全 文 ：毛 豹 皮 樟 同 工 酶 研 究
苟　琳 , 冉茂升
(四川农业大学 基础部 , 四川 雅安　625014)
摘要:采用不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳 ,对毛豹皮樟鲜叶的过氧化物酶同工酶和多酚氧化酶同
工酶进行分离测定 , 二者均分离出 3 条酶带 ,并明确其谱型特征 ,为毛豹皮樟品种鉴定和进一步
研究提供依据。
关键词:毛豹皮樟;过氧化物酶;多酚氧化酶;同工酶
中图分类号:Q949.747.6;Q946.5　　文献标识码:A　　文章编号:1000-2650(1999)04-0468-03
毛豹皮樟(Li tsea coreana Leve.var)又名“老鹰茶” ,樟科 ,木姜子属 ,为长绿小乔木或乔
木 ,在我国分布较广 ,主要产于海南 、广东 、四川 、云南等十多个省区[ 1] ,种质资源十分丰富。
近年来 ,老鹰茶消费量日趋增加 ,而目前对毛豹皮樟的研究甚少 ,仅限于生物学特征 、加工工
艺 、扦插繁殖等 ,这对于毛豹皮樟的进一步开发利用还远远不够 。本文采用聚丙烯酰胺凝胶
电泳对毛豹皮樟过氧化物酶(Peroxidase ,POD)和多酚氧化酶(Polyphenol oxidase , PPO)的同
工酶进行分离测定 ,从生物化学的角度 ,在分子水平上探讨毛豹皮樟品种的科学划分 ,为品
种鉴定与检验及进一步开发利用提供依据和技术 ,对毛豹皮樟的研究与开发具有极其重要
的实际意义。
1　材料与方法
1.1　试验材料
1999年 4月 ,从名山县徐家沟野生毛豹皮樟树上采摘浅绿色春季生新梢嫩叶 ,装入冰
瓶带回实验室备用。
1.2　试验方法
1.2.1　酶液的制备
1.2.1.1　过氧化物酶酶液制备　取毛豹皮樟嫩叶 0.5g ,加入 0.5mL pH7.5 , 0.1mol/ L 磷
酸盐缓冲液 ,少许石英砂 ,在冰浴中研磨成匀浆 ,在 4℃下 ,10000r/min离心 10min ,取上清
液备用。
1.2.1.2　多酚氧化酶酶液制备　取毛豹皮樟嫩叶 0.5g ,加入 0.5mL pH7.2 、0.1mol/ L 磷
酸盐缓冲液 ,少许石英砂 ,在冰浴中研磨成匀浆 ,在 4℃下 10000r/min离心 10min ,取上清液
备用 。
1.2.2　聚丙烯酰胺凝胶电泳
采用垂直板不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳 ,分离胶浓度为 7.5%,分离胶缓冲液为 pH8.9
的 Tris-HCl溶液;浓缩胶浓度为 3%,浓缩胶缓冲液为 pH6.7的 Tris-HCl溶液;电极缓冲
液为 pH8.3的 Tris-Gly 溶液 。点样量为 20μL ,在 4℃下 ,200V电泳 5h 。
1.2.3　染　色
第 17卷　第 4期　　　　　　　　　　四川农业大学学报　　　　　　　　　　　　　Vol.17 No.4
1999 年 12 月　　　　　　　Journal of Sichuan Ag ricultural University　　　　　　　　　Dec.1999
收稿日期:1999-11-08
第二作者为四川农业大学林学园艺学院茶学系 95级毕业生。
DOI :10.16036/j.issn.1000-2650.1999.04.025
过氧化物酶用醋酸联苯胺法 ,多酚氧化酶用邻苯二酚加对苯二胺染色 ,取染色清晰的胶
板绘制图谱 ,并拍照 。
1.2.4　扫　描
用日本岛津 CS-930扫描仪扫描。过氧化物酶在波长 520nm 下扫描 ,多酚氧化酶在波
长 680nm 下扫描。
2　结果与讨论
2.1　毛豹皮樟过氧化物酶同工酶
毛豹皮樟过氧化物酶同工酶的酶谱及酶谱扫描结果如图 1 、表 1所示 。从图 1可见 ,毛
豹皮樟嫩叶过氧化物酶同工酶明显表现为3条酶带:靠近正极的酶带G1最宽 ,但活性较弱;
靠近负极的酶带 G3较宽 ,活性最强;而中间酶带 G2最窄 ,且活性也较弱 。从酶谱扫描图还
可知 ,各带峰面积由大到小顺序为 G1>G3>G2 。
图 1　POD同工酶酶谱及扫描图 图 2　PPO同工酶酶谱及扫描图
表 1　过氧化物酶同工酶酶带及扫描情况比较
酶带 酶带状况 峰面积 活性
G 1 色浅而宽 　129362.40 弱
