全 文 ：苯酚硫酸法测定迷果芹多糖的含量
于瑞涛1 , 2 , 朱鹏程1 , 2 , 陶燕铎 1 , 邵 斌贝1
(1.中国科学院西北高原生物研究所 , 西宁 810008;2.中国科学院研究生院 , 北京 100049)
摘 要:测定迷果芹中多糖的含量以及 4种迷果芹粗多糖中的多糖含量。采用
硫酸-苯酚比色法于波长 490 nm处测定吸收度 。结果表明 , 迷果芹中的原药材
中的多糖含量为 4.04%。迷果芹粗多糖醇沉1次 、醇沉 2次 、醇沉 3次和醇沉3
次脱脂所测得的迷果芹粗多糖中的多糖含量分别为 54.90%, 53.40%,
45.73%, 50.90%。
关键词:迷果芹;多糖;硫酸-苯酚;比色法;含量
迷果芹(Sphallerocarpus gracilis)为伞形科迷果
芹属的单种植物 。多年生草本 , 生长在海拔 1700
～ 4000m之间的河滩 、田边 、路旁 , 产于青海东部
农业区及黄南 、海北 、海西 、海南 、果洛 、玉树各
州 , 广泛分布于东北 、华北 、西北等地区[ 1] 。迷果
芹俗称黄葑 、小叶山红罗卜 , 因其根肉质 , 呈淡黄
色 , 形似人参 , 故又名黄参 。迷果芹除了具有丰富
的资源外 , 还具有重要的药用价值 , 据《晶珠本
草》记载:加哇辛 、涩 、温 、治黄水病 , 肾病 、腰
痛 、肿痛 , 肾腰寒气病(藏药志);迷果芹全草入
药 , 祛风除湿 , 主治风湿性关节炎(青海经济植物
志)。对于迷果芹的研究仅限于化学成分 , 微量元
素分析 , 核型分析等。对于迷果芹的多糖方面的
研究国内外尚未见报道。本文对迷果芹根中的多
糖采用苯酚硫酸法测定了其含量。
1 实验部分
1.1 材料与仪器
迷果芹根采自青海平安 。由中国科学院西北
高原生物研究所潘锦堂教授鉴定。
1.2 试剂与仪器
浓硫酸(GR)、苯酚 、 95%乙醇 、无水乙醇 、丙
酮 、乙醚和无水葡萄糖均为市售分析纯。玻璃试
管;752N紫外可见分光光度计(上海精密科学仪
器有限公司);KQ-250DB型数控超声清洗器(昆山
市超声仪器有限公司);不锈钢电热蒸馏水器(上
海申安医疗器械厂)。JDG-0.2冷冻燥机(兰州科近
真空冻干技术有限公司)。
2 方法
2.1 对照品溶液制备
精密称取经 105 ℃干燥至恒重的无水葡萄糖
约 24.7 mg , 加纯化水于 50 mL 量瓶中 , 溶解 , 定
容 , 摇匀 , 即得 。
2.2 供试液制备
2.2.1 迷果芹原药材供试液制备 迷果芹根粉
碎 , 过 100目筛 , 取 3份 , 每份各 1 g , 加入 100mL
80%的乙醇回流提取 1.5 h , 过滤 , 用 80%热的乙
醇洗涤 3次 , 弃滤液 , 残渣烘干 , 加入 50 mL 蒸馏
水回流提取1 h 。过滤 , 用适量热蒸馏水洗涤 3次 ,
定容于 100 mL容量瓶中。备用 。
2.2.2 4种粗多糖供试液的配制 分别精密称取
迷果芹粗多糖醇沉 1次 、醇沉 2次 、醇沉 3次和醇
沉 3次脱脂约 11.5 , 11.0 , 10.9 , 10.7 mg 用蒸馏
水溶解 , 定容于 50 mL容量瓶中 , 摇匀 , 即得 。
2.3 苯酚试剂的配制 取苯酚 200 g , 加铝片 0.2
g 和NaHCO3 0.1 g , 蒸馏 , 收集180 ℃左右的馏分 。
将新蒸苯酚配成浓度 5%的溶液 , 放入棕色瓶中 ,
置于冰箱中保存备用。
2.4 含量测定
2.4.1 标准曲线的制备 精密量取对照品溶液
0.5 , 1.0 , 1.5 , 2.0 , 2.5 mL , 分别置 10 mL 试管
—222—
第27卷增刊
2008 年 12 月 分析试验室Chinese Journal of Analysis Laboratory Vol.27.Suppl.2008-12
基金项目:国家科技支撑计划(2007DAI45B00)项目资助
作者简介:于瑞涛(1979-), 女 , 硕士研究生;E-mail:yuruitao521@163.com
DOI :10.13595/j.cnki.issn1000-0720.2008.0585
中 , 蒸馏水定容 , 摇匀 , 再分别精密量取 2.0 mL ,
置干燥具塞试管中 , 加入苯酚试剂 1 mL , 浓H2SO4
试剂 5.0 mL , 立刻摇匀 , 冷却 30 min 。同时以 2.0
mL 蒸馏水 , 加苯酚试剂 1 mL和浓H2SO4 试剂 5.0
