全 文 ：表 3 方差分析表
因素 离差平方和 自由度 F比 F临界值 显著性
加醋量 18.557 2 10.287 19
闷润时间 35.685 2 19.781 19 ＊
烘干温度 509.598 2 282.482 19 ＊
烘干时间 1.804 2 1 19
误差 1.8 2
注:F0.05(2, 2)=19.00
3.5 验证试验 由于优选的工艺未包括在正交设
计表的 9次实验中 ,故对其进行 3批验证试验 ,测得
氢溴酸东莨菪碱 、硫酸阿托品的含量见表 4 ,由表 4
可知 ,该最佳炮制工艺具有良好的重复性和合理性 。
表 4 醋天仙子中氢溴酸东莨菪碱 、硫酸阿托品含量测定表
编号 氢溴酸东莨菪碱 /(mg/g) 硫酸阿托品 /(mg/g)
1 0.362 1 0.582 6
2 0.361 7 0.584 2
3 0.360 5 0.581 1
4 结论
4.1 选用 L9 (34)正交试验 ,以天仙子中氢溴酸东
莨菪碱 、硫酸阿托品的含量为指标 ,对加醋量 、闷润
时间 、烘干温度 、烘干时间四个影响因素进行考察 ,
经过直观分析和方差分析得到:影响天仙子醋制因
素的大小为 C>B>A>D, 醋制优化工艺为
A3B3C3D1 ,即每 100kg药材加 40kg米醋 ,闷润 2h,
于微波炉低火干燥 4 min。重复试验证明此工艺为
最佳工艺(n=3)。
4.2 药物与毒药之间并没有严格的界限 ,任何药物
的效应和它所用的制剂浓度都有直接关系 ,用量大
药物的血药浓度高 ,效应就相对加强 ,超过剂量也会
出现毒性 ,天仙子中的有效成分也一样 ,炮制工艺对
醋天仙子的临床疗效有直接影响 ,炮制后可增加两
种生物碱的含量 ,相同的药材用量可在安全范围内
提高其疗效。因此以氢溴酸东莨菪碱 、硫酸阿托品
的含量作为指标进行探讨 ,优选工艺 ,能准确代表药
材的炮制意义 ,并且稳定可靠 。
4.3 实验结果表明 ,此工艺稳定可行 ,对中药天仙
子饮片的规范化 、标准化 、现代化起到一定的推动作
用。
参考文献:
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含量分析 [ J] .中草药 , 1999, 30(8):582-583.
狗脊炮制品化学成分研究
许 枬 , 步显坤 , 鞠成国 , 贾天柱＊
(辽宁中医药大学 ,辽宁 沈阳 110032)
收稿日期:2008-10-12
基金项目:国家自然科学基金委项目(30572371)
作者简介:许 枬(1968-),女 ,副教授 ,博士 ,研究方向:中药有效成分。 Tel:(0411)87586014E-mail:xudanbs@163.com
＊通讯作者:贾天柱(1951-),男 ,教授 ,硕士 ,研究方向:中药炮制原理。 Tel:(0411)87586038E-mail:tzjia@263.net
关键词:狗脊;化学成分;中药炮制
摘要:目的:研究狗脊炮制品的化学成分 ,为狗脊的炮制原理解析提供依据。方法:采用反复硅胶 、凝胶色谱法对沙烫法
制备的狗脊炮制品进行化学成分研究。结果:从氯仿提取物中分离出 7个化合物 , 运用化学和波谱学方法分别鉴定为 β-
谷甾醇(I)、正十六烷酸(II)、β-谷甾醇 -3-O-(6′一正十六酰氧基)-β-D葡萄糖苷(III)、 5-羟甲基糠醛(IV)、双 [ 5-甲酰基
糠基 ]醚(V)、胡萝卜苷(VI)、3-羟基-γ-吡喃酮(VII)。结论:所有化合物全部为首次从炮制品中得到 , 其中化合物 VII为
首次从金毛狗脊(Cibotiumbaronetz(L.)T.sm.)中得到。
中图分类号:R283 文献标识码:A 文章编号:1001-1528(2009)07-1072-03
中药狗脊为蚌壳蕨科植物金毛狗脊 Cibotium
baronetz(L.)T.sm.的干燥根茎 。始载于 《神农本草
经》 ,为草部中品。
狗脊的炮制方法历史悠久 ,最早见于 《雷公炮
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炙论》,采用酒拌蒸的方法 。后来 《太平惠民和剂局
方 》、《圣济总录》、《普济方 》、《本草纲目》等都有狗
脊的炮制方法的记载 。 2005版 《中国药典》一部 ,收
载砂烫的炮制方法[ 1] 。
中药炮制就是通过改变药物中的化学成分 ,最
终达到改变药物的药性 ,使其更能发挥药物的治疗
作用的目的 。研究炮制前后药物的化学成分变化 ,
