全 文 ：檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶
应灵敏度高，故选用 250 nm 作为检测波长。
在色谱条件优化时，分别比较了甲醇-水，乙
腈-水，甲醇-0. 1% 冰醋酸水溶液，甲醇-0. 1% 磷
酸水溶液 4 种流动相，考察了 25，30，35 ℃柱温
及流速为 0. 8，1. 0，1. 2 mL·min － 1，结果以甲醇-
0. 1%磷酸水溶液为流动相梯度洗脱，柱温 35
℃，流速 1. 0 mL·min － 1，检测波长 250 nm 时色谱
峰较多且达到基线分离，峰型对称，分离较好，保
留时间适中。
12 批虎耳草样品的相似度均 ＞ 0. 90，说明各地
区的样品化学成分一致性较好，所得出的指纹图谱
共有模式具有代表性，可以反映贵州虎耳草药材的
指纹特征。但 18 个共有峰的峰面积差异较大，初步
说明贵州不同产地的虎耳草主成分基本相同，但组
分含量的差异较大;虎耳草药材的质量受地理环境
和气候条件影响较大，因此固定的产地来源对保障
虎耳草药材质量的稳定性极为重要，同时也为今后
研究虎耳草环境因子与药材质量相关性提供了一定
的参考基础。
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［收稿日期］ 20111219(003)
［基金项目］ 国家科技富民强县专项行动计划试点县及科技项目 (国科发农〔2008〕471 号)
［第一作者］ 林海霞，硕士，从事生药学研究和中草药资源开发利用工作，Tel:13890625706，E-mail:153327789@ qq． com
［通讯作者］ * 王书林，教授、博士生导师，从事中药品种、质量研究，Tel:13508142598，E-mail:wslgap@ tom． com
HPLC测定竹叶柴胡中黄酮类成分的含量
林海霞1，王书林2* ，王砚1，孙翠萍1
(1．成都中医药大学， 成都 610075;2．成都中医药大学峨眉学院，四川 峨眉山 614201)
［摘要］ 目的:建立竹叶柴胡中黄酮类成分(芦丁、槲皮素、山奈素和异鼠李素)HPLC的含量测定方法，为该药材的开发
利用提供科学依据。方法:采用 C18柱，流动相为甲醇(A)-0. 1%磷酸(B)梯度洗脱，流速 0. 8 mL·min
－1，检测波长 360 nm，柱
温 35 ℃，进样体积 10 μL。结果:芦丁在 667. 8 ～ 33 390 ng(r = 0. 999 8) ，槲皮素在 216. 0 ～ 10 798. 4 ng(r = 0. 999 9) ，山奈素
在 27. 5 ～ 1 372. 8 ng(r = 0. 999 9) ，异鼠李素在 130. 6 ～ 6 528. 0 ng(r = 0. 999 8)线性关系良好，平均加样回收率分别为
100. 3%(RSD 0. 78%) ，94. 5%(RSD 1. 13%) ，94. 5%(RSD 1. 15%) ，94. 1% (RSD 1. 09%)。结论:该法在同一色谱系统中同
时测定芦丁、槲皮素、山奈素和异鼠李素的含量，操作简便、准确性高、重复性好，用于竹叶柴胡药材的质量评价。
［关键词］ 竹叶柴胡;黄酮;高效液相色谱法
［中图分类号］ R284. 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2012)15-0076-04
Determination of Flavonoid of Bupleurum marginatum by HPLC
LIN Hai-xia1，WANG Shu-lin2* ，WANG Yan1，SUN Cui-ping1
(1. Chengdu University of Traditional Chinese Medicine，Chengdu 610075，China;
·67·
第 18 卷第 15 期
2012 年 8 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 18，No． 15
Aug．，2012
DOI:10.13422/j.cnki.syfjx.2012.15.034
2. Institute of Emei，Chengdu University of Traditional Chinese Medicine，Emei 614201，China)
［Abstract］ Objective:To develop a method by HPLC for determination of flavonoid of Bupleurum
marginatum． Method:Agilent Zorbax SB C18 column (4. 60 mm × 150 mm，5 μm) ，mobile phase methanol-