mL 作空白。在 490 nm 波长处测定吸收度 。以吸收
度(A)为纵坐标 , 葡萄糖浓度(C)为横坐标进行回
归 , 得回归方程为:A =15.98381C-0.0796 , r=
0.9978 , 在 0.0247 ～ 0.1235 mg mL 范围内呈线形
关系 。
图 1 迷果芹多糖的标准曲线
2.4.2 样品含量测定 精密量取供试液 0.5 mL ,
置干燥具塞试管中 , 加蒸馏水至 2 mL , 再各加苯
酚试剂1.0 mL 和浓 H2SO4 试剂 5.0 mL , 立即摇
匀 , 冷却至室温 , 按 2.4.1项下操作 , 计算葡萄糖
浓度 。
多糖含量按下式计算:多糖含量(%)=CDF
W , C为迷果芹原药材及四种粗多糖中的葡萄糖浓
度(mg mL), D为稀释的最终体积(mL), F=0.9[ 3]
为换算因子 , W为迷果芹原药材的质量及 4种粗
多糖的质量(mg)。
2.5 加样回收率试验
按2.2项下制备供试品溶液 , 分别精密加入
供试液1.0 mL , 分别加入对照品溶液 0.5 mL置 10
mL量瓶中 , 加蒸馏水定容 , 摇匀。再分别精密量
取2.0 mL置干燥具塞试管中 , 依法加苯酚试剂 1
mL 和浓 H2SO4 试剂 5.0 mL。在 490 nm 波长处测
定吸光值 。回收率=(加入对照品后总的葡萄糖含
量-未加入对照品时的葡萄糖含量 加入葡萄糖量
(单位 mg), 结果 , 迷果芹原药材 , 醇沉1次 、醇沉
2次 、醇沉 3 次和醇沉 3 次脱脂回收率分别为
98.05%, 99.80%, 97.60%, 99.57%, 100.24%。
RSD 分别为 1.12%, 0.80%, 0.57%, 0.98%,
1.25%。
2.6 精密度试验
分别精密取迷果芹原药材供试液 5 份 , 每份
2.0 mL , 置干燥具塞试管中 , 各加苯酚试剂 1.0
mL和浓 H2SO4 试剂 5.0 mL , 立即摇匀 , 冷却 30
min , 按 2.4.1项下操作 , 结果 RSD为 2.35%。
2.7 稳定性试验
精密量取迷果芹原药材供试液 2.0 mL , 置干
燥具塞试管中 , 加苯酚试剂 1.0 mL和浓 H2SO4 试
剂 5.0 mL , 立即摇匀 , 冷却 30 min , 按2.4.1项下
操作 , 每 1 , 2 , 3 , 4 , 8 h测定吸光值 , 计算葡萄糖
含量 。结果在8 h内 , RSD为0.78%。
3 结果与讨论
苯酚-硫酸法测定多糖含量 , 是根据多糖在
H2SO4 的作用下先水解成单糖分子 , 并迅速脱水
生成糖醛衍生物 , 然后与苯酚生成橙黄色化合物 ,
再以比色法在 490 nm 波长处测定吸光度。在测定
多糖含量时 , 因难以得到相应的多糖对照品 , 而
常以葡萄糖等单糖作为对照 , 测定结果则以单糖
来表示多糖的含量 。通过样品含量测定可知 , 迷
果芹中的原药材中的多糖含量为 4.04%。迷果芹
粗多糖醇沉 1次 、醇沉 2次 、醇沉 3次和醇沉 3次
脱脂所测得的迷果芹粗多糖中的多糖含量分别为
54.90%, 53.40%, 45.73%, 50.90%。如图 2 、图3
所示 。
图 2 迷果芹多糖醇沉次数与多糖含量的关系
图 3 迷果芹粗多糖脱脂前与脱脂后多糖含量的比较
迷果芹多糖醇沉次数与多糖的关系有逐渐下
降的趋势。分析其原因可能是因为检测多糖一般
—223—
第 27卷增刊
2008 年 12 月 分析试验室Chinese Journal of Analysis Laboratory Vol.27.Suppl.2008-12
用单糖来确定 , 而醇沉 1 次的单糖和低聚糖含量
偏高 , 而到第 3次醇沉有绝大部分单糖和低聚糖
已被 80%乙醇除去 , 所以测得的值会偏低。在多
糖的提取过程中 , 多糖醇沉的最佳次数还需要进
一步的研究 。在迷果芹粗多糖脱脂前与脱脂后的
多糖含量比较中 , 脱脂后的多糖含量明显比脱脂
前的多糖含量高 。说明在脱脂过程中除去了一些
极性较小的杂质。
参考文献
[ 1] 郭本兆.青海经济植物志 , 西宁:青海人民出版社 ,
1987.417
[ 2] 张惟杰.复合多糖生化研究技术(第一版), 上海科
学技术出版社 , 1987.6
—224—
第27卷增刊
2008 年 12 月 分析试验室Chinese Journal of Analysis Laboratory Vol.27.Suppl.2008-12