将为揭示中药炮制的机理提供有力的科学依据 。因
此本试验对沙烫法制备的狗脊炮制品的化学成分进
行研究 ,从中分离出 7个化合物 ,化合物Ⅰ ～ Ⅶ 均是
首次从狗脊炮制品中得到 ,其中 3-羟基-γ-吡喃酮为
首次从金毛狗脊属植物中得到 。
1 仪器和材料
熔点用 Kofler型显微熔点测定仪测定(温度未
校正);瑞士 BrukerIFS55付立叶变换红外分光光度
计(KBr压片);日本岛津液相色谱仪;日本岛津 GC-
MS-QP5050A质谱仪;NMR:BrukerAV600型核磁共
振谱仪 , TMS为内标;柱色谱用硅胶为青岛海洋化
工厂产品;SephadexLH-20为 Pharmacia公司产品;
所用试剂均为分析纯或化学纯 。
样品为金毛狗脊 ,购于河北安国 。经辽宁中医
药大学贾天柱教授鉴定为金毛狗脊 Cibotiumbaron-
etz(L.)T.sm.。药材样品保存在辽宁中医药大学炮
制教研室。
2 炮制品与生品化学成分差异研究
2.1 供试品溶液的制备 取 2 kg狗脊药材饮片 ,
按 《中国药典 》2005版一部狗脊项下炮制品方法 ,以
10倍量净砂 , 180℃砂烫至断面黄棕色 ,质地松脆 ,
制成砂烫炮制品 。精密称取等量的狗脊生品和沙烫
法制备的炮制品各 10 g,分别加乙醇回流提取 3次 ,
每次 1 h,回收溶剂 ,加水混悬 ,置分液漏斗中以氯仿
萃取 3次 ,每次 20 mL,合并氯仿层 ,回收溶剂 ,残渣
加甲醇 1 mL溶解 ,作为供试品溶液。
2.2 氯仿提取物的 TLC分析 在同一薄层板上交
叉点上述生品和制品的供试品溶液各 5 μL,以环己
烷 -醋酸乙酯(3∶1)为展开剂 ,展开 ,取出 ,晾干 ,喷以
香草醛 -硫酸显色剂 , 105 ℃加热至显色清晰 。在制
品的供试品溶液色谱中 ,出现两个明显的在生品的
供试品溶液色谱相同位置上 ,没有检出的黑色斑点 ,
见图 1,由此可以确定其为狗脊炮制后的新成分。
2.3 提取与分离 取上述狗脊炮制品 10 kg,加乙
醇 6倍量 ,提取 3次 ,每次 1 h,合并提取液 ,回收溶
剂 ,得总提取物 815 g。取上述提取物加水混悬 ,用
氯仿 、醋酸乙酯 、正丁醇依次萃取 ,每个溶剂萃取 3
次 ,每次加入量 300 mL,回收溶剂 ,分别得到氯仿萃
取物 209 g,醋酸乙酯萃取物 71 g和正丁醇萃取物
307 g。将氯仿萃取物以 2倍量硅胶拌样 ,经硅胶柱
层析(硅胶用量 1 000 g),以石油醚 -丙酮(100:1※
丙酮)梯度洗脱 ,每 300mL为 1份 ,收集洗脱液 ,分
别回收溶剂 ,以薄层色谱为依据 ,合并具有相同斑点
的流份 ,共得到 10个流份。将石油醚-丙酮(20:1 )
洗脱部分再经反复硅胶柱层析 ,以环己烷-醋酸乙酯
(20:1※10:1)梯度洗脱 ,得化合物 I(80 mg)、I(1
g)、II(1.5 g)。石油醚 -丙酮(10:1)洗脱部分经凝
胶柱层析 ,以氯仿-甲醇(1:1)洗脱 ,收集薄层板上相
同斑点 ,再经反复重结晶 ,得化合物 IV(15g)、V(45
mg)。石油醚-丙酮(5:1)洗脱部分经反复硅胶柱层
析 ,以环己烷-醋酸乙酯(2:1)洗脱 ,得化合物 VI(2
g)、VI(35 mg)。
图 1 氯仿提取物对比分析薄层色谱图
1.生品 2.炮制品
3 结构鉴定
化合物 I 无色针状结晶。 Liebermann-Bur-
chard反应阳性 。与对照品 β -谷甾醇共薄层 , Rf值
相同 ,鉴定该化合物为 β -谷甾醇 。
化合物 I 无色油状物 , EI-MS显示相对分子
量为 256,分子式为 C16H32O2 ,与标准谱比较鉴定为
十六烷酸 。
化合物 II 无色油状固体 , Liebermann-Bur-
chard反应阳性。碳谱数据与胡萝卜苷数据非常相
似 ,但在高场处出现长碳链的吸收碳信号 ,推测可能
为 β -谷甾醇-3-O-(6′-正-n-酰氧基 -β -D-葡萄糖苷。
经与文献[ 2] 对照 , 结果一致。用 3 mol/LKOH-
MeOH水解 ,水解后的产物经 GC定性分析 ,与正十
六烷酸甲酯保留时间一致 。因此确定该化合物为
β-谷甾醇-3-O-(6′-正十六酰氧基)-β-D葡萄糖苷 。
化合物 IV 棕红色液体 , 10%硫酸显黑色。1H-
NMR谱中 δ9.54(1H, s)为醛基的质子信号 , δ7.24
