全 文 ：［基金项目］福建省科技开发项目(编号:2005) ;福建省卫生厅青年基金项目(编号:2005-2-8) ［作者简介］王少明，男，副主任药师，电话:
0591-87557768-2039
阴地蕨对 A549 肿瘤细胞增殖、黏附及迁移能力的影响
王少明1，阮君山2 (1．福建省立医院药剂科，福建 福州 350001;2．福建医科大学省立临床学院药学教研室，福建 福州
350001)
［摘要］ 目的:研究阴地蕨对肿瘤转移相关生物学行为黏附、迁移能力的作用。方法:利用 MTS /PMS 法检测阴地蕨对 A549
细胞增殖的影响;黏附实验检测阴地蕨对肿瘤细胞黏附能力的影响;通过划痕法及 Transwell 小室法分别检测阴地蕨对 A549
细胞迁移及侵袭能力的影响。结果:25 μg·mL －1的阴地蕨对肿瘤细胞增殖有抑制作用，并且能明显抑制肿瘤细胞的黏附，质
量浓度 5 μg·mL －1以上的阴地蕨即可抑制肿瘤细胞的迁移和侵袭。结论:阴地蕨可通过抑制肿瘤细胞黏附、迁移及侵袭，抑制
肿瘤的转移。
［关键词］ 肿瘤转移;阴地蕨
［中图分类号］R285 ［文献标识码］A ［文章编号］1001-5213(2011)24-2008-04
Inhibition of proliferation，adhesion，migration and ivasion in cancer cell A549 by Scepteridi-
um ternatum
WANG Shao-ming，RUAN Jun-shan (1． Department of Pharmacy，Fujian Provincial Hospital，Fujian Fuzhou 350001，China;2．
Fujian Provincial Hospital，Clinical College of Fujian Medical University，Fujian Fuzhou 350001，China)
ABSTRACT:OBJECTIVE To explore the effect of Scepteridium ternatum (Thunb 1)Lyon，on the biological behavior of tumor me-
tastasis-related adhesion and migration．METHODS MTS /PMS assay，adhesion-assay，scarification and the Transwell chamber assay
were used to detect the ability of tumor cell proliferation，adhesion，migration and invasion by incubated with Sceptcridium ternatum
(Thunb1)Lyon． RESULTS 25 μg·mL －1 of Scepteridium ternatum(Thunb1)Lyon，inhibited the proliferation of tumor cells and can
inhibit tumorcell adhesion，5 μg·mL －1 concentration of Scepteridium ternatum(Thunb1)Lyon，could inhibit tumor cell migration and
invasion． CONCLUSION Scepteridium ternatum(Thunb1)Lyon，could inhibit tumor cell adhesion，migration invasion and tumor me-
tastasis．
KEY WORDS:tumor metastasis;Scepteridium ternatum(Thunb1)Lyon
恶性肿瘤是目前危害人类健康最严重的疾病之
一。恶性肿瘤的转移和复发是导致肿瘤治疗失败的
主要原因，据统计 80%以上的肿瘤患者死于肿瘤转
移。肿瘤转移是一个多步骤、多环节、多因素参与的
连续复杂过程［1］，黏附、迁移、侵袭是肿瘤细胞转移
过程中的恶性生物学行为的表现，也是常见的抗肿
瘤转移作用体外筛选的方法［2］。
阴地蕨科植物阴地蕨 Sceptridium ternatum
(Thunb1)Lyon，主产地为福建，是民间习用草药，性
甘平、味淡，具有清肝、肺火、明目、解热祛风的功效。
临床上常用于肿瘤转移的治疗，我们前期的研究表
明其具有解热、抗炎、免疫调节和抗肿瘤等活
性［3-7］。以下对其体外抑制肿瘤转移相关生物学行
