科多年生草本
植物，民间以全草入药，主要有解毒消肿，降糖降脂，凉血止
血，清热除湿等功效［1，2］。翻白草含多种有效成分，其中山
奈酚主要具止咳祛痰和消炎作用，槲皮素表现为较强的抑
菌作用，其抑菌浓度可以达到 59 × 10 － 6和 37 × 10 － 6［1］。医
学研究表明:槲皮素的抑制非酶糖化作用是通过抑制蛋白
质糖化，进而抑制醛糖还原酶活性，实现降糖效果［3，4］。为
促进翻白草药用资源的研究，拓展翻白草的应用领域，对翻
白草主要活性成分山奈酚和槲皮素建立分离提取工艺显得
十分必要，而且目前少有文献报道翻白草中山奈酚、槲皮素
的一步法同时分离提取工艺。本研究以 HPLC 法为监测、
检测手段，采用正交试验法，以翻白草提取物中槲皮素、山
奈酚作为研究对象，针对分离提取工艺过程中影响因素进
行筛选，确定最佳分离提取工艺，为翻白草综合开发利用提
供理论依据。
一、材料与方法
(一)材料。翻白草采自山东泰安市，经成都天然产物研
究所黄铭教授鉴定为蔷薇科多年生草本植物翻白草(Potentilla
discolor Bge．)。将翻白草叶 60℃条件烘干，粉碎，过 0． 3 mm
筛，备用。对照品购于中国药品生物制品检定所，山奈酚对照
品(批号:110861 －200405) ，槲皮素对照品(批号:081 － 9003)。
甲醇为色谱纯，水为 2次蒸馏水，其他试剂为分析纯。
限的实际电压的情况时，也是如此，使点所属的区域能够得
到有效的判断。
在自动控制对执行允许的条件下，通过程序对分接头调
节、电容器投切进行执行，有效完成自动控制的重要工作。
当电容器的循环投切以及分接头的确定下，依据原有的控制
策略，对其进行有效的控制。
在闭锁信号的处理过程中，检测、校验开关量和模拟量，
是非常重要的一个依据，在程序控制中，不能够缺少的一个
部分，通过这种依据的设立，能够对控制命令的准确执行进
行保证，同时对设备的安全运行也非常的有利，可有效处理
电容器有关的保护信号与变压器分接头。如对主变而言，当
其达到日调节次数的最大值时，出现主变过流、低压、停电、
主变档位不一致、分接头保护动作等情况时，就要通过闭锁
调节分接头，在发生过压的状况下，对运行的电容器进行有
效的切除。如果系统运行方式与参数检测结果不一致，就不
能对自动控制进行执行。
考虑系统的运行方式，借助分接头动作，对子程序进行
准备，方向控制程序、行程控制程序两块共同组成调节命令
程序对分接头进行控制，依据 PLC 的高速脉冲指令，可对行
程控制程序进行控制，对分接头动作定位的及时性、准确性
的保障非常重要。依据程序命令，可对投、切电容器进行控
制，在驱动接触器动作的实施下，能够促使电容器投、切控制
的有效实现。
三、结语
本方案主控单元为西门子 PLC，通过扩展灵活、指令丰
富、抗干扰能力强等技术优势的充分发挥，对具有通讯功能、
可靠性高的电量变送器进行了选用作为参数单元;参数检测
单元与控制主机通过通讯方式获得相关参数，且与其他具有
串口的设备进行通讯。利用电压无功控制策略，对影响电压
无功控制效果的因素进行了分析，以实时计算数据作为控制
决策的参考，促使精度控制的有效提高，有效避免无效调节
对设备造成的危害。
【参考文献】
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(二)仪器设备。岛津 LC － 20AT高效液相色谱系统，二
极管阵列检测器(DAD) ，CLASS － VP V5． 0 色谱数据处理工
作站，CTD － 6A 色谱柱温箱，SZ － 93 型自动双重纯水蒸馏
器，KQ －25DE型医用数控超声波清洗器，常规实验仪器。
(三)正交实验设计。黄酮的提取方法一般为乙醇回流
法、乙醇冷浸法、水煮法、温漉法等，文献［3］对乙醇浸提法的
条件已报道。根据槲皮素、山奈酚的性质，经试验，水煮法提
取翻白草叶中 2 种黄酮组分，仍可取得满意效果，并且条件
易控，环保、低成本。影响槲皮素、山奈酚组分提取率的主要
