全 文 ：中仅有 6个碳信号 ,表明分子具有对称性。根据以
上分析 ,确定化合物 3 为对羟基苯乙酸 。化合物 3
的光谱数据:IRcm-1:3410.1 ～ 2552.5(br ,OH),1705.7
(C =O), 1610.0 , 1600.9 , 1518.8 , 1446.3 , 1236.6 ,
1192.5 ,827.8;1HNMR(DMSO-d6)δppm:3.38(2H , s , 7-
H),6.67(2H ,d , J=6.8Hz ,3-H and 5-H),7.01(2H , d ,
J=6.8Hz , 2-H and 6-H), 9.68(2H ,brs ,2OH);13CNMR
(DMSO-d6)δppm:126.1(s ,C-1), 131.1(d , C-2 and C-
6),116.0(d , C-3 and C-5), 156.6(s , C-4),40.7(t , C-
7), 174.5(s , C-8);EIMSm/ z(%):152[M] +(39),107
[M-COOH] +(100),79[M-COOH-CO] +(18),77(35)。
参 考 文 献
1 　毕韵梅 ,等.头孢霉 AL031 真菌菌丝体化学成分研究.
中药材 , 2001 , 24(8)∶568
2　毕韵梅 , 等.头孢霉 AL031 真菌菌丝体化学成分研究
(Ⅱ).中药材 , 2003 , 26(1)∶21
3 　毕韵梅 ,等.头孢霉 AL031 菌株液体培养工艺的研究.
中国医药工业杂志 , 2001 , 32(1)∶488
4 　Nishitoba Y , et al.Lichen acids , plant growth inhibitors from
Usnea longissima , Phytochemistry , 1987 , 26(12)∶3181
5 　Franck B , et al.Fungi components.22.Oxidative cyclization
of hydroxybenzpohenones.Chem.Ber., 1973 , 106(4)∶1182
(2003-09-23收稿)
Phenolic Acid from Culture Broth of Fungus Cephalosporium sp.AL031
Bi Yunmei1 , Bi Xubin2 , Zhao Qianrong1 , Du Xia1
(1.Department of Chemistry , Yunnan Normal University , Kunming 650092;2.Yunnan Institute of Animal Husbandry and Veterinary Sci-
ence , Kunming 650224)
Abstract　Three phenolic acids were isolated from the culture broth of the fungus Cephalosporium sp.AL031 whose metabolites have
been proven to possess antifungal and antibacterial activities.Their structures were elucidated as 2 , 4-dihydroxy-3 , 6-dimethyl-benzoic acid(1),
3 , 6-dihydroxy-2 , 4-dimethylbenzoic acid(2)and 4-hydroxy-pheny lacetic acid(3)by IR , EIMS , 1HNMR , 13CNMR , DEPT , HMQC and HMBC.
Key words　Cephalosporium;Phenolic acids
中药狗脊多糖的含量测定及高效
毛细管电泳指纹图谱分析
许重远1　陈振德2　晏　媛1　陈志良1　张　 3
(1.第一军医大学南方医院 ,广州 510515;2.深圳市第二人民医院药学部 ,深圳 518029;3.广东工业大学 ,
广州 510090)
　　摘要　采用苯酚-硫酸比色法测定不同产地狗脊及狗脊炮炙品中多糖的含量 , 并对多糖进行高效毛细管电泳
指纹图谱分析。
关键词　狗脊　多糖　高效毛细管电泳　指纹图谱
　　中药狗脊为蚌壳蕨科植物金毛狗脊 Cibotium
barometz(L.)J.Sm.的干燥根茎 ,为常用中药 ,历版
中国药典均有收载。多糖是其重要的活性成分 ,我
们在对狗脊的根进行系统化学成分研究中 ,提取分
离了其多糖部分并测定了其含量 ,并用高效毛细管
电泳构建其指纹图谱 ,现报道如下 。
1 　材料与仪器
1.1 　材料　供试药材见表 ,均经笔者鉴定 ,凭证标
本存放于第一军医大学南方医院药学部植化室。
1.2 　仪器与电泳条件　UV-265FW 紫外分光光度
计(日本岛津);沙多利士 R200D 型电子天平(德
国);美国 BIO-RAD 公司 BioFocusTM 3000 型Capillary
Ion Analyzer ,配有紫外扫描检测器。熔融石英毛细
