全 文 ：No.8.2007
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参考文献:
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大叶钩藤总生物碱提取溶剂的
研究及钩藤碱的纯度测定
李维锋1,姜建国1,王定勇2,陈 健1,李艳敏1
(1.华南理工大学轻工与食品学院,广州 510640;
2.广州药学院药科学院,广州 510006)
摘要:目的:筛选大叶钩藤总生物碱工业化提取的适宜溶剂,分离纯化得到钩藤碱并测定其纯度。方
法:用不同的溶剂提取大叶钩藤的总生物碱,柱层析分离得到钩藤碱晶体,用HPLC测定晶体的纯度。
结论:溶剂的选择直接影响总生物碱的提取量,氯仿是大叶钩藤总生物碱工业化提取的适宜溶剂,用
通过柱层析可以得到纯度高达为95.49%的钩藤碱晶体。
关键词:大叶钩藤;总生物碱;提取溶剂;钩藤碱
中图分类号:TS201 文献标识码:A 文章编号:1005-9989(2007)08-0156-03
收稿日期:2007-01-19
作者简介:李维锋(1982-),男,河南济源人,硕士研究生,研究方向为糖类物质及其药物的制备与生物利用。
StudyonthesolventsextractingthetotalalkaloidsfromUncaria
macrophylaWalandthepurityofRhynchophyline
LIWei-feng1,JIANGJian-guo1,WangDING-yong2,CHENJian1,LIYan-min1
(1.SchoolofLightIndustryandFoodScience,SouthChinaUniversityofTechnology,
Guangzhou510640;2.PharmacyColege,GuangdongPharmaceuticalUniversity,
Guangzhou510006)
Abstract:Objective:TooptimizetheoptimumsolventextractingthetotalalkaloidsfromUncariamacrophyla
WalinindustrialproductionanddeterminethepurityofRhynchophylineisolatedfromthetotalalkaloids.Me-
thods: ThetotalalkaloidsinUncariamacrophylaWalwereextractedbyusingdiferentsolvents. Rhyn-
chophylinewasseparatedfromthetotalalkaloidsbydrycolumnchromatographyandwasdeterminedthepu-
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工艺技术
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DOI:10.13684/j.cnki.spkj.2007.08.075
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ritybyHPLC.Results:Theamountsofthetotalalkaloidsextractedbydiferentsolventswerealsodistinctively
diferent.Thechloroformwastheoptimumsolvent.ThepurityofRhynchophylineseparatedfromthetotalalka-
loidswas95.49%.
Keywords:UncariamacrophylaWal;totalalkaloids;extractingsolvent;Rhynchophyline
