全 文 ：江西农业学报 2012，24(6) :153 ～155
Acta Agriculturae Jiangxi
建立景迈茶区春季晒青毛茶指纹图谱的研究
李 扬，周斌星* ，杨 超，罗 玲，郭 威，柴 洁，马存强
收稿日期:2012 －04 －05
基金项目:国家级课题“普洱茶深加工产品研究开发”(2007BAD58B03)。
作者简介:李扬(1986─) ，男，云南昆明人，硕士研究生，主要从事茶叶深加工技术与原理研究。* 通讯作者:周斌星。
(云南农业大学 龙润普洱茶学院，云南 昆明 650201)
摘 要:确定了建立景迈茶区春季晒青毛茶高效液相指纹图谱的方法:采用线性梯度洗脱，以乙腈和 2%乙酸水溶液为流
动相，检测波长 280 nm，柱温 30 ℃。景迈茶区不同晒青毛茶样品的指纹图谱具有极高的相似度，但景迈茶区晒青毛茶的标准
图谱与其他地区茶样间的相似度差异较大。
关键词:高效液相色谱;指纹图谱;春季;晒青毛茶;质量评价
中图分类号:S571． 1 文献标识码:A 文章编号:1001 －8581(2012)06 －0153 －03
Study on Establishment of Fingerprint Map of Spring
“Shaiqingmao”Tea in Jingmai Tea Area
LI Yang，ZHOU Bin － xing* ，YANG Chao，LUO Ling，GUO Wei，CHAI Jie，MA Cun － qiang
(College of Puer Tea Science，Yunnan Agricultural University，Kunming 650201，China)
Abstract:The author studied the method for establishing the high － performance liquid chromatographic fingerprint map of spring
“Shaiqingmao”tea in Jingmai tea area，and it was ascertained as follows:adopting a linear gradient elution，taking acetonitrile and
2% acetic acid water solution as mobile phase，with the detection wavelength of 280 nm and the column temperature of 30 ℃． The fin-
gerprint maps of different“Shaiqingmao”tea samples in Jingmai tea area had a very high similarity，but there was great difference in
fingerprint map between Qingmai tea sample and other tea sample．
Key words:High － performance liquid chromatography;Fingerprint map;Spring;“Shaiqingmao”tea;Quality evaluation
化学指纹图谱是一种从整体上研究复杂物质体系的
技术工具，现在已经在环境保护、石油勘探和食品评价等
许多领域中得到广泛的应用，也是目前中药现代化研究
中的热点之一，已成为国际公认的控制中成药或天然药
材质量的最有效的手段［1 －2］。化学指纹图谱技术通过采
用一定的提取分离程序去除那些存在于植物中的非特征
性成分，获取该种植物中具有特征性化学成分的总提取
物，再采用现代分析手段测定这种特征性总提取物的图
谱，来建立对植物特征性化学成分的总体描述，具有整体
性和模糊性两大特征［3］。成浩等的研究结果表明，茶叶
的化学指纹图谱能够很好地表征产品的原料品种
属性［5］。
高效液相色谱(HPLC)是以经典液相色谱法为基
础，引入 GC理论的分离分析方法，它只要求样品能制成
溶液，分析对象广，对于挥发性低、热稳定性差、分子质量
大的高分子化合物以及离子型化合物的分离尤为适用。