G 2 色浅而宽 37898.37 弱
G 3 色深而宽 53200.94 强
　　同工酶对植物种和品种鉴定与分类有着
重要意义 ,过氧化物酶是植物体内广泛存在
的重要酶类 , 是由单基因决定的同工酶[ 2] 。
在植物的不同部位和不同发育时期可以出现
多种同工酶谱 ,且对底物 H2O2 的要求是相
同的 ,这些酶谱在一定部位和一定发育时期
具有相对的稳定性 ,与多肽链的异聚体形式的同工酶比较 ,在一定程度上能较好地反映个体
的遗传特性以及个体间的遗传差异 ,本文对毛豹皮樟嫩叶过氧化物酶同工酶分析研究及其
结果 ,可作为毛豹皮樟品种鉴定和分类的依据之一 。
2.2　毛豹皮樟多酚氧化酶同工酶
毛豹皮樟多酚氧化酶同工酶的酶谱及酶谱扫描结果如图 2 、表 2所示 。从图 2得知 ,毛
豹皮樟多酚氧化酶同工酶乃明显表现为 3条酶带:其中靠近两极的酶带 D1 和 D3 ,活性强且
酶带宽;中间酶带 D2活性较弱且酶带较窄 。从酶谱扫描图还可知 ,各带峰面积由大到小依
次为 D1>D3>D2 。
469第 4 期　　　　　　　　　　　　苟　琳(等):毛豹皮樟同工酶研究　　　　　　　　　　　　　　
以上结果表明 ,多酚氧化酶同工酶均表现出较强活性。根据唐茜研究结果 ,毛豹皮樟具
有较高含量的多酚类物质 ,达 15.63%[ 3] 。因此 ,笔者认为 ,若按红茶制作酶促氧化途径:
PPO的活性 ,制定出老鹰茶的红茶加工工艺及相关参数 ,无疑对老鹰茶的开发利用具有重
要意义。
表 2　多酚氧化酶同工酶酶带及扫描情况比较
酶带 酶带状况 峰面积 活性
G 1 色深而宽 48539.95 弱
G 2 色浅而窄 16652.95 弱
G 3 色深较宽 24455.18 强
2.3　毛豹皮樟 PPO 和 POD 同工酶与茶树
的比较
据已有研究结果 ,毛豹皮樟的内含成分
与茶树虽然有相似之处[ 3] ,但是同工酶却相
差较远;茶树 PPO 和 POD 同工酶均在 6条
带以上[ 4 , 5] 。本研究测得毛豹皮樟 PPO 和
POD同工酶均为 3条酶带 ,由此可知 ,毛豹皮樟与茶树之间的相似性较差 。同工酶是基因
水平的表型性状 ,植物间酶带的相似性越大 ,则其亲缘关系越近 ,从而证明毛豹皮樟与茶树
亲缘关系较远 ,为“老鹰茶不是茶”提供了一个有力证据 。
参考文献:
[ 1] 郑万均.中国树木志[ M] .北京:中国林业出版社(第一卷), 1983 , 663～ 664
[ 2] 张立彬.欧李种质资源过氧化物酶同工酶研究[ J] .园艺学报 , 1994 , 21(1):94～ 96
[ 3] 唐　茜 , 齐桂年.毛豹皮樟饮料资源的开发利用[ J] , 四川林业科技 , 1998 , 19(4):66～ 68
[ 4] 安徽农学院.茶叶生物化学[M ] .1994:12～ 13
[ 5] 谢序宾.雅安地区绿茶推广品种多酚氧化酶同工酶初探[ J] , 茶叶科技 , 1989(2):38～ 40
A Study on Isoenzyme of Litsea Coreana Leve.var
GOU L in , RAN Mao-sheng
(Department of Basic Sciences , Sichuan Agricultural University , Yaan 625014 , Sichuan , China)
Abstract:This paper studies the pat terns of peroxidase isoenzyme and polyphenol oxidase of
Li tsea coreana Leve.var by means of polyacryamide gel elect rophoresis.The result show s that
the enzyme belt numbers of POD and PPO isoenzyme are 3 in the young leaf of new grow th.
Key words:LITSEA COREANA LEVE.VAR;PEROXIDASE;POLYPHENOL OXIDASE;ENZYME
(本文审稿施嘉王番)
470　　　　　　　　　　　　　　　　　四川农业大学学报　　　　　　　　　　　　　　　第 17 卷