管 75μm×60 cm(河北永年光纤厂)。电解缓冲液为
300mmol/L硼酸盐溶液(pH8.5);电压为20 kV;温度
20℃;紫外检测波长 260 nm;重力进样 ,时间5 s。开
机后先用0.1 mol/L 氢氧化钠冲洗毛细管2 min ,再
用去离子水冲洗 5 min ,然后用缓冲液冲洗至基线平
稳后开始进样。每两次进样之间设定缓冲液冲洗
2min 。
1.3 　试剂　无水葡萄糖对照品(AR),苯酚(AR),
浓硫酸(AR),所用试剂均为分析纯 。
·22· 中药材第 27 卷第 1期 2004年 1 月
DOI :10.13863/j.issn1001-4454.2004.01.014
2 　方法
2.1 　狗脊多糖的提取与精制　取狗脊适量 , 60℃
烘干 ,粉碎 ,过 20目筛。称取 100 g 置 1000 ml圆底
烧瓶中 ,加 80%乙醇 900 ml ,浸泡过夜 ,90℃回流 1
h ,趁热过滤 。滤渣加入 800 ml水 ,浸泡 1 h , 90℃温
浸1 h ,滤过 ,药渣加水 400 ml ,90℃温浸 30 min ,滤
过 ,合并滤液 ,减压浓缩至 100 ml ,用氯仿萃取 3次 ,
水液加 1%活性炭脱色 2次 ,抽滤 ,滤液加 85%乙醇
使醇含量达 80%,4℃以下放置过夜。滤过 ,残渣先
后用 85%乙醇 ,无水乙醇和丙酮依次洗涤 3次 ,样
品置真空干燥器中干燥 ,得精制狗脊多糖。
2.2 　对照品溶液的制备　精密称取 105℃干燥至
恒重的葡萄糖 28.5 mg ,加水溶解并定量至 100 ml。
2.3 　标准曲线的绘制　分别吸取对照品溶液 1.0
ml、3.0 ml 、5.0 ml 、7.0ml、9.0 ml 、11.0ml和13.0 ml ,
置于 50 ml容量瓶中 ,加水稀释至刻度 ,各精密吸取
2.0 ml于具塞试管中 ,加入 1.0 ml 5%苯酚溶液 ,再
垂直加入 5.0ml浓硫酸 ,静置 5 min ,振摇 ,置沸水中
保温 15 min ,冷却 ,在 490 nm波长处测吸收度 ,以葡
萄糖量为横坐标(X),吸收度为纵坐标(Y),绘工作
曲线。得回归方程:Y=36.3388×10-3X+1.1645×
10
-3 , r=0.9944(n=3),线性范围为:1 ～ 10 μg/ml。
2.4 　换算因子的测定　精密称取多糖 23.0 mg ,溶
解并稀释至 100 ml ,摇匀 ,吸取 2.0 ml ,加入 1.0 ml
苯酚溶液 ,再垂直加入5.0 ml浓硫酸 ,静置 5min ,振
摇 ,置沸水中保温 15 min ,冷却 ,在 490 nm波长处测
吸收度 ,重复 4次。另精密称定一份对照品 0.2 g ,
用蒸馏水稀释至 100 ml ,量取 2 ml再稀释至 100 ml ,
测定其吸收度。用外标法计算其葡萄糖含量 。按下
式计算多糖换算因子:J=W/C×D(式中:W为实际
多糖量 , C 为供试液中葡萄糖量 , D 为稀释因子)。
求得 J为 13.95×10-3 。
2.5 　样品测定　精密称取不同产地狗脊粉末 100
mg ,于 100 ml平底烧瓶中加入 80%乙醇 50 ml ,回流
1 h ,趁热过滤 ,滤渣以 80%乙醇洗涤 3次 , 每次 20
ml。药渣置平底烧瓶中 ,加蒸馏水 50ml ,回流 1 h过
滤 ,用蒸馏水洗涤 4次 ,每次 5 ml ,转移滤液于 100
ml容量瓶中 ,冷却后定容 。精密吸取2.0ml ,置具塞
试管中 ,按标准曲线项下同法操作 ,测吸收度 ,用外
标法计算多糖含量。
2.6 　样品液 HPCE测定　按 1.2所述电泳条件进
行测定。
3 　结果
3.1 　狗脊多糖含量见表 , 多糖加样回收率为
98.3%, RSD=2.31%(n=5)。
　表 不同产地的狗脊多糖含量(n=5)
材料 来源 多糖含量(%)
生药狗脊 云南景洪 4.27
生药狗脊 广西龙胜 2.63
生药狗脊 福建武夷山 2.44
炮炙药材 广东省药材公司 1.26
3.2 　不同产地狗脊所含多糖的 HPCE 图谱基本一
致 ,从图中可看出 ,狗脊主要含两种多糖 ,其迁移时
间分别在 10.45 min和 10.95 min 左右 ,平均相对含
量分别为 32.58%和 48.08%, RSD<3.0%(n=5)。
但经炮炙后的药材多糖成分和相对含量有明显改
变 ,以上两种多糖仍存在 ,但平均相对含量分别为
23.98%和 31.25%, RSD<3.0%(n=5)。另外还有
一些肩峰和小峰出现 ,其中迁移时间在13.49min的
峰较大 ,平均相对含量为 6.96%, RSD<3.0%(n=
5)。
图　狗脊多糖 HPCE图谱
A.狗脊生药　B.炮炙药材
4 　讨论
有文献提及狗脊含淀粉约 30%〔1〕 ,但未见狗脊
多糖含量的报道。本文首次对不同产地的狗脊多糖
进行了测定 ,发现多糖含量高低相差较大 ,其中云南
狗脊多糖含量较高 ,而炮炙药材多糖含量较低 ,相差
约 3倍。
参 考 文 献
1 　中科院药物所.中药志(第二册).北京:人民卫生出版
社 , 1982∶436
(2003-10-08收稿)
·23·中药材第27卷第 1 期 2004 年 1月