0. 1% phosphoric gradient elution，flow rate 0. 8 min·mL －1，detected wavelength 360 nm． Result:The linear
ranges of rutin，quercetin，kaempferol and isorhamnetin were 667. 8-33 390 ng (r = 0. 999 8) ，216. 0-10 798. 4
ng (r = 0. 999 9) ，27. 5-1 372. 8 ng (r = 0. 999 9) ，and 130. 6-6 528. 0 ng (r = 0. 999 8) ，the average
recovery rates were 100. 3% (RSD 0. 78%) ，94. 5% (RSD 1. 13%) ，94. 5% (RSD 1. 15%)and 94. 1%
(RSD 1. 09%)． Conclusion:The HPLC method is simply and rapid，and suitable to assess qualitative of B．
marginatum．
［Key words］ Bupleurum marginatum;flavonoid;HPLC
竹叶柴胡为伞形科柴胡属植物，广泛分布于四
川、云南、贵州、甘肃等地，具解表和里、疏肝解郁、提
升中气之功效，为西南地区民间习用品，并以全草入
药。而《中国药典》(2010 年版)收载柴胡和狭叶
柴胡的干燥根为药用柴胡来源，有效成分主要为
柴胡皂苷 a、柴胡皂苷 d，此外地上部分含芦丁、山
奈素、异鼠李素等黄酮成分［1-2］。据实验研究及文
献记载，竹叶柴胡根部同样含柴胡皂苷 a、柴胡皂
苷 d等皂苷类成分［3］，地上部分也含有黄酮类成
分［4］。现代药理研究发现黄酮类化合物具有消
炎、强心、降压、扩张冠状动脉、降低胆固醇、利尿、
止咳祛痰、保肝等作用［5］。本课题考察竹叶柴胡
的黄酮类成分的含量，以期探明西南地区习用竹
叶柴胡，并以全草入药的科学性，为合理开发利用
柴胡药用资源提供一定的实验依据。
1 材料
竹叶柴胡采自四川省自贡市荣县，经成都中医
药大学峨眉学院王书林教授鉴定为伞形科植物竹叶
柴胡 Bupleurum marginatum Wall． ex DC． 的干燥全
草。对照品芦丁(批号 0080-9705)、槲皮素(批号
100081-200907)、山奈素(批号 0861-200002)、异鼠
李素(批号 110860-200407)均为中国药品生物制品
检定所提供。试剂甲醇(色谱纯) ，超纯水，其他试
剂均为分析纯。
Waters 2996-2695 型高效液相色谱仪，Waters
Empower化学工作站，BP-211D 1 /万型电子分析天
平(北京赛多利仪器系统有限公司) ，UPT-Ⅱ-10T
型超纯水器(成都超纯科技有限公司)。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 Agilent Zorbax SB C18色谱柱(4. 60
mm ×150 mm，5 μm) ，流动相甲醇(A)-0. 1%磷酸
(B)梯度洗脱［0 min(32∶ 68)～ 25 min(55∶ 45)～ 40
min(90∶ 10) ］，流速 0. 8 mL·min －1，检测波长 360
nm，柱温 35 ℃，进样体积 10 μL。理论塔板数按芦
丁、槲皮素、山奈素和异鼠李素计算均不低于6 000。
2. 2 对照品溶液的制备 精密称取芦丁、槲皮素、
山奈素和异鼠李素适量，加甲醇分别制成每 1 mL含
芦丁、槲皮素、山奈素和异鼠李素分别为 0. 6，0. 2，
0. 03，0. 15 mg的对照品溶液。
2. 3 供试品溶液的制备 取竹叶柴胡全草粉末
(过二号筛)1 g，精密称定，精密加入 85%乙醇 30
mL，称重，置 95 ℃水浴中加热回流 2. 5 h，放冷，补
足失重，过滤，精密吸取滤液 15 mL，蒸干，残渣加甲
醇定容至 5 mL量瓶中，摇匀，微孔滤膜滤过，取续滤
液，即得。
2. 4 色谱行为 取 2. 2 项下对照品溶液和 1 号供
试品溶液各 10 μL，分别注入液相色谱仪中，结果见
图 1，4 种黄酮类成分的分离度均 ＞ 1. 5，表明该条件
可行。
1. 芦丁;2. 槲皮素;3. 山奈素;4. 异鼠李素
R. 对照品;S1. 供试品
图 1 对照品和供试品 HPLC图谱
2. 5 方法学考察
2. 5. 1 线性关系 取 2. 2 项下对照品溶液分别进
样 1，3，5，10，30，50 μL。以进样量(ng)为横坐标，
·77·
林海霞，等:HPLC测定竹叶柴胡中黄酮类成分的含量
峰面积为纵坐标绘制标准曲线，得芦丁的线性回归
方程为 Y = 2 060 X － 356 823(r = 0. 999 8) ，在
667. 8 ～ 33 390 ng线性关系良好;槲皮素的线性回
归方程为 Y = 5 012. 3X － 310 897(r = 0. 999 9) ，在
