全 文 ：第 23卷 , 第 1 期
2 0 0 6 年 1 月
光 谱 实 验 室
hC 认es 了ou 阴al Of S P e c t osr c o P y aL b~ 才口勺声
/ 口V o l . 2 3 , N o . 1
J a n u a r y
,
2 0 0 6
金毛狗中黄酮成分与微量元素的分析测定
叶筱琴 杨小凤① 仇佩虹 黄可新
(浙江省温州医学院药学院化学教研室 浙江省温州市 3 2 5 0 27 )
摘 要 为了进一步开发利用金毛狗的资源 , 对金毛狗中黄酮成分进行了分析 ,并采用电感祸合等离
子体 一原子发射光谱仪 (l C P一A E )S 对其中的 10 种微量元素进行测定 。 结果表明 , 金毛狗中总黄酮提取的最
佳条件是 :在 50 C 下用 60 %乙醇超声波提取 1 . h0 、提取体积 10 0m L 、提取二次 。 金毛狗中总黄酮的含量为
0
.
7 9 6 %
,平均回收率 一0 0 . 6写 , R S D 二 0 . 5 4% ( n 二 6 ) 。 金毛狗中含有非常丰富的 F e 、 C a 、 M g 、 N i 、 Z n 、 M n 、 C u
等多种人体必需的微量元素 , 其中 C a 含量最高 , C u 含量低 , 有毒有害的元素 P b 、 C d 均未检出 。 此结果为
金毛狗药效功能的进一步研究和资源开发利用提供科学依据 。
关键词 金毛狗 ,总黄酮 ,电感祸合等离子休一原子发射光谱法 ,微量元素 。
中图分类号 : 0 6 5 7. 3 2 ; 0 6 5 7 . 31 文献标识码 : B 文章编号 : 1 0 0 4 一 8 1 3 8 ( 2 0 0 6 ) 0 2一 0 0 5 9一 0 5
1 前言
蚌壳旅科 ( D i s k s o n i a e e a e )金毛狗 ( C ib o t iu m . B a r o m e t : )又名金毛狗脊 ,分布在浙江 、 四川 、福建 。
在浙江主产于泰顺平阳 ,生于山脚沟边及林下酸性土中 。 在中医药中有补肝肾 、 强腰膝 ,强筋骨 ,舒
经脉 ,祛风湿的功能 ,用于治疗风寒湿痹 ,腰背酸痛 ,足膝无力 ,肾虚带下 ,小便失禁等 〔` 〕 。 金毛狗的
金黄色柔毛对疤痕组织 ,肝脏的损伤出血有较好的止血效果 , 其作用较明胶海绵迅速 。近年来 ,在中
医中药领域中 , 以金毛狗为主要药材主治颈稚 、 腰推 、 坐骨神经 、腰肌劳损有特别的疗效 2j[ 。 金毛狗
的化学成分研究已有报道闭 , 然而其黄酮含量测定还未见报道 , 为了搞清金毛狗的药效基础 , 为金
毛狗资源的综合开发利用提供科学依据 , 本文对其所含的黄酮成分做了总含量的测定 。并采用电感
藕合等离子体一原子发射光谱仪 ( IC P 一 A E )S 测定金毛狗中 10 种常见的微量元素 (钙 、钻 、 铜 、 铁 、 镁 、
锰 、镍 、 锌 、 铅 、 镐 ) 。
2 实验部分
2
.
1 仪器
U V
一
7 5 0 2 P C 紫外可见分光光度计 〔上海欣茂仪器有限公司 ) , BS l l 0S 电子天平 (北京赛多利斯
天 平有限公司 ) , K Q 一 2 50 D E 型医用数控超 声波清洗器 (昆山市超声仪器有限公司 ) , A ot m s ca n
A vd an at ge 型电感藕合等离子体一原子发射光谱仪 (美国 T her m o lE e m en alt 公司 ) ; X T 一 ILJ 型压力自
控密闭微波消解仪 (上海新拓微波溶样测试技术有限公司 ) 。
2
.
