全 文 ：［收稿日期］ 20160128(006)
［通讯作者］ * 詹十音，主管药师，从事中药质量标准研究工作，Tel:13871081883，E-mail:zsy1835@ qq． com
ＲP-HPLC同时测定不同产地路边青药材中
4 种活性成分的含量
詹十音*
(湖北省中西医结合医院，武汉 430015)
［摘要］ 目的:建立反相高效液相色谱法同时测定路边青药材中咖啡酸、槲皮素-3-O-葡萄糖苷、山柰酚-3-O-葡萄糖苷、
山柰酚含量的方法。方法:采用 Agilent C18色谱柱(4. 6 mm × 250 mm，5 μm)，流动相乙腈-0. 5%甲酸水溶液梯度洗脱，流速
0. 8 mL·min －1，柱温 25 ℃，检测波长 340 nm。结果:咖啡酸、槲皮素-3-O-葡萄糖苷、山柰酚-3-O-葡萄糖苷、山柰酚分别在
0. 045 ～ 1. 130，0. 095 ～ 2. 370，0. 105 ～ 2. 635，0. 041 ～ 1. 030 μg线性关系良好，平均加样回收率(n = 6)分别为 99. 0%，98. 5%，
97. 7%，100. 7%，ＲSD分别为 1. 0%，0. 9%，1. 0%，1. 6%。结论:该方法简便、快捷，重复性好，可用于路边青药材的质量控制。
［关键词］ 路边青;咖啡酸;槲皮素-3-O-葡萄糖苷;山柰酚-3-O-葡萄糖苷;山柰酚
［中图分类号］ Ｒ284． 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2016)14-0098-04
［doi］ 10. 13422 / j． cnki． syfjx． 2016140098
Simultaneous Determination of Four Constituents in Geum aleppicum by ＲP-HPLC
ZHAN Shi-yin*
(Hubei Provincial Hospital of Integrated Chinese ＆ Western Medicine，Wuhan 430015，China)
［Abstract］ Objective:To establish a method for simultaneously determining caffeic acid，quercetin-3-
O-glucoside， kaempferol-3-O-glucoside and kaempferol in Geum aleppicum by ＲP-HPLC． Method: The
quantitative analysis of G． aleppicum was carried out on Agilent C18 column (4. 6 mm ×250 mm，5 μm)，mobile
phase was acetonitrile-0. 5% formic acid with gradient elution，flow rate was 0. 8 mL·min －1，columntemperature
was maintained at 25 ℃，and detection wavelengrt was 340 nm． Ｒesult:The linear relationships of caffeic acid，
quercetin-3-O-glucoside，kaempferol-3-O-glucoside and kaempferol fell within the ranges of 0. 045-1. 130，
0. 095-2. 370，0. 105-2. 635，0. 041-1. 030 μg，respectively． Their average recoveries (n = 6)were 99. 0%，
98. 5%，97. 7%，100. 7% with the relative standard deviations (ＲSDs)of 1. 0%，0. 9%，1. 0%，1. 6%，
respectively． Conclusion:This method is simple，accurate，sensitive，which can be used for quality control of
G． aleppicum．
［Key words］ Geum aleppicum; caffeic acid; quercetin-3-O-glucoside; kaempferol-3-O-glucoside;