为的作用进行了研究。现报道如下。
1 材料
1． 1 实验用细胞株 人肺腺癌细胞株 A549，本实
验室自有，购自中科院细胞库，PRMI1640 培养基 +
10%小牛血清常规培养。
1． 2 实验药物 阴地蕨(购自福州中药饮片厂，批
号 20100506) ，适当粉碎后，采用前期研究的实验方
法［8］，用乙醇提取制成阴地蕨醇提取物，制成每 1
mL含生药 1 g 的溶液，临用前用 1640 培养基稀释
至所需要浓度，0． 22 μm的精密滤头过滤。
1． 3 实验试剂 PRMI1640 (Invitrogen，批号:
861432) ;PBS(实验室自制) ;小牛血清(Invitrogen，
批号:8104931) ;胰蛋白酶 Trypsin 1 ∶ 250(Amer-
sco，批号:9AC10360) ;EDTA(Amersco，批号:
0458) ;三苯基氯化四氮唑(MTS) (promega，批
号:22258402) ;吩嗪硫酸甲酯 (PMS) (promega，
批号:55843)。
2 方法
2． 1 细胞增殖试验 参照文献［9］收集处于对数
期生长的肿瘤细胞，调整细胞悬液密度，接种于 96
孔板，每孔 200 μL，5 000个细胞 /孔，置37 ℃、5%
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CO2 培养箱孵育 24 h 使细胞贴壁。细胞贴壁后弃
上清，更换新鲜的培养液，180 μL /孔并加入 20 μL
的各浓度药液，含阴地蕨生药分别为0． 1，0． 5，1，5，
10，25，50，100 μg·mL －1，空白对照仅加入 20 μL 培
养基，每组 6 个复孔，置摇床上低速振荡混匀，
37 ℃、5% CO2 培养箱继续培养 24 h后加入 20 μL /
孔 MTS /PMS 溶液，MTS 的终质量浓度为 333 μg·
mL －1，PMS 的终浓度为 25 μmol·L －1，继续培养 4
h，然后置摇床上低速振荡 10 min，测量各孔在 490
nm处的吸光值。
2． 2 划痕法测定细胞迁移能力试验 参考文献
［10］方法，略作改变将肿瘤细胞与药物孵育 24 h
后，胰酶消化，计数，调整密度用完全培养基配成 1
× 106 /mL 的细胞悬液，取 200 μL 细胞悬液接种于
24 孔板中，形成致密单层后划痕，取各时间点拍照、
比较，使用 Image J软件统计。
2． 3 肿瘤与细胞外基质黏附试验［11］ 将细胞接种
于 6 孔板，细胞贴壁后加入各浓度药物，作用 24 h
后将各组细胞消化，调整细胞悬液密度，取 100 μL
细胞悬液(含 4 万个细胞)加入铺有明胶(10 mg·
L －1)的 96 孔板中，培养箱中孵育 30 min，PBS 洗去
未黏附的细胞，加入 100 μL 的0． 2%虎红染色 30
min，PBS洗涤，200 μL 95%乙醇-PBS(1 ∶ 1)固定 1
h，570 nm处测定吸光值。
2． 4 Transwell 小室法细胞侵袭试验 参照文献
［11］，细胞与各浓度药物孵育 24 h后，胰酶消化，计
数，上室加入 100 μL细胞悬液(含 5 万个细胞) ，下
室加入含 10%小牛血清的完全培养基，置于培养箱
孵育 6 h，取出 Transwel，2%的多聚甲醛瞬时固定，
PBS洗涤，4%的多聚甲醛常温固定 1 h，PBS 洗涤，
2%考马斯亮蓝室温染色 1 h，PBS漂洗，擦去上室表
面细胞，拍照、计数。用 Image J 软件统计穿膜的细
胞数。
2． 5 统计学处理 应用 Excel软件进行统计分析，
结果以 珋x ± s表示，采用 t检验进行分析比较。
3 结果
3． 1 阴地蕨对肿瘤细胞增殖能力的影响 以增殖
率对药物对细胞的增殖影响进行比较。增殖率 =
(各组所得到的吸光值 /空白对照组平均值)×
100%。实验结果表明，阴地蕨 25 μg·mL －1以上质
量浓度可以抑制肿瘤细胞的增殖(P ＜ 0． 05) ，结果
见图 1。
3． 2 阴地蕨对肿瘤细胞迁移能力的作用 随着时
间延长，细胞从划线边缘逐渐向中间迁移，经过 12 h
后，对照组的划痕已经愈合，给药组抑制了划痕处肿
瘤细胞向中间的迁移。用 ImageJ 软件统计细胞迁
移的距离，将对照组迁移的距离均值归一化为
100%，其他组的迁移距离与对照组均值的比值统计
为相对迁移率，进行比较。可以看出阴地蕨在 25，
50 μg·mL －1质量浓度下能明显抑制肿瘤细胞细胞
的迁移能力，差异有统计学意义(P ＜ 0． 01)。见图
2。
图 1 阴地蕨对人肺癌细胞 A549 增殖的抑制作用