(1H, d, J=3.5Hz), 6.52(1H, d, J=3.5 Hz)为 2个
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相互偶合的烯碳质子信号 ,由其偶合常数推测这两
个质子在同一个呋喃环上 。 δ4.70(2H, s)为亚甲基
的两质子信号。综上分析 ,推测该化合物为 5-羟甲
基糠醛 。其波谱数据与文献 [ 3]报道的 5-羟甲基糠
醛一致。故鉴定此化合物为 5-羟甲基糠醛。1H-
NMR(CDCl3 , 600 MHz)δ:7.24(1H, d, J=3.5 Hz,
H-3), 6.52(1H, d, J=3.5 Hz, H-4), 9.54(-CHO),
4.70(-CH2), 3.70(-OH)。
化合物 V 白色针状结晶(甲醇)。该化合物
与化合物 IV的1H-NMR谱非常相似。13C-NMR谱中
也只有高场区的羟甲基信号(δ64.6)与 5-羟甲基糠
醛的羟甲基(δ57.3)差别较大 ,其他碳信号基本相
近 。由此推测该化合物可能为 5-羟甲基糠醛的羟
甲基衍化物 。EI-MS给出分子离子峰 234,其分子质
量正好约为 5-羟甲基糠醛分子质量的 2倍 。波谱数
据与文献中报道的双 [ 5-甲酰基糠基 ]醚[ 3]数据对
照基本一致 , 鉴定其为双 [ 5-甲酰基糠基 ]醚 。
UVλEtOHmax 280, 227 nm;IRcm-1:3 111(ν=CH), 2 925,
2 850(ν=CH), 1 672(νC=O), 1 522(νC=
C)。1HNMR(CDCl3)δ:7.22(1H, d, J=3.6 Hz),
6.57(1H, d, J=3.6 Hz), 9.64(1H, s), 4.64(2H,
s)。13CNMRδ:152.8, 157.2, 111.8, 123.0, 177.7,
64.6。与文献[ 3]中双 [ 5-甲酰基糠基 ]醚的光谱数
据对照 ,基本一致 ,鉴定该化合物为双 [ 5-甲酰基糠
基 ]醚。
化合物 VI 无色粉末。 Liebermann-Burchard
反应阳性。 Molish反应阳性 。提示该化合物为甾体
苷类化合物。 mp288 ～ 290 ℃, 光谱数据与文献 [ 4]
对照基本一致 ,鉴定该化合物为胡萝卜苷 。
化合物 VII 无色结晶(甲醇)。三氯化铁显红
棕色 ,提示该化合物结构中含有酚羟基。 mp:117 ～
118 ℃。1H-NMR(DMSO, 600 MHz)δ:9.17(1H, s,
OH), 8.04(1H, s, H-2), 6.37(1H, d, J=5.4 Hz, H-
5), 8.07(1H, d, J=5.4 Hz, H-6)。13C-NMR(DMSO,
150MHz)δ:140.3(C-3), 146.8(C-2), 173.4(C-4),
114.4(C-5), 155.8(C-6)。数据与文献 [ 5]中报道的
3-羟基 -γ吡喃酮对照 ,基本一致 ,鉴定该化合物为 3-
羟基-γ-吡喃酮 。
4 炮制产生新化合物的验证试验
将分离到的 5-羟甲基糠醛和双 [ 5-甲酰基糠
基 ]醚 (香草醛硫酸溶液显黑色)与上述供试品溶
液 ,按 2.2项下薄层色谱条件 ,进行薄层色谱分析 ,
结果见图 2。由图 2可见 ,与生品对照 ,狗脊制品色
谱中增加的 2个黑色斑点的 Rf值分别 5-羟甲基糠
醛和双 [ 5-甲酰基糠基 ]醚一致。由此确定炮制后产
生的新成分为 5-羟甲基糠醛和双 [ 5-甲酰基糠基 ]
醚。样品 1为狗脊生品 ,样品 2为狗脊炮制品 ,样品
3为 5-羟甲基糠醛 ,样品 4为双 [ 5-甲酰基糠基 ]醚。
图 2 狗脊炮制品中新成分分析 TLC色谱
1.狗脊生品 2.狗脊炮制品 3.5-羟甲基糠醛 4.双 [ 5-甲酰基糠
基 ]醚
5 讨论
通过对狗脊的炮制品和生品的化学成分的薄层
色谱比较 ,发现 5-羟甲基糠醛和双 [ 5-甲酰基糠基 ]
醚为炮制过程中产生的新化合物 ,对该类成分的深
入研究有可能有助于解释炮制后药物的药性产生变
化的原因 ,也将为药物的炮制品的质量标准的制定
提供有力依据 。
另外研究发现 ,生品中含量较大的 β -谷甾醇 ,
胡萝卜苷等甾醇类化合物在炮制品中含量依然很
大 ,提示甾体类化合物在沙烫的炮制过程中没有发
生结构的变化 。
参考文献:
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