因素是料液比、提取时间、提取次数，结合文献和预试结果，
以上述三个主要因素为考察对象，每个因素设立 3 个水平
(见表 1) ，采用 L9(3
4)正交设计，以翻白草叶提取物。
表 1 因素水平表
水平 料液比(A)提取时间(B)提取次数(C)
1 20 倍 1 h 1 次
2 25 倍 2 h 2 次
3 30 倍 3 h 3 次
其中的 2 种活性成分提取量之和为考察指标，优选活性
成分槲皮素、山奈酚的提取工艺，试验安排及结果见表 2，表
3。
表 2 L9(34)正交试验结果
列号 A B C D 总提取量(μg﹒ g －1)
1 1 1 1 1 591． 71
2 1 2 2 2 1011． 43
3 1 3 3 3 1281． 28
4 2 1 3 2 1108． 65
5 2 2 1 3 597． 09
6 2 3 2 1 937． 71
7 3 1 2 3 903． 15
8 3 2 1 1 979． 69
9 3 3 3 2 981． 80
K1 2884． 42 2603． 51 2509． 11 2170． 60
K2 2643． 45 2588． 21 3101． 88 2852． 29
K3 2864． 64 3200． 79 2781． 52 3369． 62
R 80． 32 204． 19 197． 59 399． 67
表 3 方差分析
方差来源 离差平方和 自由度 均方 F值 P值 显著性
A 11931． 42 2 5965． 71 0． 049486 0． 952848 ﹥ 0． 1
B 81359． 08 2 40679． 54 0． 337437 0． 747699 ﹥ 0． 1
C 58690． 45 2 29345． 22 0． 243419 0． 804234 ﹥ 0． 5
误差 241108． 90 2 120554． 50
注:F005(2，2)= 19，F010(2，2)= 9． 0
(四)浸膏收率。取正交试验所得提取试液适量，置已干
燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干后，置烘箱内 60℃干燥至恒
重，置于保燥器内冷却至室温，精密称定质量，计算收率。
(五)测定山奈酚、槲皮素含量。
1．色谱条件。Kromasil C18 色谱柱(4． 6 mm × 150 mm，5
μm) ;流动相:MeOH － 0． 3% H3PO4(3． 8 ︰ 6． 2，V /V) ;流速:
1． 1 mL·min －1;检测波长:365 nm;柱温:35 ℃;进样量为 10
μL;分离度≥1． 5;灵敏度为 0． 050 AUFS;理论板数按槲皮
素、山奈酚峰计算均大于 4 000。
2．对照品溶液配制。精密称取干燥至恒重的山奈酚、槲
皮素对照品，分别为 7． 2 和 4． 1 mg，置于 50 mL量瓶，加甲醇
45 mL，超声溶解，冷却至室温后甲醇定溶至刻度，摇匀。吸
取混合对照品溶液 2． 5 mL，置于 10 mL 量瓶中，甲醇稀释至
刻度，摇匀，即得。槲皮素和山奈酚混标溶液浓度分别为 36．
0 μg． mL －1、20． 5 μg． mL －1。
3．供试样品溶液配制。精密称取干燥翻白草样品粉末
0． 50 g，加入石油醚(60 ～ 90℃)50 mL，超声 20 min，滤过，弃
去石油醚，药渣挥干。药渣精密加甲醇 50 mL 称定质量，水
浴回流 2 h，补足减失的甲醇质量，摇匀，用 0． 46 μm 微孔滤
膜过滤，取续滤液待测。
4．工作曲线制备。精密吸取混标溶液 1． 0、2． 0、3． 0、5．
0、7． 0 mL，置于 10 mL 容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇
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匀，分别精确进样 10μL，重复进样(n = 3) ，按色谱条件行色