2 试剂
芦丁 (中国药品生物制品检定所 ) , 钙 、 钻 、铜 、铁 、 镁 、锰 、 镍 、锌 、 铅 、镐标准溶液 G S B (国家环境
① 联系人 , 电话 : ( 0 5 7 7 ) 5 6 65 99 5 5 (办 ) ; ( 0 5 7 7 ) 55 39 3 7 5 6 (宅 ) ; E一 m a i一: ” n g x i a o fe n g z 9 6 5@ y a h o o . c o m . c n
作者简介 : 叶筱琴 ( 1 9 6 2一 ) ,女 ,浙江省温州市人 ,高级实验师 , 从事化学及仪器分析 。
收稿 日期 : 20 0 5一 0 9一 1 6 ;接受 日期 : 20 0 5一 0 9一 25
10 光潜实验室 第 23 卷
保护总局标准样品研究所 ) ;浓 N HO。 (上海试剂一厂 , 优级纯 ) ;其他试剂均为分析纯 (上海试剂一
J
一
) ;实验用水为二次蒸馏水 。
2
.
3 样品
金毛狗于 2 0 0 2 年 8 月采自福建 ,晒干 、粉碎 ,备用 。
3 方法和结果
.3 1 总黄酮含一测定川
3
.
1
.
1 最佳提取条件的选择
准确称取 5 . 09 金毛狗样品 , 先加 1 0 m l才 石油醚 , 回流 hl 进行脱色脱脂处理 , 过滤 , 将滤渣中
石油醚挥发干 。 然后 ,按 L 。 ( 3 4 )正交设计表对提取的四个因素和 3 个水平进行试验 ,各因素和水平
见表 1 ,分析结果见表 2 。 表 2 的分析结果表明 , 因 R l > R ` > R Z> R : ,所以影响超声波提取金毛狗中
总黄酮的主次因素为 A 一 D 一B 一 C ,即乙醇浓度 ,提取次数 ,提取时间 ,溶剂量 。 最佳的提取条件组合为
八 , D Z几 C : (据最大 K 值 ) ,即 60 %乙醇在 50 ℃下超声波提取 1 . h0 、提取体积 1 0 m I J 、 提取 2次 。
表 1 考察的因紊及水平
因素水平 乙醇浓度 (% ) 提取时间 ( b) 溶剂 t ( m L ) 提取次数 (次 )
A B C D
80102
0
.
5
1
。
0
1
.
5
0月bl了OU
表 2 试骏方案及分析结果
序号 吸光度 ( A ) 总黄酮含 t (% )
l ( 6 0 )
1 ( 6 0 )
1 ( 60 )
2 ( 7 0 )
2 ( 7 0 )
2 ( 7 0 )
3 ( 8 0 )
3 ( 8 0 )
3 ( 8 0 )
1
.
7 5 6
1
.
5 1 8
1
.
3 5 0
0
.
5 8 5
0
.
5 0 6
0
。
4 5 0
0
。
1 3 5
1 ( 0
.
5 )
2 ( 1
.
0 )
3 ( 1
.
5 )
l ( 0
.
5 )
2 ( 1
.
0 )
3 ( 1
.
5 )
1 ( 0
.
5 )
2 ( 1
.
0 )
3 ( 1
.
5 )
1
.
5 4 4
1
。
5 9 0
1
.
4 9 0
0
.
5 1 5
0
.
5 3 0
0
。
4 9 7
0
.
0 3 3
1 ( 8 0 )
2 ( 1 0 0 )
3 ( 1 2 0 )
2 ( 10 0 )
3 ( 1 2 0 )
l ( 8 0 )
3 ( 12 0 )
1 ( 8 0 )
2 ( 10 0 )
1
.
5 4 4
1 5 7 2
l
。
5 0 8
0
.
5 1 5
0
.
5 2 4
0
。
5 0 3
0
.
0 2 1
1 ( l )
2 ( 2 )
3 ( 3 )
3 ( 3 )
1 ( 1 )
2 ( 2 )
2 ( 2 )
3 ( 3 )
1 ( 1 )
1
。
3 5 8
1
.
6 7 4
1
.
5 9 2
0
.
4 5 3
0
.
5 5 8
0
。
5 3 1
0
.
1 0 5
0
.
2 8 2
0
.
3 5 4
0
。
3 0 9
0
.
2 4 0
0
.
2 4 0
0
.
2 8 7
0
。
2 5 9
0
.
2 5 0
0
.
2 0 3
0
.
52 6
0
.
65 6
0
.
5 7 4
0
。
53 4
0 4 5 0
0
.
5 3 4
0
.
48 4
0
.
48 4
0
.
38 2
KIZ3瓦及兀R
3 :l 2 供试品溶液的制备
准确称取 5 . 鲍 样品 ,先加人 10 m L 石油醚 , 回流 h1 进行脱色脱脂处理 ,过滤 ,将滤渣中石油
醚挥发干 。 按正交试验得到的最佳提取方案 ,即 60 %乙醇在 50 ℃下超声波提取 1 . h0 、提取体积
1()0 m L
、 提取 2次 . 过滤 ,用 70 %乙醇定容至 10 0m L 容量瓶中 ,备用 。
3
.
