全 文 ：收稿日期:2012-04-16; 修订日期:2012-09-30
基金项目:广西壮族自治区食品药品监督管理局面上项目
( No． mzy2010005) ;
广西壮族自治区自然科学基金创新研究团队项目
( No． 2011GXNSFF018006) ;
广西壮族自治区科学研究与技术开发计划项目( No． 10100027 －1)
作者简介:马雯芳( 1983-) ，女( 汉族) ，广西南宁人，现任广西中医药大学
讲师，硕士学位，主要从事中药鉴定及质量控制研究工作．
* 通讯作者简介:蔡 毅( 1962-) ，男( 汉族) ，广西南宁人，现任广西中医
药大学教授，学士学位，主要从事中药及民族药品种鉴定与开发工作．
紫外-可见分光光度法测定肾蕨中
多糖含量的实验性研究
马雯芳1，2，邓慧连1，蔡 毅1* ，黎 理1，梁 雁1
(1．广西中医药大学，广西 南宁 530001; 2．成都中医药大学，四川 成都 610075)
摘要:目的 建立用紫外 －可见分光光度法测定肾蕨多糖含量的方法。方法 采用苯酚 －硫酸法显色反应体系，对显色剂
的浓度与用量进行考察，测定肾蕨中多糖的含量。结果 以 D －无水葡萄糖为对照品，测定波长为 489 nm，在 1． 9 ～ 22． 8
μg·ml －1范围内线性关系良好( r = 0． 999 0) ，平均回收率为 102． 29% ( RSD = 1． 29%，n = 6) 。结论 该方法简便、快捷、准
确，可作为肾蕨多糖含量测定的方法。
关键词:肾蕨多糖; 含量测定; 显色方法; 优化
DOI标识:doi: 10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2012． 11． 021
中图分类号:R284． 2 文献标识码:A 文章编号:1008-0805( 2012) 11-2714-02
The Content Determination of Polysaccharide in Nephrolepis auriculata ( Linn． ) Trimen by UV
MA Wen-fang1，2，DENG Hui-lian1，CAI Yi1* ，LI Li1，LIANG Yan1
( 1． Guangxi University of Chinese Medicine，Guangxi 530001，China; 2． Chengdu University of Traditional Chi-
nese Medicine，Chengdu 610075，China)
Abstract: Objective To establish a quantitative method for the determination of polysaccharide in Nephrolepis auriculata
( Linn． ) Trimen by UV － VIS spectrophotometry．Methods The effects of species，concentration，and dosage of chromogenic rea-
gent were studied by the phenol － sulphuric acid method to determine the content of polysaccharide in Nephrolepis auriculata
( Linn． ) Trimen． Results Using rutin as comparison sample，the detection wavelength was set at 489nm． There was good linear re-
lationship within 1． 9 ～ 22． 8μg·ml －1 ( r = 0． 9990) ． The average recovery rate was 102． 29% ( RSD = 1． 29%，n = 6) ． Conclu-
sion The method is simple，rapid，accurate and can be used for the quantitative method of Nephrolepis auriculata ( Linn． ) Trimen．
Key words: Nephrolepis auriculata ( Linn． ) Trimen; Polysaccharide; Quantitative method; Colour reaction system; Optimize
肾蕨又称马骝卵、石黄皮、圆羊齿等，为真蕨目骨碎补科肾蕨
Nephrolepis auriculata (Linn．)Trimen．的地下块茎，是一味极具民
族特色的壮药［1］，味甜、淡、凉，具有清热毒、除湿毒、通气道、水
道的功效。民间常用于治疗感冒发热，咳嗽，肺结核咯血，痢疾，
急性肠炎等症状［2］。目前已有相关的定性研究和常规检查报
道［3］，并收载于《广西壮族自治区壮药质量标准》(第 2 卷)［4］。
本文采用紫外 －可见分光光度法测定其中多糖的含量，为进一步
完善其质量标准提供依据。
1 仪器与材料
1． 1 仪器 Agilent UV － 8453 紫外 －可见分光光度计(美国安捷