kaempferol
路边青为蔷薇科路边青属植物干燥全草，别名
蓝布正、追风七、海棠菜、老五叶，生长地点多集中在
林内和林缘，以及洼地、湿地和水边等，为 2015 年版
《中国药典》收录药材蓝布正的基源植物之一。具
有益气健脾、补血养阴，润肺化痰的功效，主要用于
治疗气血不足、虚痨咳嗽、脾虚带下等证［1］。路边
青药材是中成药复方穿心莲片、感清糖浆的重要组
成药材之一［2-3］，含有萜类、黄酮类、苯丙素类和挥
发油等有效成分，其中黄酮类化合物为主要有效成
分之一，槲皮素，槲皮素-3-O-葡萄糖苷，5，7，4-三羟
基黄酮，山柰酚-3-O-葡萄糖苷及山柰酚等黄酮类化
合物具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤等活性［4-8］。近年来
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对路边青药材的化学成分和种植开发研究得比较深
入，但对路边青药材的质量控制研究比较少，同时测
定路边青药材中多种活性成分含量的文章未见报
道［9-11］。本研究通过高效液相色谱法同时测定路边
青药材中咖啡酸、槲皮素-3-O-葡萄糖苷、山柰酚-3-
O-葡萄糖苷、山柰酚的含量，为路边青药材及其制
剂的质量控制提供定量依据的补充。
1 材料
1200 型液相色谱仪［美国 Agilent，配置 G1311C
型四元梯度泵，G1315D 型二极管阵列检测器
(DAD)，G1316A 型柱温箱，G1329B 型自动进样器、
Agilent Chemstation 色 谱 工 作 站 (Version B．
04. 02)］，KQ-500 DE型数控超声波清洗机(昆山超
声仪器有限公司，功率 500 W，频率 40 kHz)。水为
超纯水，乙腈为色谱纯，其他试剂为分析纯。
路边青药材购自不同地区药店，经湖北中医药
大学陈科力教授鉴定为蔷薇科植物路边青 Geum
aleppicum的干燥全草;对照品咖啡酸(批号 110885-
201405)，槲皮素-3-O-葡萄糖苷 (批号 111809-
201306)和山柰酚(批号 110861-201310)购自中国
食品药品检定研究院;山柰酚-3-O-葡萄糖苷(南京
替斯艾么中药研究所，批号 TCM010-150624，HPLC
测定，纯度 ＞ 98. 0%)。
2 方法与结果
2. 1 混合对照品溶液 精密称取上述各对照品适
量，加入 50%乙醇制成含咖啡酸、槲皮素-3-O-葡萄
糖苷、山柰酚-3-O-葡萄糖苷、山柰酚分别为 4. 52，
2. 37，5. 27，4. 12 g·L －1的单一对照品储备液。分别
取单一对照品储备液适量，配制成含咖啡酸、槲皮
素-3-O-葡萄糖苷、山柰酚-3-O-葡萄糖苷、山柰酚分
别为 45. 2，94. 8，105. 4，41. 2 mg·L －1的混合溶液。
2. 2 供试品溶液 取路边青粉末(过四号筛)0. 5
g，精密称定，置于 50 mL 具塞锥形瓶中，加 50%乙
醇 20 mL，超声提取 30 min，提取 2 次，滤过，合并滤
液定容到 50 mL，过 0. 45 μm 微孔滤膜，取续滤液，
即得。
2. 3 色谱条件及系统适用性考察 采用 Agilent
C18色谱柱(4. 6 mm × 250 mm，5 μm)，流动相乙腈
(A)-0. 5%甲酸水溶液(B)梯度洗脱(0 ～ 15 min，
10% ～ 20% A;15 ～ 40 min，20% ～ 35% A)，流速
0. 8 mL·min －1，柱温 25 ℃，检测波长 340 nm，进样
量 10 μL。各色谱峰与相邻峰的分离度均 ＞ 1. 5，理
论塔板数均 ＞ 1 万。见图 1。
2. 4 线性关系考察 取 2. 1 项下混合对照品溶液，
A. 对照品;B. 路边青;1. 咖啡酸;2. 槲皮素-3-O-葡萄糖苷;3. 山柰
酚-3-O-葡萄糖苷;4. 山柰酚
图 1 路边青 HPLC
Fig． 1 HPLC chromatograms of Geum aleppicum
分别进样 1，5，10，15，20，25 μL，注入液相色谱仪，
重复进样测定 3 次，记录色谱峰。以进样量 X(μg)
为横坐标，峰面积平均值 Y 为众坐标，绘制标准曲
线并进行回归计算，咖啡酸、槲皮素-3-O-葡萄糖苷、
山柰酚-3-O-葡萄糖苷、山柰酚等成分线性关系良