1
.
3 标准品溶液的制备
准确称取芦丁标准品 2 . s m g 于小烧杯中 ,加少量 70 写乙醉 ,超声溶解后 ,定容至 10 0m L 容量
瓶中 ,摇匀 ,得芦丁标准溶液 , 浓度为 2 . s m g / 10 0m L 。
第 1 期 叶筱琴等 : 金毛狗中黄酮成分与微 t 元素的分析侧定
.3 1
.
4 浏 定波长的选择
分别准确量取芦丁标准溶液及供试品溶液 l m I J 于 10 m L 刻度试管中 ,用水稀释至 4 . o m L ,各
加人 5%的亚硝酸钠溶液 0 . 4m L ,摇匀 ,放置 6m in , 加 10 %的硝酸铝溶液 0 . 4m L ,摇匀 ,放置 6m in
后 ,加 4 %的氢氧化钠溶液 4m L ,最后用水稀释至刻度 ,摇匀 ,放置 1 5m in 。 按波长扫描的操作方法
分别对芦丁标准品及供试品进行波长扫描 ,波长范围为 20 一 7 O0n m ,扫描结果见图 1 , 图 2 。二者均
在 5 1 o n m 处有最大吸收峰 ,故选择 5 1 0n m 为测定波长 。
3
.
30 J 3
·
29 9」
.2 5 0
霆’ · 5 0来
彭
0
.
50 0
2
.
50 0
.0 5 0
一
0 2 9 7
·
0
.
29 3
3 0 0 50()
波长 J n/ m
3 00 50 0
波长义 n/ m
图 1 芦丁标准品的吸收曲线 图 2 金毛狗的吸收曲线
3
.
1
.
5 校准曲线的制备
准确量取芦丁标准溶液 。 、 0 . 4 、 0 . 8 、 1 . 2 、 1 . 6 、 2 . 0 、 2 . 4 、 2 . 8 、 3 . Zm L 分别置于 l o m l砂 刻度试管
中 ,均用水稀释至 4 . o m L ,按 3 . 1 . 4 项操作 ,配制各溶液 。 以 。号试剂空白作参比 ,在 5 10n m 处分别
测定吸光度 A ,以吸光度 A 为纵坐标 ,浓度 C 为横坐标绘制校准曲线 , 得回归方程 A 一 0 . 1 1 0 6 C 一
0
.
0 0 5 4 3
, r 一 0 . 9 9 9 5 ( n = 8 ) 。 结果表明芦丁含量在 0 . o g o m g / l o o m L一 7 . Z o o m g / i o om L 范围内与吸
光度线性关系良好 。 见图 3 。
0
.
8 0 0
。 . 6 0
八UōU月峥.0
气侧来督
.0 2 0
.0 X() 0
0 1 0 3
.
0 5 0
浓度 C加.g I 0m0 L
图 3 芦丁校准曲线
3
.
1
.
6 稳定性试验
准确量取芦丁标准溶液 2 . o m I J ,其余操作按 3 . 1 . 4 项操作 ,配制溶液 , 以试剂空白作参比 ,在
5 10 n m 处测定吸光度 A ,按时间扫描的操作方法对时间进行扫描 ,结果表明在 s m in 一 h4 内吸光度
稳定 。
光谱实脸室 第 23卷
3
.
1
.
7样品浏定
准 确 t取 金 毛 狗 供 试 品
1
,
Om L
,
6份 , 按 3 . 1 . 4项操作 , 配制
各溶液 。 以试样空 白作参比 , 在
5 1On m 处测定各吸光度 ,并计算含
量 ,结果见表 3 。
3
.
1 8 回收率试脸
表、 3 总黄困含 , 的侧定结 .
序号 吸光度 ( A ) 总黄酮含通 (% ) 平均含 t (% ) R S D (% )
1 0
.
2 12 0
.
7 9 6
2 0
.
2 1 1 0
.
7 9 2
3 0
.
2 1 4 0
.
8 0 4 0
.
7 9 6 0
.
8 4
4 0
.
2 1 4 0
.
8 0 4
5 0
.
2 1 1 0
.
7 9 2
6 0
.
2 1 0 0
.
7 8 8
表 4 加样回收率
分别准确量取金毛狗供试品 。 . s m L
6份 ,分别加人 2 2 . s m g八 o o m L 芦丁标准
0
.
,`
、
0
.
6
、
0
.
7
、
0
.
8
、
0
.