Fig 1 Scepteridium ternatum inhibited cell proliferation in lung cancer
A549 cell
图 2 阴地蕨对人肺癌细胞 A549 迁移能力的影响
Fig 2 Scepteridium ternatum inhibited cell migration in lung cancer
A549 cell
3． 3 阴地蕨对肿瘤细胞与细胞外基质黏附能力的
影响 实验结果中将空白对照组所得出的吸光度均
值归一化设定为 100%，各剂量组的值转化为%空
白对照。结果表明阴地蕨 5 μg·mL －1以上质量浓度
可以抑制肿瘤细胞与细胞外基质的黏附(P ＜
0． 05)。见图 3。
图 3 阴地蕨对人肺癌细胞 A549 与基质粘附的影响
Fig 3 Scepteridium ternatum inhibited cell adhesion in lung cancer A549
cell
3． 4 Transwell小室法细胞侵袭试验 药物作用 24
h后，用考马斯亮蓝染色，见图 4。由图可以看出各
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组细胞都能穿膜运动到 Transwell 下室，但是发生侵
袭的细胞数目明显不同，从结果统计图中可以看出，
阴地蕨能明显抑制 A549 细胞的侵袭，差异有极显
著性(P ＜ 0． 01)。见图 5。
图 4 阴地蕨对肿瘤细胞侵袭能力的影响
A．对照组;B． 5 μg·mL －1;C． 10 μg·mL －1;D． 25 μg·mL －1;E． 50 μg·
mL －1
Fig 4 Scepteridium ternatum inhibited cell invasion in cancer A549 cell
A． control group;B． 5 μg·mL －1;C． 10 μg·mL －1;D． 25 μg·mL －1;E． 50
μg·mL －1;
图 5 阴地蕨对肿瘤细胞 A549 的侵袭能力的抑制作用
Fig 5 Scepteridium ternatum inhibited invasion ability in cancer A549
cell
4 讨论
恶性肿瘤的侵袭和转移是肿瘤患者死亡的主要
原因。研究寻找有效的抗肿瘤转移药物一直是药物
研发的热点［12-14］。肿瘤发生转移时其恶性生物学
行为将会发生改变，肿瘤细胞黏附、迁移和侵袭在肿
瘤转移的各个环节中起重要作用，阻断肿瘤细胞黏
附、侵袭和迁移过程的各环节均有可能抑制肿瘤的
转移。这些实验通常作为抗肿瘤转移药物的基本筛
选［15-19］。
由于实验中采用的是提取物，成分复杂，所以有
别于传统的肿瘤转移的实验设计，我们实验中将药
物与肿瘤细胞预先孵育 24 h，这样做的目的在于充
分地发挥中药的作用，并可以平行检测药物作用后
各组的差异。
通过研究，我们发现阴地蕨能明显抑制人肺腺
癌细胞株 A549 对胞外基质的黏附、迁移及侵袭，提
示阴地蕨可能具有抗肿瘤转移的作用，但尚需体内
实验的进一步研究。
阴地蕨中含大量的生物活性黄酮如木犀草
素［20］、阴地蕨素［21-22］等，当前的研究表明这些黄酮
具有良好的抗肿瘤作用，提示阴地蕨有着良好的开
发前景。
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［收稿日期］2011-05-20
［基金项目］江苏省中药炮制重点实验室开放式课题(编号:ZYPZ007) ［作者简介］韩乐，男，硕士研究生，电话:025-85811511，E-mail:win-
ner2243@ sohu． com ［通讯作者］刘训红，男，教授，电话:025-85811511，E-mail:liuxunh1959@ sohu． com
非水毛细管电泳测定延胡索饮片中 4 种生物碱的含量
韩乐，傅兴圣，刘训红，李俊松，蔡宝昌 (南京中医药大学江苏省中药炮制重点实验室，江苏 南京 210029)
［摘要］ 目的:建立非水毛细管电泳法(NACE)同时测定不同批次延胡索饮片中延胡索乙素、原阿片碱、盐酸小糪碱及黄连碱
含量的方法。方法:以 40 mmol·L–1醋酸钠-60 mmol·L －1醋酸铵-无水甲醇缓冲液(pH 6． 0)为电泳介质，未涂渍标准熔融石英
毛细管(75 μm ×64． 5 cm，有效长度 56 cm)为分离通道，分离电压为 25 kV，检测波长为 270 nm，毛细管温度为20 ℃，压力进