HPLC具有分辨率高、分析速度快、重现性好的特点，非
常适合于构建茶叶指纹图谱［4］。
王丽鹭等［3］的研究结果表明，利用 HPLC 所建立的
化学指纹模式图谱较好地代表了其来源样本的特征属
性。成浩等［5］研究发现采用 HPLC方法结合判别技术对
茶产品的产地属性进行鉴别或验证分析是可行的。宁井
铭等［6］明确了普洱晒青毛茶高效液相色谱指纹图谱的
不同识别方法，这为普洱茶原料鉴别和质量控制提供了
新的试验依据。
随着普洱茶的发展，作为普洱茶原料的云南晒青毛
茶的市场发展越来越快，同时也涌现了大量普洱茶(生
茶)和晒青茶的消费者，晒青茶的价格也不断攀升，而且
表现出与地域性关系密切的特征。目前辨别地域性茶已
经成为市场的需要，而鉴别茶地域性的最佳途径就是建
立指纹图谱。因此，建立各个地区晒青毛茶的指纹图谱，
对于其市场的健康发展有着重大的意义。
1 材料与方法
1． 1 实验材料 本实验所用茶样均由实验者于景迈茶
区当地制备。茶样为 2011年 3 ～5月于景迈山大平掌固
定区域采制，采样标准为一芽二叶。实验者选定茶园后，
在茶园中划出一个方形区域，以东南西北方位为 4 个角，
并且在 4个角及正中央 5 个点上选择相邻茶树进行采
摘，采摘标准为一芽二叶，之后通过杀青 －揉捻 －晒干工
艺制成晒青毛茶。茶样分别为:景迈 1 号、景迈 2 号、景
迈 3号、景迈 4号、景迈 5号。
1． 2 主要实验试剂 纯净水、乙腈、乙酸。
1． 3 主要实验仪器 电子分析天平(上海精天电子仪器
厂)、数显恒温水浴锅(北京市光明医疗仪器厂)、FZ102
微型植物试样粉碎机(广东省顺德市今日电器实业有限
公司)、高效液相色谱仪(美国安捷伦)。
1． 4 实验方法
1． 4． 1 试液的制备 称取 3 g磨碎试样于 500 mL 锥形
瓶中，加沸蒸馏水 450 mL，立即进行沸水浴，浸提 45 min
(每隔 10 min摇动 1 次)。浸提完毕后立即趁热减压过
滤。残渣用少量热蒸馏水洗涤 2 ～ 3 次，滤液合并移入
500 mL容量瓶中，冷却后用蒸馏水稀释至刻度。
1． 4． 2 检测项目及分析测定方法 通过 HPLC 仪器检
测上述所制茶汤于 280 nm紫外光下出峰的主要物质，进
样量为 10 μL。
1． 4． 3 色谱条件 流动相为乙腈和 2%乙酸水溶液的
混合溶液，A 相为乙腈，B 相为 2%乙酸水溶液，梯度洗
脱，流速为 1 mL /min。色谱柱:安捷伦反相 C18 色谱柱
(250 mm ×4． 6 mm，5 μm) ;检测波长为 280 nm;柱温为
30 ℃。梯度洗脱程序见表 1。
表 1 流动相梯度
流动相
运行时间 /min
0 50
A液 /% 92 69
B液 /% 8 31
1． 4． 4 方法学考察
1． 4． 4． 1 精密度 取样品溶液 10 μL 进样，连续进样 5
次，检测指纹图谱，以保留时间为 15． 8 min 的峰(S 峰)
作为标准峰，测得共有峰保留时间和相对峰面积(表 2)。
各共有峰的相对保留时间RSD ＜3%，相对峰面积的RSD
＜3%;以第一张图为参照谱，进行自动匹配，各指纹图谱
的相似度 ＞97． 0%，精密度良好，符合指纹图谱研究的技
术要求。
表 2 晒青毛茶共有峰保留时间与相对峰面积
峰编号 共有峰保留时间 /min 相对保留时间 共有峰面积 相对峰面积
1 3． 930 ±0． 005 0． 248 ±0． 000 582． 329 ±11． 859 0． 077 ±0． 002
2 4． 896 ±0． 007 0． 309 ±0． 001 2230． 740 ±14． 011 0． 294 ±0． 000
3 5． 792 ±0． 009 0． 365 ±0． 001 906． 310 ±6． 870 0． 120 ±0． 001
4 7． 743 ±0． 008 0． 488 ±0． 001 778． 760 ±9． 647 0． 103 ±0． 001
S 15． 852 ±0． 013 1． 000 ±0． 000 7582． 990 ±48． 207 1． 000 ±0． 000
5 21． 070 ±0． 028 1． 329 ±0． 001 523． 848 ±15． 648 0． 069 ±0． 002
