全 文 ：第 29卷 ,第 2期 光　谱　实　验　室 Vol . 2 9 , No . 2
2 0 1 2年 3月 Chinese Journal of Spectroscopy Laboratory March , 2 0 1 2
不同生长期的浙产 木叶中槲皮素和山奈酚的
含量动态①
① 浙江省新苗人才计划资助项目 ( 2010R413032)
② 联系人 ,电话: ( 0577) 86699572;手机: ( 0) 13906649038; E-mail: pxj666@ 163. com
作者简介:吴震纬 ( 1989— ) ,男 ,浙江省仙居县人 ,主要从事中药材质量控制研究工作。
潘晓军 ( 1978— ) ,男 ,江西省宜春市人 ,讲师 ,硕士 ,主要从事中药材质量控制研究工作。
收稿日期: 2011-05-31;接受日期: 2011-07-07
吴震纬　郭 腾　胡小玲　张锦晶　潘晓军② a
(温州医学院　浙江省温州市高教园区中心北路 3号　 325035)
a (温州医学院药学院中药系　浙江省温州市高教园区中心北路 3号　 325035)
摘　要　对浙产 木叶的最佳采收期进行研究 ,以期更好地指导生产实践。采用高效液相色谱法测定
不同生长期的浙产 木叶中槲皮素和山奈酚的含量变化。不同生长期 木叶中槲皮素的含量以 6至 7月为
高 , 8月份则迅速降低 ;山奈酚的含量以 7月至 8月为高 ,从 9月份开始逐渐下降。7月是浙产 木叶的最佳
采收期。
关键词　 叶 ;槲皮素 ;山奈酚 ;采收期
中图分类号: O657. 7+ 2　　　文献标识码: A　　　文章编号: 1004-8138( 2012) 02-0894-05
1　引言
木是常用的民间药 ,收载于《中国药典》 1977年版 (一部 ) [ 1] ,来于金缕梅科 木属植物 木
[Loropetalum chinensis ( R. Br. ) Oliv. ]。民间常以其根、叶和花入药 ,其中 木叶具有止血、止泻、止
痛、生肌的功效 ,用于子宫出血、腹泻、烧伤和外伤出血的治疗。 木在浙江省野生植物资源相当丰
富 ,具有较好的开发利用价值。
对于 木叶的采收期 ,有着不同说法: 《浙江药用植物志》记载 木叶可全年采收 [2 ] ,《浙江省
中药炮制规范》 ( 2005年 )记载 木叶夏、秋二季枝叶茂盛时采收 [3 ]。这样势必造成 木叶采收期的
混乱 ,从而影响药材的质量。本实验采用高效液相色谱法对不同生长期 木叶中的槲皮素和山奈
酚含量同时进行了测定 ,以期更全面地确定 木叶的最佳采收期 ,从而更好地指导生产实践。
2　实验部分
2. 1　实验仪器与试剂材料
Agilent 1100 Series型高效液相色谱仪 ,配 G1379A型在线脱气泵 , G1311A型四元比例阀 ,
G1316A 型柱温箱 , G1314A型紫外检测器 (美国 Agilent公司 ) ; Eclipse XDB-C18型色谱柱
( 4. 6mm× 250mm , 5μm,美国 Agilent公司 ) ;舒美 KQ-500DE型医用数控超声清洗器 (昆山市超声
仪型器有限公司 ) ; BS210S型电子分析天平 (北京赛多利斯仪器系统有限公司 ) ; 3号筛 ( 50目筛 ) ;
U PWS型超纯水器 (杭州永洁达净化科技有限公司 ) ; 101-1-BS型电热恒温鼓风干燥箱 (上海跃进
医疗器械厂 )。
　　乙腈为色谱纯 (天津市四友生物医学技术有限公司 ) ;甲醇为分析纯 (中国上海试剂总厂 ) ;盐酸
为分析纯 (中国浙江衢州巨化试剂有限公司 ) ;槲皮素 (批号: 117-39-5,纯度≥ 98% ) ,山奈酚 (批号:
520-18-3,纯度≥ 98% ) (成都曼思特生物科技有限公司 )。 实验用水为超纯水。
实验所需 木叶样品均由笔者亲自采挖 ,共采集 12份样品 (见表 1) ,经温州医学院附属第二
医院药剂科蔡进章副主任中药师鉴定为金缕梅科 木属植物 木 [Loropetalum chinensis ( R. Br. )
Oliv . ]的叶。