样为 50 mbar，6 s。结果:4 种生物碱的浓度与峰面积的线性关系良好(r ＞ 0． 999 2) ;加样回收率为96． 33% ～ 98． 10%。用此法
测定了延胡索饮片中 4 种生物碱的含量，得到满意结果。结论:该方法简单、准确，重复性较好，可用于延胡索饮片内在质量的
评价和控制。
［关键词］ 非水毛细管电泳法;延胡索;延胡索乙素;原阿片碱;盐酸小糪碱;黄连碱
［中图分类号］R927． 2 ［文献标识码］A ［文章编号］1001-5213(2011)24-2011-05
Simultaneous determination of four alkaloids in Rhizoma Corydalis by nonaqueous capillary
electrophoresis
HAN Le，FU Xing-sheng，LIU Xun-hong，LI Jun-song，CAI Bao-chang (Nanjing University of Chinese Medicine，Jiangsu
Key Laboratory of Chinese Medicines Processing，Nangjing 210029，China)
ABSTRACT:OBJECTIVE To establish a nonaqueous capillary electrophoresis (NACE)method for simultaneous determination of
berberine，palmatine，jatrorrhizine and magnoflorine in Rhizoma Corydalis from different batches．METHODS 40 mmol·L －1 sodium
acetate and 60 mmol·L －1 ammonium acetate methanol solution was used as buffer solution (pH6． 0) ，uncoated fused silica capillary
(56 cm /64． 5 cm × 75 μm，id)was used，separation voltage was 25 kV，detection wavelength was at 270 nm，column temperature was
maintained at 20 ℃，and sample was injected at 50 mbar，6 s． RESULTS Four alkaloids showed good linearity (r ＞ 0． 999 2)in
the range of the tested concentration，the average recoveries of the method were between 96． 33% ～ 98． 10% ． CONCLUSION The
method is simple，accurate and reproducible，and can be used for quality control of Rhizoma Corydalis．
KEY WORDS:NACE-DAD;Rhizoma Corydalis;berberine;palmatine;jatrorrhizine;magnoflorine
延胡索为历版药典收载的常用中药，系罂粟科
植物延胡索 Corydalis yanhusuo W． T． Wang 的干燥
块茎，具有行气止痛、活血散淤之功效［1］。现代研
究表明，延胡索含多种生物碱，其中延胡索甲素、延
胡索乙素、延胡索丙素具有明显的止痛作用，尤以延
胡索乙素的作用最强，所含的盐酸小檗碱、黄连碱又
具有抗菌、消炎的作用［3-4］。醋炙能提高延胡索生
物碱和延胡索乙素的煎出量，从而增强镇痛和镇静
作用［2］。目前对延胡索饮片质量评价，在质量控制
指标上主要集中在延胡索乙素［1，5-7］上，对其他几种
生物碱的报道较少［8-9］，因此，建立简单、准确的生
物碱检测方法对延胡索生品及其炮制品的质量评价
具有重要意义。
毛细管电泳技术作为一种新型分析技术，兼有
电泳和色谱技术的双重优点，因而具有高效、高速、
高灵敏度、高自动化以及样品和试剂耗用量少等一
系列优点［10］。对于生物碱而言，-N-基可与填料上
的残余-Si-OH 基结合而造成峰拖尾，使分离度变
差。而毛细管电泳方法本身需要分析带有一定电荷
的物质，而生物碱在结构上以含有氮原子为特点，所
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