7 32． 260 ±0． 040 2． 035 ±0． 002 473． 304 ±10． 218 0． 062 ±0． 002
1． 4． 4． 2 重复性 取同批次茶样，平行 5 份，依 1． 4． 1
项方法制备供试品溶液，检测指纹图谱。以保留时间为
15． 8 min的峰(S峰)作为标准峰，测得共有峰保留时间
和相对峰面积(表 3)。各共有峰的相对保留时间 RSD ＜
3%，相对峰面积的 RSD ＜ 3%;以第一张图为参照谱，进
行自动匹配，各指纹图谱的相似度 ＞ 97． 0%，重复性良
好，符合指纹图谱研究的技术要求。
表 3 晒青毛茶共有峰保留时间与相对峰面积
峰编号 共有峰保留时间 /min 相对保留时间 共有峰面积 相对峰面积
1 3． 929 ±0． 017 0． 247 ±0． 001 575． 005 ±19． 888 0． 077 ±0． 002
2 4． 894 ±0． 039 0． 308 ±0． 001 2209． 874 ±41． 507 0． 296 ±0． 002
3 5． 796 ±0． 052 0． 365 ±0． 001 910． 600 ±18． 184 0． 122 ±0． 001
4 7． 745 ±0． 066 0． 488 ±0． 001 760． 019 ±16． 334 0． 102 ±0． 000
S 15． 883 ±0． 099 1． 000 ±0． 000 7477． 829 ±185． 491 1． 000 ±0． 000
5 21． 106 ±0． 178 1． 329 ±0． 003 527． 507 ±8． 041 0． 071 ±0． 002
7 32． 276 ±0． 206 2． 032 ±0． 001 524． 313 ±19． 325 0． 070 ±0． 001
1． 4． 4． 3 稳定性 取上述样品溶液，分别在 0、24、48、72
h进样，检测指纹图谱，以保留时间为 15． 8 min 的峰(S
峰)作为标准峰，测得共有峰保留时间和相对峰面积(表
4)。各共有峰的相对保留时间 RSD ＜ 3%，相对峰面积
的 RSD ＜3%;以第一张图为参照谱，进行自动匹配，各指
纹图谱的相似度 ＞ 95． 0%，结果表明样品在 72 h 内
稳定。
表 4 晒青毛茶共有峰保留时间与相对峰面积
峰编号 共有峰保留时间 /min 相对保留时间 共有峰面积 相对峰面积
1 3． 924 ±0． 009 0． 247 ±0． 001 580． 372 ±12． 480 0． 077 ±0． 001
2 4． 886 ±0． 018 0． 308 ±0． 001 2194． 865 ±41． 700 0． 293 ±0． 002
3 5． 783 ±0． 023 0． 365 ±0． 001 902． 336 ±23． 373 0． 120 ±0． 002
4 7． 733 ±0． 029 0． 488 ±0． 001 762． 568 ±6． 425 0． 102 ±0． 000
S 15． 857 ±0． 056 1． 000 ±0． 000 7498． 301 ±81． 048 1． 000 ±0． 000
5 21． 049 ±0． 096 1． 327 ±0． 002 532． 758 ±14． 280 0． 071 ±0． 002
7 32． 205 ±0． 078 2． 031 ±0． 002 490． 849 ±8． 936 0． 065 ±0． 001
451 江 西 农 业 学 报 24卷
2 结果与分析
2． 1 景迈茶区春茶标准图谱的生成 精密称取样品，依
法制备样品，按 1． 4． 3 项下的色谱条件进样，记录色谱
图。根据 5批次样品指纹图谱的特点，以 7 个主要色谱
峰作为标记进行多点校正(见图 1)。应用中药色谱指纹
图谱相似度评价系统 A版，采用平均数法生成对照图谱
(见图 2)。积分参数:斜率灵敏度 1，峰宽 0． 04，最小峰
面积 1，最小峰高 1． 7。积分区间:0 ～50 min。
图 1 景迈茶区春茶的指纹图谱
图 2 景迈茶区春茶的标准图谱
2． 2 景迈茶区春茶指纹图谱的相似度 由表 5 可见:景