伦) ;BP211D电子天平分析天平(德国赛多利斯) ;SB25 － 120 超
声波清洗机(宁波新芝生物科技股份有限公司)。
1． 2 药材 肾蕨采自广西，经广西中医药大学蔡毅教授鉴别为真蕨
目骨碎补科肾蕨 Nephrolepis auriculata (Linn．)Trimen．的地下块茎。
1． 3 试药 D －无水葡萄糖对照品(含量测定用 批号:110833 －
200904 中国食品药品检定研究院) ;其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2． 1 对照品溶液的制备 取 D －无水葡萄糖对照品适量，精密称
定，加水制成每毫升含 0． 15 mg的溶液，即得。
2． 2 供试品溶液的制备 取本品粉末约 1 g，精密称定，置具塞锥
形瓶中，精密加入蒸馏水 25 ml，称定重量，超声处理 75 min，放
冷，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取滤液
10 ml，加入 2 倍量乙醇，放置过夜，离心 10 min(3 000 r /min) ，沉
淀置 25 ml量瓶中，并用水定容至刻度，即得。
2． 3 显色条件的优化
2． 3． 1 硫酸用量考察 精密量取 D －无水葡萄糖对照品溶液和
供试品溶液各 1 ml，置 10 ml刻度试管中，按照“2． 5”项下“标准
曲线的制备”方法，分别加入 3，5，7，9 ml 浓硫酸，水浴加热 15
min，再置冰水浴中 15 min，以相应试剂为空白，在 200 ～ 800 nm
波长处测定吸光度。结果 5 ml 浓硫酸条件下，对照品溶液和供
试品溶液最大吸收波长一致，且显色灵敏、稳定，故选择浓硫酸用
量为 5ml。结果见图 1。
2． 3． 2 保温温度考察 精密量取 D －无水葡萄糖对照品溶液和供
试品溶液各 1 ml，置 10 ml刻度试管中，按照“2． 5”项下“标准曲线
的制备”方法，分别于室温、45℃、65℃、85℃、沸水浴加热 15 min，
再于冰水浴中放置 15 min，以相应试剂为空白，在 200 ～800 nm波
长处测定吸光度。结果 45℃ 条件下，对照品溶液和供试品溶液最
大吸收波长一致，且显色灵敏、稳定，故选择保温温度为 45℃。结
果见图 1。
2． 3． 3 保温时间考察 精密量取 D －无水葡萄糖对照品溶液和
供试品溶液各 1 ml，置 10 ml刻度试管中，按照“2． 5”项下“标准
曲线的制备”方法，分别于 45℃加热 10，15，20，25，30 min，再置冰
水浴中放置 15 min，以相应试剂为空白，在 200 ～ 800 nm 波长处
测定吸光度。结果 45℃保温 10 min 条件下，对照品溶液和供试
品溶液最大吸收波长一致，且显色灵敏、稳定，故选择保温时间为
10 min。结果见图 1。
2． 3． 4 冰水浴时间考察 精密量取葡萄糖对照品溶液和供试品
溶液各 1 ml，置 10 ml刻度试管中，按照“2． 5”项下“标准曲线的
制备”方法，分别于冰水浴中放置 5，10，15，20，25 min，以相应试
剂为空白，在 200 ～ 800 nm 波长处测定吸光度。结果冰水浴时
间为 5 分钟条件下，对照品溶液和供试品溶液最大吸收波长一
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时珍国医国药 2012年第 23 卷第 11 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2012 VOL． 23 NO． 11
致，且显色灵敏、稳定，故选择冰水浴时间为 5 min。结果见图 1。
2． 3． 5 显色条件的确定 通过实验考察发现，待测液以加蒸馏水
至 2 ml，加 5%苯酚 1 ml，加浓硫酸 5 ml，45℃水浴加热 10 min，再
置冰水浴中放置 5 min，显色灵敏、稳定，效果较佳。
a －硫酸用量考察 b －保温温度考察
c －保温时间考察 d －冰水浴时间考察
图 1 显色条件的优化结果
2． 4 测定波长的选择 精密量取 D －无水葡萄糖对照品溶液和
供试品溶液各 1 ml，置 10 ml刻度试管中，按照“2． 3． 5”项下的方
法，在 200 ～ 800 nm波长范围内进行扫描。对照品溶液和供试品
溶液吸收光谱图基本一致，最大波长吸收均在 489 nm，故选定检
测波长为 489 nm。D －无水葡萄糖对照品溶液及肾蕨供试品溶
液光谱图见图 2。
A － D －无水葡萄糖对照品溶液光谱图 B －肾蕨供试品溶液光谱图
图 2 吸收光谱图
2． 5 标准曲线的制备 精密量取 D －无水葡萄糖对照品溶液
0． 1，0． 2，0． 4，0． 6，0． 8，1． 0，1． 2 ml，分别置 10 ml刻度试管中，加
蒸馏水至 2 ml，加 5%苯酚 1 ml，加浓硫酸 5 ml，45℃水浴加热 10
min，再置冰水浴中放置 5 min，摇匀，以相应溶剂为空白，于 489
nm 波长处测定，记录吸光度。以吸光度为纵坐标，浓度为横坐
标，绘制标准曲线。计算得回归方程为:Y = 49． 471X － 0． 046 6，
r = 0． 999 0。结果表明 D －无水葡萄糖在 1． 9 ～ 22． 8 μg·ml －1范
围内呈良好线性关系。