谱，测定槲皮素、山奈酚的峰面积。分别以对照品进样量 X
(μg)为横坐标，峰面积 Y(A)为纵坐标，绘制标准曲线，山奈
酚的线性围 0． 0360 － 0． 252 μg。回归方程 y = 2682． 4x － 20．
20，相关系数 r = 0． 9998。槲皮素的线性范围 0． 0205 ～ 0．
143μg。回归方程 y = 6539． 6x － 321． 41，相关系数 r = 0．
9996。
5．精密度考察。取混合对照品溶液，重复进样 5 次，每
次 10 μL，测定峰面积积分值，结果山奈酚相对标准偏差为 1．
3． %，槲皮素相对标准偏差为 2． 1%。
6．稳定性考察。取供试样品溶液，分别在制备完成后每
隔 3 h进样 10 μL，连续按色谱条件测定 5 次，其峰面积的相
对标准偏差为结果:山奈酚 RSD = 0． 3%，槲皮素 RSD = 0．
7%，表明样品在 12 h内基本稳定。
7．回收率试验。精密称取同批样 6 份，其中 5 份分别加
入对照品，另一份作为测定本底值样品。各份均依制样方法
操作，重复进样 3 次，计算平均回收率，山奈酚、槲皮素平均
回收率分别为 98． 8%，99． 2%;相对标准偏差分别为 1． 6%，
2． 4%。
8．样品测定。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液
10 μL，注入高效液相色谱仪，记录槲皮素、山奈酚面积积分
值，代入回归方程计算含量。色谱图见图 1。
A． 标准品 B． 供试样品 1． 槲皮素 2． 山奈酚
图 1 标准品与样品 HPLC图
二、结果与分析
(一)正交试验确定提取的最佳条件。从表 2 数据直观
分析知，不同因素水平综合评分 A1 ＞ A3 ＞ A2，B3 ＞ B1 ＞ B2，
C2 ＞ C3 ＞ C1，根据因素极差大小知 B ＞ C ＞ A，所以排列出因
素影响的主次顺序为:提取时间、提取次数、料液比。由表 3
方差分析可知，因素 A、B、C对实验均无显著的影响。综合考
虑各因素，确定翻白草中槲皮素、山奈酚最佳提取方案为
A1B3C2，即以 20 倍样品量的水提取 2 次，每次 3 h。
(二)验证试验。按正交试验结果确定的最佳工艺，重复
提取翻白草叶 3 次，经提取率计算和含量测定结果表明，该
工艺重现性好，达到了优化的目的(见表 4)。
三、结论
(一)供试品溶液制备条件的确定。翻白草含有酯类
物质，此类物质通过石油醚的萃提可基本除去，提高组分
间分离度与反相柱使用寿命。试验方法采用水作为提取
溶剂，避免了外源性污染引入，所得槲皮素、山奈酚活性成
分含量较高，说明该方法经济、环保，简便易行，具有较强
的应用价值。
表 4 最佳工艺重复试验结果
样品 槲皮素提取量(μg﹒ g －1) 珋x ± s 山奈酚提取量(μg﹒ g －1) 珋x ± s
1 498． 94 510． 98
2 502． 64 499． 20 ± 3． 32 537． 65 521． 16 ± 14． 41
3 496． 03 514． 84
(二)选择测定波长。槲皮素、山奈酚组分紫外扫描光谱
图显示，两对照品组分的最大吸收波长分别为 368 nm、254
nm和 365 nm、265 nm，在 368 nm 处其它未确定组分有明显
紫外吸收，选择该波长将对待测组分测定结果产生干扰，造
成测定误差。同时充分考虑各组分检测灵敏度差异，选择最
佳检测波长为 365 nm。
(三)流动相选择。本试验目标组分含量测定流动相种
类已有文献报道。因待测组分化合物中酚羟基易电离，组分
峰易产生拖尾，造成峰面积积分误差，本实验加入 H3PO4 调
整 pH至弱酸性，改善组分峰形对称性，且保留值适宜。
【参考文献】
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