好，回归方程、线性范围、相关系数，见表 1。
表 1 4 种成分的线性范围及回归方程(n = 6)
Table 1 Ｒegression equations and correlation coefficients of four
compositions(n = 6)
成分 线性方程 r 线性范围 /μg
咖啡酸 Y =1 235. 7X －3. 502 0. 999 9 0. 045 ～ 1. 130
槲皮素-3-O-葡萄糖苷 Y =1 130. 5X －2. 576 0. 999 9 0. 095 ～ 2. 370
山柰酚-3-O-葡萄糖苷 Y =1 127. 1X －8. 274 0. 999 8 0. 105 ～ 2. 635
山柰酚 Y =1 310. 5X －1. 764 0. 999 9 0. 041 ～ 1. 030
2. 5 精密度试验 精密吸取上述 4 个成分混合对
照品溶液 10 μL，连续进样 6 次，测定峰面积。结果
咖啡酸、槲皮素-3-O-葡萄糖苷、山柰酚-3-O-葡萄糖
苷、山柰酚峰面积的 ＲSD 分别为 1. 0%，0. 7%，
0. 7%，1. 8%，表明仪器精密度良好。
2. 6 重复性试验 精密称取路边青样品(广东饶
平 150428)6 份，按 2. 2 项下方法制备试品溶液，在
2. 4 项色谱条件下分析测定，记录咖啡酸、槲皮素-3-
O-葡萄糖苷、山柰酚-3-O-葡萄糖苷、山柰酚的峰面
积值，代入 2. 4 项下回归方程，计算。结果样品中咖
啡酸、槲皮素-3-O-葡萄糖苷、山柰酚-3-O-葡萄糖苷、
山柰酚的平均质量分数分别为 1. 76，3. 82，5. 13，
1. 53 mg·g －1，ＲSD 依次为 1. 1%，0. 9%，0. 6%，
2. 2%，表明该方法重复性良好。
2. 7 稳定性试验 取同一份供试品(广东饶平
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150428)溶液，分别在 0，2，4，8，12，24 h进样 10 μL，
记录色谱图，计算咖啡酸、槲皮素-3-O-葡萄糖苷、山
柰酚-3-O-葡萄糖苷、山柰酚色谱峰的峰面积值，计
算其 ＲSD 分别为 1. 4%，0. 8%，0. 9%，1. 9%，表明
供试品溶液在 24 h内稳定性良好。
2. 8 加样回收率试验 取 2. 7 项中已测知含量的
路边青(广东饶平 150428)粉未 6 份，每份约 0. 25
g，精密稳定，分别置具塞锥形瓶中，分别精密加入相
当于咖啡酸 0. 452 mg，槲皮素-3-O-葡萄糖苷 0. 948
mg，山柰酚-3-O-葡萄糖苷 1. 265 mg，山柰酚 0. 421
mg的对照品储备液各适量，按 2. 2 项下的方法制备
供试品溶液，在上述色谱条件下进样 10 μL，记录峰
面积，计算回收率，结果见表 2，表明方法准确度
良好。
表 2 路边青中 4 种成分的加样回收率试验
Table 2 Ｒesult of recovery tests of four constituents in Geum
aleppicum
成分
称样量
/ g
样品
中量
/mg
加样量
/mg
测得量
/mg
回收率
/%
平均值
/%
ＲSD
/%
咖啡酸 0. 251 5 0. 443 0. 452 0. 886 98. 01 99. 0 1. 0
0. 250 2 0. 440 0. 452 0. 882 97. 79
0. 251 1 0. 442 0. 452 0. 888 98. 67
0. 250 2 0. 440 0. 452 0. 889 99. 34
0. 251 6 0. 443 0. 452 0. 896 100. 22
0. 252 1 0. 444 0. 452 0. 895 99. 78
槲皮素-3- 0. 251 5 0. 961 0. 948 1. 910 100. 11 98. 5 0. 9
O-葡萄糖苷 0. 250 2 0. 956 0. 948 1. 893 98. 84
0. 251 1 0. 959 0. 948 1. 891 98. 31
0. 250 2 0. 956 0. 948 1. 888 98. 31
0. 251 6 0. 961 0. 948 1. 890 98. 00
0. 252 1 0. 963 0. 948 1. 886 97. 36
山柰酚-3- 0. 251 5 1. 290 1. 265 2. 506 96. 13 97. 7 1. 0
