全 文 ： ml- 1范围内线性关系良好。
2. 5 精密度试验　取同一供试品溶液 20μl , 连续进样 6 次 ,
峰面积平均值为 292359. 5 , RSD =0. 48%。
2. 6 回收率实验　分别按处方比例的 80%、100%、120%(并
以一定放大比例)精密称取利鲁唑对照品适量 ,与相应的片剂
辅料混合均匀;再分别精密称取 80%混合粉适量(约相当于
利鲁唑 16mg)三份 ,分别置 100ml量瓶中 ,加流动相溶解并稀
释至刻度 ,摇匀 ,滤过 ,精密量取续滤液 5ml , 置 100ml量瓶中 ,
加流动相稀释至刻度 , 摇匀 ,作为供试品溶液;同法精密称取
100%混合粉(约相当于利鲁唑 20mg)和 120%混合粉(约相当
于利鲁唑 24mg)各三份 , 分别置 100ml量瓶中 ,加流动相溶解
并稀释至刻度 ,摇匀 ,滤过 , 精密量取续滤液 5ml , 置 100ml量
瓶中 , 加流动相稀释至刻度, 摇匀 , 作为供试品溶液。按含量
测定项下方法依法测定 ,计算回收率 , 结果见表 1。
2. 7 稳定性实验　取同一供试品溶液 , 在 0、2 、4、6 、8h 分别
进样 20μl , 平均峰面积为 291380. 3 , RSD 为 0. 62%。 可见
供试品溶液在 8h 内稳定。
2. 8 方法重复性试验　精密称取同一批号的样品6 份,照含量测
定方法 ,同法操作 ,峰面积平均值为293063. 5, RSD =0. 76%。
2. 9 样品的测定　取利鲁唑片三批 , 按上述方法制备供试品
溶液和对照品溶液 , 照上述色谱条件 ,精密量取各溶液 20μl ,
注入液相色谱仪 , 记录色谱图 ,按外标法计算 , 三批样品结果
分别为 99. 8%、99. 3%、99. 6%。
表 1 利鲁唑回收率
加入量(mg) 测得量(mg) 回收率(%) 平均回收率(%) RSD (%)
16. 2 16. 1 99. 4
16. 1 15. 9 98. 8
16. 3 16. 2 99. 4
20. 0 19. 9 99. 5
20. 2 20. 0 99. 0 99. 5 0. 71
19. 8 19. 9 100. 5
24. 5 24. 3 99. 2
24. 2 23. 9 98. 8
24. 1 24. 3 100. 8
3　讨论
利鲁唑在 254nm 波长处有最大吸收 , 且在 254nm 波长
下辅料对含量测定无干扰 , 故选择 254nm 为检测波长。
参考文献
[ 1] 温预关 ,莫玉泉 ,马崔. 反相高效液相色谱法测定人血浆中利鲁
唑浓度. 中国药房 ,2005 , 16(3):203～ 204.
白花丹参中脂溶性成分提取工艺的优选及HPLC法含量测定
刘洪军 ,万建建 ,艾燕
(禹城市第一人民医院　禹城　251200)
摘要:目的　优选白花丹参中脂溶性成分的最佳提取工艺。方法　实验中采用超声提取技术对白花丹参根进行处理 , 以
正交实验法来考察不同因素对超声提取液中脂溶性成分含量的影响并以高效液相色谱法进行的含量测定为考察指标优选出
白花丹参中脂溶性成分的最佳提取工艺。结果　白花丹参中脂溶性成分最佳提取工艺为:A 1B2C3D1即 10 倍量 75%的无水
乙醇浸泡 6h ,超声 30min ,抽滤 ,超声 1次。丹参酮Ⅱ A 在7. 5 ～ 50μg ml- 1范围内线性关系良好。结论　超声技术操作简便
快速 ,试验重复性好 , 结果满意 ,在丹参酮的提取中可适当推广使用。
关键词:白花丹参　正交实验　超声提取　高效液相色谱法
中图分类号:R927. 2　文献标识码:A　文章编号:1672 -7738(2006)07 - 0405 - 03
Optimizing extraction technique of l iposoluble constituent in Baihua Danshen
and determining it by HPLC method
LIU Hong-jun ,WAN Jian-jian ,AI Yan
(First People′s Hospital of Yucheng , Yuncheng , 251200)
ABSTRACT:OBJECTIVE　Optimizing extr action craft of lipo so luble constituent in Baihua Danshen. METHODS　Ultra-
sonic ex tractive technique w as used to trea t the ma te rial. Orthogonal te st w as also used to resea rch the affec t factor s of the li-
po so luble componens in Baihua Danshen. The ex traction yields o f Tanshinone ⅡA w ere determined by HPLC. RESULTS　The
best e xtr acting technique was A1B2C3D1 , 10 times of 75% ethyl alcohol soaked fo r 6 hour s , supe rsonic 30 minute s , sucking fil-
tration and then super sonic one time. CONCLUSION　Supe rsonic technical opera tion w as simple , fast and had good reproduc-
ibility , result w as satisfied. May promote the use suitably for salvia miltior rhiza′s e xtr action.