大叶钩藤UncariamacrophylaWal.类属茜草科钩
藤属植物,为常用中药。自古用作清热平肝、息风
镇惊药,用于治疗头晕目眩、惊痫抽搐、全身麻木
等心脑血管和神经系统疾病,现已成为治疗高血压
方剂中常用药物[1]。现代药理研究表明,钩藤药理作
用的有效成分主要是生物碱,其中钩藤碱和异钩
藤碱等吲哚类生物碱为主要有效成分。钩藤碱占
总碱的28.9%,毒性低,副作用小,具有良好的药
用疗效[2]。由于钩藤碱的热稳定性较差,在81℃时即
有部分分解,其酯键受热易分解,并在极性条件下
易转化为异钩藤碱,转化率在60%以上[3]。因此,本
实验未采用酸水提取法,而采用了有机溶剂提取法,
对常用的有机溶剂乙酸乙酯、氯仿、乙醚、甲苯、
石油醚与乙酸乙酯混合溶剂(5:3)对钩藤总生物碱的提
取进行了实验研究,确定工业化提取的最佳溶剂,
并对总生物碱进行分离纯化,得到钩藤碱并鉴定其
纯度。
1 实验部分
1.1 仪器
设备电热套;调压器;水泵;S11-4-Ⅱ/电热恒
温水浴锅;X-6显微熔点测定仪:北京泰克仪器有限
公司;日本岛津LC-10AD高效液相色谱仪;4882型
三用紫外分析仪:上海顾村电光仪器厂;pHS-25型
酸度计:上海伟业仪器厂;RE-52S旋转蒸发仪:巩
义市英予华仪器厂;各种型号的玻璃仪器。
1.2 试剂
乙醚、氯仿、甲苯、石油醚、乙酸乙酯:AR;
浓硫酸、氨水:CP;蒸馏水;Mayer试剂;重铬酸
钾-浓硫酸试剂;显色剂:改良碘化铋钾(Dragendrof)
试剂;标准品:钩藤碱。
1.3 药材
2006年4月采自广东省云浮市,经广东药学院中
药学院曾常青副教授鉴定为钩藤。
1.4 钩藤总生物碱的提取
1.4.1 钩藤中总生物碱的提取 称5份药材粗粉(14
目)各500g,分别置于5个5000mL圆底烧瓶中,各加入
氨水-水(1∶9)溶液使药材湿润并放置30min,再分别
以乙酸乙酯、氯仿、乙醚、甲苯和石油醚与乙酸乙
脂(5∶3)混合溶剂,用电热套加热,回流提取5次(第1次
所用溶剂量为2500mL,以后每次用2000mL),每次加
热回流5h,温度调节为溶剂微沸。将每次提取液过
滤,合并滤液,减压浓缩至1000mL,置于分液漏斗
中,用硫酸(50%硫酸∶水=1∶300)溶液200mL萃取,共5
次。合并酸水液,过滤,滤液用氨水碱化至pH9~10,
再用原相应于提取溶剂的溶剂萃取5次,每次用溶剂
200mL。合并萃取液,过滤,减压回收溶剂至干,于
600℃烤箱中烘烤至质量恒定,称质量。
1.4.2 薄层层析法分离、鉴定生物碱[4] 将硅胶GF254
薄层板在105℃活化30min,分别取乙酸乙酯、氯仿和
乙醚提取的总生物碱及少量钩藤碱标准品,以氯仿
溶解,点于活化的硅胶板上,以石油醚∶乙酸乙酯=5∶
3为展开剂,置于紫外灯下检识。
1.5 钩藤中钩藤碱的分离及其性质鉴定
称取药材粗粉500g,先用pH9~10氨水润湿,
30min后,用2500mL氯仿回流提取5次,每次5h。提
取液浓缩到原来体积一半,再用硫酸(50%硫酸∶水=1∶300)
萃取,萃取至氯仿层溶液的碘化铋钾反应呈阴性。
然后用浓氨水将酸萃取液的pH值调至9~10,即有大
量白色沉淀析出,再用氯仿萃取水层至水层对碘化
铋钾反应呈阴性。滤集沉淀并在40℃下真空干燥,得
到钩藤总生物碱。将总生物碱干法上硅胶柱,石油
醚/乙酸乙酯梯度洗脱,收集钩藤碱部分洗脱液,经
石油醚/乙酸乙酯重结晶可得到针状的钩藤碱晶体。
取少量钩藤碱晶体观察其性状、颜色、水溶性,
使钩藤碱的氯仿溶液分别与Dragendrof试剂、Mayer
试剂和重铬酸钾-浓硫酸试剂反应,观察现象。
1.6 样品纯度测定
用HPLC方法鉴定得到的晶体(钩藤碱)的纯度。色
谱条件为色谱柱:pH稳定性1.5-10的PhenomexneC18
柱(5μm, 250mm×4.6mm);流动相:甲醇-0.04mol/L三
