全 文 ：CARCINOGENESIS , TERATOGENESIS ＆ MUTAGENESIS
收稿日期:2008-08-27;修订日期:2008-11-17
作者简介:关 爽(1973- ), 男, 吉林 ,硕士 , 研究方向:杜香提取物的功能
活性研究。E-mail:xlujing1@yahoo.com.cn
＊Correspondence to:LIU Jing-bo , E-mail:ljb168@sohu.com
杜香熊果酸提取物
对小鼠遗传损伤的
保护作用
关 爽 1/卢 静 2/刘静波 1 , ＊
(1.吉林大学食品科学与工程系 ,吉林 长春 130062;
2.吉林大学食品质量与安全系 ,吉林 长春
130062)
Protective Effects of Ursolic
Acid Extract from Ledum
Pulastre L .against Genetic
Damage on Mice
GUAN Shuang
1 , LU Jing 2 , LIU Jing-bo 1 , ＊
(1.Department of Food Science and Engineering , J ilin University ,
Changchun 130062 ;2 .Department of Food Quality and
Safty , J ilin University , Changchun 130062 , China)
【摘要】背景与目的:研究杜香熊果酸提取物对小鼠遗传损伤是否具有保护作用 。 材料与方法:以环磷酰胺(cyclophosphamide , CP)
所导致的遗传损伤小鼠作为损伤模型 , 采用小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验 , 检测杜香熊果酸提取物对遗传损伤的保护作用 。 结果:
杜香熊果酸提取物 1.16 、2.30 、4.60 g/kg的骨髓嗜多染红细胞微核发生率分别为 2.00‰±0.37‰、2.00‰±0.45‰、1.80‰±0.37‰ ,
与正常组 (2.00‰±0.45‰)比较差异均无统计学意义 (P> 0.05), 与阳性对照组 (24.00‰±0.71‰)其差异均具有统计学意义
(P<0.01)。杜香熊果酸提取物 1.16 、2.30 、4.60 g/kg加环磷酰胺组骨髓嗜多染红细胞微核发生率分别为 17.20‰±1.24‰、16.40‰±
1.53‰、16.00‰±0.51‰,明显低于阳性对照组(24.00‰±0.71‰), 其差异均具有统计学意义(P<0.05)。 结论:杜香熊果酸提取物
对遗传损伤有保护作用 。
【关键词】杜香;熊果酸;遗传损伤;细胞微核
中图分类号:R114 文献标识码:A 文章编号:1004-616X(2009)01-0068-03
【ABSTRACT】 BACKGROUND AND AIM:To study the protective effects of ursolic acid extract from Ledum Pulastre L.
against genetic damage.MATERIALS AND METHODS:We used mice with genetic damage caused by cyclophosphamide ,
(CP), as a model of injury.Through mouse cells of bone marrow PCE micronuclear test , the protective effects of
ursolic acid extract on genetic damage was measured.RESULTS:The bone marrow cells_nuclear PCE rates of ursolic acid
extract at 1.16 , 2.30 , 4.60 g/kg dose were 2.20‰ ±0.37‰,2.00‰ ±0.45‰,1.80‰±0.37‰, respectively.There
was no significant difference with the normal group (2.00‰±0.45‰)(P >0.05), but showed a significant difference
wi th positive group (24.00‰±0.71‰)(P<0.01).The bone marrow cells_nuclear PCE rates of ursolic acid at 1.16 ,
2.30 , 4.60 g/kg dose wi th added CP were 17.20‰±1.24‰, 16.40‰±1.53‰, 16.00‰±0.51‰, respectively ,
significantly different from the positive group(24.00‰±0.71‰)(P<0.05).CONCLUSION:Ursolic acid extract from
Ledum Pulastre L.demonstrated protective effects against genetic damage.
【KEY WORDS】 Ledum pulastre L.;ursolic acid;genetic damage;cell micronucleus
杜香(Ledum pulastre L.)为杜鹃花科杜香属常绿小
灌木 ,具有较高的香料价值和药用价值 。主产于大兴安
岭长白山区 ,资源丰富 [ 1]。熊果酸(ursolic acid),又名乌
索酸 , 乌苏酸 , 是存在于天然植物中的一种五环三萜类
化合物 [2] , 具有抗病毒 [ 3] 、抗肿瘤 [4] 、抗氧化 [ 5] 、抗菌抗
炎 [6] 、降血脂[ 7]等多种生物活性。研究表明 ,杜香中含有
熊果酸 、熊果苷 、熊果醇等萜类化合物[ 8] ,因此从杜香中
提取含有熊果酸的提取物 , 进行深度研究和开发 , 具有
较好的学术前景和市场前景 。
我们采用乙醇回流提取法获得杜香熊果酸提取物
0 0 6 8
癌变 畸变 突变
检测研究 Vol.21 No.1O9 Jan.
