全 文 ：新疆农业科学 2013，50( 7) : 1310 － 1313
Xinjiang Agricultural Sciences
doi:10. 6048 / j. issn. 1001 － 4330. 2013. 07. 019
RP － HPLC法测定多花柽柳中没食子酸含量
廖菁1，孙宇2，卿德刚2，张娟2，倪慧2，贾晓光2
( 1. 新疆大学生命科学与技术学院，乌鲁木齐 830046; 2. 新疆维吾尔自治区中药民族药研究所，乌鲁木齐 830002)
摘 要:【目的】建立多花柽柳中没食子酸 HPLC含量测定的方法。【方法】采用反相高效液相色谱法，色谱柱
Waters XTerra RP C18(250 × 4. 6 mm，5 μm) ;流动相:乙腈 － 0. 5%冰醋酸，体积流量:1. 0 mL /min，检测波长:
270 nm，柱温 25℃。【结果】没食子酸在 0. 139 ～ 1. 390 μg 范围内呈良好的线性关系(R = 0. 999) ，加样回收率
为 100. 59%，RSD为 1. 25%。【结论】该方法简便可靠、准确、灵敏度高、重现性好，能有效测定多花柽柳药材
中没食子酸含量，为柽柳的质量控制提供了理论依据和方法基础。
关键词:多花柽柳;没食子酸;含量测定;HPLC
中图分类号:TS207. 3 文献标识码:A 文章编号:1001 － 4330(2013)07 － 1310 － 04
收稿日期:2013 － 03 － 04
基金项目:国际科技合作项目(2010DFB30540)
作者简介:廖菁(1988 －) ，女，四川人，硕士研究生，研究方向为食品科学，(E － mail)liaojingn@ sina. com
通讯作者:倪慧(1964 －) ，女，上海人，研究员，硕士生导师，研究方向为天然药物的分析及制剂，(E － mail)xjnihui@ 163. net
Determination of Gallic acid in Tamarix hohenackeri Bunge by HPLC
LIAO Jing1，SUN Yu2，QING De － gang2，ZHANG Juan2，NI Hui2，JIA Xiao － guang2
(1. College of life Science and Technology，Xinjang University，Urumqi 830046，China;2. Xinjiang
Institute of Chinese Materia Medica and Ethical Materia Medica，Urumqi 830002，China)
Abstract:【Objective】The purpose of this study was to establish a method for determining the Gallic acid
in Tamarix hohenackeri Bunge. 【Method】The assay was performed on a Waters XTerra RP C18(250 × 4. 6
mm，5 μm)column by a isocratic elution program with acetonitrile － 0. 5% acetic acid as mobile phase at a
flow rate of 1. 0 mL /min，and the column temperature was 25℃. 【Result】The linear ranges of gallic acid was
0. 139 － 1. 390 μg，and the average recoveries (n = 6)were 100. 59%(RSD = 1. 25%). 【Conclusion】This
method is sample ，accurate highly sensitive and reproducible. It could be effective in measuring the content of
gallic acid in Tamarix hohenackeri Bunge，provides theoretical basis and methods for the quality control of
Tamarix chinensis medicinal materials.