2． 6 精密度实验 精密量取对照品溶液 0． 4 ml，按“2． 5”项下
“标准曲线的制备”方法自“置 10 ml 刻度试管中”起，依法测定
吸光度，重复测定 6 次，记录吸光度值，RSD为 0． 43%。
2． 7 稳定性实验 取同一供试品溶液，照“2． 5”项下“标准曲线
的制备”方法，自“置 10 ml刻度试管中”起，依法测定吸光度，每
隔 10 min测定一次，记录 120 min 内供试品溶液的吸光度值，结
果供试品溶液在 90 min内保持稳定，RSD为 2． 10%(n = 9)。
2． 8 重复性实验 取同一批样品粉末 6 份，各 1 g，精密称定，照
2． 5 项下“标准曲线的制备”方法制备供试品溶液，照“2． 2”项下
的方法，自“置 10 ml刻度试管中”起，依法测定，记录吸光度值，
并计算含量。结果表明该方法重复性良好，RSD为 2． 73%。
2． 9 加样回收率实验 取同一批已知含量的样品粉末(含 D －无
水葡萄糖 5． 81%)6 份，各 1 g，精密称定，照“2． 2”项下的方法制
备供试品溶液，精密移取供试品溶液 0． 25ml，分别精密加入 D －
无水葡萄糖对照品 0． 045 mg，照“2． 5”项下“标准曲线的制备”方
法，自“置 10 ml刻度试管中”起，依法测定，记录吸光度值，结果
平均回收率为 102． 29%，RSD为 1． 29%。实验结果见表 1。
表 1 加样回收率实验结果
试验号
原有量
m /mg
加入量
m /mg
测得量
m /mg
回收率
(%)
平均回收率
(%)
RSD
(%)
1 0． 0465 0． 045 0． 0917 100． 39
2 0． 0465 0． 045 0． 0923 101． 92
3 0． 0465 0． 045 0． 0925 102． 31 102． 29 1． 29
4 0． 0465 0． 045 0． 0922 101． 65
5 0． 0465 0． 045 0． 0933 104． 10
6 0． 0465 0． 045 0． 0930 103． 39
2． 10 样品测定 取不同产地，不同采收时间的肾蕨药材 13 批，
按“2． 2”项下方法制成供试品溶液。精密移取供试品溶液 0． 5
ml，照“2． 5”项下“标准曲线的制备”方法，自“置 10 ml刻度试管
中”起依法测定吸光度，对广西不同产地及不同采收时间采集的
14 批肾蕨药材中的多糖含量进行测定。结果见表 2。
表 2 肾蕨中多糖含量测定结果
编号 批次 采集时间 平均含量(%)RSD(%)
1 柳州市融安县 2010-04 1． 58 2． 88
2 南宁市九塘乡 2011-01 0． 77 2． 70
3 柳州市融安县 2011-02 1． 02 0． 58
4 河池市 1 2011-02 1． 53 2． 64
5 钦州市 2011-02 0． 78 2． 78
6 河池市 2 2011-02 1． 73 2． 16
7 百色市 2011-02 1． 17 2． 01
8 南宁市 2011-02 1． 56 2． 32
9 河池市南丹县 2011-04 0． 87 2． 93
10 河池市 2011-04 0． 82 2． 87
11 南宁市 2011-05 1． 09 2． 93
12 南宁市腾翔乡 2011-05 0． 68 2． 80
13 南宁市马山县 2011-06 1． 30 1． 86
14 河池市 2011-08 5． 81 2． 73
n = 3
3 讨论
多糖为天然存在数量最多的大分子化合物，几乎存在于所有
的植物中，多具有抗肿瘤、抗氧化、抗糖尿病、抗病毒、抗辐射、调
节性功能、调血脂等活性，越来越多地引起了人们的重视［5］。在
肾蕨药材中，多糖为主要成分之一，含量在 1%左右。通过研究
其含量的高低，能间接地控制其品质的好坏，对临床用药的有效
性具有一定的参考价值。
本实验结果表明，硫酸用量、保温温度、保温时间、冰水浴时
间对显色有重要影响，故优化显色的条件是准确测定药材中多糖
含量的前提。以 D －无水葡萄糖为对照品，测定波长为 489 nm，
在 1． 9 ～ 22． 8μg·ml －1范围内线性关系良好(r = 0． 999 0) ，平均
回收率为 102． 29%(RSD = 1． 29%，n = 6)。该方法简便、快捷、准
确，可作为肾蕨多糖含量测定的方法。
然而，目前对肾蕨的研究仍处于初级阶段，药效与多糖间的
关系、及其动态积累变化尚需有待进一步研究，这将为更加客观
地质量控制提供依据。
参考文献:
［1］ 钟 鸣，韦松基．常用壮药临床手册［M］．南宁:广西科学技术出版
社，2010:352．
［2］ 龙友国，余跃生，戎聚全，等．民族药肾蕨的民族民间应用［J］．黔南
民族医专学报，2002，15(4) :189．
［3］ 朱 华，苏 玲，朱意麟，等． 肾蕨的显微鉴别［J］． 时珍国医国药，
2008，19(7) :1755．
［4］ 广西壮族自治区食品药品监督管理局． 广西壮族自治区壮药质量
标准(第二卷) ［M］．南宁:广西科学技术出版社，2011:176．
［5］ 刁 波，唐 瑛，王晓琨，等．中药多糖研究新进展［J］．中国医药导
报，2008，(03) :21．
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