CARCINOGENESIS , TERATOGENESIS ＆ MUTAGENESIS
Group Cell
Micronucleus(MN) Rate of MN(‰) PCE/NCE
1.16/kg UAE
2.30/kg UAE
4.60 g/kg UAE
1.16 kg UAE+CP
2.30 g/kg UAE+CP
4.60/kg UAE+CP
Positive control
Negative control
5 000
5 000
5 000
5 000
5 000
5 000
5 000
5 000
10
10
9
86
82
80
120
10
2.00±0.37＊＊
2.00±0.45＊＊
1.80±0.37＊＊
17.20±1.24＊#
16.40±1.53＊#
16.00±0.51＊＊#
24.00±0.71＊＊
2.00±0.45
0.9
0.9
0.8
1.1
1.0
0.8
1.1
1.0
表 1 小鼠骨髓细胞微核率(‰, x-±s)
Table 1 Rate of bone_marrow micronucleus(‰, x-±s)
UAE:ursolic acid extracts , compared with positive control , ＊P<0.05 ,
＊＊P<0.01;compared with negative control , #P<0.05
对小鼠进行灌胃实验 ,研究杜香熊果酸提取物对遗传损
伤的保护作用 ,为杜香熊果酸提取物的开发应用提供理
论依据。
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.1.1 杜香干粉 采集 2008年 8月份的细叶杜
香茎 、叶 , 晾干后剪成碎段 , 再于 60 ℃烘干 , 研磨过 80
目筛备用。
1.1.2 实验动物 昆明种小鼠 , 体重 18 ～ 22 g ,
雌雄各半 , 购于吉林大学实验动物中心 , 合格证号:
SCXK(吉)-2003-0001。
1.1.3 试剂与仪器 环磷酰胺(江苏恒瑞医药股
份有限公司)、 小牛血清 (杭州四季青)、 Giemsa 粉
(Sigma)、吐温 80(大连旅顺化工厂),其它试剂均为市售
分析纯。恒温水浴锅(HPX_9162MBE ,上海博迅实业有限
公司医疗设备厂)、离心机(L_530 , 湘仪离心机仪器有限
公司)、显微镜(MOTIC SFC_18 , 麦克奥迪实业集团有限
公司)、旋转式蒸发器(RE_52A , 苏州市大龙仪器仪表有
限公司)、恒温干燥箱(9140MBE , 北京利康达圣科技发
展有限公司)等 。
1.2 实验方法
1.2.1 熊果酸提取物的制备 干燥的杜香粉适
量 , 按 1∶10(m/V)量加水浸泡 8 h , 再加热煮沸 3次 ,
每次 1 h , 收集固体沉淀物 , 于 60 ℃烘干后粉碎 。用
90%的乙醇 85 ℃加热回流提取 3次 ,前两次各 2 h , 后
一次 1 h , 合并提取液过滤 , 将滤液在旋转蒸发器上回
收乙醇 ,得熊果酸浸膏 , 60 ℃烘干后粉碎备用。用高效
液相色谱法测定其熊果酸含量 。
1.2.2 微核实验 健康成年小鼠 , 随机分为 8
组 ,每组 10只 ,雌雄各半 。1～ 3组分别灌胃给予杜香熊
果酸提取物 1.16、2.30 、4.60 g/kg(分别为 1/8 LD50 、
1/4 LD50 、1/2 LD50),连续 7 d;4～ 6组分别灌胃给予杜
香熊果酸提取物 1.16、2.30 、4.60 g/kg , 连续 7 d , 并于
第 7 d时和第 7组同时腹腔注射环磷酰胺(40 mg/kg);
第 8组给予同体积吐温 80。1 ～ 8组于最后一次灌胃
24 h后 , 将受试动物断髓处死 , 立即取出胸骨 , 挤出胸
骨骨髓与小牛血清混匀 , 推片 , 自然干燥 。甲醇固定
7 min ,然后用 Giemsa染色 15 min ,晾干 。油镜下观察 ,计
数 1 000个 PCE中含有微核的 PCE数 , 并且计数在 200
个细胞中 PCE与 NCE比例。
1.3 统计学方法
运用 SPSS 13.0及 Excel软件进行数据分析 , 组间
比较用 t检验 。
2 结 果
杜香熊果酸提取物 (熊果酸含量 2.6%)微核实验
结果见表 1 ,可知 PCE/NCE的比值在正常范围内 , 实验
结果可信。杜香熊果酸提取物 1.16 、2.30、4.60 g/kg各
试验组与阴性对照组间差异无统计学意义(P>0.05),
说明杜香熊果酸提取物无遗传毒性。杜香熊果酸提取物
高 、中 、低剂量加环磷酰胺各组骨髓嗜多染红细胞微核
率显著低于阳性对照组(P<0.05), 说明杜香熊果酸提
取物对环磷酰胺所导致的遗传损伤具有拮抗作用 , 提
示 ,杜香熊果酸提取物对遗传损伤有保护作用 。
3 讨 论
微核 (micronuclei , MN)呈圆形或椭圆形 , 游离于
主核之外 、大小在主核 1/3 以下 , 是真核类生物细胞中
的一种异常结构。微核的形成是细胞受遗传毒物作用后
的一种遗传学终点 , 观察细胞中微核的形成可以用来检
测遗传毒物 [9]。环磷酰胺是一种遗传毒物 ,能致正常细胞
突变 , 可明显诱发 MN 的产生 , 导致染色体畸变和微核
的形成 [ 10]。因此 , 通过考察化合物对环磷酰胺所致的骨
髓嗜多染红细胞微核发生率的作用就可考察该化合物
是否具有遗传损伤保护作用 。杜香熊果酸提取物能降低
环磷酰胺所致骨髓嗜多染红细胞微核的发生率 , 可见杜
香熊果酸提取物对遗传损伤有保护作用。但本实验中杜
香熊果酸提取物 1.16、2.30 、4.60 g/kg加环磷酰胺组骨
髓嗜多染红细胞微核发生率与阴性对照组微核发生率
也有显著差别 ,可见在此剂量下 ,杜香熊果酸提取物虽具
遗传损伤有保护作用 , 但并不能完全消除环磷酰胺的遗
传毒性作用 , 可能是所考察的剂量较小或该提取物对遗
传损伤的保护作用较弱所致 。因此 , 下一步要增加考察
的剂量并增大剂量组距 ,以进一步明确其量效关系。
参考文献:
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(下转第 73页)
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癌变 畸变 突变
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