全 文 ：现代生物医学进展 www.shengwuyixue.com Progress inModern Biomedicine Vol.10 NO.18 SEP.2010
Level
Factors
Volume of
alcohol（A）
Contents of
alcohol(B)
Duration (C)
1 4:1(ml/g) 50% 1h
2 6:1(ml/g) 70% 1.5h
3 8:1(ml/g) 90% 2h
正交试验优选紫参片的醇提工艺
崔雪娜 王四旺 赫少清 王剑波 党碧艳
（第四军医大学药学系药物研究所 陕西西安 710032）
摘要 目的：优选紫参片的醇提工艺。方法：以醇浸膏得率、丹参酮ⅡA、阿魏酸含量为考察指标,采用正交试验法,考查乙醇浓度、加
醇量及提取时间对紫参片提取工艺的影响。结果：最佳醇提工艺为 A2B2C2 ,即药材加 6倍量 70 %乙醇提取 3次,每次提取 1 h。结
论：优选的紫参片的醇提工艺简便、快速、准确,可为工业化生产提供理论依据。
关键词：正交试验；紫参片；醇提工艺；丹参酮ⅡA；阿魏酸
中图分类号：R285 文献标识码：A 文章编号：1673-6273（2010）18-3544-03
Optimization of Ethanol Extract Technology for ZiShen Tablet
by Orthogonal Test
CUI Xue-na, WANG Si-wang△, HE Shao-qing, WANG Jian-bo, DANG Bi-yan
(Institute of Materia Medica, School of Pharmacy, The Fourth Military Medical University, Xi`an 710032, China）
ABSTRACT Objective: To optimize the ethanol extract technology of ZiShen tablet. Methods: Alcohol extract rate, salviol and
ferulaic acid content were chosen as the indexes for investigation and orthogonal test was carried out to investigate the effects of three ext
-racting factors (alcohol density , alcohol amount and extracting time) on the extract technology. Results: The optimum extract technolo-
gy was A2B2C2, it is adding 70% alcohol which was 6 times the quantity of medicine and extracting twice (one hour each time). Conclu-
sions: The optimized ethanol extract technology for ZiShen tablet is simple, rapid and accurate and serves as theoretic basis for the indus-
trialized production of this preparation.
Key words: Orthogonal test; ZiShen tablet; Ethanol extract technology; salviol; ferulaic acid
Chinese Library Classification: R285 Document code: A
Article ID: 1673-6273(2010)18-3544-03
作者简介：崔雪娜（1984-），女，河北保定人。硕士研究生；
△通讯作者：王四旺（1958-）男，湖北武汉人。教授，博士生导师；
Email：wangsiw@fmmu.edu.cn
（收稿日期：2010-06-08 接受日期：2010-07-03）
前言
紫参片由紫河车、丹参、当归、灵芝、鸡血藤等组成，具有活
血化瘀、益气养血的功效。笔者对丹参、当归、灵芝进行醇提，以
醇浸膏收率、丹参酮ⅡA、阿魏酸含量为指标，优选醇提取工
艺。
1 仪器与试药
1.1 仪器
高效液相色谱仪美国 Waters 公司，2695 分离单元 ,
PDA2996二极管阵列检测器, Empower色谱工作站）；C18色谱
柱(250 ×416mm，Kromasil)；电子分析天平(ME235S 型，德国
Sartorius公司)；旋转蒸发装置(EYELA日本)；电热恒温干燥箱
（G2X-DH ,上海市跃进医疗器械厂）。