216. 0 ～ 10 798. 4 ng 线性关系良好;山奈素的线性
回归方程为 Y = 1 552. 1X － 8 438. 1(r = 0. 999 9) ，
在 27. 5 ～ 1 372. 8 ng线性关系良好;异鼠李素的线
性回归方程为 Y = 1 662. 8X － 34 819(r = 0. 999 8) ，
在 130. 6 ～ 6 528. 0 ng线性关系良好。
2. 5. 2 重复性试验 精密称取 1 号样品粉末 1 g，
共 6 份，按照 2. 3 的方法制备供试品溶液，按上述色
谱条件分别进样 10 μL，得芦丁、槲皮素、山奈素和
异鼠李素的含量 RSD 分别为 0. 39%，0. 64%，
2. 18%，2. 55%，表明方法重现性良好。
2. 5. 3 精密度 将 2. 2 项下对照品溶液按上述色
谱条件连续进样 6 次，每次 10 μL，得芦丁、槲皮素、
山奈素和异鼠李素的峰面积 RSD 分别为 0. 78%，
0. 48%，0. 95%，0. 41%，表明仪器精密度良好。
2. 5. 4 稳定性 取同一批号(1 号)的供试品溶液，
分别于 0，6，10，14，20，24 h 后测定，每次进样 10
μL，得芦丁、槲皮素、山奈素和异鼠李素的峰面积
RSD 分别为 0. 66%，0. 36%，2. 58%，0. 85%，表明
供试品溶液在 24 h内稳定。
2. 5. 5 加样回收率 取 1 号样品粉末(过二号筛)
0. 5 g，共 6 份，精密称定，分别加入适量的对照品，
按照 2. 3 项下条件制备供试品溶液，在上述色谱条
件下分别进样 10 μL，得芦丁的平均加样回收率为
100. 3% (RSD 0. 78%) ;槲皮素的平均加样回收率
为 94. 5% (RSD 1. 13%) ;山奈素的平均加样回收
率为 94. 0% (RSD 1. 15%) ;异鼠李素的平均加样
回收率为 94. 1%(RSD 1. 09%) ，表明该方法回收率
好，方法可行。结果见表 1 ～ 4。
表 1 芦丁加样回收率试验测定
No． 称样量 / g 样品含量 /mg 加入量 /mg 测得量 /mg 回收率 /% 平均值 /% RSD /%
1 0． 526 4 0． 727 8 0． 890 4 1． 617 4 99． 92
2 0． 512 4 0． 708 5 0． 890 4 1． 612 6 101． 53
3 0． 524 6 0． 725 4 0． 890 4 1． 609 8 99． 33 100． 3 0． 78
4 0． 523 3 0． 723 5 0． 890 4 1． 612 7 99． 86
5 0． 518 1 0． 716 3 0． 890 4 1． 612 9 100． 70
6 0． 517 8 0． 715 9 0． 890 4 1． 612 2 100． 66
表 2 槲皮素加样回收率试验测定
No． 称样量 / g 样品含量 /mg 加入量 /mg 测得量 /mg 回收率 /% 平均值 /% RSD /%
1 0． 526 4 0． 855 7 0． 259 2 1． 101 7 94． 92
2 0． 512 4 0． 833 0 0． 259 2 1． 076 7 94． 01
3 0． 524 6 0． 852 8 0． 259 2 1． 095 6 93． 66 94． 5 1． 13
4 0． 523 3 0． 850 6 0． 259 2 1． 099 1 95． 88
5 0． 518 1 0． 842 2 0． 259 2 1． 088 9 95． 19
6 0． 517 8 0． 841 7 0． 259 2 1． 082 8 93． 01
表 3 异鼠李素加样回收率试验测定
No． 称样量 / g 样品含量 /mg 加入量 /mg 测得量 /mg 回收率 /% 平均值 /% RSD /%
1 0． 526 4 0． 008 0 0． 008 6 0． 016 0 93． 51
2 0． 512 4 0． 007 8 0． 008 6 0． 015 7 93． 09
3 0． 524 6 0． 007 9 0． 008 6 0． 016 2 95． 92 94． 0 1． 15
4 0． 523 3 0． 007 9 0． 008 6 0． 015 9 93． 42
5 0． 518 1 0． 007 8 0． 008 6 0． 016 0 94． 86
6 0． 517 8 0． 007 8 0． 008 6 0． 016 0 94． 58
表 4 山奈素加样回收率试验测定
No． 称样量 / g 样品含量 /mg 加入量 /mg 测得量 /mg 回收率 /% 平均值 /% RSD /%
1 0． 526 4 0． 131 1 0． 087 0 0． 212 3 93． 28
2 0． 512 4 0． 127 7 0． 087 0 0． 209 4 93． 97