Key words:Tamarix hohenackeri Bunge;Gallic acid;Determination;HPLC
0 引 言
【研究意义】柽柳系柽柳科(Tamaricaceae)柽柳属植物，在我国主要分布在西北各省区的荒漠和半
荒漠区，其中以新疆、甘肃、内蒙古、青海和宁夏为最多 ［1 ～ 2］，因柽柳属植物独特的生物学构造，使其能
忍受大气极端干旱和适应土壤盐渍化，是荒漠河岸植被中的重要建群植物，也是新疆防风固沙先锋植
被［3 ～ 4］。柽柳属植物是我国名贵中药管花肉苁蓉(Cistanche tubulosa(Schenk)R. Wight)的主要寄主植物
之一。近年来，由于肉苁蓉优良的经济价值，作为寄主植物，柽柳在新疆也得到了大面积的推广种
植［5］。同时柽柳也是我国的传统药材，历代本草多有记载［6］，基于柽柳药用和生态学价值研究其化学
7 期 廖菁等: RP － HPLC法测定多花柽柳中没食子酸含量
成分和含量测定具有十分重要意义，并能为柽柳的质量控制提供依据。【前人研究经验】Tamarix
amplexicaulis的种子醇提物对 CCl4 或乙酰氨基酚引起肝毒性具有护肝作用
［7］。T． ramosissima 的各个提
取部位，均显示有抗氧化活性［8］。柽柳还具有抑菌活性，抑制 α －葡萄糖苷酶，抗肿瘤和抗衰老等药理
作用［9］。鉴于柽柳属植物具有重要的药用价值和生态学意义，课题组对管花肉苁蓉的柽柳属寄主植
物—多枝柽柳的化学成分及生物活性进行研究，已从多花柽柳中分离出 14 个化合物［10，11］，并对分离的
化合物进行生物活性研究。【本研究切入点】目前对于多花柽柳的研究报道较少见，对其含量测定未见
文献报道。根据多花柽柳化合物分离鉴定情况，没食子酸为分离的酚酸类化合物主要成分，同时也是多
花柽柳的活性成分之一，故选没食子酸为指标做含量测定。【拟解决的关键问题】以没食子酸为检测指
标，建立多花柽柳中没食子酸的含量测定方法，为柽柳的质量控制提供理论依据。
1 材料与方法
1. 1 材 料
Waters 2695 型高效液相色谱仪，Waters 2998PDA 检测器。色谱柱 Waters XTerra RP18(250 mm ×
4. 6 mm，5 μm) ;KQ3200 型超声波清洗仪(昆山市超声仪器有限公司) ，Mettler AE163 电子天平，乙腈为
色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。没食子酸对照品购自中国药品生物制品检定所(批号:
110831 － 201003)。多花柽柳(Tamarix hohenackeri Bunge)采自新疆和田地区，茎和叶自然阴干，经中国
科学院新疆生态与地理研究所尹林克研究员鉴定。
1. 2 方 法
1. 2. 1 色谱条件
色谱柱:Waters XTerra RP18(250 mm ×4. 6 mm，5 μm) ，流动相:乙腈 － 0. 5%冰醋酸(10∶ 90，V /V) ;
流速:1. 0 mL /min，检测波长:270 nm，柱温 25℃。
1. 2. 2 对照品溶液的制备
精密称取没食子酸对照品 1. 390 mg，加 10 mL甲醇溶解制成每 1 mL含 139 μg的溶液，即得。
1. 2. 3 供试品溶液的制备
精密称定多花柽柳粉末约 2 g(过三号筛) ，置索式提取器中，加三氯甲烷回流提取 3 h，弃去三氯甲
烷溶液，粉末挥干置于烧瓶中，加入 50 mL甲醇，精密称重，加热回流提取 2 h，待冷却后，用甲醇补足减
失的重量，摇匀，用 0. 45 μm微孔滤膜过滤，取续滤液，即得。
2 结果与分析
2. 1 标准曲线绘制
精密吸取对照品溶液 1. 0、2. 0、4. 0、6. 0、8. 0、10. 0 μL，按 1. 2. 1 项色谱条件，依次进样，以对照品进
样量(μg)为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程:Y = 3 × 106X － 17 278，R =
0. 999。结果表明没食子酸在 0. 139 ～ 1. 390 μg，与峰面积呈良好的线性关系。图 1
A．供试品;B．没食子酸对照品 A． Sample;B. Gallic acid
图 1 供试品及没食子酸对照品图谱
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新疆农业科学 50 卷
2. 2 精密度
精密吸取对照品溶液 15 μL，按 1. 2. 1 项色谱条件，连续进样 6 次，记录其峰面积，计算 RSD 为
1. 08%，表明该仪器运行精密度良好。
2. 3 稳定性
对同一供试品溶液适量，精密进样 15 μL，分别在 0、2、4、8、10、12 和 24 h按 1. 2. 1 项色谱条件测定
