全 文 ：【文章编号】1005-4057( 2005) 02-0119-02
纯化半边旗抗肿瘤有效成分 5F的新方法
龚先玲1 ,陈志红2 ,梁 统1 ,梁念慈1
( 1.广东医学院广东天然药物研究与开发重点实验室 ,广东湛江 524023;
2.广东医学院分析中心 ,广东湛江 524023)
【基金项目】国家自然科学基金项目 ( 3987099) ;广东医学院青年基
金 (X Q0208)
【收稿日期】2004-11-05;【修订日期】2004-12-10
【作者简介】龚先玲 (1975-) ,女 ,理学硕士 ,助教。
【摘要】目的: 寻找分离纯化半边旗抗肿瘤有效成分 5F的新方法。方法: 提取分离出 5F精提物后 ,以 H60型硅胶为填料 ,
采用不同的溶剂系统石油醚和丙酮的混合液 ,氯仿和甲醇的混合液洗脱 ,分离纯化 5F。结果:经薄层色谱鉴定 ,可以得到纯
的 5F。 结论: 分别采用两种不同的溶剂系统洗脱硅胶柱 ,可以有效地纯化半边旗抗肿瘤有效成分 5F。
【关键词】半边旗 ;纯化 ;抽提
【中图分类号】R 06-332 【文献标识码】A
A new method for purifying the anti-tumor ingredient 5F fromPteris semipinnata
GONG X ian-ling , CHEN Zhi-hong ,LIAN G Tong , LIANG N ian -ci
( Guangdong Key Laboratory for Research and Development of Natural Drug s,
Guangdong Medical Colleg e, Zhanjiang 524023, China )
【Abstract】Objective: To find an idea l method fo r isolating and purifying the activ e anti-tumo r ing redient 5F fr om
Pteris semipinnata . Methods: Af ter the rude ex tract containing 5F was prepa red, H60 silica g el co lum n w as used to purify
the ing redient 5F by the com plex so lv ent sy stems w ith chlor ofo rm-methanol or pet ro teum e the r-acetone. Results: The
purified ing redient 5F was confirmed with the thin lay er chromo tog raphy. Conclusion: The anti-tumo r ing redient 5F is
obtained by the purifica tion w ith the chromatog r aphy on H60 silica g el column through two solv ent sy stems described
above.
【key words】Pteris semipinnata; purification; ex t raction
半边旗 ( Pteris sem ipinnata )是凤尾蕨科凤尾蕨属
植物 ,广泛分布于我国南方各省 ,民间用于治疗菌痢、
肝炎、肠炎、毒蛇咬伤等 [1 ]。 本课题组发现半边旗有明
显的抗肿瘤作用 [2～ 4 ] ,但其抗肿瘤有效成分之一 5F,
常与其他物质混在一起 ,难于分开。虽然兰柳波等 [ 5]发
现用 AgNO3结合的硅胶柱可以纯化得到 5F,但过程
略嫌繁琐。本文介绍一种采用不同溶剂系统分离纯化
5F的新方法。
1 材料与方法
1. 1 材料
半边旗采于广东省广州市郊区 ,并由湛江海洋大
学扬燕君副教授鉴定。 活性炭由广东省台山化工厂生
产 ;硅胶 H60型及薄层层析硅胶板 HF254均由青岛海洋
化工厂生产 ;有机溶剂石油醚 ( b. p. 60～ 90℃ )、丙
酮、氯仿、乙醇、甲醇均为分析醇 ,由广州试剂厂生产 ;
浓硫酸为分析纯 ,由广州东红化工厂生产。显色剂为
10%硫酸-乙醇溶液。 5F标准品由兰柳波老师提供 (经
日本东京理科大学药学部和广东医学院医用生化研究
所鉴定 )。 浓缩用的 R系列旋转蒸发仪由上海申生科
技有限公司生产。
1. 2 方法
半边旗全草洗净晒干经乙醇冷浸提取、过滤 ,该祛