KEY WORDS:Baihua Danshen;o rthogonal te st;ultr asonic e xtr action;HPLC
　　白花丹参(Salvia mnltionrrhizaf. alba)为丹参的白花变型 , 为多年生草本植物 ,是主产于泰山及其周边地区的道地药材,
405 齐鲁药事 Qilu Pharmaceutical Af f airs 2006 Vol. 25 , No.7
白花丹参除具有丹参的生物活性和用途外, 对治疗血栓性脉
管炎具有独特的疗效。丹参酮是中药丹参的脂溶性成分 ,但
目前其分离量小 , 市场难以得到 ,给进一步研究其生物活性及
其药理作用等带来困难。近年来, 在中药提取方面出现了许
多新技术 、新方法[ 1] 。本试验优选丹参酮的提取工艺 ,对丹参
酮的深入研究及中草药的开发利用具有一定的实用意义。另
外本实验中采用超声技术[ 2]对白花丹参根进行处理用正交实
验法对各影响因素进行了合理有效的安排, 最大限度的减少
了实验误差 ,使之达到高效 、快速 、经济的目的。
1　实验仪器与试剂
1. 1 仪器　Waters高效液相色谱仪;电子分析天平(上海恒平
科学有限公司);KQ -600DB超声清洗器(昆仑山超声仪器有限
公司);恒温水浴锅(北京市医疗设备厂);自动平衡离心机(上海
安亭科学仪器厂);Waters2996 型二极管阵列检测器。
1. 2 试剂与药品
1. 2. 1 实验中各药材来源:白花丹参根 1(种植),白花丹参根2(秋
季采集),紫花丹参根(种植),野紫花丹参根于 2005年采集。
1. 2. 2 标准品:丹参酮ⅡA , 批号:110766 - 200314(中国药品
生物制品检定所)。
1. 2. 3 试剂:色谱醇甲醇(天津永大化学试剂开发中心);无
水乙醇(天津市德恩化学试剂有限公司);乙腈(天津市四通
化工厂);重蒸水(自制)。
2　实验方法
2. 1 色谱条件　美国Water s Symmtry shield RP18( 5μm , 3. 9
×150mm)色谱柱。 流速为 0. 8 ml min - 1 , 检测波长为
270nm。柱温:室温。流动相:总丹参酮的提取中试用甲醇
- 水为 100∶0 、90∶10 、80∶20 、70∶30;丹参酮ⅡA 的提取
中则选用了甲醇 -水为 90∶10、80∶20、75∶25 , 以及乙腈
- 水为 75∶25 四个不同的流动相系统 ,
2. 2 溶液的配制
2. 2. 1 储备液的配制:精密称取丹参酮及丹参酮ⅡA 对照品
各 2. 5mg 分别置于小烧杯中 , 用甲醇溶解后转移至 50 ml棕
色容量瓶中 ,加甲醇稀释至刻度 , 其浓度均为 50μg ml - 1做
为储备液 ,备用。
2. 2. 2 样品的处理:取白花丹参根进行粉碎过 200 目筛 , 准
确称取 5g ,各 9份 , 放入棕色碘量瓶中 , 10 倍量药材重量的
溶剂浸泡 ,超声振荡提取 , 抽滤 , 收集滤液 , 取少量放入离心
试管中 ,然后置于 3000r min- 1的离心机中离心 20min , 取
上清液得样品溶液 ,备用。
2. 3 标准曲线的建立
2. 3. 1 总丹参酮标准曲线的建立:精密吸取上述 50μg ml- 1
储备液用甲醇依次稀释成浓度为 6. 25 , 12. 5 , 18. 75 , 25 ,
31. 25μg ml - 1的溶液 ,精密吸取 20μl各进样三次测定峰面
积 A ,以 C(μg ml - 1)浓度为横坐标 , A 峰面积为纵坐标建
立标准曲线。
2. 3. 2 丹参酮ⅡA 标准曲线的建立:在流动相乙腈 - 水=75
∶25 条件下分别精密吸取上述 50μg ml- 1储备液依次稀释
成浓度为 7. 5、12. 5 、25 、37. 5、50μg ml- 1的溶液 , 精密吸取
15μl各进样三次测定峰面积 A , 以 C(μg ml- 1)浓度为横坐
标 , A 峰面积为纵坐标建立标准曲线。
3　实验结果
3. 1 色谱行为　总丹参酮在甲醇 -水=90∶10条件下峰形较