迈茶区不同春茶样品的高效液相图谱相似度极高，以景
迈 1号为参照，差异性最大的景迈 4 号也有高达 98． 9%
的相似度，差异性极不显著。以标准图谱为对照的话，差
异性最大的景迈 4 号则达到了 99． 3%的相似度。一般
认为相似度高于 95%即为相似度高。本实验中的 5 个
图谱相似度极高，能够准确反映出景迈茶区春季晒青毛
茶的物质分布规律性。
表 5 5个景迈春茶茶样的相似度 %
茶样 相似度(参照) 相似度(对照)
景迈 1号(S) 100． 0 99． 9
景迈 2号 99． 7 99． 9
景迈 3号 99． 8 99． 8
景迈 4号 98． 9 99． 3
景迈 5号 99． 9 99． 8
2． 3 景迈茶区春茶标准图谱与其它茶样图谱的差异性
将测试茶样的指纹图谱与景迈茶区春茶样品的标准图
谱进行比对分析，结果显示:景迈茶样的标准图谱与测试
茶样图谱间的相似度最低仅有 80． 3%，最高有 98． 9%
(见表 6)。因此可以断定:测试茶样 2、3、4、5 均非景迈
茶区春季所产的晒青毛茶，而测试茶样 1 则有可能是景
迈晒青毛茶。
表 6 不同茶样的图谱与景迈春茶样品
标准图谱的相似度 %
茶样 相似度(对照)
景迈春茶样品(对照) 100． 0
测试茶样 1(景迈茶区春季晒青毛茶) 98． 9
测试茶样 2(滇红) 80． 3
测试茶样 3(福鼎白茶) 84． 5
测试茶样 4［普洱茶(熟茶) ］ 80． 4
测试茶样 5(勐宋茶区春季晒青毛茶) 91． 1
3 结论
通过多次检测，笔者确定了一套指纹图谱的建立方
法。采用线性梯度洗脱，以乙腈和 2%乙酸水溶液为流
动相，将检测波长设为280 nm，柱温设为30 ℃时，效果最
佳，重现性良好。
本实验所涉及的 5个景迈茶区晒青毛茶的样品虽然
采自同一茶园，但在采制时间上有所区别。它们液相图
谱的相似度却极高，均达 98． 0%以上。
建立了景迈茶区春季晒青毛茶的高效液相指纹图
谱。其标准图谱与其它测试茶样图谱之间的相似度为
80． 3% ～98． 9%，据此可以断定部分测试茶样并非景迈
茶区春季所产的晒青毛茶。因此，通过该图谱，可以进行
景迈茶区春季晒青毛茶的品质鉴定与辨伪。
4 讨论
4． 1 关于景迈茶区春季晒青毛茶的辨伪 景迈茶区的
茶树由于其特殊的生长环境，在内质上表现出了极其相
似的特征。利用这一特征我们建立了景迈茶区春季晒青
毛茶的标准图谱，如果测试茶样的高效液相色谱图与其
相似度达到 97． 0%，基本上可认定是景迈茶。
4． 2 关于其他地区茶样指纹图谱的建立 云南各个茶
区都有各自特殊的自然生态条件，只要能够采集到相应
的样品，从理论上来说都能够建立出各自的指纹图谱。
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(下转第 158页)
5516期 李扬等:建立景迈茶区春季晒青毛茶指纹图谱的研究
图 5 盐浓度对 pH值的影响
图 6 保藏温度对 pH值的影响
3 小结
本研究表明:(1)食盐的质量分数不同，泡菜制品中
亚硝酸盐的生成和变化规律也有不同。盐度低(4%) ，
“亚硝峰”出现得早(第 2天) ，峰值(19． 73 mg /kg)小;盐
度高(12%) ，“亚硝峰”出现得晚(第 5 天)且峰值
(121． 37 mg /kg)大。
(2)采用常用的食盐质量分数(8%)进行泡制，4 d
后出现峰值，30 ℃下保藏的黄瓜亚硝酸盐含量维持在 10
mg /kg以下，比其他温度下的含量都要低。
(3)不同盐浓度的发酵液的 pH值与时间呈负相关，
且食盐浓度越高的泡菜制品中 pH值越高。
(4)在低温下，泡菜 pH值变化不大;保藏温度为 20
℃及 30 ℃时，pH值与时间呈负相关。
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(责任编辑:丁 建
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(上接第 155页)
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(责任编辑:黄荣华)
851 江 西 农 业 学 报 24卷