1.2 试药
药材均购自西安市药材公司, 经鉴定符合中国药典 2005
年版规定的品种；丹参酮ⅡA对照品(批号 110766-200417,用于
含量测定)，阿魏酸对照品（批号 0773 - 9910，用于含量测定），
均购自中国药品生物制品检定所；甲醇、乙腈为色谱醇(sk
chemicals 公司)；其他试剂均为分析纯；水为三蒸水（美国
Mil-lipore纯水系统）。
2方法与结果
2.1正交试验设计
为了确定紫参片中醇提工艺的条件,根据文献[1]和预试验结
果,采用正交试验法,以醇浸膏得率和丹参酮ⅡA、阿魏酸的含量
为考察指标,对乙醇的浓度(A)、加醇量(B)、提取时间(C)进行
探讨,用 L9(34 )正交表安排试验,因素水平见表 1。
2.2 出膏率测定[2]
取 2.5倍处方量的药材按正交表安排实验，进行热回流提
取。提取液 60℃减压浓缩成浸膏，精密称定浸膏总量，另精密
称取稠浸膏适量,烘干至恒重,计算稠膏含水量,折算出干膏率,
结果见表 2。
表 1 因素水平
Table 1 Factor and level
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DOI:10.13241/j.cnki.pmb.2010.18.002
现代生物医学进展 www.shengwuyixue.com Progress inModern Biomedicine Vol.10 NO.18 SEP.2010
2.3 丹参酮ⅡA的含量测定[1] ,[3]
2.3.1 色谱条件 色谱柱：C18色谱柱 (250×416mm，Kromasil)；
检测波长：270nm；流动相：甲醇:水（80:20）；流速：1.00ml/min；
在此条件下理论塔板数以丹参酮ⅡA峰计应不低于 6000。
2.3.2 线性关系 精密称取丹参酮ⅡA对照品 3.01 mg,置 25 mL
棕色量瓶中,加甲醇溶解并定容,摇匀,分别精密量取 2、4、6、8、
10 mL置 10 mL的量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀。取 20μL,分别
注入液相色谱仪,考察对照品浓度与峰面积的线性关系,得回归
方程: Y = 53326X +3568, r = 0. 9995, 丹参酮ⅡA线性范围为
12.04～60 .20μg/mL。
2.3.3 样品测定 精密称定按出膏率测定项下制备的稠浸膏适
量，放于烧杯中，加水 25ml并加热溶解，用乙醚抽提 4次（4×
15ml），合并乙醚层用无水硫酸钠过滤，滤液回收乙醚，残渣加
甲醇溶解并定容至 25ml，作为供试品溶液，进样 10μl，按上述
色谱条件进行测定，计算丹参酮ⅡA含量，结果见表 2。
2.4 阿魏酸的含量测定[2]，[4]
2.4.1色谱条件色谱条件[5] 色谱柱：C18色谱柱 (250×416mm，
Kromasil); 检测波：长 313nm；流动相：甲醇 :乙腈 :1%冰醋酸
（15:15:70）；流速：1.00ml/min；在此条件下理论塔板数以阿魏酸
峰计应不低于 5000。
2.4.2 线性关系 精密称取阿魏酸对照品 2.05mg,置 50 mL棕色
量瓶中,加甲醇溶解并定容,摇匀,分别精密量取 0.4、0.8、1.2、
1.6、2.0 mL置 5mL的量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀。取 20μL,分
别注入液相色谱仪,考察对照品浓度与峰面积的线性关系,得回
归方程 : Y= 89745X +78849, R = 0.9998, 阿魏酸线性范围为
8.2～41.00μl/mL。
2.4.3 样品测定 精密称定浸膏适量，放于烧杯中，加水 25ml并
加热溶解，盐酸酸化至 ph2~3,用乙醚抽提 4次（4×15ml），合并
乙醚层用无水硫酸钠过滤，滤液回收乙醚，残渣加甲醇溶解并
定容至 10ml，作为供试品溶液，进样 20μl，按上述色谱条件进
行测定，计算阿魏酸含量，结果见表 2。
2.4.3 正交试验计算 [1] 根据所选指标进行多指标综合评分,按
成分主次标准，规定丹参酮ⅡA和阿魏酸得率满分为 80分，各
占 40分。实验所用丹参药材经测定丹参酮ⅡA含量为 0.22%、
当归药材中阿魏酸含量为 0.20%，故以药材得率 0.22%，0.20为
40分，根据此规定可算出丹参酮ⅡA和阿魏酸的得分。根据工
艺提取情况，出膏率的变动范围为 18.61%~32.07%，规定
18.61%为 0分，32.07%为满分，每增加 1%的浸膏则增加 20/
（32.07-18.61）=1.49分，算出浸膏得分，将三种得分相加，即为
综合评分值，结果见表 2。
表 2 正交试验结果
Table 2 The result of the L9(34)orthogonal
NO.