表 1　 木叶样品及编号
编号 采摘时间 采摘地点
01 2010-01-15 浙江省温州市瓯海区大罗山
02 2010-02-15 同上
03 2010-03-15 同上
04 2010-04-15 同上
05 2010-05-15 同上
06 2010-06-15 同上
07 2010-07-15 同上
08 2010-08-15 同上
09 2010-09-15 同上
10 2010-10-15 同上
11 2010-11-15 同上
12 2010-12-15 同上
2. 2　实验方法
2. 2. 1　色谱条件
色谱柱: Eclipse XDB-C18 ( 4. 6× 250 mm , 5μm,美国 Agilent公司 ) ;流动相: 乙腈 -0. 4%磷酸
( 35∶ 65, V /V ) ;流速: 1mL· min- 1;检测波长: 360nm;柱温: 25℃ ;进样量: 20μL。在此色谱条件下 ,
以槲皮素和山奈酚的峰计算理论塔板数分别为 7600和 6800,分离度良好 ,色谱图见图 1。
图 1　槲皮素和山奈酚色谱图
A—— 对照品 ; B——对照品 ; C——供试品 ; 1—— 槲皮素 ;2—— 山奈酚。
895第 2期 吴震纬等:不同生长期的浙产 木叶中槲皮素和山奈酚的含量动态
2. 2. 2　对照品溶液的制备
准确称取槲皮素 ,山奈酚标准品各 10mg,用 80%甲醇配成浓度均为 0. 1mg· mL- 1的溶液 ,即
得对照品母液。
2. 2. 3　对 木叶鲜品的处理方法
将采集的 木叶清洗干净 ,置于烘箱中 , 60℃烘干至恒重 ,置干燥器中保存备用。
2. 2. 4　供试品溶液的制备
取 木叶 ,粉碎后过 3号筛 ,准确称取 木叶粉末 1g于圆底烧瓶中 ,加入 80%甲醇 50mL,称
重 ,回流提取 1h,冷却 ,称重 ,以 80%甲醇补足减失重量。过滤 ,取 25mL滤液 ,依次加入 5% HCl
10mL, 80%甲醇 5mL,回流 30min,放冷 ,用 80%甲醇定容至 50mL,摇匀 ,得供试品溶液。
2. 2. 5　线性关系的考察
准确量取对照品母液 0. 1、 0. 25、 0. 5、 1、 2. 5、 5mL,各置于 10mL容量瓶中 ,用 80%甲醇稀释至
刻度 ,制成不同浓度的标准品溶液。将配得不同浓度对照品溶液及母液各进样 20μL,以峰面积和浓
度求线性方程为:
槲皮素校准线性方程为 A= 64814. 674C— 91. 516(r= 0. 9998)
山奈酚校准线性曲线为 A= 80542. 513C— 91. 916(r= 0. 9999)
结果表明:槲皮素 ,山奈酚在 1— 100ng /μL的范围内均具有良好的线性关系。
2. 2. 6　精密度实验
准确吸取浓度为 0. 01mg· mL- 1的槲皮素和山萘酚对照品液 20μL,进样检测 ,重复进样 6次 ,
得两对照品的峰面积 RSD分别为 1. 344% (槲皮素 ) , 1. 708% (山萘酚 ) ,以上数据表明本方法精密
度良好。
2. 2. 7　重复性实验
准确称取同一批 木叶粉末 5份 ,每份约 1. 0g ,按照 2. 2. 4项下方法制备方法制备得供试品
溶液 ,进样测定含量 ,结果为 RSD= 2. 87% (槲皮素 ) , RSD= 2. 68% (山奈酚 )。 实验结果表明本方
法有良好的重复性。
2. 2. 8　回收率实验
取已知含量 (槲皮素含量为 0. 268% ,山萘酚含量为 0. 162% )的 木叶若干 ,粉碎 ,过筛 ,准确
称取 6份 ,每份约 1 g,置圆底烧瓶中 ,分别准确加入对照品母液 10mL 3份 , 15mL 3份 ,按 2. 2. 4项
下方法制备供试品液 ,按上述色谱条件测定 ,计算回收率 ,实验结果见表 2、表 3。
表 2　槲皮素回收率实验结果 (n= 3)
试验号 取样量
( g)
样品中量
( mg)
加入量
(mg )
测得量
( mg)
回收率
(% )
平均回收率
(% )
RSD
(% )
