全 文 ：［收稿日期］ 20111115(007)
［第一作者］ 马秉智，硕士，主管药师，从事医院中药制剂研究
与开发，Tel:010-84205688，E-mail:mbz20052002
@ yahoo． com． cn
［通讯作者］ * 高增平，博士，教授，从事中药新药研究与开发，
Tel:13661035777， E-mail: gaozengping2008 @
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HPLC测定不同产地单芽狗脊中
山柰酚-3，7-O-α-L-二鼠李糖苷的含量
马秉智1，鞠海1，田雪峰1，王巍1，朱立平1，高增平2*
(1. 中日友好医院药学部，北京 100029;2. 北京中医药大学中药学院，北京 100102)
［摘要］ 目的:建立高效液相色谱法测定单芽狗脊中山柰酚 3，7-O-α-L-二鼠李糖苷含量的方法。方法:HPLC 条件为
DiamonsilTM C18(4. 6 mm × 200 mm，5 μm)色谱柱，流动相乙腈-水(30∶ 70) ，检测波长 265 nm，流速 1. 0 mL·min
－ 1，柱温 25 ℃。
结果:9 个产地单芽狗脊中山柰酚 3，7-O-α-L-二鼠李糖苷的质量分数范围为 0. 05% ～ 0. 43%。结论:该法简便、准确、专属性
强，可用于单芽狗脊中山奈酚-3，7-O-α-L-二鼠李糖苷的含量测定。
［关键词］ 单芽狗脊;山柰酚-3，7-O-α-L-二鼠李糖苷;高效液相色谱法
［中图分类号］ R284． 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2012)12-0130-02
［DOI］ CNKI:11-3495 /R． 20120411． 0913． 007 ［网络出版时间］ 2012-04-11 9:15
［网络出版地址］ http:/ / www． cnki． net / kcms / detail /11． 3495． R． 20120411． 0915． 007． html
Determination of Kaempferoα 3，7-O-α-L-dirhamnopyranoside
in Woodwardiae unigemmata from Different Habitats by HPLC
MA Bing-zhi1，JU Hai1，TIAN Xue-feng1，WANG Wei1，ZHU Li-ping1，GAO Zeng-ping2*
(1. China-Japan Friendship Hospital，Beijing 100029，China;
2. School of Chinese Materia Medica，Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 100102，China)
［Abstract］ Objective:To develop a HPLC method for the content determination of kaempferol 3，7-O-α-
L-dirhamnopyranoside in Woodwardiae unigemmata． Method:HPLC was applied with a DiamonsilTMC18 column by
acetonitrile-water (30∶ 70)as mobile phase． The flow rate was 1. 0 mL·min － 1 ． The column temperature was at 25
℃ and the UV detection wavelength was at 265 nm． Result:The content range of kaempferol 3，7-O-α-L-
dirhamnopyranoside from 9 different habats was from 0. 05% -0. 43% ． Conclusion:The method is simple，accurate
and specific． It can be used for determination of kaempferol 3，7-O-α-L-dirhamnopyranoside in W． unigemmata．
［Key words］ Woodwardia unigemmata;kaempferol 3，7-O-α-L-dirhamnopyranoside;HPLC
狗脊贯众来源于乌毛蕨科植物单芽狗脊
Woodwardia unigemmata(Makono)Nakai 和狗脊 W．
japonica Sm． 带叶柄残基的干燥根茎［1］。李玉洁
等［2］研究发现，紫萁贯众和荚果蕨贯众醇提物对内
毒素致小鼠全身炎症反应综合征模型有一定保护作
用。在化学成分方面，狗脊贯众含有儿茶酚衍生物、
山柰酚-3，7-二鼠李糖苷(K390)等多种黄酮类成分
及鞣质、甾体、三萜等成分［3-4］。在质量控制方面，
厉博文等［5］建立了紫萁贯众中总多糖的含量测定
方法，结果发现，紫萁贯众多糖含量因产地和采收期
变化而不同。本文建立并测定了 9 个产地的样品中
K390 的含量，为评价单芽狗脊药材质量提供。
1 材料
Agilent 1100 高效液相色谱仪(G1311A 四元泵、
G1322A 在线脱气机、G1316A 柱温箱 G1314AVWD
检测器、Agilent Chem 工作站) ，电子天平 (ER-