掉浓缩滤液至原体积的一半 ,浓缩液经活性炭脱色 ,得
粗提物。粗提物用硅胶柱层析 ,氯仿和甲醇混合液梯度
洗脱 (体积比为 99∶ 1～ 95∶ 5) ,分段收集、点板 ,该祛
掉相同的组分合并 ,经浓缩 ,重结晶后得到 5F的精提
物 (多含 4F)。 5F、 4F的结构式详见图 1。
1. 3 5F的分离与纯化
5F的精提物用丙酮溶解、拌硅胶、晾干与硅胶柱
层析 ( 4 cm× 80 cm ) [6 ] , 石油醚和丙酮混合液梯度洗
脱 (体积比为 4∶ 1～ 3∶ 1) ,分段收集 ,点板、合并与浓
缩得到 6个部分 ;其中第 6部分再用硅胶柱层析 ,氯仿
119
第 23卷第 2期
2005年 4月
广 东 医 学 院 学 报
JO URNAL OF GU ANGDONG M EDICAL COLLEGE
Vo l. 23 No. 2
Apr. 2005
/甲醇梯度洗脱 (体积比为 99∶ 1～ 98∶ 2) ,分段收集、
点板、合并与浓缩得到 5F的纯品。
A: 5F ( 11α-羟基 -15-氧 -16-烯 --对映贝壳杉烷 -19-酸 )
B: 4F ( 11α-羟基 -15-氧 -16( R)甲基 -对映贝壳杉烷 -19-酸 )
图 1 5F、 4F的结构式
1. 4 薄层色谱鉴别 5F
取上述含有 5F的精提物 1 mg,分离得到的 5F
1 mg ,分别用 1 mL丙酮溶解 ,制成 1 g· L- 1的溶液 ,
作为供试品溶液。另取标准品 5F加丙酮制成每 1 mL
含 1 mg的溶液 ,作为标准液。依照《中国药典》 2000年
版一部附录 (Ⅵ B)试验薄层层析法 ,吸取上述三种溶
液各 2μL,分别点于同一薄层层析板 HF254上 ,以氯
仿:甲醇= 95∶ 5展开 ,取出 ,晾干 ,喷 10% H2 SO4-乙
醇溶液 ,加热至 120℃ ,结果如图 2A。按照同样的方法
用石油醚:丙酮= 7∶ 3展开 ,取出 ,晾干 ,喷 10%硫酸-
乙醇溶液 ,加热至 120℃ ,结果如图 2B。
A. 氯仿∶甲醇 = 95∶ 5 B.石油醚∶丙酮= 7∶ 3
1. 5F的精提物 ; 2. 5F标准品 ; 3. 5F纯品
图 2 5F的薄层层析色谱图
2 结果
如图 3所示 ,纯化前的混合物出现以 5F和 4F为
主的两个斑点 ,纯化后只有 5F一个斑点。用不同溶剂
系统的展开剂展开 ,纯化后的 5F只有一个斑点。说明
分离得到的 5F已达到纯化的目的。
3 讨论
利用以往常规提取工艺 ,由于 5F多和 4F混在一
起 ,难于分开。本文的依据是色谱理论原理 ,当分离度
R> 1. 5时 ,相邻两斑点可达到基线分离的目的 [7 ]。 由
于石油醚 /丙酮对 5F和 4F的分离度 R,比氯仿 /甲醇
对 5F和 4F的分离度大 ,而且能使 5F和 4F达到基线
分离的目的 ,因此选用石油醚 /丙酮系统来纯化 5F和
4F的混合物。 但用此系统洗脱收集到的以 5F为主的
混合物中 ,含有少量的 6F,而氯仿 /甲醇系统对该混合
物的分离度大 ,优于石油醚 /丙酮系统 ,因此需用氯仿 /
甲醇洗脱系统进行进一步的分离纯化。这样 ,结合两种
洗脱系统可达到纯化 5F的目的。由于 4F和 5F结构
的相似性 ,要大量制备 5F纯品还比较困难。本文只是
从分离纯化的角度进行探索和尝试 ,并为提取半边旗
有效成分的工艺改进提供参考 ,也从药物分析的角度
提供标准品。
参考文献:
[ 1 ]丁恒山 .中国药用孢子植物 [M ].上海: 上海科技出版社 ,
1982: 104.
[ 2]崔燎 ,梁念慈 ,陈志东 ,等 .半边旗体内外抗癌作用及急性毒
性研究 [ J].中药材 , 1996, 19( 1): 29-32.
[ 3]张晓 ,崔燎 ,田中信寿 ,等 .半边旗有效成分及抗肿瘤活性研
究 [ J].中国药学杂志 , 1997, 32( 1): 37-38.
[ 4]李金华 ,梁念慈 ,莫丽儿 ,等 . 半边旗 5种成分体外细胞毒活
性比较及构效关系分析 [ J].药学学报 , 1998, 33( 9): 641-
644.
[ 5]兰柳波 ,邓亦峰 ,梁念慈 ,等 .一种分离与纯化半边旗有效成
分 5F的新方法 [ J ].广东医学院学报 , 2003, 21( 2): 100-
101.
[ 6 ]姚新生 .天然药物化学 [M ].第 2版 .北京 :人民卫生出版
社 , 1994: 32.
[ 7]何丽一 . 平面色谱方法及应用 [M ]. 北京: 化学工业出版
社 , 2000: 9.
120 广 东 医 学 院 学 报 2005年第 23卷