O-葡萄糖苷 0. 250 2 1. 284 1. 265 2. 529 98. 42
0. 251 1 1. 288 1. 265 2. 530 98. 18
0. 250 2 1. 284 1. 265 2. 509 96. 84
0. 251 6 1. 291 1. 265 2. 540 98. 74
0. 252 1 1. 293 1. 265 2. 529 97. 71
山柰酚 0. 251 5 0. 385 0. 412 0. 800 100. 73 100. 7 1. 6
0. 250 2 0. 383 0. 412 0. 804 102. 18
0. 251 1 0. 384 0. 412 0. 794 99. 51
0. 250 2 0. 383 0. 412 0. 800 101. 21
0. 251 6 0. 385 0. 412 0. 807 102. 43
0. 252 1 0. 386 0. 412 0. 790 98. 06
2. 9 样品测定 精密称取路边青药材粉末 0. 5 g，
按 2. 2 项下方法制备供试品溶液，精密取 10 μL 进
样分析，测定峰面积，代入 2. 4 项下回归方程计算各
成分含量，结果见表 3。
表 3 路边青药材中 4 种成分的质量分数(n = 3)
Table 3 Contents of four constituents in Geum aleppicum(n = 3)
mg·g － 1
批号 产地 咖啡酸
槲皮素-3-
O-葡萄糖苷
山柰酚-3-
O-葡萄糖苷
山柰酚
150428 广东饶平 1. 76 3. 82 5. 13 1. 53
150714 福建华安 2. 11 3. 64 5. 30 1. 97
150908 湖南宁乡 1. 96 3. 02 5. 94 2. 83
151009 四川新津 2. 44 2. 71 6. 15 2. 91
150623 广东朝州 1. 83 3. 22 1. 67 2. 02
150508 安徽亳州 0. 89 － 3. 90 －
151021 贵州安顺 1. 02 3. 51 － －
150917 湖北恩施 1. 46 3. 02 5. 94 2. 83
150829 浙江临安 － － 2. 06 3. 81
151102 广西上林 2. 44 2. 71 6. 15 2. 91
注:“ －”代表未检出。
3 讨论
在供试品的制备方法中，考察了水和体积分数
10%，30%，50%，70%，80%，90%的乙醇溶液及超
声处理 20，30，40，60 min 的提取效果。结果表明
50%乙醇溶液超声处理 30 min 能有效提取路边青
样品中的待测成分。
咖啡酸、槲皮素-3-O-葡萄糖苷、山柰酚-3-O-葡
萄糖苷、山柰酚的最大紫处吸收波长分别为 329，
340，350，340 nm，试验考察发现，340 nm 波长下，
各色谱峰分离度好，杂质干拢小，因此选择 340 nm
为检测波长。另外，对乙腈-水、甲醇-水、甲醇-磷
酸水溶液、甲醇-甲酸水溶液等多个溶济系统进行
选择，发现用含有甲醇的洗脱系统，各色谱峰峰形
较差，有拖尾，经过多次试验，最终确定了以乙腈-
0. 5%甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱，可使待
测组分得到很好的基线分离，且能有效地防止色
谱峰的拖尾。
由测定结果可知，10 批不同产地的路边青药材
中咖啡酸、槲皮素-3-O-葡萄糖苷、山柰酚-3-O-葡萄
糖苷、山柰酚的含量差异较大，其原因可能与采收期
及不同产地湿度、温度、阳光和土质等外部生长环境
因素有关。有关各组分含量、采收时间之间的动态
变化以及产地之间含量的差异，将在后期试验中进
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一步研究。本试验对路边青多个成分同时进行测
定，建立的方法简便、快速、准确，对于路边青的质量
控制具有重要意义。
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［责任编辑 顾雪竹
檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶
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