182A，Tokyo Japan)。对照品 K390(自制，HPLC 归
·031·
第 18 卷第 12 期
2012 年 6 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 18，No． 12
Jun．，2012
DOI:10.13422/j.cnki.syfjx.2012.12.045
一化法测定纯度为 99. 9%)符合含量测定要求。乙
腈为色谱纯，甲醇为分析纯，水为纯净水。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 DiamonsilTM C18色谱柱(4. 6 mm ×
200 mm，5 μm) ，流动相乙腈-水(30∶ 70) ，流速 1. 00
mL·min － 1，柱温 25 ℃，检测波长 265 nm。对照品、
供试品(四川)色谱图见图 1。
1. K390;A. 对照品;B. 供试品
图 1 K390 对照品供试品(四川)HPLC
2. 2 对照品溶液的制备 精密称取对照品 K390
适量，加甲醇制成 1 mL 含 16. 88 μg 的溶液。
2. 3 供试品溶液的制备 取单芽狗脊药材粉末
(过 60 目筛)约 1. 0 g，精密称定，置 50 mL 锥形瓶
中，加甲醇 25. 00 mL，称定质量，回流提取 1 h，冷却
至室温，用甲醇补足质量，摇匀，0. 20 μm 微孔滤膜
滤过，即得。
2. 4 线性关系的考察 取 K390 对照品溶液，分别
进样 5，10，15，20，25 μL，按上述色谱条件测定峰面
积，并以峰面积(Y)对进样量(μg)进行回归，得标
准曲线 Y = 2 983. 8 X + 27. 45(r = 0. 999 9) ，表明
K390 在 0. 084 4 ～ 0. 422 0 μg 具有良好的线性
关系。
2. 5 精密度试验 精密吸取上述对照品溶液
(16. 88 mg·L － 1)10 μL，连续进样 5 次，K390 峰面积
RSD 1. 13%，表明本法精密度良好。
2. 6 稳定性试验 取供试品溶液(购自四川成都
市)分别于 0，3，6，9，12 h 进样 10 μL，测得样品中
K390 面积值的 RSD 2. 22%，表明供试液在 12 h 内
稳定性良好。
2. 7 重复性试验 取同一批样品(购自四川成都
市) ，分别制备供试液 5 份，按含量测定方法测得峰
面积并计算含量，结果 K390 含量的 RSD 1. 85%，表
明本法重复性良好。
2. 8 回收率试验 取已知含量的样品(购自四川
成都市) ，分别精密加入一定量的 K390 对照品溶
液，挥干溶剂，按供试品制备方法制备并注入高效液
相色谱仪，结果 K390 的平均回收率为 99. 62%，
RSD 0. 72%，结果见表 1。
表 1 加样回收率测定
No．
样品含量
/mg
加入量
/mg
测得量
/mg
回收率
/%
平均回
收率 /%
RSD
/%
1 0． 344 9 0． 337 6 0． 685 0 100． 74
2 0． 349 0 0． 337 6 0． 682 3 98． 73
3 0． 347 3 0． 337 6 0． 683 9 99． 70 99． 62 0． 72
4 0． 344 3 0． 337 6 0． 679 9 99． 41
5 0． 346 7 0． 337 6 0． 682 7 99． 53
2. 9 样品测定 分别精密吸取对照品溶液及供试
品溶液各 10 μL，按 2. 1 项色谱条件测定，记录峰面
积，计算 K390 的含量，结果见表 2。
表 2 不同产地单芽狗脊药材中 K390 的含量测定(n = 3)
No． 样品来源 K390 /% No． 样品来源 K390 /%
1 四川 0. 06
2 新疆 0. 22
3 山西 0. 07
4 宁夏 0. 08
5 内蒙古 0. 21
6 河南 0. 17
7 吉林 0. 05
8 山东 0. 05
9 北京 0. 43
3 讨论
作者前期化学成分分离时发现，单芽狗脊主要
含有山柰酚类成分，山柰酚-3，7-O-α-L-二鼠李糖苷
为其中之一，而且分离得到的量较多，因此选择它作
为对照品，并测定它在药材中的含量。
购自北京平谷的单芽狗脊中 K390 含量最高，
为 0. 43%，吉林、山东的含量最低，为 0. 05%。临床
上虽然它们都做贯众用，但是 K390 含量差异明显，
因此购买药材时不仅要注意品种，还应关注产地，这
就验证了道地药材的科学性。
［参考文献］
［1］ 吴兆洪 ．中国植物志 ． 第 4 卷 ． 第 2 分册［M］． 北京:科
学出版社，1999:203．
［2］ 李玉洁，杨庆，杨岚 ．内毒素致小鼠 SIRS 模型建立及两
种贯众醇提物对其保护作用的初步观察［J］． 中国实
验方剂学杂志，2011，17(8) :187．
［3］ 谭文界，魏俊德，肖玉平 ． 单芽狗脊化学成分［J］． 中草
药，1984，25(6) :6．
［4］ 杨明惠，杨雪琼，张凤梅，等 ． 单芽狗脊蕨的化学成分
［J］．中草药，2009，40(10) :1546．
［5］ 厉博文，张东，杨岚 ．紫萁贯众中多糖的含量测定［J］．
中国实验方剂学杂志，2010，16(10) :41．
［责任编辑 邹晓翠］
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马秉智，等:HPLC 测定不同产地单芽狗脊中山柰酚-3，7-O-α-L-二鼠李糖苷的含量