好 ,保留时间适中 ,见图 1 。丹参酮ⅡA 在乙腈 -水=75∶25条
件下峰对称性较好,能与总丹参酮的峰较好地分离,见图 2。
图 1　甲醇 -水=90∶10条件下丹参酮色谱
图 2　乙腈 -水=75∶25条件下丹参酮ⅡA 色谱图
3. 2 标准曲线与线性范围　总丹参酮线性方程为 A =5. 88
×106 C - 1. 99 ×105 , r =0. 9994 , 结果表明总丹参酮在
6. 25 ～ 50μg m l- 1范围内线性关系良好。
丹参酮ⅡA 线性方程为 A =7. 8×104 C - 5. 41×104 ,
r =0. 99942 , 结果表明丹参酮ⅡA 在 7. 5 ～ 50μg ml- 1范围
内线性关系良好。
3. 3 灵敏度考察　以基线噪音 3 倍计算本实验中丹参酮 ⅡA
的最低检出量为 5ng。
3. 4 正交实验的设计　根据文献可知白花丹参中脂溶性成
分是以总丹参酮 , 丹参酮Ⅱ A 为代表的酮及醌类成分 , 结合
其理化性质确定乙醇浓度(A), 浸泡时间(B),超声时间(C),
超声次数(D)四个因素 ,每个因素三个水平 , 选用 L9(34)正
交实验表。设计因素水平如表 1:
表 1 L9(34)正交工艺设计因素水平表
A浸泡时间(h) B乙醇浓度(%) C超声时间(h) D超声次数
1 6 90 10 1
2 15 75 20 2
3 24 65 30 3
3. 5 正交实验结果及验证　正交实验结果详见表 2 , 3。
表 2 总丹参酮 L9(34)实验方案及结果
A B C D 丹参酮(%)
1 1 1 1 1 0. 75
2 1 2 2 2 0. 60
3 1 3 3 3 0. 77
4 2 1 2 3 0. 78
5 2 2 3 1 0. 87
6 2 3 1 2 0. 54
7 3 1 3 2 0. 82
8 3 2 1 3 0. 85
9 3 3 2 1 0. 70
K 1 2. 12 2. 34 2. 14 2. 32
K 2 2. 19 2. 33 1. 93 1. 99
K 3 2. 37 2. 01 2. 56 2. 38
k1 0. 71 0. 78 0. 701 0. 773
k2 0. 73 0. 784 0. 643 0. 763
k3 0. 79 0. 67 0. 84 0. 793
R 0. 08 0. 114 0. 197 0. 03
406 齐鲁药事 Qilu Pharmaceuti cal Af f airs 2006 Vol.25 , No. 7
　　表 3 丹参酮ⅡA L9(34)实验方案及结果
A B C D
丹参酮ⅡA(%)
1 1 1 1 1 0. 357
2 1 2 2 2 0. 379
3 1 3 3 3 0. 296
4 2 1 2 3 0. 342
5 2 2 3 1 0. 38
6 2 3 1 2 0. 230
7 3 1 3 2 0. 317
8 3 2 2 3 0. 249
9 3 3 1 1 0. 349
K 1 1. 032 1. 016 0. 936 0. 986
K 2 0. 952 1. 008 1. 070 0. 926
K 3 0. 915 0. 875 0. 993 0. 987
k1 0. 344 0. 339 0. 312 0. 328
k2 0. 317 0. 336 0. 390 0. 309
k3 0. 305 0. 292 0. 331 0. 329
R 0. 039 0. 047 0. 078 0. 02
　　对表 2 结果进行直观分析 , 由极差 R 对丹参酮含量的
影响次序为:C>B>A>D , 对丹参酮Ⅱ A 的影响次序为:C
>B>A>D ,可知超声时间对丹参酮及丹参酮ⅡA 的影响最
显著 ,而浸泡时间 , 超声次数对含量的影响很小 ,为节省时间
选用浸泡 6h , 而乙醇浓度为 90%、75%时对含量的影响差别
不大 ,从节约溶剂方面考虑选用 75%的乙醇为溶剂。 因此
丹参酮的最佳提取工艺为 A 1B2C3D1 , 即 10 倍量 75%的乙
