全 文 ：HPLC 法测定维吾尔药香青兰中熊果酸和齐墩果酸的含量
新疆生产建设兵团机关门诊部(乌鲁木齐 830002)　　　谭　英　　　　
新疆维吾尔自治区食品药品检验所(乌鲁木齐 830004)　凯赛尔·阿不拉
摘　要:目的:建立 HPLC 法测定维吾尔药材香青兰中熊果酸和齐墩果酸的含量。方法:Kromasil ODS 色谱柱(4.6mm ×
250mm , 5μm);柱温:室温;流动相:甲醇-水-冰醋酸-三乙胺(90:10:0.03:0.06);流速:0.6ml/min;检测波长:220nm。结果:
熊果酸在 2.570～ 15.42μg 范围内有良好的线性关系 , 齐墩果酸在 0.78525 ～ 4.7115μg 范围内有良好的线性关系;精密度良
好 , RSD为 0.76%。结论:本法重现性好 ,灵敏度高 ,稳定性好 , 适用于香青兰中熊果酸和齐墩果酸的含量测定。
关键词:高效液相色谱法;香青兰;熊果酸;齐墩果酸
中图分类号:R291.5　文献标识码:B　文章编号:1006-6810(2009)03-0057-02
　　维吾尔药材香青兰(Dracocephslum Moldavicae L.)为唇
形科植物香青兰的药用全草 , 具有补脑安神 、养肝暖胃 、镇
咳止喘的功效 , 用于心脑病和高血压的心神不安 、头晕 、胃
寒作痛 、气管炎等〔1〕 ,香青兰中含有黄酮类 、黄酮醇类 、木脂
素类和三萜类挥发油类等化合物〔2 ,3〕 , 其中熊果酸 、齐墩果
酸属于三萜类化合物 , 具有抗炎 、抗菌 、抗病毒和抗肿瘤活
性 ,对肝损伤有保护作用〔4〕。《维吾尔药材标准》〔5〕中香青
兰项下并没有对熊果酸 、齐墩果酸的含量测定方法 , 我们在
参考诸多文献及实验研究的 建立了样品处理简单 、重现性
好 、灵敏度高的高效液相色谱法 , 为维吾尔药材香青兰的质
量标准的建立提供参考方法。
1　仪器与试药
美国Waters 高效液相色谱仪 , 包括 Waters1525 泵 、Wa-
ters2487 双波长紫外检测器Waters717 自动进样器 、Empower
色谱工作站。
香青兰样品来源分别为和田 、阜康 、吉木萨尔 、新疆民
族医院。
熊果酸 、齐墩果酸对照品(批号:110742-200516 , 110709
-200304;供含量测定用;中国药品生物制品检定所);甲醇
为色谱醇(TEDIA 公司)水为超纯水(Ultra pure water system
超纯水仪)其他试剂为分析纯。
2　色谱条件分析
Kromasil ODS 色谱柱(4.6mm ×250mm , 5μm);柱温:室
温;流动相:甲醇-水-冰醋酸-三乙胺(90:10:0.03:0.
06);流速:0.6ml/min;检测波长:220nm。进样量 20μl;在此
色谱条件下样品峰分离度良好。(见图 1)
3　溶液配制
3.1　对照品储备溶液的制备:精密称取熊果酸对照品 10.
37mg ,加甲醇定容至 10ml , 再精密吸取 3ml , 用甲醇定容至
10ml;精密称取齐墩果酸对照品 10.47mg , 加甲醇定容至
10ml , 再精密吸取 1ml , 用甲醇定容至 10ml。
3.2　供试品溶液的制备:取本品粉末(过 3 号筛), 精密称
取 1g ,置索氏提取器中 , 加入乙醚 100ml , 回流提取 4 小时 ,
将乙醚转至蒸发皿中回收至干 , 残渣用石油醚(30℃ ～
60℃)浸渍 2次 , 每次 10ml , 约 2min , 弃去石油醚 , 用甲醇定
容至 5ml ,摇匀 , 用 0.45μm微孔滤膜过滤 ,即得。
图 1　对照品(A)和供试品(B)色谱图
4　方法学考察
4.1　线性关系考察:分别自动进样熊果酸对照品储备液
(0.514mg/ml)5 , 10 , 15 , 20 , 25 , 30μl , 按上述色谱条件测定 , 以
峰面积为纵坐标 , 以熊果酸对照品进样量为横坐标 , 绘制标
准曲线。计算得回归方程:Y=3510082X-215497 , r=0.
9995 , 线性范围 2.570 ～ 15.42μg;分别自动进样齐墩果酸对
照品(0.15705mg/ml)5 , 10 , 15 , 20 , 25 , 30μl , 按上述色谱条件
测定 , 以峰面积为纵坐标 , 以齐墩果酸进样量为横坐标 , 绘
制标准曲线。计算得回归方程:Y=318741X-41653.80 , r=
0.999 ,线性范围 0.78525～ 4.7115μg。
4.2　稳定性实验:分别进供试品(产地吉木萨尔)20μl ,定时
进行测定 ,时间间隔为 2 , 4 , 8 , 12 , 16 小时 , 齐墩果酸的峰面
积分别为 799237 , 780863 , 798839 , 793947 , 788101 , RSD 为 0.