9
、
1
.
o m L
,按 3 . 1 . 4
项操作 , 测定各吸光度 A ,得样品的平均
回收率 1 0 . 6% , 结果见表 4 。
3
.
2 元素含 , 的测定
3
. 二弓 1 样品处理
样品 t
( m g )
0
.
1 9 9
0
.
1 9 9
0
.
19 9
0
.
1 9 9
0
.
1 9 9
0
.
1 9 9
加人里
( m g )
0
.
1 1 3
0
.
1 3 5
0
.
1 5 8
0
.
1 8 0
0
。
2 0 3
0 2 2 5
测得值
( m g )
0
.
3 1 5
0
.
3 3 5
0
.
3 5 2
0
.
3 8 0
0
.
3 9 7
0
。
4 3 2
回收率
(肠 )
平均回收率
1 0 3
1 0 1
9 6
.
8
1 0 1
9 7
.
5
1 04
(纬 )
10 0
.
6
分别准确称取 1 . 0 0 09 金毛狗干样品 ,置人微波消解罐的内罐 ,各加人 I Om l 』 浓 H N O , ,加盖过
夜 , 按微波消解仪的操作步骤进行消解 ,压力 5 档 ,微波加热时间 1 0m in 。 消解完毕 , 自然冷却 , 取
出 ,加一滴 30 % H ZO : ,然后用 5 % H N O 3 定容至 25 . o m L 。 以同样方式处理空白溶液 。
3
. 公. 2 含童浏定
用经过试验选定的各元素分析线和适当的仪器工作条件设定程序 , 用标准溶液系列制作校准
曲线 ,依次进行空白样品和试样的测定 。 IC P一 A E S 操作条件 : 发射功率为 1 150 w ,泵速为 l o o rP m ,
辅助器流最为 1 . o L /m in ,雾化器压力为 179 . 6 8 kP a ,积分时间为 s5 ,冷却气流量为 4 , OL /m in 。 测定
结果见表 . 5 。
表 5 金毛狗样品中微工元众的含 l ( p g / g )
(二a C o C u eP M g M n N i Z n P b C d
12 4 2 0
·
0 2 0 8 8
·
8 4 5 1 1 34 8 7 4
,
3 1 79
.
4 80
.
1 5 64
.
7 8 未检出 未检出
样品微量元素含量年 g / g ) ~ 测定值 (拌g / m L ) X 2 5
.
0 0 ( m L )
样品重 ( g )
4 结论
黄酮类化合物是植物中非常重要的一类次生代谢产物 ,是植物中广泛存在的一种有效成分 ,具
有活血化淤 、保肝抗炎 、抗菌 、 抗病毒及泻下 、 解痉的多种药理作用 。黄酮能与多种元素形成配合物 ,
其配合物有抗菌消炎作用 stj 。 另外黄酮类化合物具有抗癌 、抗氧化作用困 。 因此 ,对金毛狗中总黄酮
成分分析与微量元素含量测定 ,是了解中药金毛狗的药理作用和合理开发的重要基础工作 。总黄酮
提取的最佳条件是用 60 %乙醇在 50 ℃下超声波提取 1 . h0 、提取体积 10 0 m L 、提取 2 次 。 金毛狗中
总黄酮的含量为 0 . 7 9 6% 。 经元素分析 ,金毛狗中 C a 、 F e 、 M g 、 元素的含量很丰富 , M n 、 N i 、 Z n 、 C u 的
含量次之 , C。 含 t 低 ,有毒有害的元素 Pb 、 C d 均未检出 。
上述结果为金毛狗总黄酮的提取方法 , 及药效功能的进一步研究和资源开发利用提供了科学
依据 。金毛狗中的黄酮成分及丰富的微量元素与其抗菌抗病毒 、抗癌抗氧化的关系有待进一步的研
第 1 期 叶筱琴等 : 金毛狗中黄酮成分与微量元素的分析测定
究 。
参考文献
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D e t e r m i n a t i o n o f F I a
v o n o id s a n d T r a e e E l e m e n t s i n C i b o t i u m
.
B a r o m e t z
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.
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.
8 4 % ( n = 6 )
.
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T h i s w o r k o f f e r s t h e n e w s e i e n t i f ie d a t a f o r
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.
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为答谢作者和长期订户对本刊的支持 ,本期发表的《邮票上的化学 、 光学和光谱学史 》还印有少量彩色抽
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建林 , 邮编 : 1 0 0 0 9 5 。 赠送截止 日期 : 2 0 0 6年 6 月 30 日 。
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《光谱实验室 》编辑部
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