1 1. 0055 2. 695 1. 0 3. 719 102. 40
2 1. 0039 2. 690 1. 0 3. 707 101. 70
3 1. 0060 2. 696 1. 0 3. 731 103. 50 102. 08 1. 79
4 1. 0026 2. 687 1. 5 4. 256 104. 60
5 1. 0049 2. 693 1. 5 4. 203 100. 67
6 1. 0063 2. 697 1. 5 4. 191 99. 60
896 光谱实验室 第 29卷
表 3　山萘酚回收率实验结果 (n= 3)
试验号 取样量
( g)
样品中量
( mg)
加入量
(mg )
测得量
( mg)
回收率
(% )
平均回收率
(% )
RSD
(% )
1 1. 0055 1. 629 1. 0 2. 583 95. 40
2 1. 0039 1. 626 1. 0 2. 637 101. 10
3 1. 0060 1. 630 1. 0 2. 634 100. 40 99. 31 2. 85
4 1. 0063 1. 630 1. 5 3. 109 98. 60
5 1. 0026 1. 624 1. 5 3. 172 103. 20
6 1. 0049 1. 628 1. 5 3. 085 97. 13
　　由表 2和表 3可知 ,槲皮素的回收率为 102. 08% , RSD为 1. 79% ;山萘酚的回收率为 99. 31% ,
RSD为 2. 85% ,该方法稳定可靠。
3　结果与讨论
3. 1　实验结果
取不同时间采集的 12份 木叶样品 ,按“ 2. 2. 4”项下制备方法制备供试品溶液 ,在上述色谱
条件下 ,进样 20μL进行检测。结果见表 4,图 2,图 3。
表 4　不同采集时间 木叶中槲皮素和山奈酚含量 (n= 3,% )
编号 采摘时间 槲皮素含量 山奈酚含量
01 2010-01-15 0. 0468 0. 0341
02 2010-02-15 0. 0356 0. 0358
03 2010-03-15 0. 103 0. 0460
04 2010-04-15 0. 122 0. 0752
05 2010-05-15 0. 183 0. 0863
06 2010-06-15 0. 268 0. 158
07 2010-07-15 0. 257 0. 162
08 2010-08-15 0. 167 0. 153
09 2010-09-15 0. 149 0. 106
10 2010-10-15 0. 0752 0. 0948
11 2010-11-15 0. 0493 0. 0394
12 2010-12-15 0. 0386 0. 0417
图 2　槲皮素含量的动态分布图 图 3　山奈酚含量的动态分布图
由表 4和图 2、图 3可知 ,槲皮素含量最高值在 6月 , 7月微有下降 , 8月后下降幅度较大。山奈
酚含量最高值在 7月 , 8月微有下降 , 9月后逐渐下降。
3. 2　质量控制指标成分的确定
对 木叶指标成分的研究 ,已有相关文献报道: 李雪晶等用反相高效液相色谱法测定了湖南
产 木及红花 木叶中槲皮素的含量 [4 ] ;游璐茜等用反相高效液相色谱法测定了福建产 木叶中
槲皮素和山奈酚等指标成分的含量 [ 5]。现代研究认为 ,槲皮素能增强毛细血管抵抗力 ,减少毛细血
897第 2期 吴震纬等:不同生长期的浙产 木叶中槲皮素和山奈酚的含量动态
管脆性的作用 ,且对肿瘤有化学预防和治疗双重作用 ,山奈酚有着逆转肿瘤细胞多药耐药作用 ,且
对神经细胞具有保护作用。 因此 ,本文选用这两种成分作为评价 木叶质量的指标。
3. 3　流动相的优化
在对流动相进行考察的过程中 ,发现采用酸性流动相 ,可有效提高柱效 ,减少槲皮素、山奈酚的
色谱峰拖尾 ,而其中以 0. 4%磷酸水溶液的分离效果最佳。同时 ,对乙腈和 0. 4%磷酸的体积比例考
察发现 ,随着乙腈含量的增加 ,槲皮素和山奈酚的出峰时间会明显提前 ,且分离效果良好 ,比较后使