98%;熊果酸的峰面积分别为 2441063 , 2474776 , 2454658 ,
2586967 ,2566990 , RSD 为 2.69%。结果表明实验方法比较
572009年 3 月第 3 期　　　　　　　　　　　　　中国民族医药杂志　　　　　　　　　　　　　　　　　　 　
DOI :10.16041/j.cnki.cn15-1175.2009.03.039
稳定。
4.3　精密度实验:分别进供试品(产地吉木萨尔)20μl , 连续
进样 6 次。 齐墩果酸的峰面积分别为 783303 , 782652 ,
795522 , 799237 , 798072 , 792266 , RSD 为 0.92%;熊果酸的峰
面积分别为 2405740 , 2404919 , 2424842 , 2441063 , 2449103 ,
2434887 , RSD为 0.76%,结果表明精密度良好。
4.4　重复性实验:精密称取同一批供试品(产地吉木萨尔)
1g , 5份 , 按“3.2”方法制备供试液 , 进样 20μl 测定。齐墩果
酸含量分别为 0.634 , 0.619 , 0.635 , 0.638 , 0.625 , RSD 为 1.
07%;熊果酸的含量分别为 1.885 , 1.923 , 1.817 , 1.877 , 1.
891 , RSD为 1.97%。结果表明方法的重复性较好。
5　加样回收实验
精密称取同一批供试品(主地吉木萨尔 , 齐墩果酸含量
为 0.6302mg/ml , 熊果酸含量为 1.8786mg/ ml)0.5g , 共 6 份 ,
分别精密加入齐墩果酸对照品溶液(浓度为 0.309mg/ml)和
熊果酸对照品溶液(浓度为 0.939mg/ml)0.8ml , 1.0ml , 1.
2ml ,按“3.2”方法制备供试液 , 并按含量测定方法测定 , 测
得齐墩果的平均回收率为 97.76%, RSD为 0.97%。 熊果酸
的平均回收率为 97.40%, RSD为 1.22%。结果表明回收良
好。结果见表 1。
表 1　回收率测定结果
序号
样品取
样量
(g)
样品中
齐墩果
酸量
(mg)
加入对
照品齐
墩果酸
量(mg)
测得齐
墩果酸
量
(mg)
齐墩果
酸的回
收率
(%)
样品中
熊果酸
量
(mg)
加入对
照品熊
果酸的
量(mg)
测得熊
果酸的
量
(mg)
熊果酸
的回收
率(%)
1 0.4993 0.3147 0.2472 0.555 97.21 0.9380 0.7512 1.657 95.71
2 0.5013 0.3159 0.2472 0.557 97.53 0.9417 0.7512 1.676 97.75
3 0.4995 0.3148 0.3090 0.618 98.12 0.9383 0.939 1.869 99.12
4 0.5033 0.3172 0.3090 0.615 96.38 0.9455 0.939 1.864 97.82
5 0.4996 0.3148 0.3708 0.679 98.22 0.9385 1.1268 2.038 97.58
6 0.5005 0.3154 0.3708 0.683 99.14 0.9402 1.1268 2.027 96.45
回收率
RSD(%)
0.97 1.22
6　供试品含量测定
取 4 批供试品按照“ 3.2” 项下制备供试品溶液 ,HPLC
法测定供试品中熊果酸和齐墩果酸峰面积 , 按外标法计算
含量 , 测定结果见表 2。(n=2)
表 2　熊果酸和齐墩果酸含量
来源 熊果酸含量(%) 齐墩果酸含量(%)
吉木萨尔 0.63 1.88
和田 0.74 2.03
阜康 0.72 2.05
新疆民族医院 0.85 2.15
7　讨　论
7.1　提取方法的选择:熊果酸 、齐墩果酸为非极性的五环
三萜类 ,可溶于氯仿 、甲醇 、乙醇 、丙酮等有机溶剂 , 不溶于
水和石油醚。根据以上特性我们选择了 5 种方法进行预实
验。方法一:甲醇超声提取;方法二:三氯甲烷超声提取;方
法三:乙醇超声提取;方法四:乙醚索氏提取;方法五:乙醚
超声提取。结果表明乙醚索氏提取的含量最高 , 因此采取
了方法四:乙醚索氏提取 ,在提取时间选择时试验结果表明
提取 4 小时已经将熊果酸和齐墩果酸完全提取。
7.2　流动相的选择:在预实验中我们采用了 4 种流动相进
行比较 ,流动相一:乙腈-0.1%磷酸(75:25);流动相二:乙
腈-0.2%乙酸胺(80:20);流动相三:甲醇-磷酸盐缓冲液
(89:11),缓冲液配制方法(取 Na2HPO4·12H2O5.3788g 与 1ml
磷酸 ,用蒸馏水定容至 1000ml);流动相四:甲醇-水-冰醋
酸-三乙胺(90:10:0.03:0.06)。流动相四使熊果酸 、齐墩
果酸完全分开 , 而其他 3种并没有使熊果酸 、齐墩果酸完全
分开 , 因此我们采用了流动相四。
7.3　流速与检测波长的选择:流速在 1.0ml/ min 和 0.6ml/
min 中选择时 , 发现 0.6ml/ min 可以更明显的改善分离效
果 ,并且对保留时间影响不大 , 因此采用 0.6ml/min;在波长
选择时 ,当波长小于 210nm ,信噪比太小 , 无法定量 , 而大于
230nm 时响应值太低 ,在 220nm 时熊果酸 、齐墩果酸的响应
值均比较理想 , 在预实验过程中 , 220nm 能使熊果酸 、齐墩果
酸完全分开 , 而 210nm 不能 , 因此采用 220nm 作为检测波
长。
参考文献
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分册 , 2004 , 31(3):133-136.
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乌鲁木齐:新疆科技卫生出版社 , 1993.
2008 年 12月 8 日收稿
58　　　　　　　　　　　　　　　　　中国民族医药杂志　　　　　　　　　　　　　2009 年 3月第 3 期