乙胺(HAC调节pH至10)=(70∶30);流速0.8mL/min;检
测波长254nm;柱温室温;运行时间40min;进样量
10μL。
2 结果
2.1 钩藤总生物碱不同提取溶剂的结果
采取不同的溶剂对钩藤中的总生物碱进行提取,
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图1各有机溶剂提取钩藤总生物碱的硅胶G薄层色谱图
表1不同溶剂提取钩藤总生物碱的结果
溶剂
名称
乙酸
乙酯
氯仿 乙醚 甲苯
石油醚与乙酸乙酯
(5∶3)混合溶剂
总生物
碱量(g) 1.51 2.05 2.11 0 1.86
占百分
比(%) 0.32 0.41 0.422 0 0.372
A
O
B
C
D
注:A:乙酸乙酯提取的总生物碱;B:氯仿提取的总生物碱;C:乙
醚提取的总生物碱;D:石油醚与乙酸乙酯(5∶3)混合溶剂提取的总生物碱;
O:钩藤碱的标准品。
结果见表1。根据文献报道,钩藤中总生物碱的提取
量基本在0.4%,本实验结果表明,在5种有机溶剂中
氯仿与乙醚的提取效果最好,是提取钩藤总生物碱
的适宜溶剂。
2.2 钩藤总生物碱的鉴定及成分分析
取4种不同溶剂提取物作薄层色谱,在紫外灯下
检识,各提取物在与钩藤碱标准品相同位置上有紫
红色斑点 (见图1)。由图1可知,用薄层层析法分离
氯仿提取的总生物碱,共可分离出4种成分。据相关
文献[5]可知,钩藤总生物碱中包含有4种生物碱,
即:钩藤碱、异钩藤碱、柯诺辛、柯诺辛B。而钩藤
碱的一般性质,见表2。
2.3 钩藤碱的HPLC的检测结果
本次实验所得产品为无色针晶和无色柱晶,针
晶的熔点为208~209℃,柱晶的熔点为204~205℃。高
效液相色谱检测保留时间为23.445min,纯度为
95.49%,见图2。
3 讨论
3.1生物碱盐类易溶于水,因此曾用盐酸提取,但生
物碱无法提出。因为游离生物碱易溶于有机溶剂,
于是采用先将药材用氨水润湿后再用氯仿提取的方
法,使生物碱先游离出来,这样就提高了总生物碱
提取率。在研究该工艺的实验中,我们也曾用甲苯
作为提取溶剂,但因其沸点太高,浓缩困难,因此也
不被采用;试过用石油醚与乙酸乙酯的混合溶剂提
取,但钩藤碱会被破坏。另外,虽然乙醚提取率也不
错,但是考虑到乙醚沸点低,挥发性强,易燃易爆,
不安全,最终也没被采用。而氯仿提取钩藤碱效率
好,且价格适中,适合作为工业化提取的溶剂。
3.2 钩藤碱难溶于石油醚,而在乙酸乙酯中却有较
好溶解度,因此在精制方面我们选用一个合适体积
比的石油醚与乙酸乙酯混合溶液进行重结晶,最终
获得较好晶体,且纯度高。由于钩藤碱对热不稳定,
而且在极性溶剂中又容易转化成异钩藤碱,因此实
验过程中应注意将温度控制在81℃以下;另外,根据
经验,酸碱处理时的速度越快,提取的效果越好,为
进一步的研究提供参考。
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表2钩藤碱的一般性质
成分 状态 颜色 Drahen-
drof试剂
Mayer
试剂
重铬酸钾-浓
硫酸试剂
钩藤碱
针状
晶体
无色
橙黄色
沉淀
白色
沉淀
橙色转为黄
绿色
图2 柱层析分离所得钩藤碱的HPLC图
20.0015.0010.005.00 30.0025.00
0.15
0.10
0.05
0.00
A
U
时间(min)
经过一年的酝酿与讨论,近日欧盟出台新的葡萄酒生
产法规。新法规禁止在葡萄酒生产中加糖以提高酒的度数,
也仍然禁止进口未发酵葡萄汁酿制的葡萄酒。对于葡萄酒
的分级,简化为普通餐酒类与地理标识保护类。此外,在
包装上要标明葡萄的种类与采摘年份。欧盟农业委员伯尔
称,该法规的出台,旨在提高欧盟葡萄酒生产行业在国际
市场上的竞争力,同时调节欧盟内部市场的供求平衡。
(王江波)
欧盟新法规简化葡萄酒分级
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