3 0． 524 6 0． 130 7 0． 087 0 0． 213 4 95． 07 94． 1 1． 09
4 0． 523 3 0． 130 4 0． 087 0 0． 213 2 95． 23
5 0． 518 1 0． 129 1 0． 087 0 0． 211 4 94． 56
6 0． 517 8 0． 129 0 0． 087 0 0． 209 6 92． 64
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第 18 卷第 15 期
2012 年 8 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 18，No． 15
Aug．，2012
2. 6 含量测定 按照 2. 3 项下条件制备供试品溶
液，按照 2. 1 项下色谱条件分别进样 10 μL。结果
见表 5，图 2。
表 5 淡竹叶中黄酮类成分含量测定(n = 3) mg·g － 1
No． 采集地 生长年限 采集时间 芦丁 槲皮素 山奈素 异鼠李素 含量总和
1 荣县正紫镇窝棚湾村 一年 2010-08-23 1. 382 6 1. 627 9 0. 051 4 0. 249 1 3. 27
2 荣县度佳镇杨烧村 两年 2011-09-18 10. 823 1 3. 202 2 0. 046 4 0. 553 9 14. 63
3 荣县正紫镇前进村 两年 2011-09-18 20. 005 7 3. 341 0 0. 049 4 0. 543 8 23. 94
4 荣县正紫镇窝棚湾村 两年 2011-09-18 7. 742 9 2. 822 9 0. 045 2 0. 587 7 11. 20
5 荣县正紫镇干沟村 两年 2011-09-18 15. 240 1 2. 594 4 0. 045 9 0. 600 6 18. 48
6 荣县度佳镇李家嘴村 两年 2011-09-18 10. 041 0 4. 380 9 0. 073 7 0. 876 4 15. 37
7 荣县正紫镇丁家庙村 一年 2011-09-18 9. 686 9 4. 708 1 0. 095 2 0. 700 0 15. 19
8 荣县正紫镇卫星村 一年 2011-09-18 4. 631 5 2. 633 8 0. 039 4 0. 478 5 7. 78
9 荣县正紫镇坟嘴山村 两年 2011-09-18 9. 219 7 2. 903 4 0. 047 2 0. 525 1 12. 70
10 荣县度佳镇芭蕉湾村 一年 2011-09-18 18. 076 0 3. 938 0 0. 066 2 0. 774 0 22. 85
11 荣县度佳镇胡家巷村 两年 2011-09-18 5. 288 3 3. 622 7 0. 046 1 0. 636 2 9. 60
12 荣县正紫镇窝棚湾村 一年 2011-09-18 6. 908 1 3. 047 4 0. 053 6 0. 570 6 10. 58
13 荣县正紫镇窝棚湾村 两年 2011-09-13 7. 153 2 2. 415 0 0. 033 2 0. 382 0 9. 98
14 荣县正紫镇窝棚湾村 两年 2010-08-23 1. 351 5 0. 978 4 0. 024 0 0. 155 3 2. 51
1. 芦丁;2. 槲皮素;3. 山奈素;4. 异鼠李素
S1 ～ S14. 1 ～ 14 号供试品
图 2 竹叶柴胡供试品 HPLC图谱
3 小结
对 14 批竹叶柴胡全草进行了检测，建立了竹叶
柴胡药材中黄酮的 HPLC 含量测定方法，该方法在
同一色谱系统中，可同时测定芦丁、槲皮素、山奈素
和异鼠李素的含量，操作简便，结果可靠，重复性好。
川产的竹叶柴胡黄酮含量丰富，其中芦丁含量
所测值最高达到 23. 94 mg·g －1，槲皮素最高达到
4. 708 1 mg·g －1，山奈素最高达到0. 095 15 mg·g －1，
异鼠李素最高达到0. 774 0 mg·g －1，4 种黄酮类成分
总和均最高达 22. 85 mg·g －1。柴胡以根入药，常将
地上部分弃去，造成药材资源的浪费。西南地区所
产的竹叶柴胡主根较柴胡细小，而地上部分生长茂
盛，质量大约是根的 6 ～ 10 倍。由于黄酮类成分具
有特殊的药用价值，主要存在于地上部分，因此除了
将含柴胡皂苷的根部入药外［3］，还应将地上部分充
分利用起来。至于西南地区习用竹叶柴胡全草是否
合理，能否将其作为药典柴胡品种的补充，还需后期
对其皂苷、黄酮类等化学成分的种类和含量及药理
作用等与药典柴胡品种做系统完善的对比研究。
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［责任编辑 顾雪竹］
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林海霞，等:HPLC测定竹叶柴胡中黄酮类成分的含量