用乙腈∶ 0. 4%磷酸= 35∶ 65所组成的流动相分离效果最佳。
3. 4　提取条件的选择
实验对样品处理方法进行了考察。实验中考察了超声提取法、加热回流提取法、冷浸法 3种方
法 ,结果表明加热回流法提取效率最高 ,超声法和冷浸法提取效率较低 ,故本实验选用加热回流法
处理样品。
4　结论
在 7月份 , 木叶中槲皮素和山奈酚含量均较高 ,可将其采收期定为 7月份。
参考文献
[1 ]中华人民共和国国家药典委员会 .中华人民共和国药典 [M ].北京:化学工业出版社 , 1977. 528— 529.
[2 ]浙江药用植物志编写组 .浙江药用植物志 [M ].杭州:浙江科学技术出版社 , 1980. 540— 543.
[3 ]浙江省食品药品监督管理局 .浙江省中药炮制规范 [M ].杭州:浙江科学技术出版社 , 2005. 314.
[4 ]李雪晶 ,高叶 ,周小江 . 木叶中槲皮素的含量测定 [ J] .湖南中医药大学学报 , 2008, 28( 2): 46— 48.
[5 ]游璐茜 ,吴振 ,赵玉芬 . 木中槲皮素、山奈酚和杨梅素含量的高效液相色谱法测定 [ J ].化学通报 , 2009, 72( 10): 898— 900.
Dynamic Changes of Quercetin and Kaempferol in the Leaves
of Loropetalum chinensis (R. Br. )Oliv. from Zhejiang
Province in Different Growing Season
WU Zheng-Wei　 GUO Teng　 HU Xiao-Ling　 ZHANG Jin-Jing　 PAN Xiao-Juna
(Wenzhou Med ical Col lege,W enzhou , Zhejiang 325035, P. R. China )
a (Department of Trad itional Chinese Pharmacology , School o f Pharmacy of Wenzhou Medical College,
Wenzhou, Zhej iang 325035, P. R .China)
Abstract　 The optimal harv est-time of the leaves of Loropetalum chinensis ( R. Br. ) Oliv. f rom
Zhejiang province was studied in o rder to guide production practice. The contents changes of quercetin
and kaempferol in the leaves of Loropetalum chinensis ( R. Br. ) Oliv. f rom Zhejiang province in different
g row ing season were determined. The contents of the quercetin w ere higher in June and July , but that
w ere much decreasing in August. The contents of Kaempferol were higher in July and August, but
that w ere fall-of f September. The optimal harv est-time of the leaves of Loropetalum chinensis ( R. Br. )
Oliv . f rom Zhejiang province is in July.
Key words　 The Leaves of Loropetalum chinensis ( R. Br. ) Oliv . ; Quercetin; Kaempferol;
Harv est-Time
898 光谱实验室 第 29卷