Factor and level extraction rate (%) holistic
markingA B C 空白 extractum TanshinoneⅡA ferulic acid
1 1 1 1 1 27.40 0.0793 0.0121 29.9062
2 1 2 2 2 28.71 0.1705 0.0885 63.0064
3 1 3 3 3 21.13 0.2064 0.0326 47.8052
4 2 1 2 3 30.22 0.0989 0.0228 39.8004
5 2 2 3 1 30.23 0.1472 0.0954 63.1118
6 2 3 1 2 18.61 0.2107 0.0634 50.9927
7 3 1 3 2 32.07 0.0959 0.0129 40.0104
8 3 2 1 3 29.11 0.1745 0.0747 62.2657
9 3 3 2 1 21.32 0.2043 0.0511 51.3921
Ⅰj 140.72 109.72 143.16 144.41 G=Yi=448.29
Ⅱj 153.90 188.38 154.20 154.01 CT=G2/n=(372.63)2/9=22329.41
Ⅲj 153.67 150.19 150.93 149.87 Q=Ⅰj2+Ⅱj2+Ⅲj2
Rj 13.19 78.67 11.03 9.60 R=大－小
SSj 37.96 1031.70 21.41 21.41 SSj＝Q/3－CT
表 3 方差分析结果
Table 3 The analysis of variance of orthogonal
Derivation of Sum of sequanes Df F Significance
Volume of alcohol SSA=37.96 2 2.458
Contents of alcohol SSB=1031.70 2 66.754 P＜0.05
Duration SSC=21.41 2 1.385
Error SSe=21.41 2
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2.4.5 结果分析 表 2的极差 R分析显示影响提取效率的因素
依次为 B>A >C，以 B2A2C2为佳;方差结果表明: B因素对醇
提取有显著意义,B因素和 C因素无显著意义，为了节省时间,
提高效率,故以提取 1小时为宜,因此最佳提取工艺为 B2A2C1
即加 6倍量 70%乙醇提取 3次，每次 1h。
2.5 验证试验
为了验证上述结果的准确性,以保证醇提工艺的合理可行
性,按上述确定的工艺条件,进行验证试验。结果,平均浸膏得率
为 26.539 % , 丹参酮ⅡA 提取率为 0.176%，阿魏酸提取率
0.068%，结果见表 4。
3 讨论
文献研究表明,丹参酮ⅡA、阿魏酸对光、热敏感,易分解变
质[6,7]，在优选醇提工艺的正交试验中，选择此两项作为评价指
标是非常有意义的。浸膏是药物治疗疾病的物质基础，而某些
单一成分或几个有效成分浸出量的多少并不代表总有效成分
浸出量的多少[8]，故将浸膏得率作为正交试验评价指标，能更全
面地反映提取工艺的优劣。本试验采用多指标综合评分法，相
对单指标而言多指标综合评价可使优化工艺的代表性更强，能
更全面地反映提取结果。
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NO. extractum (%) TanshinoneⅡA(%) ferulic acid (%)
1 27.073 0.175 0.067
2 26.216 0.172 0.071
3 26.394 0.179 0.065
4 26.473 0.178 0.069
mean 26.539 0.176 0.068
表 4 工艺的验证
Table 4 Validation of the process
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