醇浸泡 6h , 超声 30min ,抽滤 , 超声 1 次。方差分析见表 4。
表 4 L9(34)工艺正交实验结果方差分析
方差来源 方差平方和 自由度 方差 F值
A 0. 3028 3 0. 1010 1. 0049
B 0. 3049 3 0. 1016 1. 0109
C 0. 3693 3 0. 1231 1. 2249
D 0. 3016 3 0. 1005 1. 0000
　　结果由上表数据可知 , 各因素对总丹参酮及丹参酮 ⅡA
的含量的影响大小为:C>D>B>A , 其中超声时间 C 对含
量有显著的影响 , 而 A 、B、D 对含量的影响相对较小。由此
得出白花丹参中丹参酮提取的最佳工艺为:A1B2C3D1即 10
倍量 75%的乙醇浸泡 6h ,超声 30min ,抽滤 , 超声 1 次。
4　讨论
丹参是中医用于治疗心血管疾病的常用药材 ,具有活血
化淤之功效 , 总丹参酮具有良好的抗菌活性 , 尤其对耐药性
金葡菌的抑制作用已引起人们的高度重视[ 3] 。 丹参酮Ⅱ A
是其主要活性成分 , 据报道[ 4]常用的醇提法 , 在其蒸发 、浓
缩 、干燥过程中 , 由于发生化学变化 , 丹参酮Ⅱ A 损失可达
40%以上 ,而超声提取法生产周期短 ,实验过程无须加热 , 因
此 , 避免了丹参酮ⅡA 的降解反应 , 故能保留较多的丹参酮
ⅡA 。由表 2 、3 可知四个因素中超声时间对总丹参酮及丹
参酮ⅡA 的含量有显著的影响 ,而因素 A、B 、D 的影响则相
对较小 , 由此得出丹参酮超声提取的最佳工艺为:A1B2C3D1
即 10倍量 75%的乙醇浸泡 6h , 超声 30min ,抽滤 , 超声1 次。
本实验中仅以化学指标成分为考察指标 , 还需进行药效学实
验来考察和验证。另外数据显示丹参中丹参酮类化学成分
和含量因生长地区 、采集时间以及用药部位的不同有较大的
差异 , 所以对于不同产地的丹参 , 丹参的不同部位在用药时
均应区别对待处理。
参考文献
[ 1] 安建忠 ,许志慧. 新技术新方法在中草药提取方面的应用. 时珍
国医国药 , 2001 , 12(5):595～ 597.
[ 2] 李化 ,吴天骄. 超声技术在中草药成分提取中的应用 ,时珍国医
国药 , 2001 , 12(6):563～ 564.
[ 3] 高玉桂. 丹参酮的药理. 药学学报 , 1979 , 14(2):75.
[ 4] 苏子仁 ,刘中秋 ,同华 ,等. 丹参酮醇提液在浓缩干燥工艺过程中
的化学成分变化研究(Ⅰ)-丹参酮ⅡA 湿热降解机理探讨. 中
成药研究 , 1997 , 19(11):5～ 7.
　 国外药讯
新型 PTP - 1B抑制剂有望治疗 II型糖尿病
　　2006 年5 月25 日 ,CEP TYR 公司宣布他们已
经筛选出了一个小分子化合物 CPT633 来进行治
疗 I I 型糖尿病的临床研究 ,CP T633 是一种有效的
PTP - 1B(蛋白酪氨酸磷酸酶- 1B ,一种胰岛素信
号的负性调节因子 ,与肥胖症和 I I 型糖尿病的发病
及发展关系密切)酶抑制剂 。临床前研究发现 ,
CPT633 可以显著地改善啮齿动物的胰岛素活性 ,
降低血糖和改善血浆胰岛素和瘦素的水平 ,
CPT633 还可以使受试小鼠的肥胖症减轻 ,且不产
生低血糖等不良反应 , CEP TYR 公司计划在2007
进行 I 期临床试验 ,并在第二季度提交该药的新药
申请。
CPT633 影响 的蛋 白 酪氨 酸 磷酸 酶 1 B
(PTP1B)是一种胰岛素信号的负性调节因子 ,与肥
胖症和 I I 型糖尿病的发病及发展关系密切。
P TP1B 可通过引起胰岛素抵抗 、瘦素抵抗及影响
脂代谢等而导致肥胖症和 Ⅱ型糖尿病的发生。对
P TP1B 基因敲除小鼠的研究表明 ,缺失 P TP1B 小
鼠的胰岛素敏感性明显增加 ,并对肥胖有一定的抵
抗作用 。
407 齐鲁药事 Qilu Pharmaceutical Af f airs 2006 Vol. 25 , No.7