没食子酸峰面积，结果 RSD为 1. 79%。实验结果表明，供试品溶液在 24 h稳定。
2. 4 重复性实验
取同一批次柽柳粉末 2 g，精密称定，按 1. 2. 3 项制备供试溶液 6 份，按 1. 2. 1 项色谱条件测定没食
子酸的含量，结果 RSD为 1. 44%，表明重现性良好。
2. 5 加样回收率实验
取已知没食子酸含量的柽柳粉末约 2 g，精密称定，平行 6 份。分别加入适量的没食子酸标准品。
按 1. 2. 3 项下方法制备供试品溶液，按 1. 2. 1 项色谱条件测定没食子酸含量，计算加样回收率及 RSD。
没食子酸的平均回收率(n = 6)为 100. 59%。表 1
表 1 加样回收率试验结果(n = 6)
Table 1 Result of recovery test of samples
取样量 (g)
Sample weight
样品含量 (μg)
Sample content
加入量 (μg)
Addition
测定量(μg)
Determination
回收率(%)
Mean
平均值(%)
Average
RSD
(%)
1. 925 6 232. 10 120. 2 350. 08 99. 37 100. 59 1. 25
2. 032 0 244. 92 120. 2 373. 37 102. 26
1. 928 6 232. 46 120. 2 349. 91 99. 22
1. 871 2 225. 54 120. 2 348. 64 100. 84
2. 065 4 248. 95 120. 2 375. 72 101. 78
1. 892 3 228. 08 120. 2 348. 56 100. 08
2. 6 样品含量测定
取 3 个不同批次多花柽柳粉末约 2 g，精密测定，按 1. 2. 3 项下方制备供试品溶液，按 1. 2. 1 项色谱
条件进行测定。每批样品测定 3 次，计算没食子酸含量，结果表明不同采集地区的没食子酸含量差异不
明显，其中以和田采集的含量最高。表 2
表 2 样品含量测定(n = 3)
Table 2 Determinetion of sample content
批次
Batch
产地
Habitat
平均没食子酸含量(μg /g)
Average content
RSD
(%)
1 墨玉县 115. 65 1. 82
2 和田 122. 26 1. 25
3 吉木萨尔县 119. 79 2. 04
3 讨 论
3. 1 色谱条件选择
采用 Waters XTerra RP18(250 mm ×4. 6 mm，5 μm)色谱柱的分离效果最好。实验分别采用甲醇 －
水、乙腈 －水体系进行色谱条件确定，甲醇 －水的峰形有一定拖尾，其他峰干扰较多，并对流动相中含不
同浓度的冰醋酸水溶液(0. 1%、0. 2%、0. 5%)的分离效果进行比较，发现 0. 5%浓度的酸溶液比其他浓
度的分离效果好。同时，通过对不同体积比流动相的分离效果比较，最终确定研究所报道的等度洗脱程
序乙腈 － 0. 5%醋酸溶液(10∶ 90)可达到较好的分离效果。
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7 期 廖菁等: RP － HPLC法测定多花柽柳中没食子酸含量
3. 2 供试液溶液制备方法的选择
在样品前处理过程中，分别采用了甲醇直接回流提取，氯仿索式提取除杂后甲醇回流，甲醇超声波
提取法进行提取，发现直接使用甲醇提取，对没食子酸测定干扰因素太多，基线不稳;甲醇超声波提取没
食子酸，测定结果偏低，不彻底;氯仿除杂后甲醇回流处理的样品测定效果较好，并且通过回收率试验得
以验证。前处理中还考察了提取时间和甲醇提取量对实验的影响，发现氯仿索式提取 3 h 能有效的去
除杂质，且不会造成没食子酸流失;除杂后加入 50 mL 甲醇回流 1. 5 h 得率最高。分离效果较好，故采
用上述方法进行供试品溶液的制备。
3. 3 检测波长及流动相的选择
通过全波长扫描确定没食子酸最佳吸收波长在 270 nm处，峰形稳定，且基线平，其他杂质峰干扰较
小，故选择紫外检测波长为 270 nm。
4 结 论
该属植物因其独特的生物学构造，多数种具有抗旱、耐盐碱、耐水湿、耐贫瘠的特性，柽柳在新疆也
是优良的盐碱地造林树种和固沙先锋树种。我国关于柽柳属植物研究生态学方面报道较多，而关于多
花柽柳化学成分和含量测定研究的相关文献很少，尤其是对于多花柽柳含量测定基本未见报道。实验
室已从多花柽柳中分离并鉴定 14 个化合物，建立了高效液相色谱法测定多花柽柳中没食子酸含量的方
法，实验结果表明，该方法简便、准确，重现性良好，回收率高，可为柽柳的质量控制提供理论依据。
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